文山三七根腐病病原真菌的鉴定与药剂防治

从云南文山三七药材基地感染根腐病的三七组织获得分离物,并对其进行培养和纯化,并运用科赫法则（Koch’s Postulate）进行病原菌回接感染,得3株致病明显的菌株,后对此菌株进行生物学和18S-rDNA全序列分析鉴定及室内药效防治。结果表明,此3株菌分别是尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）,茄病镰刀菌（Fusarium solani）和链格孢菌（Alternaria alternata）。甲基硫菌灵、根康、多菌灵对茄孢镰孢菌、尖镰孢菌的抑菌效果最好,腐霉利、甲基硫菌灵对链格孢菌的抑菌效果最好。该研究可为尖孢镰刀菌、茄病镰刀菌和链格孢菌引起的三七根腐病的防治提供参考。     

灯台树叶枯病病原菌的鉴定及其生物学特性

采用传统形态学和分子生物学相结合方法对灯台树（Cornus controversum）叶枯病病原菌进行鉴定,并采用室内培养法对病原菌的生物学培养特性进行研究。结果表明,引起灯台树叶枯病的病原菌为芜菁链格孢（Alternaria napiformis Purk.et Mall.）。适合菌丝生长的温度为20～35℃,适宜pH值的范围6～8,最佳碳源为乳糖,最佳氮源为酵母粉,适宜培养基为植物浸汁培养基。     

宁夏肉牛皮肤病原真菌的分离与鉴定

【目的】从患真菌性皮肤病肉牛的毛发、皮屑、痂皮等病料样本中分离皮肤病原真菌并对其进行种属分类鉴定,为牛真菌性皮肤病的诊断及防治提供参考依据。【方法】无菌采集宁夏地区患皮肤病肉牛的毛发、皮屑、痂皮,将病料样本置于载玻片上,滴加10% KOH溶液1滴,静置5 min后进行镜检观察;将病料样本接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA）中进行真菌的分离、纯化培养,对分离的真菌用乳酸酚棉兰染液进行染色观察,根据真菌形态学特征对其进行初步分类;用分离的真菌制备浓度为1×10⁸ cfu·mL^-1的孢子悬液涂抹健康ICR小鼠皮肤,根据其致病性筛选病原真菌;提取病原真菌DNA,对其内部转录间隔区（ITS）进行PCR扩增并测序,登录NCBI GenBank数据库,对病原真菌ITS序列进行同源性比较并构建系统发育树,根据其同源性比较及系统发育分析结果,结合真菌形态学特征对病原真菌作出种属分类鉴定。【结果】病料中含真菌菌丝及链状厚垣孢子,毛发中存在大量小分生孢子;从病料样本中共分离、纯化到23株真菌,分属于毛癣菌属（Trichophyton）、曲霉属（Aspergillus）、横梗霉属（Lichtheimia）、链格孢属（Alternaria）、镰刀菌属（Fusarium）、附球菌属（Epicoccum）、毛霉菌属（Mucor）;小鼠皮肤感染试验表明,分离的毛癣菌属真菌NXGY1、NXGY2具有较强的致病性,试验组小鼠均出现瘙痒、皮屑增多、形成结痂、脱毛等临床症状;毛癣菌属NXGY1、NXGY2 的ITS序列长度大小分别为660、662 bp,其同源性比较及系统发育分析结果表明,NXGY1、NXGY2与疣状毛癣菌(Trichophyton verrucosum)同源性高达99% ,在系统发育树上属于同一分支,遗传距离最近。【结论】根据真菌形态特征及系统发育分析结果,鉴定分离的肉牛皮肤病原真菌NXGY1、NXGY2为疣状毛癣菌(T. verrucosum)。     

信阳市油茶病害及其病原鉴定

通过野外调查及室内病原分离、检测与鉴定对信阳市油茶(Camellia oleifera Abel)病害发生及病原种类进行了研究。结果表明:信阳油茶病害发生普遍,为害严重。主要病害为炭疽病、灰斑病、褐斑病、枝枯病、枯稍病,病原菌分别为胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)、茶拟盘多毛孢菌(Pestalotiopsis theae)、壳囊孢菌(Cyto-spora sp.)、壳色单隔孢菌(Diplodia sp.)、小孢拟盘多毛孢菌(Pestalotiopsis microspora)。其中,壳囊孢菌为油茶病害病原新记录。     

SYBR Green I 实时荧光定量PCR检测小麦纹枯病菌体系的建立和应用

【目的】纹枯病是小麦生产上重要的土传病害之一,早期准确定量检测病原是病害预测预报及实现有效防控的基础。传统组织分离鉴定方法费时、程序复杂,而且无法做到准确定量。为实现小麦纹枯病早期快速准确定量检测,研究旨在建立小麦纹枯病菌（Rhizoctonia cerealis）的SYBR Green I实时荧光定量PCR（real-time PCR）检测方法。【方法】根据小麦纹枯病菌的β-tubilin序列,设计1对特异性引物,建立并优化SYBR Green I real-time PCR反应体系,利用小麦纹枯病菌、立枯丝核菌（R. solani）、双核丝核菌AG-A和AG-F菌株、小麦全蚀病菌（Gaeumannomyces graminis var. tritici）、小麦根腐病菌（Bipolaris sorokiniana）、小麦茎基腐病菌假禾谷镰孢（Fusarium pseudograminearum）和禾谷镰孢（F. graminearum）等8种小麦根部或土壤病原物的菌丝DNA进行普通PCR和real-time PCR特异性检测,并对灵敏度、可重复性进行评价。利用该体系分别检测接种后5、10、60 d不同接种浓度的盆栽小麦病株。【结果】研究设计的引物特异性强,普通PCR检测结果仅小麦纹枯病菌DNA有扩增条带。Real-time检测结果表明该对引物对小麦纹枯病菌只有唯一的产物吸收峰,对其余供试菌株均未检测到荧光信号。普通PCR检测的灵敏度为6.5×10³ copies/μL, real-time PCR的灵敏度可达到6.5×10² copies/μL。以携带目的基因片段的重组质粒为标准品,构建的real-time PCR标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,熔解曲线的吸收峰单一,相关系数为0.997,扩增效率为0.91。对人工接种的盆栽小麦病株进行real-time PCR检测,结果表明与病情指数和接种量分别呈显著正相关。【结论】研究建立的基于real-time PCR技术的小麦纹枯病菌快速检测方法速度快、灵敏度高、特异性强、重复性好。可以用于小麦纹枯病菌检测、指导病害预测和防治。     

球孢白僵菌对烟粉虱后代生命表参数的亚致死影响

【目的】关于昆虫病原真菌对昆虫生命表亚致死影响的研究较少,而由真菌侵染所产生的亚致死影响对于寄主昆虫的种群动力学至关重要,并最终影响着目标昆虫的害虫地位。论文旨在比较烟粉虱（Bemisia tabaci）亲代3龄若虫经球孢白僵菌（Beauveria bassiana）处理及对照子代种群的生命表参数,探讨球孢白僵菌对烟粉虱生命表参数的亚致死影响。【方法】应用年龄-阶段两性生命表分析经球孢白僵菌处理的烟粉虱后代的发育历期、存活率和繁殖率数据,以蒸馏水处理的个体作为对照。应用bootstrap方法计算种群生长参数的平均数和标准误;采用t-test比较分析球孢白僵菌处理组和对照组烟粉虱的种群参数、发育历期和繁殖力间的差异。【结果】球孢白僵菌处理的烟粉虱与对照之间在成虫前期、总产卵前期、1-4龄若虫存活率和生命表参数上存在着显著差异。与对照处理的烟粉虱成虫前期（20.59 d）相比,亲代接种球孢白僵菌使后代个体的成虫前期显著延长（26.58 d）。经球孢白僵菌处理的烟粉虱后代存活率（0.195）要比对照个体（0.76）低。球孢白僵菌处理烟粉虱后代种群的内禀增长率（r）、周限增长率（λ）、净增殖率（R₀）、平均世代时间（T）和总繁殖率（GRR）分别为0.063 d^-1 、1.065 d^-1、6.85,30.613 d和41.883,而对照烟粉虱后代种群的上述参数分别为0.137 d^-1 、1.147 d^-1、33.443、25.575 d和51.44。【结论】亲代经球孢白僵菌处理的烟粉虱其子代种群增长要比对照组慢,死亡率高,但生殖能力并无显著性影响。该研究可为了解昆虫病原真菌对烟粉虱的长期影响提供理论依据。     

黄帝陵侧柏叶枯病的病原菌鉴定及防治药剂筛选

【目的】明确黄帝陵侧柏叶枯病的病原菌及其培养特性,筛选对该病害具有较好防治效果的药剂,为黄帝陵古柏群的保护提供指导。【方法】采用组织分离培养法从采集的侧柏叶枯病叶中分离病菌,通过回接试验和柯赫氏法则,证明分离物是否为引起侧柏叶枯病的病原菌;通过形态学和分子生物学对黄帝陵侧柏叶枯病病原菌进行鉴定,并研究其在不同培养基上的生长速率;采用带毒平板法和田间试验筛选对黄帝陵侧柏叶枯病具有较好防治效果的药剂。【结果】经形态学和分子生物学鉴定,黄帝陵侧柏叶枯病病原菌为互隔交链孢（Alternaria alternata）和芍药生拟盘多毛孢（Pestalotiopsis paeoniicola）,这2种病原菌可单独侵染,也可共同复合侵染。互隔交链孢和芍药生拟盘多毛孢在黄豆(SA)培养基和马铃薯蔗糖琼脂(PSA)培养基上生长速率均较高。室内抑菌活性测定结果表明,戊唑醇对互隔交链孢和芍药生拟盘多毛孢抑菌活性较高,其有效中浓度（EC₅₀）分别为1.13和1.38 mg/L;咪鲜胺次之,其EC₅₀分别为1.58和1.44 mg/L。田间试验结果表明,80%戊唑醇可湿性粉剂750倍液和25%咪鲜胺乳油3 000倍液对侧柏叶枯病的防效最佳,喷药4次后其防治效果均在80%以上。【结论】黄帝陵侧柏叶枯病由互隔交链孢（A. alternata）和芍药生拟盘多毛孢（P. paeoniicola）单独或共同侵染引起,为弱寄生菌,这2种病原菌均在SA和PSA培养基生长良好;侧柏为芍药生拟盘多毛孢（P. paeoniicola）的新寄主;戊唑醇和咪鲜胺对黄帝陵侧柏叶枯病具有良好的防治效果。     

渐绿木霉抑菌物质的分离纯化及其对植物病原菌的抑制作用

【目的】从木霉（Trichoderma spp.）代谢产物中获得对疫霉菌（Phytophthora spp.）有抑制作用的活性拮抗化合物,并评价其对其他植物病原菌的生防潜力,为木霉生防菌株及其产生拮抗化合物的利用提供依据。【方法】用玻璃纸筛选法筛选产生拮抗化合物的木霉菌株,这些化合物对疫霉菌有强烈的抑制活性。在PDA上培养获得的木霉菌株作为接种体,进一步接种在稻米培养基上扩大培养,用于拮抗化合物的提取。木霉培养物经乙酸乙酯萃取、过滤和浓缩等程序,获得最初的粗提物。粗提物进一步通过柱层析、薄层层析纯化和生物活性测定,确定活性组分并获得纯的样品。依据样品的化学特性,采用气相色谱-质谱联用（GC-MS）进行化学结构鉴定,确定拮抗化合物的化学分子式和结构。选用不同类群的植物病原菌,包括卵菌门的辣椒疫霉（P. capsici）和黄瓜疫霉（P. melonis）、子囊菌门中的尖镰孢（Fusarium oxysporum）和担子菌门的立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）,测定拮抗化合物对它们发育不同阶段的拮抗活性。【结果】最初筛选试验结果显示,渐绿木霉（T. viridescens）菌株TS0404能产生对疫霉菌有强烈抑制活性的拮抗化合物。分离、纯化和生物活性试验表明,具有生物活性的活性组分是一种黄色油状液体。质谱图揭示该化合物最大离子峰166,化合物被鉴定为6-戊基-2H-吡喃酮（6-pentyl-2H-pyran-2-one,6-PP）。生物活性测定结果显示,该化合物对辣椒疫霉、黄瓜疫霉、立枯丝核菌、尖镰孢菌丝生长有显著抑制作用（EC₅₀分别为115.26、99.58、126.46和315.75 μg?mL^-1）,其中对黄瓜疫霉抑制效果最好,300 μg?mL^-1浓度完全抑制黄瓜疫霉菌丝生长。该化合物对辣椒疫霉和黄瓜疫霉游动孢子囊萌发也有显著抑制效果（EC₅₀分别为168.67和111.87 μg?mL^-1）,其中对黄瓜疫霉游动孢子囊萌发抑制效果最好,在400 μg?mL^-1时,完全抑制其游动孢子囊的萌发。此外,6-戊基-2H-吡喃酮还对尖镰孢分生孢子和立枯丝核菌菌核萌发有显著的抑制效果,其对尖镰孢分生孢子萌发抑制的EC₅₀为151.81 μg?mL^-1;300 μg?mL^-1时,完全抑制立枯丝核菌菌核的萌发。【结论】从渐绿木霉筛选分离获得了6-戊基-2H-吡喃酮,其对卵菌中的辣椒疫霉和黄瓜疫霉子实体有强烈的抑制活性,对尖镰孢和立枯丝核菌菌核也有显著的抑制作用,显示该物质是一种广谱性的拮抗化合物,在作物疫病防治中具有潜在的应用价值。     

我国新发现的几种云杉病害及其新记录真菌

报道了发生于新疆雪岭云杉上的一种新病害：云杉叶枯病和我国尚未报道过的二种新记录病害（芽枯病与枝枯病）及三种新记录真菌：暗红无座盘菌（Ａｇｙｒｉｕｍｒｕｆｕｍ），壁生粉衣菌（Ｃａｌｉｃｉｕｍｐａｒｉｅｔｉｎｕｍ）和毒鼠子多隔腔孢（Ｐｈｒａｇｍｏｔｒｉｃｈｕｍ　ｃｈａｉｌｅｔｉｉ）．对这些病害的分布、症状、病原的形态及新记录真菌做了详细的记载和描述．     

爬地柏枯梢病病原菌鉴定

在黑龙江省内采集病植物标本,对爬地柏枯梢病病原菌进行形态学和分子生物学鉴定。根据形态学初步鉴定爬地柏枯梢病病原物为微色二孢属(Microdiplodia sp.)。通过对该病原菌r DNA进行PCR扩增和序列测定,得出该序列与Gen Bank中微色二孢属的同源性为99%。从爬地柏枯梢病症状、病原菌、病菌生物学特性和防治技术4个方面描述爬地柏枯梢病,为该病害的防治提供借鉴。     

华山松无性系种子园辅助授粉试验初报

在华山松无性系种子园初果期,花粉量不能满足自然授粉需要的情况下,进行人工辅助授粉可使座果率、种子饱满率和千粒重均有所提高,其中对晚花型无性系效果最好,辅助授粉可在雌球花可授期的初期和盛期各进行1次.     

华山松无性系种子园结实量与种实性状的关系

以云南楚雄紫溪山华山松无性系种子为研究对象,对该园95个无性系的球果结实量及20个无性系种子的性状进行分析研究.结果表明:华山松无性系之间结实量的年度方差分量不同,但遗传力在中上水平,表明结实量有一定的稳定性.不同种源间的结实量差异极显著.种实性状与结实量之间的相关性不显著,由此认为:华山松在选择育种中将结实量作为选择指标,既不会影响种子的质量,且具有很大的经济潜力.     

秦岭华山松林生态系统对大气降雨水化学特性的影响

基于野外定点监测的方法,根据大气降雨与秦岭华山松林生态系统相互作用的时空顺序,测定并分析水分传输过程各层次水的pH及水化学元素沿运移路径的变化过程,获知华山松森林影响水化学元素沉降变化的关键层次,进而探讨华山松林不同层次对大气降雨水质的影响。结果表明,华山松林生态系统对偏酸性降雨的pH有较强的调升能力,林冠和土壤A层对pH调升作用较显著,调升幅度分别为0.51、1.01个pH单位。系统对NH₄⁺、Pb、Cd²⁺、Cr均具有吸附净化效应。吸贮固定NH₄⁺的关键层是土壤层,土壤A、B层对NH₄⁺的吸附净化效果依次为42.31%、63.11%,净化效果均达到极显著差异(P＜0.05);吸贮阻减Pb、Cd²⁺、Cr的关键层是林冠层,阻减效果分别为63%、78%、45%;降雨对系统中SO^₄2-、NO₃^-、PO₄^3-、K⁺、Ca²⁺、Mg²⁺、Zn²⁺、Al³⁺等离子表现一定的淋溶效应。其中林冠层是淋溶SO₄^2-、PO₄^3-、K⁺和Zn²⁺的关键层次,林内雨较大气降雨4种离子的浓度增幅分别为31%、175%、585%、48%;土壤层是淋溶NO₃^-、Ca²⁺、Mg²⁺、Al³⁺的主要层次,增幅均达显著差异(P＜0.05)。其中NO₃^-主要来源于土壤A层,Ca²⁺、Mg²⁺主要来源土壤B层,Al³⁺主要来源于降雨对整个土壤层解吸的Al³⁺的淋溶作用。     

甘肃华山松溃疡病病原真菌类群的初步鉴定

近年来甘肃陇南地区华山松溃疡病发生严重，导致华山松大面积死亡，但有关病害发生的原因等尚不清楚。采用组织分离法从感病华山松的健康部位、病健交界处、子实体及病组织处分离获得97个真菌菌株，结合形态学及系统学对分离到的菌株进行初步分析。结果显示，所得菌株分为9个种，其中Neocosmospora silvicola占14.17%，Fusicolla violacea占1.67%，Microcera sp.占8.33%，Neonectria neomacrospora占11.67%，Dermea pinicola占8.33%，Nematogonum ferrugineum占9.17%，Pezicula sporulosa占4.17%，Phaeoacremonium fraxinopennsylvanicum占14.17%，Sarea resinae占9.17%。以丛赤壳科为优势菌群，占总菌株数量的44.33%；初步推断Neocosmospora silvicola为疑似病原菌。     

紫溪山华山松种子园无性系SCoT遗传多样性分析

为明确云南省楚雄市紫溪山林场华山松种子园内不同种源无性系间的遗传背景,收集了园内6个种源的97份华山松无性系单株针叶,采用改良CTAB法提取其总DNA,并利用SCoT分子标记,对其进行遗传多样性分析,从而对园内华山松种质资源进行评价。结果表明：筛选出条带清晰、反应稳定且具有较高多态性的34条引物,经SCoT−PCR扩增后,华山松6个种源的等位基因数为5.2647,Shannon's多样性指数（I）为1.3786,Nei's基因多样性指数（H）为0.6904,说明华山松6个种源遗传多样性较高。地理位置较近的种源间其遗传距离并不一定较近,没有被归为一类,地理距离并未对其遗传距离造成明显影响。种源间的遗传分化系数（G_st）为0.0541,遗传变异主要存在于各种源内,占总变异的94.59%。华山松群体内基因流较大（N_m均值为4.3683>1）,高水平的基因流可能削弱了各种源间的遗传差异。     

华山松无性系种子园结实习性观测与分析

对云南楚雄华山松Pinus armandii Franch无性系种子园结实习性进行调查,结果表明,华山松球果生长期较长,最长约为170d.球果的年生长大致呈"S"型曲线,速生期较明显,为5～7月;华山松球果主要着生在树冠中上部1～2龄枝上,树冠内膛是结实稀疏区,树冠西、南方向结实量明显高于北方.定植密度对树体生长和结实量影响较大,5m×5m密度结实量是其它密度的5倍以上.树冠垂直方向上球果的饱满种子率和出种率无显著差异,而千粒重差异显著,树冠上部种子的千粒重最大,平均427.6g,下部次之,为400.8g,中部为383.9g.     

我国棉花育种技术的创新与成就

目的为明确楚雄市紫溪山华山松种子园内各种源无性系的遗传结构及其亲缘关系,对该种子园内6个种源的97个无性系进行SSR遗传多样性分析。方法利用改良CTAB法,提取97个华山松无性系DNA,用前期筛选出的26对高多态性引物对所有DNA样品进行SSR-PCR扩增,并统计其多态性条带信息,最后用POPGEN 1.32、NTSYS 2.10和Structure 2.3.1软件对其遗传多样性进行分析。结果(1)在群体水平上,6个种源的N_a范围为3.730 8~4.807 7,均值为4.237 1,N_e为2.901 1,H为0.637 6,I为1.186 5,表明华山松各种源均具有较高的遗传多样性。(2)聚类分析表明：地理距离较近的种源其遗传差异并不一定近,UPGMA聚类图并未将地理位置较近的种源归为一类。(3)华山松的基因流N_m均值为4.150 3,说明华山松种源间的遗传交流较多。结论华山松无性系种源间遗传变异不高,其主要遗传变异存在于种源内,研究结果可为利用该种子园内的不同无性系进行华山松遗传改良提供理论依据及实践指导。     

波密岗乡华山松林优势植物空间格局及其关联性

以藏东南波密岗乡华山松林优势植物华山松、林芝云杉和高山松为研究对象,采用点格局分析方法中的Ripley L函数分析不同等级华山松和优势植物的空间分布格局及其关联性。结果表明:1）华山松的小树(D＜20 cm且H≥100 cm)在整体尺度上(0~50 m)均表现为集群分布,中树(20 cm≤D＜40 cm)在小尺度内(0~16 m)为集群分布,大尺度(17~50 m)呈随机分布,大树(D≥40 cm)在整体尺度内(0~50 m)都呈随机分布。2）华山松在0~50 m尺度内均呈集群分布,随尺度的增长,集聚程度的变化较小;高山松在0~30 m尺度内集群分布,其中在7 m处集聚强度最大,随后集聚强度随尺度的增加而减小,在37~46 m尺度内表现为均匀分布,在30~37 m和46~50 m尺度上为随机分布;林芝云杉在0~49 m尺度上都呈现集群分布,只有在49~50 m处随机分布。3）华山松的种内关联性几乎都表现为不相关,只有小树和中树在9~14 m的尺度上表现为负相关。4）华山松和高山松的种间关联性在0~17 m尺度内表现为空间负相关,在17~50 m的尺度内不相关;华山松和林芝云杉在0~3 m及40~50 m的尺度内不相关,但在3~40 m的尺度上呈负相关;高山松和林芝云杉的关联性变化较大,依次是负相关>不相关>正相关>不相关。     

影响油松种子园产量的因素及提高对策

根据调查,提出了影响油松无性系种子园良种产量的主要因素,即无性系个体间开花结实的差异、球果害虫危害、雌花授粉不良和栽植密度过大等。通过无性系再选择、留优去劣疏伐和截顶等修剪试验,提高了花期温度,改善了通风透光条件,加强了花粉的传播,促进了油松母树开花结实;进行人工辅助授粉和病虫害防治,能够提高座果率和种子品质,减少球果在其生长发育过程中的损失;提出了促进油松种子园种子丰产的综合技术,使良种产量由原来的11.5 kg.hm-2提高到26.0 kg.hm-2。     

微波辐射和浸种对华山松种子生活力和发芽的影响

为了解微波辐射和清水2因素不同水平组合对华山松种子吸水、生活力和种仁发芽率的影响,以及微波辐射结合清水和GA₃溶液浸种3因素对华山松种子发芽率的影响,采用L₉(3⁴)正交设计开展试验实施。结果表明：微波辐射和清水浸种处理组合的种子生活力、种子、种仁和种壳吸水率分别为75.3%～88.0%（CK的为94.7%）、6.63%～10.44%、15.00%～23.80%和0.98%～4.87%,处理组合间种子和种仁吸水率均具有极显著的差异（P < 0.01）;影响生活力的主导因子是微波辐射和清水浸种时间的交互作用,影响种子和种仁吸水率的则是清水浸种时间;测定（TTC法）的和未测定生活力的种仁发芽率分别为4.0%～22.8%和52.7%～90.0%,CK的为4.7%和60.0%,微波辐射是影响种仁发芽率的主导因子。微波辐射结合清水和GA₃溶液浸种的组合,种子场圃发芽率为56.0%～71.6%（CK的为56.0%）,清水和GA₃浸种的交互作用是影响种子场圃发芽率的主导因子。微波辐射和清水浸种的组合降低种子生活力。清水浸种8 h时,种子吸水基本达到饱和;微波辐射15 s,清水浸种12 h后0.05 g/L GA₃溶液浸种,提高华山松种子场圃发芽率,可应用于生产实践。