影响猪精子耐冻性的候选基因分析

在对通城猪精液冷冻保存的过程中,发现精液冻存质量存在个体差异。根据多次精液冻存后的精子活力检测结果,结合系谱关系筛选出精子耐冻与不耐冻个体各3头,并采用"中芯一号"SNP芯片进行群体遗传分化指数(F_ST)分析,应用生物信息学方法挖掘影响猪精子耐冻性差异的关键候选基因。结果显示:22头通城猪精液冻存后的精子活力存在明显差异,3头精子耐冻个体之间和3头精子不耐冻个体之间分别具有更近的亲缘关系,表明猪精子耐冻性差异可能受遗传因素影响;对耐冻性差异个体SNP芯片数据的F_ST分析结果显示,F_ST平均值为0.170 5,存在较高程度的遗传分化;进一步选取F_ST前1%(F_ST>0.53)的266个SNP位点,并在其上下游100 kb区域共注释到了397个候选基因,富集在细胞形态、肌动蛋白细胞骨架和离子通道等生物学过程;其中KCNG4、ARPC1B、DNAAF4、MNS1、LIMK2、RPL31和VIM等基因可作为猪精子耐冻性差异的关键候选基因。以上结果说明,猪精子耐冻性受遗传因素影响,...     

二花脸和大约克夏公猪不同发育时期睾酮分泌特性

随机选取 3,2 0 ,30 ,90 ,12 0和 180日龄纯种二花脸和大约克夏公猪各 4头 ,屠宰后采取血样和睾丸组织样 ,测定血清和睾丸组织中睾酮含量。结果表明 ,90日龄前 ,两品种公猪血清睾酮水平均维持在较低水平 ,血清睾酮水平从 90日龄开始 ,随日龄增加二花脸公猪极显著升高 (P〈0 0 1) ,而大约克夏公猪的则从 12 0日龄开始显著上升 (P〈0 0 5 )。二花脸公猪的血清睾酮水平显著高于大约克夏公猪 (P〈0 0 5 )。不同日龄的公猪睾丸组织中睾酮含量的变化与血清睾酮水平的变化趋势相反 ,3日龄时睾丸组织中睾酮含量最高 ,以后随日龄增加而下降 ,二花脸公猪在 2 0和 90日龄时急剧下降 (P〈0 0 1) ,大约克夏公猪 90日龄前随日龄显著降低 (P〈0 0 5 ) ,90日龄后保持相对稳定。睾丸组织中睾酮含量二花脸公猪极显著低于大约克夏公猪 (P〈0 0 1)。     

过氧化物酶同工酶与马铃薯耐冻性的关系

为揭示野生马铃薯的耐冻性机理,对野生马铃薯幼苗的耐冻性和冷驯化能力与过氧化物酶同工酶间的关系进行了研究。结果表明:耐冻性越强的品系,POD酶带颜色越深、酶带宽度越宽;冷驯化能力越强的材料在冷驯化后酶带颜色越深,没有冷驯化能力的材料冷驯化后POD酶带颜色深浅不变。认为:S.acaule无性系材料的耐冻性和冷驯化能力与POD同工酶酶带的颜色的深浅、酶带的宽度有密切关系;冷驯化能力的高低主要与冷驯化后酶带颜色深浅有关。     

冬小麦品种耐冻性比较研究

通过电导率、叶色、株高、鲜重及干重5项指标比较20个冬小麦品种幼苗期对冷冻处理的耐性强弱。结果表明,各品种对冷冻处理的不同指标反应不同,有的表现为抑制,有的表现为促进。鲜重、干重和株高对冷冻处理相关显著。筛选出的耐性品种为高优503、秦麦78-4、德州961、临麦2号、晋麦47、太633、633、泰山269、太原8003、京10531。与株高相比,鲜重与干重及相对耐性间的相关系数较高,因此,鲜重可以作为评价苗期冬小麦耐冻的指标。     

公猪射精过程不同阶段精液精子密度和精液量的变化

公猪在一次完整射精过程中有1至数次不等的短暂停顿,将公猪一次完整射精的精液分成三段:浓精(S1)、第一次射精中除浓精外的精液(S2)及其余部分精液(S3),研究三段精液精子密度、精液量的变化规律。结果表明:浓精精液量显著低于其它两段精液(P<0.01),而精子密度及总精子数显著高于其它两段精液(P<0.01);浓精量只占总精液量的约17%,而精子数占总精子数的约71%;公猪完整射精过程中的第一次射精精液量占总精液量的约70%、精子数占总精子数的约95%。     

公猪睾丸、附睾及精子中硒蛋白编码基因相对表达量分析

【目的】考察公猪生殖系统中硒蛋白编码基因表达情况,初步筛选与其繁殖性能密切相关的硒蛋白编码基因。【方法】采用RT-qPCR技术对成年和半月龄DLY三元杂交公猪的睾丸、附睾及杜洛克公猪的精子进行25个硒蛋白编码基因表达量分析,采用2~(-△△Ct)法计算各基因相对表达量。【结果】①GPX3和TXNRD2在仔公猪睾丸中显著高表达(P0.05),GPX6、SELENOM和SELENON在仔公猪附睾中显著高表达(P0.05);②GPX4、SELENOH、SELENOK、SELENOS、SELENOT、SELENOV、SEPHS2、TXNRD1等8个硒蛋白编码基因在成年公猪睾丸中表达量显著高于其余样品中表达量(P0.05);③MSRB1和SELENOI在成年公猪附睾中表达量显著高于仔公猪附睾中表达量(P0.05)。【结论】在公猪生殖系统中,13个硒蛋白编码基因表达具有组织特异性,2个硒蛋白编码基因表达受性成熟的影响,揭示这些差异表达的硒蛋白编码基因与相应器官生殖功能密切相关。     

磷酸缓冲液提高菜豆幼苗耐冻力机理的初探

磷酸缓冲液影响菜豆耐冻力的作用机理为:通过增加气孔阻力、抑制蒸腾,进而限制了根系吸水,使植株水分含量减少;促进淀粉由淀粉磷酸化的途径降解为可溶性糖;蛋白质降解为游离氨基酸,使细胞浓度增加;由于植株磷量增加,促进ATP高能健形成,最终使植株耐冻力得到增强。磷酸缓冲液的这种耐冻效应是可以传递的,H_2PO_4~-(HPO_4~=)、K~+和Na~+三种离子的单独效应低于它们的共同复合效应。     

磷酸缓冲液提高菜豆幼苗耐冻力的生理效应

用不同浓度和pH的磷酸缓冲液喷施菜豆叶片,然后低温处理离体叶片,测定叶片的相对含水量、水势、渗透势和低温下的膜透性,以探讨磷酸缓冲液喷施菜豆叶片的适宜浓度,pH及其提高耐冻的生理效应。主要试验结果如下:1.0.1M、pH6.45的磷酸缓冲液可增加菜豆叶片的耐冻力。但这种增强效应是暂时性的。2.处理菜豆叶片24小时后,模拟霜冻处理幼苗的成活率比对照高29.0％。离体叶片在处理后24小时耐冻力最强,低温伤害的临界温度下降0.8℃左右。但随着处理后时间的延长,耐冻力减弱,到120小时,叶片质膜透性己恢复到对照水平。3.菜豆处理后,其叶片相对含水量下降,水势降低,渗透势升高;菜豆叶片脱水2—4％,可以增加叶片的耐冻力。     

性控冻精的DNA损伤及其检测方法

性控冻精的广泛应用给现代畜牧业带来了巨大的利益。性控冻精在制作生产过程会受到高倍稀释、离心、激光照射、染色及冷冻等诸多因素的影响,而使精子DNA的完整性发生变化,结果降低受胎率,同时会对性控后代的遗传稳定性产生影响。精子DNA损伤检测方法有彗星实验（COMET assay,single cell gel electrophoresis SCGE）,末端转移酶介导的d UTP末端标记法（Terminal tranferase d UTP Nick End Labelling TUNEL）,精子染色质结构分析（sperm chromatin structure assay SCSA）和精子染色体扩散实验（Sperm chromatin dispersion SCD）等。本文综述了近年来精子DNA损伤检测方法的使用概况,对比了不同方法对检测结果的优势,为更好的评价性控冻精的质量,确定分离参数,及为生产受精率高、安全性高的性控冻精提供依据。     

重金属铬对体外培养猪精子活力及蛋白磷酸化水平的影响

为探究铬元素在猪精子体外获能培养过程中,对猪精子活力、蛋白磷酸化信号通路的影响,研究采取八头杜洛克猪新鲜精液,分别在体外获能培养液中添加不同浓度的6价铬离子(0、0.1、0.5、1、2、10、100μmol/mL)以及双丁酰环腺苷酸(dbcAMP)、异丁基黄嘌呤(IBMX)、PKA抑制剂(H-89)等cAMP-PKAs信号通路调节因子进行调控培养2h。利用精子活力计算机检测(CASA)、蛋白质免疫印迹(WB)技术,分析测定猪精子体外铬暴露获能培养过程中精子活力、蛋白磷酸化水平,并用相应试剂盒检测细胞中甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)活性、腺苷-3′,5′-环化一磷酸(cAMP)及ATP水平。结果表明:铬离子对猪精子活力、蛋白磷酸化水平有抑制作用,且随铬离子浓度增加抑制作用增强。当铬浓度达到2μmol/mL时精子活力MOT(58.4%)显著低于获能培养组(73.6%)(P0.05);10μmol/mL铬处理明显抑制蛋白磷酸化水平,且细胞内GAPDH活性、cAMP及ATP水平显著降低(P0.05)。而10μmol/mL铬处理中分别添加葡萄糖(5.0μmol/mL)及dbcAMP(1.0 mmol/L)和IBMX(0.1 mmol/L),能缓解铬对蛋白酪氨酸磷酸化(PTP)、蛋白丝氨酸/苏氨酸磷酸化(P-PKAs)及GAPDH活性的抑制作用。结果提示铬可能是通过干扰糖代谢及cAMP/PKA信号通路影响猪精子活力及蛋白磷酸化水平。本研究首次探究了体外培养过程中铬离子对家畜精子活力的影响,并初步探究了其作用机理,为进一步研究铬离子引起繁殖毒性的分子机制及家畜繁育提供一定的理论基础。     

褪黑素对热应激猪精子质量的影响

为研究褪黑素(Melatonin,MLT)对热应激引起的猪精子质量下降的缓解作用及其机制。首先用免疫荧光方法检测MLT受体在猪精子上的存在和分布;然后将稀释后的精子分为对照组(ck)、热应激组(H)、MLT组(M)、热应激+MLT组(H+M)、热应激+MLT受体拮抗剂Luzindole组(H+L)和热应激+MLT受体拮抗剂Luzindole+MLT组(H+L+M)6个组,处理结束后检测各组精子活率、活力、线粒体活性、钙离子水平以及顶体完整率。结果显示:猪精子中存在MLT受体MT1和MT2,且均分布于精子头部;与对照组相比热应激组各项指标显著下降,MLT组精子活率没有显著改变(P0.05),但精子活力、线粒体活性、钙离子水平和顶体完整率显著升高(P0.05)。添加MLT受体拮抗剂Luzindole后精子活力、线粒体活性和钙离子水平显著下降(P0.05),顶体完整率呈一定程度下降,但差异不显著(P0.05)。以上结果表明:热应激会导致猪精子质量显著下降,并且MLT能通过受体途径改善热应激对猪精子质量的影响,但同时也存在非受体介导的作用。     

双糖对冻融后猪精子质量的影响

在传统的Tris—柠檬酸—葡萄糖(TCG)稀释液基础上,分别添加0.1 mol/L乳糖、蔗糖、海藻糖,并采用细管法对精液进行冷冻,研究不同双糖对冻融后猪精液质量的影响。结果表明:0.1 mol/L的海藻糖和蔗糖相对于对照组和0.1 mol/L的乳糖TCG稀释液能够显著改善冻融后猪精子质量,其冻融后精子的活率、顶体完整率、低渗膨胀率、平均路径速度、运动线速度、平均侧摆幅度和平均鞭打频率均明显提高(P0.05),分别达到42.14%和40.56%,51.48%和49.84%,46.20%和43.01%,32.8μm/s和33.2μm/s,60.80%和59.00%,1.70μm和1.62μm,7.68 Hz和7.62 Hz。TCG稀释液中添加0.1 mol/L海藻糖和蔗糖的猪冷冻精液体外受精的受精能力明显高于0.1 mol/L乳糖组和对照组,其卵裂率分别为41%和38%。     

猪精液0.5 ml细管快速冷冻和解冻方法的优化

 【目的】优化冷冻-解冻方法,提高0.5 ml细管快速冷冻保存猪精液的质量。【方法】冷冻方法：分别将细管水平置于液氮面上方3、5、7、9和11 cm处,每一水平位置细管分别熏蒸3、5、10、15和20 min后投入液氮保存,37℃×30 s水浴解冻,确定最优冷冻方法;在选择最优冷冻方法的基础上,分别采用37℃×30s(对照组)、42℃×25 s、47℃×20 s、52℃×15 s、57℃×10 s和62℃×5 s共6种方法水浴解冻,确定最佳解冻方法。【结果】采用3 cm×10 min冷冻方法,解冻0、8 h精液中精子活率、质膜完整率和顶体完整率均最高。采用相对“高温短时”解冻,精子活率、质膜完整率、顶体完整率和线粒体膜电位均较高,同时丙二醛浓度降低;57℃×10 s和62℃×5 s解冻的精子各项指标无显著差异（P＞0.05）,但前4项指标显著高于对照组（P＜0.05）,丙二醛浓度显著降低（P＜0.05）。【结论】优化猪精液0.5 ml细管快速冷冻的冷冻和解冻方法可以显著提高解冻质量,采用3 cm×10 min冷冻、57℃×10 s或62℃×5 s解冻方法效果最佳。     

钙离子对猪精子蛋白酪氨酸磷酸化及活力影响

研究主要探究钙离子(Ca2+)对猪精子蛋白酪氨酸磷酸化及活力的作用。利用计算机辅助精子活力分析仪(CASA)检测、蛋白免疫印迹测定不同Ca2+浓度对精子活力指标及蛋白酪氨酸磷酸化水平的影响,并对精子样品的酪氨酸磷酸化蛋白的分布情况进行观察。结果显示,当Ca2+浓度≤1.0mmol/L时,精子活力和蛋白酪氨酸磷酸化水平增高;然而,当Ca2+浓度≥3.0mmol/L时,则明显抑制精子活力和蛋白酪氨酸磷酸化水平,尤其分子量约为27和34kDa的高丰度蛋白磷酸化程度明显降低(P0.05)。高浓度Ca2+(4.0mmol/L)明显抑制鞭毛处蛋白酪氨酸磷酸化。因此,细胞外钙离子对猪精子活力和蛋白磷酸化起到重要调节作用,低浓度Ca2+促进精子活力及蛋白酪氨酸磷酸化,高浓度Ca2+(≥3.0mmol/L)抑制精子活力及蛋白酪氨酸磷酸化。本研究初步明确了Ca2+浓度对猪精子蛋白磷酸化及精子活力的影响,为进一步研究精子获能提供参考。     

卵黄、牛奶及EDTA对冷冻过程中猪精子内Zn~(++)和Ca~(++)含量的影响

冷冻过程中,卵黄能有效地抑制精子内Zn~(++)含量的升高,而牛奶则无此作用。由于卵黄和牛奶中都含有大量的Ca~(++),因此当用作保护剂时,会使冻后精子内Ca~(++)的含量大大升高,但卵黄的影响较小。如果在卵黄中加入EDTA,则能明显阻止精子内Ca~(++)含量的升高。而且,解冻后精子的存活时间也延长。试验结果表明:(1)卵黄对精子的保护作用优于牛奶;(2)卵黄和牛奶中的Ca~(++)会影响解冻后精子的存活,但添加EDTA后可得到明显改善。     

Anatomical Structure Comparison Between Leaves of Two Winter Wheat Cultivars with Different Cold/Freezing Tolerance Under Low Temperature Stress

Winter wheat （Triticum aestivum） cultivars Dongnongdongmai 1 with strong cold/freezing tolerance and Jimai 22 with weak cold/freezing tolerance were used for investigating the difference of microstructure and ultrastructure between leaves of two cultivars under low temperature stress （5℃ and -15 ℃） using optical and electron microscope. The results showed that there was no obvious difference between leaves of Dongnongdongmai 1 and Jimai 22 in microstructure. However, the difference between those leaves was distinct in ultrastructure. The grana lamella and stroma lamella were stacked regularly and arranged parallelly along the long axis of chloroplasts in cv. Dongnongdongmai 1, while the arrangement directions of thylakoids in Jimai 22＇s leaves were so irregular as to form various angles with the long axis of chloroplasts. At -15℃, the mitochondrias were swelled to be round and the structure of cristaes became blurry in both cultivars＇ leaves, while some cristaes of Jimai 22 disappeared. These results would provide theoretical evidence for selecting cold/freezing tolerant winter wheat germplasm resources     

三种不同组合家野猪血清生化指标的比较分析

选取断奶野猪(♂)×大白(♀)、野猪(♂)×皮特兰(♀)、野猪(♂)×杜洛克(♀)(以下各宗系简称野大、野皮、野杜)杂交仔猪各2窝,每窝3头,共计18头,试验期为140 d.试验结束后屠宰对其血清10项生化指标进行了测定比较.结果表明,野皮与野杜组ALP均高于野大组,差异显著(P＜0.05),且野杜组与野大组差异极显著(P＜0.01);野大组与野杜组LDH均高与野皮组,差异显著(P＜0.05);野杜组GLU、TG均高与其它两组,差异极显著(P＜0.01);野杜组CHO低于野大组和野皮组,差异显著(P＜0.05),且与野大组差异极显著;从TP、Ca、P、ALT和AST看,3组间差异不显著.