生物测定法测定棉田牛筋草对草甘膦的抗药性

为了明确湖南省棉田牛筋草对草甘膦的抗药性情况,在采集各地棉田牛筋草种子的基础上,采用室内生物测定法测定了其对草甘膦的抗药性水平。结果表明:采自常德澧县和常德桃源的牛筋草种群的相对抗药性倍数均较高,分别为10.21和7.79,处于中等抗性水平;采集自湘西慈利的牛筋草种群的相对抗性倍数为4.60,处于较低抗性水平;而采集自益阳桃江等地的牛筋草种群的相对抗性倍数均处于1~3。由此表明在湖南省棉花部分产区的牛筋草种群已经产生了对草甘膦的抗药性。     

牛筋草对草甘膦的抗药性

【目的】明确广东省果园或菜田田埂牛筋草（Eleusine indica）对草甘膦（glyphosate）的抗药性水平。【方法】利用整株测定法测定广东省广州市、惠州市、梅州市等地共7个点牛筋草对草甘膦的抗药性水平;采用紫外分光光度计测定抗性水平差异最大的2种牛筋草体内莽草酸含量的差异;采用光纤型双通道PAM-100测定抗性水平差异最大的2种牛筋草叶片各自叶绿素荧光参数的差异。【结果】惠州市杨村番石榴园（以下简称杨村）牛筋草对草甘膦的相对抗性指数达11.0,试验结果与田间实际反映情况相吻合;莽草酸含量测定结果表明,1 845 g a.i./hm2草甘膦处理后0-7 d,杨村牛筋草植株内部莽草酸含量较低,与对照相当,而广州番禺牛筋草植株内部积累了较多莽草酸,草甘膦处理后7 d,其莽草酸含量（623.1 µg•g FW-1）为杨村牛筋草（68.1 µg•g FW-1）的9.1倍;叶片荧光参数结果表明,杨村牛筋草Fv/Fm（PSⅡ最大原初光能转化效率）、α（PSII光响应曲线的初始斜率,代表了植物对光能的利用效率）值均高于广州番禺牛筋草,且值较稳定,而广州番禺牛筋草Fv/Fm和α在草甘膦处理5 d后均降为0。【结论】广东省部分果园或菜田田埂牛筋草对草甘膦已产生不同程度的抗药性,其中杨村牛筋草抗性最高;杨村牛筋草体内积累的莽草酸很低,植株光合系统基本未受到影响,光合作用正常进行。     

酶联免疫分析法及其在食品农药残留检测中的应用

介绍酶联免疫分析法(ELISA)的原理,酶联免疫分析法在食品农药残留检测中应用的技术要点和存在问题,并对酶联免疫分析法在食品农药残留检测中的应用前景作了展望。     

应用双抗体夹心酶联免疫方法检测仿刺参病原菌——黄海希瓦氏菌AP629

“化皮病”是当前仿刺参养殖的最严重的疾病,导致大量死亡,严重影响我国水产养殖的经济效益。以仿刺参病原菌--黄海希瓦氏菌(Shewanella smarflavi)AP629兔源多克隆抗体和鼠源单克隆抗体3D9分别作为包被抗体和检测抗体,建立了黄海希瓦氏菌AP629的双抗体夹心ELISA快速检测方法。多克隆抗体和单抗3D9的最佳稀释倍数分别为1∶400和1∶80,该方法特异性强,与弧菌、气单胞菌、爱德华氏菌、大肠杆菌等均无交叉反应,检测灵敏度高。以PBS和仿刺参体壁匀浆上清液为悬菌介质的最低检出限分别为104 cells/mL和106 cells/mL。对人工感染黄海希瓦氏菌的10头仿刺参进行检测,其检测结果均为阳性,稳定性和重复性良好。该方法的建立有助于快速准确地诊断由黄海希瓦氏菌AP629引起的仿刺参疾病。     

草甘膦残留的酶联免疫分析方法的建立

通过碳化二亚胺法将草甘膦(Glyphosate,GLY)分别与卵清蛋白(OVA)和牛血清白蛋白(BSA)偶联制备免疫原和包被原。基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)检测表明,草甘膦与牛血清白蛋白和卵清蛋白的偶联比分别为11∶1和9∶1。合成的免疫原作用新西兰大白兔制备出草甘膦多克隆抗体,ELISA检测抗体溶液效价为1∶1×107,该抗体不与草甘膦的结构类似物增甘膦和双甘膦起交叉反应。以此抗体建立了草甘膦间接竞争ELISA检测方法(ciELISA),其线性范围为0.78～100μg/mL,线性回归方程为y=15.851 0 lnx+7.780 5,R2=0.993 8。草甘膦的检测限为IC10=1.15μg/mL,IC50=14.35μg/mL。在添加回收试验中,草甘膦添加值5和10μg/g时,玉米粉中的草甘膦回收率为104.12%和81.37%,小麦粉中的回收率则分别为118.94%和为109.39%。结果表明,采用所制备的多克隆抗体而建立的草甘膦ciELISA方法可有效地应用于玉米粉和小麦粉中草甘膦的残留检测。     

酶联免疫吸附法在环境监测领域中的应用

重点讲述酶联免疫吸附法在环境监测领域中的应用,分析了酶联免疫吸附法的缺点,并对其应用前景进行了展望。     

磺胺间甲氧嘧啶残留阻断ELISA试剂盒的研制及其初步应用

【目的】研制磺胺间甲氧嘧啶(Sulfamonomethoxine,SMM)残留快速检测阻断ELISA试剂盒(SMM-Kit),为有效治理磺胺间甲氧嘧啶的滥用,保障动物源性食品安全提供技术支撑。【方法】在成功研制SMM单克隆抗体(Monoclonal antibody,mAb)的基础上,应用阻断ELISA试验原理研制SMM-Kit,并对其特性进行了系统测定。【结果】SMM-Kit标准曲线呈典型的S型,相关系数R2=0.992 8,符合4参数logit曲线拟合,线性检测范围为1.33~389.9μg/L,灵敏度为3.57μg/L,半数抑制浓度(IC50)为17.07μg/L。牛奶样和猪尿样的平均添加回收率分别为91.5%和92.0%,平均批内和批间变异系数均低于15%;基质对SMM-Kit检测结果的影响不大;SMM-Kit与其他磺胺类药物的交叉反应性<1.7%,表明其与其他药物几乎无交叉反应性;试剂盒在4℃可保存6个月。【结论】成功地研制出了SMM-Kit,在牛奶和猪尿液样品中的初步应用证明,该试剂盒灵敏度、准确度高,特异性强,可低温保存6个月。     

酶联免疫分析技术在害虫防治中的应用

酶联免疫吸附试验具有敏感性高、特异性强、检测迅速、操作简便、安全、结果易观察的优点,并可对大规模样品进行自动化检测。 随着杀虫剂的大量使用,引起了害虫抗药性的产生、再猖獗及农药残留污染环境等一系列问题。面对这种情况,我们在防治策略上,一方面要尽可能利用自然的控制因素对害虫进行综合治理;另一方面需要制订法规加强对害虫抗性水平、农药残留的监测,及早发现问题,采取相应措施,做到防患于未燃。无论是抗性水平监测,农药残留分析,还是害虫自然控制因素中捕食性天敌控制效能的评价     

三甲氧苄氨嘧啶单克隆抗体制备以及酶联免疫试剂盒的研究

[目的]探讨系统地检测水质中三甲氧苄氨嘧啶残留量的方法。[方法]通过三甲氧苄氨嘧啶与马来酸酐反应,得到三甲氧苄氨嘧啶半抗原,再通过免疫动物得到抗三甲氧苄氨嘧啶单克隆抗体,并将其应用于能够检测水质中三甲氧苄氨嘧啶残留量的ELISA试剂盒。[结果]试验表明,该试剂盒对水质中三甲氧苄氨嘧啶的检测限为2.34μg/kg,IC50(50%抑制浓度)为4.8μg/L,回收率为60.5%~79.7%,试剂盒的标准曲线范围为0~80μg/L,批内、批间的相对标准偏差均小于10%,三甲氧苄氨嘧啶单克隆抗体与二甲氧苄氨嘧啶的交叉反应率小于1%,4℃下能够保存12个月,稳定性较好。[结论]研究可为监管三甲氧苄氨嘧啶的滥用提供参考。     

Use of chlorophyll fluorescence and P700 absorbance to rapidly detect glyphosate resistance in goosegrass(Eleusine indica)

The rapid detection of glyphosate resistance in goosegrass(Eleusine indica) will enhance our ability to respond to new resistant populations of this major weed. Chlorophyll fluorescence(Fluo) and P700(reaction center chlorophyll of photosystem I) absorbance were analyzed in one biotype of goosegrass that is resistant to glyphosate and in another that remains sensitive to the herbicide. Both biotypes were treated with a foliar spray of glyphosate. Differences in photosystem II maximum quantum yield(Fv/Fm), effective photochemical quantum yield(Y(II)), and non-photochemical quenching(NPQ) between the biotypes increased over time. Values for Fv/Fm and Y(II) differed between the two biotypes 24 h after treatment(HAT). Differentiated activities and energy dissipation processes of photosystem II(PSII) and energy dissipation processes of photosystem I(PSI) were manifested in the two biotypes 24 HAT with 20 mmol L–1 glyphosate. Differentiated energy dissipation processes of PSI were still apparent 24 HAT with 200 mmol L–1 glyphosate. These results indicate that the Fluo parameters related to PSII activity and energy dissipation and the P700 parameters related to energy dissipation are suitable indicators that enable rapid detection of glyphosate resistance in goosegrass.     

Investigating the mechanisms of glyphosate resistance in goosegrass(Eleusine indica) population from South China

Glyphosate has been used worldwide for nearly 40 years,and 30 types of resistant weeds have been reported.Glyphosate is mass-produced and widely used in China,but few studies and reports on glyphosate-resistant weeds and resistance mechanisms exist.Previous studies found a goosegrass species with high glyphosate resistance from orchards in South China and its glyphosate resistant mechanism was described in this study.The cDNAof 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase(EPSPS,EC 2.5.1.19),the target enzyme of glyphosate,was cloned from the glyphosate-resistant and-susceptible goosegrass,respectively,and referred as EPSPS-R and EPSPS-S.The Pro106 residue was known to be involved in the glyphosate resistance in most goosegrass populations.However,sequence analysis did not find the mutation at the Pro106 residue in the R biotype EPSPS amino acid sequence.The residue 133 and 382 was mutated in the R biotype EPSPS amino acid sequence instead,but it did not affect the EPSPS-S and EPSPS-R genes sensitivities to glyphosate.RT-PCR and Western blot analyses suggested that EPSPS mRNA and protein are mainly present in the shoot tissues both in the R and S goosegrass biotypes.The EPSPS-R rapidly responds to the glyphosate in R-biotype goosegrass and the induced expression was detected at 12 h post glyphosate treatment.The mRNA and protein expression of EPSPS-R increased constantly as the increasing concentration of glyphosate.However,the expression of the EPSPS-S was not induced significantly by glyphosate in the S goosegrass biotype.Quantification of real-time PCR results showed that the copy number of the EPSPS in R-biotype goosegrass was 4.7 times higher than that in the S goosegrass biotype.All the results implied that EPSPS gene amplification might mainly caused the glyphosate resistance of a goosegrass population collected from orchards in South China.     

诺氟沙星ELISA试剂盒研制与性能鉴定

【目的】建立诺氟沙星（norfloxacin,Nor）免疫检测试剂盒。【方法】基于所制备的诺氟沙星单克隆抗体,通过矩阵法筛选最佳抗体工作浓度和二抗工作浓度,建立诺氟沙星间接竞争ELISA试剂盒（Nor-kit）,并对其性能进行了鉴定和确证。【结果】Nor-kit的平均IC50 为5.18 μg•L-1,灵敏度为0.31 μg•L-1,检测限为1.00 μg•L-1。试剂盒除了和诺氟沙星反应外,还和同系物中的培氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星、洛美沙星及恶喹酸有不同程度的交叉反应。奶样中回收率平均为103.23%,变异系数(CV)为9.33%。3个不同批次试剂盒的测定结果中,批内变异系数小于10%,且批间变异系数也小于10%;在4℃保存条件下,试剂盒可以保存6个月而质量不变。奶样添加回收试验,试剂盒与LC-MS/MS测定结果没有显著差异（P≥0.05）;而且检测实际生产中鲜奶样时,试剂盒与LC-MS/MS测定结果也无显著差异（P≥0.05）。【结论】本研究成功研制出灵敏、特异、简便的诺氟沙星残留检测ELISA试剂盒。     

农产品中玉米赤霉醇ELISA检测试剂盒的研制与应用

[目的]建立快速、有效检测农产品中玉米赤霉醇(ZER)残留量的方法。[方法]试验以人工合成的ZER为包被原,ZER为竞争半抗原,两者与一定量的抗玉米赤霉醇单克隆抗体反应,应用间接竞争ELISA法建立玉米赤霉醇单克隆抗体快速检测农产品中ZER含量的半定量检测,同时对该ELISA试剂盒进行了调试。[结果]试验建立检测ZER的ELISA方法,其最适包被浓度为1∶5 000,抗体最适工作浓度为1∶2 500,酶标二抗的最适工作浓度为1∶5 000。试剂盒检测限为0.5 ng/ml,添加回收率在70.0%~116.0%,变异系数小于20%,在2~8℃条件下可保存90 d。[结论]该试验建立的方法可应用于玉米、小麦、高粱等中的玉米赤霉醇的检测,应用前景广阔。     

外来入侵植物牛筋草的生物学特性与危害成因

为了探明外来植物牛筋草(Eleusine indica)的生物学特性及其危害特点,采用实地调查法对洞庭湖区牛筋草的茎分蘖生长规律、伴生植物、分布生境、繁殖特性以及形成危害的原因等进行了调查与综合分析。结果表明:牛筋草在洞庭湖区分布广泛,繁殖能力强,根系发达,适应性强,生存竞争能力强,对农作物危害严重;其茎分枝平均长度为44.20cm,分枝节位越高,分枝长度越短;菜地牛筋草的茎分枝数最多,密度达48.80株/m2,相对盖度较大(为80.56%);牛筋草的复穗状花序分列数多是2列或3列;禾本科植物为其伴生的优势科,狗尾草、狗牙根为伴生的优势种。     

牛轮状病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立

用差速离心法纯化的牛轮状病毒(BRV)分别免疫鼠和兔,制备了鼠抗BRV和兔抗BRV超免疫血清,并用层析方法进行了纯化,建立了检测BRV的双抗体夹心ELISA方法.该双抗体夹心ELISA的最佳反应条件为:兔抗BRV IgG包被浓度为10μg·mL-1,鼠抗BRV IgG工作浓度为5 μg·mL-1,样品反应时间60 mi...     

溴氰菊酯残留检测ELISA试剂盒的研制

在前期建立溴氰菊酯间接竞争ELISA检测方法的基础上,研制组装出溴氰菊酯残留检测ELISA试剂盒,并以苹果为试样,对该试剂盒的灵敏度、精密度、准确度、特异性进行参数测定。本试剂盒的IC50为3．999-7．709μg／mL,检出限为0．011-0．024mg／kg,检测范围为0．015～100μg／mL,重现性较好,特异性强,以0．1,0．5,1．0mg／kg3个水平添加苹果,回收率为86．2％～105．8％,变异系数为6．0％～9．8％,接近气相色谱法的检测水平,可满足溴氰菊酯残留初筛检测需要。该试剂盒的成功研制为实际样品检测提供理论基础。     

磺胺嘧啶残留阻断ELISA试剂盒的研制及鉴定

基于1株分泌抗磺胺嘧啶(sulfadiazine,SD)高亲和力的SD单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb),应用ELISA试验原理研制SD残留快速检测阻断ELISA试剂盒(SD-Kit),并对其特性进行测定。SD-Kit的标准曲线呈典型的S型,相关系数R2=0.9914,符合4参数logit曲线拟合,线性检测范围为0.02～12.92μg/L,灵敏度为0.08μg/L,半数抑制浓度(IC50)为0.54μg/L,检测限为0.08μg/L;鲜奶样和猪尿样的平均添加回收率分别为90.8%、95.8%,平均批内和批间变异系数均低于10%;基质对SD-Kit的检测结果影响不大;SD-Kit与磺胺甲基嘧啶的交叉反应率为2.7%,与其他磺胺类药几乎没有反应性;试剂盒在4℃可保存6个月。