中国荷斯坦牛LYZ基因多态性及其与乳房炎的关联分析

【目的】通过研究中国荷斯坦牛溶菌酶基因(lysozyme,LYZ)编码区多态性与乳房炎的关联性,寻找与乳房炎相关的分子标记,加快中国荷斯坦牛的抗病育种进程。【方法】利用PCR-SSCP技术对30个公牛家系的610头中国荷斯坦牛LYZ基因进行多态性检测,利用最小二乘均数法对LYZ基因的多态位点与SCS和305d产奶量进行相关分析【结果】LYZ基因的外显子1上存在115(TG)突变位点,突变使精氨酸变为亮氨酸;突变位点经PCR-SSCP法检测发现了3种基因型TT、TG和GG,频率分别为0.270、0.508和0.222,χ2检验表明中国荷斯坦牛在该位点偏离Hardy-Weinberg平衡;GG基因型个体的SCS最小二乘均值极显著低于TT基因型个体(P0.01),显著低于TG基因型个体(P0.05);GG基因型个体的305d产奶量最小二乘均值极显著高于TT基因个体(P0.01),显著高于TG基因型个体(P0.05)。【结论】115(TG)位点GG基因型,对中国荷斯坦牛的SCS和305d产奶量有较大的遗传效应,可作为分子标记应用于奶牛乳房炎抗性的筛选。     

伊犁马DMRT3基因多态性研究

【目的】以103匹伊犁马(速步型)为研究对象,研究伊犁马DMRT3基因多态性与步法性状之间的相关性。【方法】运用PCR-RFLP方法对伊犁马DMRT3基因进行多态性分析。【结果】该基因在伊犁马上存在3种基因型,分别为CC、CA和AA,测序结果显示:DMRT3的碱基突变位置为g.22999655CA,该突变导致氨基酸编码提前终止,经关联分析,该突变对伊犁马速度有显著影响(P0.05)。【结论】伊犁马DMRT3基因突变与速度之间存在关联性,且可能是伊犁马步法性状的重要位点。     

伊犁马LPL基因多态性及其与肉质性状关联性分析

【目的】研究伊犁马脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase,LPL)基因多态性及其对肉质性状的影响,为专门化肉用马选种提供技术支撑。【方法】以41匹成年伊犁马为研究对象,采集颈静脉血液样本及其三角肌、背阔肌、臂三头肌、腹外斜肌和臀中肌5个部位肌肉样本,提取伊犁马DNA样本并测定肉质性状,利用PCR测序法筛选LPL基因突变位点并进行多态性分析,结合伊犁马肉质性状数据与LPL基因多态性进行关联性分析。【结果】所选马匹中共检测出2个突变位点(g.715T>C和g.12074C>A),均为内含子突变,2个位点均只检测出2种基因型,为低度多态位点。g.715T>C位点TT基因型马匹背阔肌和臀中肌失水率显著高于TC基因型马匹(P<0.05),背阔肌剪切力极显著大于TC基因型马匹(P<0.01),腹外斜肌剪切力极显著小于TC基因型马匹(P<0.05),三角肌和臀中肌剪切力显著大于TC基因型马匹(P<0.05);g.12074C>A突变位点CC基因型马匹臂三头肌和臀中肌失水率极显著低于CA基因型马匹(P<0.01),背阔肌和腹外斜肌失水率显著低于CA基因型马匹(P<0.05),臂三头肌熟肉率极显著高于CA基因型马匹(P<0.01),三角肌和腹外斜肌熟肉率与CA基因型马匹呈显著差异(P<0.05),臂三头肌和腹外斜肌剪切力极显著高于CA基因型马匹(P<0.01)。【结论】LPL基因g.715T>C和g.12074C>A位点是影响伊犁马肉质性状的潜在位点。     

伊犁马COMT基因第1外显子多态性及其与心率的关联性

【目的】 研究伊犁马COMT基因第1外显子的多态性及其构建的单倍型,并分析不同基因型、单倍型组合与心率之间的关联程度,为研究COMT基因对马匹气质及生产性能的影响奠定前期基础。【方法】以35匹伊犁马为研究对象,采用酚—氯仿法、DNA测序等技术分析COMT第1外显子基因多态性位点及基因型,通过haploview 4.2 软件构建单倍型,采集马匹心率,并对其与不同基因型、单倍型组合进行关联分析。【结果】伊犁马COMT基因第1外显子中共发现8个突变位点,其中SNP1、SNP2、SNP4、SNP5、SNP7和SNP8为错意突变;除SNP7与其余各突变间均无较强连锁外,SNP1-6、SNP8均存在一定的强连锁关系,SNP1和SNP4完全连锁;构建出9种单倍型,其中H1为优势单倍型;进行不同 SNPs位点及单倍型组合与心率的关联分析发现SNP3和SNP5不同基因型在温和刺激心率上存在显著或极显著性差异(P<0.01或P<0.05),SNP2、SNP5、SNP6、SNP7和SNP8不同基因型在剧烈刺激心率上均有显著或极显著性差异(P<0.01或P<0.05),单倍型组合H1H2在剧烈刺激心率上显著性大于H1H3。【结论】伊犁马COMT第1外显子上存在多态性,且不同突变间存在一定程度的强连锁,不同基因型、单倍型组合个体在心率上存在差异,提示COMT基因可能是对伊犁马气质和生产性能影响的重要功能基因。     

秦川肉牛FGF2基因多态性与其生长和肉质性状的关联分析

【目的】研究秦川肉牛FGF2基因的多态性及其与肉牛生长和肉质性状的关联性。【方法】选取18~24月龄的健康秦川肉牛384头,测定其生长和肉质性状指标,采集血样,采用DNA技术检测FGF2基因全部外显子中的单核苷酸突变位点,对突变位点进行基因型分型,研究其单核苷酸基因多态性(SNP),并以一般线性模型(GLM)分析该SNP位点与秦川肉牛生长和肉质性状的关联性。【结果】在第1、2外显子上未发现突变位点,在第3外显子上存在4个SNP突变位点:SV1(g.A54740T),SV2(g.A54758C),SV3(g.T56809C)和SV4(g.C59443T)。其中,SV1有AA、AT和TT 3种基因型,SV2有AA、AC和CC 3种基因型,SV3有TT、TC和CC 3种基因型,SV4有CC、CT和TT 3种基因型。相比其野生基因型,SV1位点突变会降低体斜长、体高、腰高、胸深、胸围、腰角宽、尻长和体质量性状(P0.05);SV2、SV3和SV4位点突变会改善这些性状(P0.05);SV1位点突变会降低坐骨端宽性状(P0.05),但SV3和SV4位点突变会改善坐骨端宽性状(P0.05);SV4位点突变会改善背膘厚性状(P0.05);SV2和SV4位点突变会改善眼肌面积性状(P0.05);SV1突变会改善肌间脂肪性状(P0.05)。【结论】FGF2基因对秦川肉牛生长性状和肉质性状有一定影响,可作为秦川肉牛现代分子选育的候选参考基因。     

麦洼牦牛H-FABP、HSL基因多态性及与生长性状的相关分析

【目的】探讨心脏脂肪酸结合蛋白（heart fatty acid-binding protein,H-FABP）、激素敏感脂肪酶（hormone-sensitive lipase,HSL）基因在牦牛中的遗传多态性,进一步揭示牦牛各品系间的遗传分化以及候选基因与牦牛生长性状间的关联性,同时为2个候选基因在牦牛中的表达调控等研究提供理论依据,寻找可用于辅助选择的分子标记。【方法】采用PCR-SSCP技术和DNA测序技术对共100头麦洼牦牛个体的H-FABP、HSL基因的外显子部分进行遗传多态性分析,统计基因和基因型频率,进行Hardy-Weinberg平衡性检测,计算纯合度、杂合度、多态信息含量和有效等位基因数等遗传多态指标,分析候选基因不同基因型与体高、体重、体斜长、胸围、管围等生长性状的关联性。【结果】①麦洼牦牛H-FABP、HSL基因外显子部分均存在多态性,多态性检验均存在3种基因型;②适合性检验表明仅HSL基因外显子8上多态位点处于Hardy-Weinberg平衡状态,其余多态位点均偏离;③测序分析表明,H-FABP基因外显子4第7 339位（与原序列相比）发生单碱基突变（T→C）,该突变属同义突变;HSL基因外显子7第6 883位发生G→C转换,以及第6816处发生碱基A→G突变,并导致编码氨基酸由天冬氨酸（D）转变为甘氨酸（G）;外显子8第10 183 bp处发生A→G碱基突变,编码氨基酸由半胱氨酸（C）变为甘氨酸（G）;④对各标记基因型生长发育指标（体高、体斜长、胸围、管围、体重）进行差异显著性检验,仅HSL基因外显子7上A6816G基因座差异极显著（P﹤0.01）。【结论】麦洼牦牛H-FABP、HSL基因存在遗传多态性,且HSL基因外显子7上A6816G基因座表现的多态有可能作为一种遗传标记。     

猪TGFβ1和TGFβRⅠ基因多态性与产活仔数的关联分析

为探讨猪转化生长因子β1(TGFβ1)及其受体(TGFβRⅠ)基因多态性与大白猪和长白猪产活仔数的相关性。采用PCR-SSCP方法检测了TGFβ1第6内含子和TGFβRⅠ第7内含子中与猪繁殖力相关的2个突变位点在大白猪和长白猪(共计232头)中的单核苷酸多态性,同时分析多态位点基因型与大白猪和长白猪产活仔数的关联性。结果发现:TGFβ1基因第7外显子上游的第9位碱基存在C→T突变,在大白猪和长白猪中均检出CC和TT 2种基因型,且不同基因型对2猪种产活仔数的影响差异不显著(P0.05);TGFβRⅠ基因第7内含子第808位碱基存在A→G突变,在大白猪中检出AA、AG、GG 3种基因型,长白猪中未检出GG基因型,大白猪中GG型母猪产活仔数极显著高于AA型(P0.01),长白猪中,AA型和AG型产活仔数的影响差异不显著(P0.05)。研究结果表明,TGFβ1基因的突变位点对大白猪和长白猪的产活仔数没有显著影响,TGFβRⅠ基因多态位点与母猪产活仔数显著相关,可作为猪分子遗传育种的候选基因,加快猪育种进程。     

宣和猪PRKAG3基因外显子5多态性及其与肉质性状的关联

【目的】揭示宣和猪PRKAG3基因外显子5多态性及其与肉质性状的关联。【方法】采用PCR产物直接测序法检测了120头宣和猪PRKAG3基因外显子5区域的SNP位点,借助最小二乘模型分析了各位点不同基因型及合并基因型对6个肉质性状的影响。【结果】宣和猪PRKAG3基因外显子5区域检出3个SNP位点,包括2个同义突变位点(T579C、T580C)和1个错义突变位点(G595A),分别以TT、TT、GA基因型和T、T、G等位基因的频率最高,且都处于Hardy-Weinberg平衡状态。T579C、T580C位点的TT和TC基因型可显著提高大理石纹(P0.05)和降低失水率(P0.01),分别呈显著的加性效应及加性—显性效应(P0.05或P0.01);G595A位点的AA基因型失水率最低(P0.05)、熟肉率最高(P0.05),呈显著的加性效应(P0.05);3个位点的合并基因型TTTTGG、TCTCGG和TTTTAA分别具有最高的大理石纹、pH1和最低的失水率(P0.05或P0.01),CCCCGG基因型的大理石纹和pH1最低、失水率最高(P0.05或P0.01)。【结论】研究结果进一步确认宣和猪PRKAG3基因外显子5多态性与肌肉大理石纹、pH值和失水率显著关联,T579C、T580C位点的CC基因型和G595A位点的GG基因型具有协同降低猪肉品质的效应。     

三个品种马PPARGC1A基因PCR-SSCP多态性分析

【目的】研究三个品种马PPARGC1A基因的多态性,为马分子育种奠定一定基础。【方法】以焉耆马、伊犁马、纯血马共161匹马为对象,用PCR-SSCP、DNA测序等技术研究分析马PPARGC1A基因的多态性。【结果】焉耆马和伊犁马PPARGC1A基因均有多态性,在75682碱基处发生G→A的突变,导致等位基因A变为等位基因B,产生从、BB、AB 3种基因型,基因频率计算结果显示,焉耆马,伊犁马处于Hardy-Weinberg非平衡状态。【结论】PPARGC1A基因在焉耆马与伊犁马中均存在多态性。     

无角牦牛FTO基因多态性与生长性状的关联性分析

【目的】探究无角牦牛脂肪和肥胖相关基因(FTO)多态性与生长性状之间的关联性,以期找到与无角牦牛生长相关的分子标记。【方法】参考GenBank中野牦牛的FTO基因序列,针对其第4内含子和第8内含子设计引物,采用PCR-SSCP和DNA测序技术对354头无角牦牛的FTO基因进行多态性分析,并运用SPSS 20.0软件分析各基因与体质量、体高、体斜长和胸围等生长性状的相关性。【结果】在无角牦牛FTO基因的第4内含子区域检测出A164506C突变位点,有2个等位基因A和C,有3种基因型(AA、AC和CC),优势等位基因和基因型分别是A和AA,其频率分别为0.694 9和0.485 9;在第8内含子区域检测出G309000A突变位点,共有2个等位基因A和G,有3种基因型(GG、GA和AA),优势等位基因和基因型分别是G和GG,其频率分别为0.926 3和0.858 4。A164506C突变位点为中度多态位点,纯合度较低,处于Hardy-Weinberg平衡状态;G309000A突变位点为低度多态位点,纯合度较高,处于Hardy-Weinberg不平衡状态。A164506C位点与无角牦牛的体高和体斜长具有显著或极显著相关性,AC基因型个体优于AA基因型个体。G309000A位点与无角牦牛的胸围和体斜长具有显著或极显著相关性,GA基因型个体优于GG基因型个体。【结论】FTO基因第4内含子区域A164506C突变和第8内含子区域G309000A突变均与无角牦牛生长性状具有相关性。     

基于LC/MS的伊犁马3600 m速度赛赛前、赛后血浆代谢组学差异变化

【目的】研究伊犁马3 600 m速度赛赛前赛后血浆中代谢物的差异变化。【方法】根据马场提供的遗传系谱,挑选5匹(3♂+2♀)无亲缘关系、体重(384.40±34.18)kg、年龄为2岁的速度赛用伊犁马,每日进行等强度训练。第25 d晨饲后4 h进行3 600 m速度赛,试验马以(11.75±0.87)m/s的平均速度完成比赛。赛前安稳状态下和赛后即刻测定心率和呼吸频率,采集血液、制备血浆样品,采集血浆的质谱,采用非靶向性代谢组学方法测定代谢物。【结果】与赛前心率(39.80±0.40)bpm、呼吸频率(14.00±1.80)bpm相比,3 600 m速度赛赛后即刻试验马心率(80.80±7.70)bpm、呼吸频率(78.80±3.90)bpm显著升高(P<0.05)。与赛前相比,试验马赛后即刻部分血浆代谢物产生显著变化,差异代谢物主要涉及柠檬酸循环、丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢、五糖和葡萄糖醛酸间转化、半胱氨酸与蛋氨酸代谢、氧化磷酸化、脂肪酸降解、鞘脂代谢等生化代谢途径(P<0.05)。【结论】伊犁马3 600 m速度赛前、赛后血浆样本的LC/MS代谢谱存在差异,差异代谢物...     

调教训练对伊犁马1600m速度赛步态特征的影响

【目的】研究调教训练对伊犁马1 600 m速度赛步态特征的影响,为速度赛伊犁马调教训练提供数据支撑。【方法】挑选8匹未经调教训练的3岁伊犁马(公马)为试验对象,采用3个月的速度调教训练,采集不同训练阶段马匹速度赛直道、弯道、冲刺处的步态特征,分析不同训练阶段伊犁马步态特征的差异。【结果】伊犁马训练后期平均速度显著大于训练初期(P<0.05);后位后蹄支撑相在训练初期显著低于训练中期(P<0.05),前位前蹄支撑相在训练初、后期显著低于训练中期(P<0.05),后肢双支撑相在训练初期显著低于训练中、后期(P<0.05);后位后蹄摆动相在训练中期显著低于训练后期(P<0.05),前位后蹄摆动相在训练中期显著低于训练初、后期(P<0.05),后位前蹄摆动相在训练中期显著低于训练初期(P<0.05),前位前蹄摆动相在训练中期显著低于训练初、后期(P<0.05);腾空期在训练中期显著低于训练前、后期(P<0.05);瞬时速度在训练初期显著低于训练后期(P<0.05);前肢步幅在训练初、中期显著小于训练后期(P<0.05),腾空期步...     

调教训练对1000 m速步赛伊犁马血气指标的影响

【目的】 研究调教训练对1 000 m速步赛伊犁马血气指标的影响,为国产速步赛马调教训练方案的制定提供数据参考。【方法】 选取8匹健康伊犁马母马为试验对象,速步专项训练2个月,在训练开始前和训练结束后分别组织速步测试赛,采集运动前、运动后即刻及运动后15 min马匹血液样本,测定样本血气指标,对运动前、运动后即刻及运动后15 min测定指标进行差异性分析,对训练前和训练后测定指标进行独立样本T检验。【结果】 调教训练前,1 000 m速歩赛伊犁马血液pH值运动后即刻极显著低于运动后15 min(P<0.01),HCO^-₃浓度、剩余碱浓度运动后即刻极显著低于运动前(P<0.05),PCO₂和TCO₂运动后即刻极显著低于运动前(P<0.01)Hct和Hb浓度运动后即刻极显著高于运动前(P<0.01),显著高于运动后15 min(P<0.05);调教训练后,1 000 m速歩赛伊犁马血液pH值运动后即刻显著低于运动前和运动后15 min(P<0.05),Na⁺浓度在运动后即刻显著高于运动前(P<0.05);Hct和Hb浓度在运动后即刻显著高于运动后15 min(P<0.05)。通过对调教训练前和调教训练后对比发现,1 000 m速歩赛伊犁马调教训练前、后静脉血液剩余碱浓度运动后即刻调教训练后显著高于调教训练前(P<0.05),PCO₂在运动后15 min调教训练前显著低于调教训练后(P<0.05),Hb浓度在运动后15 min调教训练前极显著高于调教训练后(P<0.01),Hct在运动后15 min调教训练前显著高于调教训练后(P<0.05)。【结论】 综上所述,调教训练后能够增强1 000 m速歩赛伊犁马酸碱平衡能力、气体交换能力及血液运输能力,有效降低马匹在运动过程中的机体损伤。     

热身强度对伊犁马心率变异性及1 000 m速度赛成绩的影响

【目的】研究不同热身强度对伊犁马心率变异性,分析1 000 m速度赛成绩的影响,为伊犁马赛前最佳热身条件的确立提供前期理论基础。【方法】选取11匹伊犁马为研究对象,控制马匹心率稳定在30%~40% HRmax(A区间)、40%~50% HRmax(B区间)、50%~60% HRmax(C区间)三个区间内热身后进行1 000 m速度赛。对不同强度热身时的心率变异性(HRV)与比赛用时进行差异性及相关性分析。【结果】在C区间热身后比赛成绩最好;在C区间热身时,与A区间热身时的值相比,SDNN、RMSSD、LF/HF、SD1极显著升高(P<0.01),HF显著增大(P<0.05),VLF、LF显著降低(P<0.05);与B区间热身时的值相比,SD1极显著升高(P<0.01);比赛用时与SD1极显著负相关(P<0.01),与LF极显著正相关(P<0.01),与VLF显著正相关(P<0.05)。【结论】热身可以提高马匹自主神经兴奋性,在C区间热身时马匹副交感神经活性最高,最有利于运动性能的发挥,比赛成绩最好。     

不同剂量原花青素对两岁伊犁马抗氧化的影响

【目的】研究补饲不同剂量原花青素对伊犁马1 000 m速度赛前后血清抗氧化指标的影响。【方法】选择年龄 2岁,1 000 m 速度赛成绩接近的伊犁马公马 16匹,随机分为四组。分别以四个剂量组原花青素进行为期 28 d 的补饲,在第28 d 进行1 000 m速度赛并进行采样,采样的时刻为赛前30 min、赛后即刻、赛后30 min、赛后90 min、赛后24 h。采集静脉血对相关指标进行测定,对测定结果进行单因素方差分析。【结果】静息状态:SOD 活性实验组时显著高于对照组(P<0.05);GSH-PX 活性添加60 mg /kg BW和40 mg/kg BW剂量组显著高于对照组(P<0.05);运动后30 min:SOD 、GSH-PX活性添加60 mg/kg BW剂量组时显著高于对照组(P<0.05); MDA含量添加60 mg /kg BW剂量组显著低于对照组(P<0.05)。运动后90 min:SOD 活性添加60 mg/kg BW剂量组时显著高于对照组(P<0.05);GSH-PX 活性添加60 mg/kg BW剂量组极显著高40 mg/kg BW剂量组、20 mg/kg BW剂量组和对照组(P<0.01);运动后24 h:SOD、GSH-PX 活性添加60 mg/kg BW剂量组时显著高于对照组(P<0.05)。【结论】运动马补饲原花青素的量控制在60 mg/kg BW可有效提高运动型伊犁马抗氧化能力。     

不同热身程度对伊犁马1000m速度赛后各阶段血气指标的影响

[目的]研究不同热身程度对伊犁马1000 m速度赛后各阶段血气指标的影响,为优化马匹热身方案、提高伊犁马1000 m速度赛后恢复能力提供技术支撑.[方法]选取10匹速度型伊犁马为研究对象,分别以最大心率70％ ～80％、60％ ～70％、50％ ～60％,热身10 min后进行1000 m速度赛,对各组赛后各阶段马匹血...     

青年伊犁马2 000 m测试赛对其心率变异性的影响

【目的】研究青年伊犁马2 000 m测试赛对其心率变异性的影响,为评估伊犁马运动的疲劳状态及运动状态提供理论参考。【方法】选取20匹2岁健康状况良好的伊犁马,组织测试赛,根据测定运动成绩分为优秀组(10匹)和普通组(10匹),采集马匹赛前、赛后即刻、赛后30 min和赛后1 h的心率变异性(HRV)时域指标、频域指标和非线性指标,分析各时间点及两组马匹的HRV指标的差异性。【结果】伊犁马2 000 m测试赛后,优秀组马匹HRV时域指标中全部正常R－R间期的平均值(Mean RR)、全部正常R－R间距的标准差(SDNN)、相邻心搏两R波间距之差值大于50 ms的心搏数占心搏总数的百分比(PNN50)、相邻R－R间期差值的均方根(RMSSD)赛后即刻极显著低于赛前(P<0.01),平均心率(Mean HR)赛后即刻极显著高于赛前(P<0.01);频域指标中极低频率(VLF)、低频功率(LF)和高频功率(HF)赛后即刻极显著低于赛前(P<0.01),低频与高频的比值(LF/HF)在赛后即刻显著高于赛前(P<0.05);非线性指标中全部正常R－R间距的标准差(Y)(SD1)和全部正常R－R间距的标准差(X)(SD2)均呈现出赛后即刻极显著低于赛前(P<0.01)。普通组马匹HRV时域指标中Mean RR、SDNN、PNN50和RMSSD在赛后即刻极显著低于赛前(P<0.01),Mean HR赛后即刻极显著高于赛期前(P<0.01);频域指标VLF、LF和HF在赛后即刻极显著低于赛前(P<0.01);非线性指标中SD2赛后即刻极显著低于赛前(P<0.01)。赛前Mean RR、SDNN和RMSSD优秀组马匹均显著高于普通组马匹(P<0.05),VLF和LF赛后即刻优秀组马匹均显著低于普通组马匹(P<0.05)。【结论】伊犁马2 000 m运动后交感神经张力增加、迷走神经张力降低,交感神经和迷走神经二者之间的平衡关系失衡,HRV可以作为评价伊犁马运动性疲劳的有效指标;可以通过在赛前监测Mean RR、RMSSD、SDNN和PNN50指标来评价马匹的运动状态。