海带和条斑紫菜凝集素提取液对刺参体壁主要免疫酶活性的影响

为探讨凝集素提取液对刺参Apostichopus japonicus免疫的影响,将刺参基础饲料中分别添加质量分数为0.64%、1.28%、2.56%的海带凝集素提取液,或质量分数为1.88%、3.76%、7.52%的条斑紫菜凝集素提取液,分别投喂6个试验组刺参(体质量为3.50 g1.95 g),以基础饲料饲养组为对照,分别于投喂凝集素提取液后第4、8、12、17天时,检测各组刺参体壁中过氧化氢酶(CAT)、溶菌酶(LSZ)、碱性磷酸酶(AKP)和酸性磷酸酶(ACP)的活性。结果表明:投喂海带凝集素提取液后,各浓度组刺参CAT、LSZ活性在第8、12、17天时均有显著或极显著提高(P<0.05或P<0.01),0.64%组ACP活性在第8、17天时有显著提高(P<0.05);投喂条斑紫菜凝集素提取液后,各浓度组刺参CAT活性在第8、12、17天时有显著或极显著提高(P<0.05或P<0.01),7.52%组LSZ活性在第8天时有显著提高(P<0.05),AKP活性在第4、17天时有极显著提高(P<0.01),ACP活性在第12天时7.52%组有极显著提高(P<0.01),第17天时各浓度组均有显著或极显著提高(P<0.05或P<0.01)。研究表明,海带和条斑紫菜凝集素提取液均能提高剌参体壁中CAT、LSZ、AKP、ACP的活性,显著增强剌参非特异性免疫水平,将其作为刺参免疫增强剂具有广阔的应用前景。     

条斑紫菜凝集素的提取及其性质研究

[目的]研究条斑紫菜（Porphyra yezoensis）凝集素的提取及分离纯化条件,并测定凝集素的性质。[方法]以比活力为指标,研究了缓冲体系、固液比、温度及时间等条件对条斑紫菜凝集素提取效果的影响。采用DEAE-Sepharose FF离子交换层析技术进行分离,确定了分离的最佳条件。以血凝集活性为指标,测定了凝集素的糖专一性、2价阳离子依赖性、温度及酸碱稳定性等性质。[结果]固液比为1∶5的Tris-HCl（25 mmol/L,pH值7.5）缓冲液在40℃条件下提取20 h得到的提取液具有最高比活力。条斑紫菜凝集素在50℃条件下加热30 min后活性保持不变,表现出一定的热稳定性,最适作用pH值为7～9。该凝集素能够与麦芽糖、半乳糖、阿拉伯糖及木糖结合,其中与麦芽糖的结合最强,凝集活性依赖Ca2＋、Mg2＋等2价阳离子。[结论]为阐明条斑紫菜的免疫机制及其高效综合利用提供了理论依据。     

条斑紫菜凝集素的提取及其性质研究(摘要)(英文)

[目的]研究条斑紫菜(Porphyra yezoensis)凝集素的提取及分离纯化条件,并测定凝集素的性质。[方法]以比活力为指标,研究了缓冲体系、固液比、温度及时间等条件对条斑紫菜凝集素提取效果的影响。采用DEAE-Sepharose FF离子交换层析技术进行分离,确定了分离的最佳条件。以血凝集活性为指标,测定了凝集素的糖专一性、二价阳离子依赖性、温度及酸碱稳定性等性质。[结果]固液比为1∶5的Tris-HCl(25mmol/L,pH值7.5)缓冲液在40℃条件下提取20h得到的提取液具有最高的比活力。条斑紫菜凝集素在50℃条件下加热30min后活性保持不变,表现出一定的热稳定性,最适作用pH值为7～9。该凝集素能够与麦芽糖、半乳糖、阿拉伯糖及木糖结合,其中与麦芽糖的结合最强,凝集活性依赖Ca2+、Mg2+等二价阳离子。[结论]该研究为阐明条斑紫菜的免疫机制及其高效综合利用提供了理论依据。     

条斑紫菜的光合作用及其主要影响因素

对3 种不同株系丝状体和同一紫菜养殖群落不同植株的光合作用进行了比较, 并研究了光、温、溶解无机碳(dissolved inorganic carbon, DIC) 浓度对紫菜叶状体光合作用的影响。结果表明: 紫菜叶状体在15 °C时的光补偿点约为70 μm ol/ (m 2 ·s), 光饱和点为250 μm ol/ (m 2·s); 而20 °C时光补偿点约为180 μm ol/ (m 2·s), 光饱和点在750 μm ol/(m 2 ·s) 附近。25～30 °C, DIC为10 m m ol/L时叶状体的光合速率最高。不同株系丝状体及同一紫菜养殖群落不同品种藻株间的光合速率均存在显著差异。耐高温株系 (HB) 在较高温度范围中光合速率比较稳定, 而不耐高温株系 (HA) 则变化较大, 故有可能以此作为选择耐高温性良种的生理指标。     

γ—射线对条斑紫菜和坛紫菜诱变作用的初步研究

本文主要测定了不同剂量γ－射线辐照条斑紫菜和坛紫菜体细胞苗后的生长情况。结果表明：两种紫菜均能耐受大范围剂量的γ－射线辐照，辐照剂量从１００－４００Ｇｙ，对两种紫菜体细胞的生长都有促进作用。条斑紫菜体细胞苗的最佳剂量为２００Ｇｙ，最佳剂量率为１２．２７Ｇｙ／ｍｉｎ；坛紫菜体细胞生长的最佳剂量为１００Ｇｙ，最佳剂量主为６．１３Ｇｙ／ｍｉｎ。此外，辐照组中，两种紫菜出现多种形态与色素变异体。     

氮磷浓度对条斑紫菜细胞培养的影响

氮和磷对紫菜的细胞生长和发育有很大的影响，本文讨论了不同氮源、不同氮和磷的浓度和不同细胞密度笃条斑紫菜细胞培养的存活率和细胞生长的影响。试验结果显示，对于细胞生长用ＮＯ３－Ｎ作为氮源估于用ＮＨ４－Ｎ的。前３天培养的细胞对Ｎ／Ｐ浓度的变化有一些忍耐性，３天后Ｎ／Ｐ的浓度对细胞存活率有影响，当Ｎ／Ｐ浓度为１８－２０／１．８－２．０ｍｇｌ＾－１时细胞存活率最高，第６天时，可达到７７－８０％，细胞分裂速度     

γ—射线对条斑紫菜和坛紫菜诱变作用的初步研究

本文主要测定了不同剂量γ－射线辐照条斑紫菜和坛紫菜体细胞苗后的生长情况。结果表明：两种紫菜均能耐受大范围剂量的γ－射线辐照，辐照剂量从１００－４００Ｇｙ，对两种紫菜体细胞的生长都有促进作用。条斑紫菜体细胞苗的最佳剂量为２００Ｇｙ，最佳剂量率为１２．２７Ｇｙ／ｍｉｎ；坛紫菜体细胞生长的最佳剂量为１００Ｇｙ，最佳剂量主为６．１３Ｇｙ／ｍｉｎ。此外，辐照组中，两种紫菜出现多种形态与色素变异体。     

氮磷浓度对条斑紫菜细胞培养的影响

氮和磷对紫菜的细胞生长和发育有很大的影响，本文讨论了不同氮源、不同氮和磷的浓度和不同细胞密度笃条斑紫菜细胞培养的存活率和细胞生长的影响。试验结果显示，对于细胞生长用ＮＯ３－Ｎ作为氮源估于用ＮＨ４－Ｎ的。前３天培养的细胞对Ｎ／Ｐ浓度的变化有一些忍耐性，３天后Ｎ／Ｐ的浓度对细胞存活率有影响，当Ｎ／Ｐ浓度为１８－２０／１．８－２．０ｍｇｌ＾－１时细胞存活率最高，第６天时，可达到７７－８０％，细胞分裂速度     

Hg2+对条斑紫菜毒害作用的研究

研究分析了不同浓度Hg2 对条斑紫菜光合作用强度、SOD、CAT、总抗氧化能力及可溶性蛋白质含量的影响。结果表明,藻胆蛋白对Hg2 的作用较为敏感,首先被破坏;叶绿素a的含量、光合作用强度、SOD、总抗氧化能力及可溶性蛋白质含量随Hg2 处理浓度的增加而先升后降,CAT活性则表现出总体下降的趋势。     

仿刺参体壁的显微和亚显微结构

采用光学显微镜和透射电镜对仿刺参体壁的组织结构进行了系统观察。H.E染色结果显示：仿刺参体壁从内向外分为4层——体腔内皮层、肌肉层、结缔组织层和表皮层。体腔内皮层由单层扁平细胞组成;肌肉层为内环外纵排列的平滑肌;结缔组织层由纤维和少量的结缔组织细胞构成;表皮层包括2～3层上皮细胞和其外很薄的角质层。超微结构观察结果显示：平滑肌纤维呈长梭形,无横纹;细胞核一个,呈长椭圆形或杆状,位于中央;细胞骨架主要由密斑、密体和中间丝组成。结缔组织中有大量胶原纤维,弹性纤维较少。细胞类型主要有成纤维细胞和颗粒细胞。表皮层大多为多边形细胞,角质层细胞界限不清,结构不完整,细胞核和细胞器已经完全消失。     

仿刺参体壁的组织学和组织化学

用组织学和组织化学方法对仿刺参Apostichopus japonicus体壁的结构和成分进行了研究。组织学研究结果表明:仿刺参体壁自外向内由上皮层、结缔组织层、肌肉层和体腔上皮层组成。上皮层主要包括一层薄的角质层和2~3层上皮细胞,结缔组织层内含丰富的胶原纤维,肌肉层主要是平滑肌,体腔上皮层由单层扁平上皮组成。组织化学研究结果表明:仿刺参体壁各层(除体腔上皮层外)均富含糖类和蛋白质,不含脂类;碱性磷酸酶和酸性磷酸酶在体壁中存在酶活性的部位相同,主要在结缔组织层的空洞状结构处以及结缔组织层与肌肉层交联处。     

仿刺参体壁再生形态学和组织学的研究

用手术刀片切掉仿刺参体壁表皮层和结缔组织层,深度至体腔膜。术后将仿刺参放入正常海水中饲养,用肉眼和光学显微镜观察仿刺参体壁再生的外部形态和组织学变化,并通过免疫荧光方法检测小鼠抗人角蛋白19（CK19）的表达。形态学观察表明：术后1 d,伤口呈凹陷状,体腔膜上增生出一薄层乳白色结缔组织;术后7 d伤口表面出现色素;术后11 d凹陷基本变平;术后21 d,伤口处体壁形态与颜色恢复至术前。组织学观察表明：术后1 d,疏松结缔组织直接暴露,创伤面附近有成纤维细胞和胶原纤维聚集;术后3 d,结缔组织外层有上皮细胞聚集;术后4 d,结缔组织间可见一条带状间隙;术后7 d,表皮外层出现角质层;术后11 d,上皮层厚度接近正常组织,但结缔组织较松散;术后21 d,上皮细胞数量、排列以及结缔组织的排列同正常组织。免疫荧光检测结果表明：CK19在正常的仿刺参体壁中表达得比较分散;术后3 d,CK19在创伤面附近集中表达。     

仿刺参体壁手术缝合方法的研究

以仿刺参Apostichopus japonicus为试验材料,建立了一种海参体壁手术缝合的方法.将体质量为(55±2.6)g的仿刺参放入盛有0.54 mol/L硫酸镁溶液的解剖盘中麻醉1h,然后用灭菌手术刀沿腹后部1/3处往前纵向切开约2 cm切口,深至体腔.采用单纯对合缝合法进行缝合,缝合后放回加有抗生素的水槽中培育.结果表明:试验组仿刺参伤口经缝合后,创口在10 d时已基本愈合,20d时切口处组织与正常组织没有区别,且在培育过程中,化皮率为10％,死亡率仅为5％;对照组伤口未经缝合,其创口愈合时间较试验组平均慢10 d,且化皮率高达58.7％,死亡率为51.7％.该方法可应用到海参的创伤试验研究以及养殖生产中.     

不同饲料蛋白水平对仿刺参生长的影响

在水温为（14±0.5）℃、盐度为31～31.5的条件下,研究了仿刺参幼参Apostichopus japonicus对蛋白水平为6%、13%、20%、27%、34%的5种饲料（以鱼粉、鼠尾藻粉、玉米面粉、复合维生素和复合矿物质为原料）的能量收支。结果表明：当饲料蛋白水平为19.48%时,幼参的特定生长率和饲料转化效率均达到最高水平,分别为1.27%/d和5.58%,此时饲料系数最低,为1.134;在该蛋白水平下,仿刺参生长能的比例最大,能量收支方程为100C=5.28G＋27.24F＋4.22U＋3.46Rs＋59.80R。     

两种降温模式的低温胁迫对刺参抗氧化酶活性及丙二醛含量的影响

为研究不同降温模式的低温胁迫对刺参Apostichopus japonicu两种抗氧化酶(CAT、SOD)活性及MDA含量的影响,以规格为(107.48±23.28)g的刺参为研究对象,采取缓降及骤降两种降温模式对其进行低温胁迫,比较不同时期刺参体腔液中CAT、SOD活力和MDA含量的变化情况。结果表明:缓降模式低温胁迫后,刺参体腔液中CAT及SOD活力较胁迫前略有所上升,而MDA含量显著上升(P0.05),2周恢复期后,CAT活力上升到最高水平(29.745U/mL),SOD活力恢复到与低温胁迫前相当水平;骤降模式低温胁迫后,刺参体腔液中CAT活力较胁迫前显著上升(P0.05),为31.165U/mL,SOD活力降低至最低值(0.401U/mL),MDA含量显著上升(P0.05),2周恢复期后,CAT活力达到最高值,为35.154U/mL,SOD活力上升至与低温胁迫前相当水平;1周0℃低温处理后,经缓降模式低温胁迫后的刺参体腔液中CAT、SOD活力和MDA含量均低于对照组,经骤降模式低温胁迫后的CAT活力低于对照组,而SOD活力显著高于对照组(P0.05),MDA含量低于同时期缓降组。研究表明,经过骤降模式低温胁迫后的刺参,其体腔液中两种抗氧化酶对低温的响应相对于缓降模式更为灵敏,能够更好地抵抗膜脂过氧化对机体的损伤,与未经低温胁迫的刺参相比,对低温环境表现出一定的适应性。本研究结果可为明确刺参在低温环境下的免疫防护机制提供理论依据,并为筛选刺参耐低温品系提供一定的参考价值。     

超声波-双水相协同提取海带多糖工艺的研究

[目的]优化超声波-双水相协同提取海带多糖的工艺。[方法]采用丙醇-硫酸铵双水相体系与超声耦合对海带多糖进行提取．苯酚-硫酸法测定多糖含量;采用单因素试验优化海带多糖的提取工艺。[结果]海带多糖提取的最佳工艺为：浸提时间为2h,超声提取时间为30min．提取温度为60℃,料液比为0．019,提取液pH值为5,在此条件下海带多糖的提取率为11．45％。[结论]试验建立了海带多糖提取的最佳工艺,为海带多糖的高效提取奠定了基础。     

仿刺参体壁创伤修复消减文库的构建与分析

应用抑制性消减杂交技术(SSH),构建了仿刺参Apostichopus japonicus(体质量为65 ～90 g)正常体壁及创伤修复(24、48、72、96、120 h后)体壁的消减cDNA文库,利用PCR和斑点杂交技术对文库进行筛选,随机挑取的768个克隆中发现292个阳性克隆,对其中信号强度较强的224个阳性克隆进行测序,得到208个有效EST序列.经BlastX工具对获得的EST与GenBank数据库进行比对分析,结果有171个EST序列与数据库中的基因同源(e≤0.001,相似性＞40％),其中153个为未知基因,18个为已知功能或已命名基因,包括在创伤及修复的体壁中上调表达的β微管蛋白、微管蛋白α-1链、肌动蛋白、肌动蛋白ike 7B类似物、细胞色素c氧化酶亚基Ⅰ、tRNA假尿苷合成酶A、GTP酶、细胞分裂周期2类似蛋白、有丝分裂原活化蛋白激酶、homeobox蛋白、延伸因子1A、核糖体蛋白L30、核糖体蛋白L17、60S酸性核糖体蛋白PO、26S蛋白酶调节亚基、泛素特异性肽酶24、大肠癌血清抗原3、清道夫受体蛋白12等.本研究结果可为探讨刺参体壁再生过程和分子机理,以及筛选刺参体壁创伤修复过程中相关功能基因的研究提供基础依据.     

镉对刺参幼参体内金属硫蛋白含量及其变化规律的影响

为评价水体中镉(Cd~(2+))对刺参Apostichopus japonicus体内金属硫蛋白(MT)的诱导效果,以刺参幼参(体质量8.87 g±1.12 g)为研究对象,在水温16~18℃下,探讨水体中不同浓度Cd~(2+)(0.005、0.025、0.050、0.250、0.500 mg/L)胁迫下幼参体内MT含量随Cd~(2+)胁迫时间(0、12、36、60、84、108h)的变化规律。结果表明:随着Cd~(2+)胁迫时间的延长,幼参肠道、呼吸树和体壁中MT含量呈先升高后趋于平稳的趋势,且在36 h时各组织中MT含量最高或相对较高;Cd~(2+)胁迫36 h时,幼参体内MT含量依次为肠道呼吸树体壁,且Cd~(2+)胁迫后幼参各组织间MT含量有显著性差异(P0.05);各时间点下,Cd~(2+)浓度试验组幼参肠道、呼吸树和体壁中MT含量均显著高于对照组(P0.05);在Cd~(2+)胁迫各时间点,幼参肠道和呼吸树中MT含量随Cd~(2+)浓度的升高呈显著"阶梯式"升高(P0.05),体壁中MT含量则随Cd~(2+)浓度的升高而升高,Cd~(2+)浓度为0.025、0.050 mg/L时,体壁中MT含量相差不大(P0.05),但均显著低于Cd~(2+)浓度最高组(0.500 mg/L)(P0.05)。研究表明,水体中的Cd~(2+)可诱导刺参组织合成金属硫蛋白,其中对肠道和呼吸树的诱导效果最明显,36 h即可达到较为显著的诱导效果,因此,刺参肠道和呼吸树组织中的MT含量可作为评价水体中重金属Cd~(2+)污染的生物标志物。