胎次对泌乳初期奶牛低丰度乳蛋白表达的影响

采用二维凝胶电泳结合液相色谱串联质谱的方法分析了第一胎和第三胎奶牛,产后第1天和第21天乳蛋白表达的差异.结果表明,与初产奶牛第1天乳蛋白表达模式相比,第三胎奶牛第1天的乳蛋白表达图谱上有4个蛋白表达量上调;而两个胎次第21天乳蛋白的表达模式无差异.这些差异表达蛋白包括具有免疫活性的免疫球蛋白G、免疫球蛋白M、乳铁蛋白...     

不同体细胞数牛乳中乳蛋白的比较蛋白质组学研究

 【目的】分析不同体细胞数牛乳中乳蛋白的表达变化。【方法】采用二维凝胶电泳技术分离了低体细胞数、中体细胞数、高体细胞数和临床乳房炎的牛乳蛋白,考马斯亮蓝G-250溶液染色,液相色谱串联质谱检测表达变化的蛋白点。【结果】在中体细胞数和高体细胞数乳中酪蛋白水解产物和白蛋白增加,在临床乳房炎牛乳中 α-、β-和κ-酪蛋白几乎全部水解,而白蛋白、转铁蛋白、纤维蛋白原β链和结合珠蛋白等乳清蛋白表达量增加。【结论】展示了不同体细胞数牛乳中乳蛋白的凝胶表达图谱,同时表明牛乳酪蛋白的水解程度随着体细胞数的增加而增加,至严重临床乳房炎时牛乳中酪蛋白几乎全部水解而乳清蛋白急剧增加。     

维生素AD3E针剂对围产期奶牛乳蛋白表达的影响

采用蛋白质组学方法,检测了产前注射维生素AD3E(V-AD3E)对围产期奶牛乳蛋白表达的影响.二维凝胶电泳分离了产后第1天和第21天乳蛋白组分,凝胶经染色、酶切、图像采集和斑点比对,与对照(不注射V-AD3E)组第1天乳蛋白图谱相比,注射组第1天乳蛋白图谱上有5个区域的蛋白表达上调,经高效液相色谱串联离子阱质谱对差异表达蛋白进行鉴定,主要为免疫球蛋白G(IgG)和白蛋白.产前注射V-AD3E上调了初乳中的IgG和白蛋白,不仅为饲喂初乳的犊牛提供了更好的免疫保护,而且提高了处于免疫抑制阶段母牛的抗病力.     

大约克猪初乳生化组成的动态变化

对9头大约克母猪分娩28d内乳汁的常规营养成分含量和乳蛋白组分的动态变化进行了研究,结果表明,大约克猪乳汁的组成在分娩3d内明显不同于常乳,其中乳蛋白含量在分娩1d内显著高于以后数天;乳糖和乳脂含量在分娩当天最低,以后数天呈波动性变化。酪蛋白比例在初乳和常乳蛋白中均占明显的优势,免疫球蛋白的比例随泌乳天数的增加呈逐渐下降的趋势,而α-乳清蛋白和高分子量蛋白的比例在分娩1d内显著低于分娩28d的。     

牦牛初乳中激素含量的动态变化

对麦洼牦牛(Bos.grunniens)分娩前后乳腺分泌物的生化组成进行了分析,并与常乳进行了比较。结果表明,牦牛初乳中激素含量高,分娩当天的初乳中生长激素、催乳素、胰岛素和胰岛素样生长因子含量均显著高于常乳,其中生长激素含量在泌乳第2天下降至与常乳接近,而其他激素或生长因子在初乳期前几天均显著高于常乳。另外,牦牛分娩当天和第2天乳汁中胰蛋白酶抑制剂(TI)含量显著高于常乳。     

利用转基因牛生产重组人乳铁蛋白研究

[目的]研究利用转基因牛生产重组人乳铁蛋白,为利用转基因动物生产药用或食用蛋白提供依据。[方法]对已获得的人乳铁蛋白转基因牛进行人工催乳,用乳成分分析仪分析了转基因对乳汁的影响,并利用放免法检测了重组人乳铁蛋白在转基因牛乳中的表达。[结果]重组人乳铁蛋白在牛乳中获得了高效表达,表达水平为(3.429±0.417)mg/ml。通过转基因牛乳的乳成分分析发现,转基因牛乳与常乳在乳脂、总蛋白、乳糖和干物质的含量上没有明显变化。[结论]重组人乳铁蛋白在转基因牛乳中获得了高效表达,为大规模生产重组人乳铁蛋白奠定了基础。     

二花脸猪乳中乳糖和乳蛋白的动态变化及其与大约克猪的比较

通过两系列实验,分析了二花脸猪乳中乳糖和乳蛋白在泌乳早期阶段(1～21 d)的含量及其变化规律,并与大约克猪乳进行了比较.同时比较了二花脸和大约克猪乳在泌乳第1 d和第6～7 d的乳脂含量.结果表明,二花脸猪和大约克猪乳糖在初乳中很低,但随着泌乳天数增加其含量逐渐增加.二花脸猪乳中乳糖含量在整个泌乳早期阶段(1～21 d)低于大约克猪,其中在泌乳第1 d、第6～7 d和第8～10 d显著低于大约克猪(p＜0.05 或p＜0.01).二花脸猪和大约克猪乳蛋白在泌乳第1 d浓度最高,分娩1周内迅速下降 ,泌乳1周以后变化幅度不大,而且两品种猪差异不显著(p＞0.05).猪乳中乳蛋白与乳糖呈负相关,二花脸猪相关系数r=-0.703(p＜0.01),大约克猪相关系数r=-0.577 (p＜0.01).二花脸猪乳中乳脂含量在泌乳第1 d和第6～7 d显著高于大约克猪(p＜0.05).     

人溶菌酶密码子优化及其在牛乳腺细胞中高效表达

【目的】分析牛乳腺中7种主要乳蛋白基因密码子使用偏好性,筛选高频密码子和低频密码子,依据其对人溶菌酶基因进行密码子局部优化和全局优化,通过牛乳腺上皮细胞等多种细胞对优化效果进行分析评价,为提高重组人溶菌酶表达量,开发新型、高效、安全的重组人溶菌酶提供理论依据。【方法】利用CodonW和EMBOSS等软件对7种主要牛乳蛋白和人溶菌酶基因密码子偏好进行生物信息学分析,筛选牛乳蛋白基因高频、低频密码子并根据牛乳蛋白基因密码子使用偏好对人溶菌酶基因翻译起始区前22位密码子（LYZop22）和全局密码子(LYZop)分别进行优化。构建人溶菌酶-荧光素酶融合表达载体（pGL3-LYZcw/op22/op）和人溶菌酶过表达载体（pcDNA-LYZcw/op22/op）,将上述载体分别转染牛乳腺上皮细胞(BMEC)、牛成纤维细胞（BFFC）和C127小鼠乳腺上皮细胞等3种细胞,通过荧光素酶、实时荧光定量PCR及Western-blot等方法检测密码子优化对溶菌酶表达的影响。【结果】牛乳蛋白基因密码子偏好以GC结尾,GC3s平均含量为0.537±0.062,而人溶菌酶GC3s含量为0.407,偏好以AT结尾;聚类结果表明,牛乳中酪蛋白与乳清蛋白类基因在密码子使用偏好性上也存在一定差异。依据筛选获得的牛主要乳蛋白基因5个高频密码子（RSCU>1.5）和7个低频密码子（RSCU<0.5）对人溶菌酶基因密码子进行优化并转染多种细胞进行表达效果分析。荧光素酶分析发现,相比野生型溶菌酶密码子（LYZcw）,翻译起始区密码子优化类型LYZop22分别在BMEC、BFFC细胞中提高1.48倍（P<0.01）和1.30倍（P>0.05）;而全局密码子优化类型LYZop分别在BMEC、BFFC中提高2.2倍（P<0.01）和2.44倍（P<0.01）,说明密码子优化能明显提高人溶菌酶在多种细胞中表达量。实时荧光定量PCR结果表明,LYZop22相比LYZcw在BMEC和BFFC细胞中分别提高了2.08倍（P<0.05）和1.5倍（P>0.05）,而LYZop则分别提高了22倍（P<0.01）和17.8倍（P<0.01）,mRNA表达水平与密码子优化后的mRNA二级结构稳定性呈正相关。Western-blot结果也进一步表明,密码子优化后的LYZop22和LYZop能明显提高重组人溶菌酶在牛乳腺上皮细胞中的表达量。上述结果表明,根据牛乳腺中主要乳蛋白基因密码子使用偏好进行密码子优化,能显著提高人溶菌酶在牛乳腺上皮细胞及成纤维细胞中的表达量,且溶菌酶基因全局密码子优化效果优于翻译起始区密码子优化效果。【结论】通过生物信息学分析获得了牛乳蛋白基因使密码子使用偏好及高低频密码子;依据牛乳蛋白密码子使用偏好性对人溶菌酶密码子优化能显著提高重组人溶菌酶mRNA水平和蛋白水平的表达量,为今后利用生物反应器高效生产重组人溶菌酶奠定基础。     

人溶菌酶密码子优化及其在牛乳腺细胞中高效表达

【目的】分析牛乳腺中7种主要乳蛋白基因密码子使用偏好性,筛选高频密码子和低频密码子,依据其对人溶菌酶基因进行密码子局部优化和全局优化,通过牛乳腺上皮细胞等多种细胞对优化效果进行分析评价,为提高重组人溶菌酶表达量,开发新型、高效、安全的重组人溶菌酶提供理论依据。【方法】利用CodonW和EMBOSS等软件对7种主要牛乳蛋白和人溶菌酶基因密码子偏好进行生物信息学分析,筛选牛乳蛋白基因高频、低频密码子并根据牛乳蛋白基因密码子使用偏好对人溶菌酶基因翻译起始区前22位密码子(LYZop22)和全局密码子(LYZop)分别进行优化。构建人溶菌酶-荧光素酶融合表达载体(pGL3-LYZcw/op22/op)和人溶菌酶过表达载体(pcDNA-LYZcw/op22/op),将上述载体分别转染牛乳腺上皮细胞(BMEC)、牛成纤维细胞(BFFC)和C127小鼠乳腺上皮细胞等3种细胞,通过荧光素酶、实时荧光定量PCR及Western-blot等方法检测密码子优化对溶菌酶表达的影响。【结果】牛乳蛋白基因密码子偏好以GC结尾,GC3s平均含量为0.537±0.062,而人溶菌酶GC3s含量为0.407,偏好以AT结尾;聚类结果表明,牛乳中酪蛋白与乳清蛋白类基因在密码子使用偏好性上也存在一定差异。依据筛选获得的牛主要乳蛋白基因5个高频密码子(RSCU1.5)和7个低频密码子(RSCU0.5)对人溶菌酶基因密码子进行优化并转染多种细胞进行表达效果分析。荧光素酶分析发现,相比野生型溶菌酶密码子(LYZcw),翻译起始区密码子优化类型LYZop22分别在BMEC、BFFC细胞中提高1.48倍(P0.01)和1.30倍(P0.05);而全局密码子优化类型LYZop分别在BMEC、BFFC中提高2.2倍(P0.01)和2.44倍(P0.01),说明密码子优化能明显提高人溶菌酶在多种细胞中表达量。实时荧光定量PCR结果表明,LYZop22相比LYZcw在BMEC和BFFC细胞中分别提高了2.08倍(P0.05)和1.5倍(P0.05),而LYZop则分别提高了22倍(P0.01)和17.8倍(P0.01),mRNA表达水平与密码子优化后的mRNA二级结构稳定性呈正相关。Western-blot结果也进一步表明,密码子优化后的LYZop22和LYZop能明显提高重组人溶菌酶在牛乳腺上皮细胞中的表达量。上述结果表明,根据牛乳腺中主要乳蛋白基因密码子使用偏好进行密码子优化,能显著提高人溶菌酶在牛乳腺上皮细胞及成纤维细胞中的表达量,且溶菌酶基因全局密码子优化效果优于翻译起始区密码子优化效果。【结论】通过生物信息学分析获得了牛乳蛋白基因使密码子使用偏好及高低频密码子;依据牛乳蛋白密码子使用偏好性对人溶菌酶密码子优化能显著提高重组人溶菌酶mRNA水平和蛋白水平的表达量,为今后利用生物反应器高效生产重组人溶菌酶奠定基础。     

饲粮中柠檬酸对妊娠期和哺乳期母猪性能,钙、磷消化率,乳成分及免疫球蛋白的影响

试验旨在确定柠檬酸(CA)对妊娠后期、哺乳期母猪全消化道粗蛋白质(CP)、钙(Ca)、磷(P)表观消化率(CTTAD),血液生化指标、初乳和常乳成分和免疫球蛋白的影响。将48只母猪(长白×大白,3.82±1.00)随机分为4个处理组(每个处理12头猪),分别添加CA 0、5、10、15 g·kg-1。试验在妊娠第90天开始,到哺乳期24 d结束,共48 d。在妊娠第107天、哺乳期0 d(分娩)、24 d(断奶)采血。在哺乳期第0天(分娩)和第14天收集初乳和奶样品。在哺乳期第20和21天收集粪样。结果表明,CA 15 g·kg-1组的CP和P的CTTAD显著增加(P0.05)。CA 10和15 g·kg-1组Ca的CTTAD显著增加(P0.05)。各处理对母猪和产子性能无显著影响(P0.05),包括母猪的平均日采食量(ADFI)、母猪体重(BW)产子数、出生窝重和仔猪增重的变化。在整个试验中,CA 10 g·kg-1组的血浆中Ca的浓度显著增加(P0.05)。添加CA提高了妊娠第107天血浆中磷的浓度(P0.05)。CA 15 g·kg-1组分娩和断奶时期血浆中的总蛋白、初乳和常乳中的总蛋白显著提高(P0.05)。CA 10和15 g·kg-1组提高了母猪血浆中IgG和IgA的水平。与对照组相比,CA 15 g·kg-1组初乳和常乳中免疫球蛋白显著提高(P0.05),常乳中IgG除外。因此,在妊娠后期和哺乳期饲粮中补充CA对母猪和产仔性能无显著影响。添加CA 10和15g·kg-1可以增强母猪对饲粮中Ca、P和蛋白质的吸收,提高母猪血液免疫功能,并且可以改善初乳和常乳对仔猪有益。     

CXCR1基因编码区SNPs与荷斯坦牛泌乳性能和繁殖性状关联分析

研究旨在探索CXCR1(Chemokine(C-X-C motif)receptor 1)基因编码区SNPs与荷斯坦牛泌乳性状及部分繁殖性状间关系。用飞行时间质谱法检测865头荷斯坦牛CXCR1基因编码区c.642 AG、c.816 CA、c.980 AG和c.1068 GA 4个SNPs位点,同时收集采样牛2010年12月至2012年7月繁殖指标和2010年至2014年奶牛生产性能测定(Dairy herd improvement,DHI)记录。采用多因素方差分析法分析CXCR1基因CDS区SNPs基因型与测定日产奶量、乳脂率、乳蛋白率等泌乳性状和产犊间隔、产后首配泌乳天数、配种次数和妊娠泌乳天数关系。结果表明,CXCR1-642 AG和CXCR1-980 AG对乳中体细胞评分(Somatic cell score,SCS)影响显著(P0.05),c.642 AG、c.816 CA、c.980 AG和c.1068 GA对乳中乳脂率、蛋白率和总固体影响显著(P0.05)。CXCR1-980 AG和CXCR1-1068 GA位点AA型个体测定日产奶量显著高于AG和GG型(P0.05),但CXCR1-980 AG AA型乳蛋白率、SCS和总固体显著低于AG和GG型(P0.05)。CXCR1-816 CA位点对产犊间隔影响达显著水平(P=0.033),AC基因型个体产犊间隔显著低于AA型个体。而CXCR1-642 AG、CXCR1-980 AG和CXCR1-1068 GA位点对产犊间隔、产后首配泌乳天数、配种次数以及妊娠泌乳天数均无显著性关联(P0.05)。CXCR1-980 AG和CXCR1-1068 GA对荷斯坦牛产奶量和乳品质存在显著遗传效应,CXCR1 c.816 CA位点对产犊间隔影响显著。CXCR1基因CDS区SNP可作为提高产奶量和乳品质、缩短产犊间隔候选分子标记之一。     

宁夏地区荷斯坦牛产奶量和产犊间隔影响因素分析

为探讨影响宁夏地区荷斯坦牛产奶量和产犊间隔的非遗传因素,以宁夏某奶业有限公司2012—2016年间6 236头健康中国荷斯坦牛产奶性能记录和繁殖记录为研究材料,以305d产奶量和产犊间隔为研究对象,运用SAS8.1软件,采用多因素方差分析法分析场、胎次、初产月龄、产犊年份及产犊季节对荷斯坦牛305d产奶量和产犊间隔的影响。结果表明:场、胎次、产犊年份、产犊季节和产犊间隔均对荷斯坦牛305d产奶量有极显著影响(P0.01),初产月龄对305d产奶量有显著影响(P0.05);场、胎次、产犊季节和产奶量对产犊间隔有极显著影响(P0.01)。研究发现胎次、初产月龄、产犊季节和产犊间隔是影响荷斯坦奶牛305d产奶量的重要因素,胎次、产犊季节和产奶量是影响奶牛产犊间隔的重要因素。     

宁夏地区荷斯坦牛乳成分及相关指标的非遗传因素、体细胞评分变化规律

目的 阐明非遗传因素对宁夏地区荷斯坦牛乳成分及相关指标的影响。方法 基于宁夏地区荷斯坦奶牛DHI测定数据,利用SAS 9.2软件GLM过程分析胎次、泌乳时期和产犊季节对9项泌乳性状的影响,并探究泌乳性状在不同体细胞评分中的变化规律。结果 胎次、泌乳时期、产犊季节、泌乳时期×产犊季节对9项泌乳性状的影响均达到显著水平(P<0.05)。对不同胎次进行比较,乳脂率和乳固形物含量在第2胎后显著下降(P<0.05),乳蛋白率和高峰奶量在第3胎后显著下降(P<0.05);日产奶量第4胎后稍有降低;乳糖率则呈现先下降后上升的趋势,在第3胎达到最低(P<0.05),为4.84%。体细胞评分随着胎次的增加逐渐上升,泌乳高峰日在第1胎次最晚出现(94.07 d),第4胎次最早(67.33 d)。对不同泌乳时期进行比较,日产奶量和乳糖率在第2、3胎随着泌乳时期的延长逐步下降(P<0.05),而乳蛋白率、乳固形物含量、体细胞评分和乳脂率呈上升趋势(P<0.05)。对不同产犊季节进行比较,1~3胎乳脂率和第1胎乳固形物含量春季至冬季均逐步下降;第1胎日产奶量和乳糖率呈上升趋势,到第2、3胎时在夏季分别处于最低水平;1~3胎乳蛋白率、体细胞评分、泌乳高峰日和高峰奶量春季至冬季均呈先升高后降低的趋势,且各性状不同胎次均在夏季达到最高水平。随着体细胞评分增高,乳糖率、日产奶量及高峰奶量整体上逐渐下降,乳脂率和乳蛋白率呈缓慢上升趋势,乳固形物含量和泌乳高峰日在体细胞评分分别为4和5时达到最高水平。结论 本研究结果为提高宁夏地区荷斯坦奶牛泌乳性能及生鲜乳质量提供了理论依据。     

iTRAQ quantitative analysis of plasma proteome changes of cow from pregnancy to lactation

Dairy cows undergo tremendous changes in physiological, metabolism and the immune function from pregnancy to lactation that are associated with cows being susceptible to metabolic and infectious diseases. The objective of this study is to investigate the changes of plasma proteome on 21 d before expected calving and 1 d after calving from dairy cows using an integrated proteomic approach consisting of minor abundance protein enrichment by Proteo Miner beads, protein labeling by isobaric tags for relative and absolute quantification, and protein identification by liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry. Nineteen proteins were changed around the time of calving. These proteins were associated with response to stress, including acute-phase response and defense response, based on the proteins annotation. In particular, three up-regulated proteins after calving including factor V, α2-antiplasmin and prothrombin were assigned into the complement and coagulation pathway. These results may provide new information in elucidating host response to lactation and parturition stress, and inflammatory-like conditions at the protein level. Differential proteins may serve as potential markers to regulate the lactation and parturition stress in periparturient dairy cows.     

奶牛产奶量校正系数研究

以西安市草滩农场第四奶牛场1994~2005年178头中国黑白花奶牛不同胎次、不同产奶月龄、不同泌乳天数和不同产犊月份的产奶量测定结果为材料,采用回归分析方法,分别建立了产奶量对胎次、年龄、泌乳天数、产犊月份等因素的最优回归方程,对其显著性进行了检验,根据这4个最优回归方程分别以第三胎、41月龄、305d、1月份估计产奶量为标准,计算了产奶量的校正系数,制定出该场的产奶量校正系数表,并对由奶牛产奶量不同影响因素构建的产奶量校正系数表进行了产奶量校正的实际应用计算。结果表明,所建立的回归方程拟合度高,所得的4类校正系数表准确、可靠,对该奶牛场育种工作的开展及生产计划的制定具有重要的实际应用价值。     

Genetic Parameters for Milk,Fat Yield and Age at First Calving of Chinese Holsteins in Heilongjiang

Genetic parameters for milk,fat yield and age at first calving of Chinese Holsteins in Heilongjiang were evaluated using multiple-trait restricted maximum likelihood procedures with an animal model.Data consisted of records of 2496 Chinese Holsteins first lactation cows collected from 1989 to 2000.The model included 21 herd effects,four calving season effects,nine age at first calving effects,6697 animal effects.(Co) variance components of milk yield,fat yield and age at first calving were estimated with software package for variance component estimation(VCE) by an animal model.The heritabilities were 0.14,0.21,0.38 for milk yield.fat yield and age at first calving ,respectively,.The estimates of genetic correlation between milk yield and fat yield ,age at first calving were 0.96,-0.29,respectively,The estimate of genetic correlation between fat yield and age at first calving was -0.28.     

奶牛初乳中常量成分和矿物元素的测定

采集46头荷斯坦奶牛分娩后2 h以内、24 h、48 h、72 h、96 h、120 h的初乳和分娩后15 d以后的常乳,测定其常量成分和部分矿物元素含量.结果表明,除乳糖以外初乳中各项指标均显著高于常乳.分娩后第1次(2 h以内)所挤初乳,其蛋白质、脂肪、乳糖、灰分的含量分别是常乳的5.03、1.95、0.56、1.92倍;Ca、P、Na、Mg是常乳的1.90、2.2 4、2.11、5.56倍;Zn、Fe、Mn是常乳的6.21、2.81、1.64倍.初乳中的各种成分随泌乳时间的延长而逐渐向常乳接近.蛋白质含量是初乳质量的决定性因素,初乳的密度和全脂乳固体含量都和蛋白质含量有密切关系.在生产实践中,可根据初乳密度推测其蛋白质含量.     

影响荷斯坦奶牛305d产奶量的因素分析

[目的]探讨各因素对荷斯坦奶牛305 d产奶量的影响.[方法]采用SAS8.1软件对影响305 d产奶量的因素进行最小二乘方差分析.[结果]不同年度对305 d产奶量的影响极显著(P<0.01);不同产犊季节对305 d产奶量有极显著的影响(P<0.01),冬季产奶量最高,夏季产奶量最低;不同胎次对305 d产奶量有极显著的影响(P<0.01),305 d产奶量随着奶牛胎次的增加产奶量也逐渐增加,5胎后开始下降;不同初产月龄对305 d产奶量有极显著的影响(P<0.01),当初产年龄在24-26月龄间产奶量最高.[结论]年度、产犊季节、胎次和初产月龄均是影响荷斯坦奶牛305 d产奶量的主要因素.