马氏珠母贝精子质量形态评定中不同染色法染色效果的比较

为筛选出适宜于马氏珠母贝Pinctada martensii精子形态分析的染色方法,采用曙红Y和结晶紫染液对不同方法制作的马氏珠母贝精液抹片进行染色,并通过显微镜观察比较染色效果。结果表明：1）采用将精液先抹片后染色（0.8 mg/mL曙红Y染液）的方法时,精子头部着色不完全,染色效果不随染色时间的延长而改善,精子形态特征不明显,故该方法不适于精子形态检测;2）将精液与20 mg/mL的曙红Y染液等体积混合后抹片,精子头部着深红色,尾部着浅红色,精子各部分结构清晰,形态特征明显,背景干净,对比明显;3）用5 mg/mL的结晶紫染液对精液进行渗透染色时,精子形态染色特征明显,头部着深紫色,尾部着浅紫色,背景干净,可较准确地判断精子的形态特征;4）依精子形态对马氏珠母贝精子进行分类,并确定了主要的畸形类型及其特点,马氏珠母贝精子畸形主要集中在精子的颈部和尾部,头部畸形情况较少;5）采用两种染色方法判定的正常精子率之间无显著差异（P〈0.05）,数据稳定,因此,这两种染色方法均可用于马氏珠母贝精子形态的评价中。     

添加剂在猪精液冷冻保存中的应用

猪精液的冷冻保存显著影响猪精子的运动学参数,损伤精子质膜、顶体和DNA完整性,降低解冻后精子活率和受精能力.近年来,在以甘油和蛋黄作为冷冻保护剂的基础上,为了有效降低冷冻-解冻对精子的损伤,提高解冻精液的受精能力,研究人员将OEP、抗氧化剂(甲基黄嘌呤、丁羟基甲苯、谷胱甘肽、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、褪黑素和维生素E等)、2-羟丙基β环糊精以及透明质酸等物质作为添加剂应用于猪精液的冷冻保存,结果表明这些物质在保护精子质膜和顶体完整性,提高解冻后精子活力、活率和受精能力等方面均有显著作用.     

单细胞电泳技术检测低温保存猪精子的DNA损伤

应用单细胞凝胶电泳技术(SCGE),对冷冻解冻后猪精子DNA的损伤情况进行研究.结果表明,冷冻解冻会对猪精子DNA造成损伤,其彗星率与鲜精相比差异显著(P＜0.05);各组冻精之间,甘油添加量为2%～3%(v/v)时,冷冻对猪精子DNA造成的损伤最低,彗星率均低于其余各组(P＜0.05).     

精子膜蛋白在异精雌核发育银鲫中的作用

通过对雄性银鲫的新鲜精液进行分级抽提得到精子的不同组份，包括精浆、精头的膜、鞭毛和脱膜精头等，在荷包红鲤和雌性银鲫杂交时加入其中的可溶性精头膜蛋白组分，研究精子膜蛋白在雌核发育银鲫异源受精中的作用。研究发现，加入同源精子膜蛋白后的雌核发育银鲫异源受精卵的孵化率比对照组低很多，并且在子代培育过程中，发现了生长速度快、表型和父本相似、基因型基本和父本基因型相同的特殊子代。在某种程度上表明：精子膜蛋白可能是雌核发育银鲫卵子进行雄核发育的关键因素。     

精子膜蛋白在异精雌核发育银鲫中的作用

通过对雄性银鲫的新鲜精液进行分级抽提得到精子的不同组份，包括精浆、精头的膜、鞭毛和脱膜精头等，在荷包红鲤和雌性银鲫杂交时加入其中的可溶性精头膜蛋白组分，研究精子膜蛋白在雌核发育银鲫异源受精中的作用。研究发现，加入同源精子膜蛋白后的雌核发育银鲫异源受精卵的孵化率比对照组低很多，并且在子代培育过程中，发现了生长速度快、表型和父本相似、基因型基本和父本基因型相同的特殊子代。在某种程度上表明：精子膜蛋白可能是雌核发育银鲫卵子进行雄核发育的关键因素。     

Electrical responses of eggs to acrosomal protein similar to those induced by sperm

The earliest known response of eggs to sperm in many species is a change in egg membrane potential. However, for no species is it known what components of the sperm cause the opening of the egg plasma membrane channels. Protein isolated from sperm acrosomal granules of the marine worm Urechis caused electrical responses in oocytes with the same form, amplitude, and ion dependence as the fertilization potentials induced by living sperm. Sperm initiated fertilization potentials in oocytes when sperm-oocyte fusion, but not binding, was inhibited by clamping oocyte membrane potentials to positive values. Acrosomal protein also initiated electrical responses in clamped oocytes. These results support the hypothesis that it is the sperm acrosomal protein that opens ion channels in the oocyte membrane.     

金属离子及低温对中华倒刺鲃精子活力的影响

对中华倒刺鱼巴（Ｓｐｉｎｉｂａｒｂｕｓｓｉｎｅｎｓｉｓ）精子在金属离子处理和低温保存下精子活力的影响研究表明,在ＮａＣｌ和ＫＣｌ溶液的渗透压约为３０８Ｋｐａ时,精子的活力最强;当高于６８０．１Ｋｐａ后,精子活动完全被抑制。Ｃａ,Ｍｇ浓度较高对精子有一定的损伤作用。精液稀释比为１∶１或３∶１时,在０～２℃保存的效果较好。稀释液中添加２．６４％的甘油,能延长精子的寿命,添加３％的葡萄糖对保存也有利。     

克林霉素对雄性小鼠精子功能的影响

[目的]研究克林霉素对雄性小鼠生殖细胞的影响。[方法]取48只健康成年雄性小白鼠,随机分为试验A组、B组、C组和对照组,每组12只小鼠。试验A、B和C组分别注射克林霉素15、30和60 mg/kg.d,对照组腹腔注射生理盐水。29 d后,脱臼处死小鼠,观察小鼠精子的活率、畸形率、精子膜低渗肿胀率。[结果]试验B、C组小鼠精子活率和尾膜肿胀比率低于对照组,而畸形率高于对照组;试验A组小鼠精子活率、畸形率以及尾膜肿胀比率与对照组相比无显著差异。[结论]克林霉素使用剂量等于或超过重度感染使用剂量时会影响雄性小鼠精子的正常功能。     

Penetration,adhesion, and fusion in mammalian sperm-egg interaction

Fertilization is the sum of the cellular mechanisms that pass the genome from one generation to the next and initiate development of a new organism. A typical, ovulated mammalian egg is enclosed by two layers: an outer layer of approximately 5000 cumulus cells and an inner, thick extracellular matrix, the zona pellucida. To reach the egg plasma membrane, sperm must penetrate both layers in steps requiring sperm motility, sperm surface enzymes, and probably sperm-secreted enzymes. Sperm also bind transiently to the egg zona pellucida and the egg plasma membrane and then fuse. Signaling in the sperm is induced by sperm adhesion to the zona pellucida, and signaling in the egg by gamete fusion. The gamete molecules and molecular interactions with essential roles in these events are gradually being discovered.     

昆虫精子竞争及其避免机制

精子竞争是指来自2个或2个以上雄性个体的精子为争夺对卵的授精权而展开的竞争。精子竞争是雄性相互竞争的最终形式,是行为生态学与进化生物学的热点。阐述了精子竞争的概念,综述了精子层化、精子失能、精子移除和精子冲洗4种昆虫精子竞争的机制以及雄性在形态、生理和行为上3类避免精子竞争的机制,详细讨论了交配次序、交配雄性数量、交配间隔以及隐秘雌性选择4个影响父权偏向的因素。笔者认为围绕精子竞争研究应尽快开展如下工作:开展精液成分的鉴定以及对精子竞争的影响作用研究,开展精子的形态、行为、生理和功能的研究,以及开展精子、雌性生殖道与卵的交互作用关系、父权偏向的精确机制等研究。     

昆虫精子竞争的研究进展

精子竞争（sperm competition）是雌性与多个雄性交配后,来自不同雄性的精子为了争夺对卵的受精权而展开的激烈竞争,是生殖竞争（reproductive competition）的最后阶段。对精子竞争机制的揭示是精子竞争研究的重要内容,该文分别对昆虫的4种精子竞争机制假说：精子分层、精子取代、精子失能和雌性的隐秘选择进行了重点综述,还对昆虫精子竞争产生的条件、精子竞争的模式及雄性对精子竞争的适应等方面做了阐述,并对精子竞争未来研究的方向做了展望。     

Sperm-female coevolution in Drosophila

Rapid evolution of reproductive traits has been attributed to sexual selection arising from interaction between the sexes. However, little is known about the nature of selection driving the evolution of interacting sex-specific phenotypes. Using populations of Drosophila melanogaster selected for divergent sperm length or female sperm-storage organ length, we experimentally show that male fertilization success is determined by an interaction between sperm and female morphology. In addition, sperm length evolution occurred as a correlated response to selection on the female reproductive tract. Giant sperm tails are the cellular equivalent of the peacock's tail, having evolved because females evolved reproductive tracts that selectively bias paternity in favor of males with longer sperm.     

人体精子冷冻前后超微结构的变化

将１０例正常生育男性的精液标本进行冷冻保存、复温后电镜观察。结果,冷冻精子复温后精子超微结构发生了不同程度的改变,其主要改变为精子顶体肿胀,顶体内、外膜分离,外膜形成波浪状皱褶,有的核局部出现凹陷,线粒体改变呈基质密度降低,结构模糊等。但是,精子基本结构保持完整。研究结果表明：冷冻精子超微结构改变的主要原因是在冷冻过程中,由于冰晶形成的影响,水分内移,细胞肿胀,因而造成其活动率的明显下降。但并不影响授精能力。     

高繁殖力和低繁殖力长白公猪的精子DFI差异分析

【目的】探究高繁殖力和低繁殖力长白公猪的精液品质及精子DNA损伤差异,为筛选出高繁殖力种公猪提供参考依据,进而优化猪场人工授精工作及提高种猪场的经济效益。【方法】选取12头法系长白公猪,通过分析繁育数据将其分组为高繁殖力和低繁殖力公猪,各6头;利用计算机辅助精子分析系统（CASA）对公猪精液品质参数进行检测分析,然后通过流式细胞仪检测精子DNA碎片指数（DFI）和活性氧（ROS）水平。【结果】高繁殖力公猪的平均窝产仔数和活产仔数均极显著高于低繁殖力公猪（P<0.01,下同）,但二者的畸胎数和死胎数差异不显著（P>0.05,下同）。高繁殖力公猪精子的前进运动率显著高于低繁殖力公猪精子（P<0.05,下同）,而精子畸形率极显著低于低繁殖力公猪,但二者在近端原生质滴率、远端原生质滴率及折尾率等方面的差异均不显著;除了高繁殖力公猪精子的曲线速率（VCL）显著高于低繁殖力公猪外,其他的运动参数均无显著差异;高繁殖力公猪的精子DFI和ROS水平均极显著低于低繁殖力公猪。长白公猪产仔数与各项精液质量参数的相关分析发现,公猪产仔数与精子DFI呈高度负相关（r=-0.85）、与精子畸形...     

酵母铬对热应激蛋用种公鸡精液品质的影响及作用机制研究

选用72只35周龄罗曼种公鸡随机平均分成6组,对照组饲喂基础日粮,分别在基础日粮中添加0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/kg铬量的酵母铬,作为试验I、II、III、IV、V组来探讨酵母铬对热应激蛋用种公鸡精液品质及内分泌机能的影响.结果表明:与对照组相比,日粮中添加0.4、0.6、0.8、1.0 mg/kg铬量的酵母铬均不同程度提高公鸡的精液量、精子活力和精子密度,降低公鸡精液的精子畸形率,而对精液的pH值影响不明显;试验各组公鸡血浆三碘甲腺原氨酸(T3)水平均有不同程度升高;皮质醇、甲状腺素 (T4)水平降低.上述结果表明:在热应激条件下,日粮中添加一定量的酵母铬可有效缓解热应激,显著提高夏季蛋用种公鸡的繁殖性能并影响其内分泌机能.     

牛精子原位杂交DTT去凝集条件优化

[目的]确定牛精子原位杂交DTT去凝集处理的优化浓度及时同.[方法]牛精子解冻后经密度梯度离心优选并制片,采用0、5、10、20、40、80和100 mmol/L六个DTT浓度以及15、30、45和60 min4个时间段的28个组合进行去凝集处理,Motic Images Advanced 3.2软件测量精子解聚后头部面积.[结果]40 mmol/L DTT处理45min精子头部面积为(52.32±4.68 )μm2,浓度＜ 40 mmol/L的16个处理组及浓度≥40 mmol/L、处理时间＜45 min的6个处理组,精子头部面积小于(52.32±4.68) μm2(p＜ 0.01);浓度＞40 mmol/L、时间≥45 min的5个处理组,精子头部面积与40 mmol/L DTT 45 min组差异不显著(P＞0.05),但精子形态不完整.[结论]40mmol/L DTT 45 min为较优处理组合.     

褪黑素对热应激猪精子质量的影响

为研究褪黑素(Melatonin,MLT)对热应激引起的猪精子质量下降的缓解作用及其机制。首先用免疫荧光方法检测MLT受体在猪精子上的存在和分布;然后将稀释后的精子分为对照组(ck)、热应激组(H)、MLT组(M)、热应激+MLT组(H+M)、热应激+MLT受体拮抗剂Luzindole组(H+L)和热应激+MLT受体拮抗剂Luzindole+MLT组(H+L+M)6个组,处理结束后检测各组精子活率、活力、线粒体活性、钙离子水平以及顶体完整率。结果显示:猪精子中存在MLT受体MT1和MT2,且均分布于精子头部;与对照组相比热应激组各项指标显著下降,MLT组精子活率没有显著改变(P0.05),但精子活力、线粒体活性、钙离子水平和顶体完整率显著升高(P0.05)。添加MLT受体拮抗剂Luzindole后精子活力、线粒体活性和钙离子水平显著下降(P0.05),顶体完整率呈一定程度下降,但差异不显著(P0.05)。以上结果表明:热应激会导致猪精子质量显著下降,并且MLT能通过受体途径改善热应激对猪精子质量的影响,但同时也存在非受体介导的作用。     

Na+、K+、葡萄糖及甘油对高体雅罗鱼精子活力的影响

[目的]明确水体介质参数与高体雅罗鱼精子活力的关系,解决高体雅罗鱼人工繁殖受精率低及鱼苗鱼种生产效率低的技术难题.[方法]以快速运动时间(FT)、寿命时间(LT)和精子激活率为评价指标,探究Na+、K+、葡萄糖及甘油对高体雅罗鱼精子活力的影响.[结果]Na+浓度为135 mmol/L时高体雅罗鱼精子活力最强,FT为71 s,LT为1020 s,精子激活率为95%;K+浓度为5 mmol/L时高体雅罗鱼精子活力最强,FT为52 s,LT为280 s,精子激活率为80%;葡萄糖浓度为180 mmol/L时高体雅罗鱼精子活力最强,FT为78 s,LT为1200 s,精子激活率为95%;甘油浓度为180 mmol/L时高体雅罗鱼精子活力最强,FT为79 s,LT为1380 s,精子激活率为90%.[结论]适宜浓度的Na+、K+、葡萄糖及甘油具有单独提高高体雅罗鱼精子活力的作用,但高浓度Na+、K+、葡萄糖及甘油对高体雅罗鱼精子的激活率呈明显抑制作用.实际生产中,可选择135 mmol/L Na+、5 mmol/L K+、180 mmol/L葡萄糖或180 mmol/L甘油作为高体雅罗鱼精子的激活液,提高其人工繁殖生产效率.     

水体中铝对雄性小鼠的遗传损伤作用

[目的]探讨氯化铝对雄性小鼠生殖细胞的遗传损伤作用。[方法]选用雄性昆明种小鼠为研究对象,研究不同浓度的氯化铝腹腔染毒对小鼠睾丸脏器系数、精子数目、存活率、活动率、畸形率及精母细胞微核率的影响。[结果]小鼠睾丸脏器系数、精子数量明显降低,小鼠精子存活率及活动能力也逐渐降低;精子畸形率和精母细胞的微核发生率也随之升高,各染毒组与对照组均有显著差异(P<0.01)。氯化铝可影响雄性小鼠的生长发育,干扰精子的发生和成熟,损伤小鼠生殖细胞的染色体。[结论]氯化铝对雄性小鼠的生殖细胞具有明显的遗传损伤作用。