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为了探索籽粒苋蛋白质的提取工艺,研究了不同的介质pH值、提取时间、提取温度和加水比例对籽粒苋蛋白质的可溶出率的影响,分析了3种pH值下提取的蛋白质氨基酸组成。结果表明:pH值极大地影响籽粒苋蛋白质的溶出率,pH 2.0~4.6时,随pH值上升,溶出率下降,pH 4.6~12.0时,随pH值上升,可溶出率增大;pH值4.6时为最低点,此时可能为籽粒苋蛋白质的等电点;水与籽粒苋之比为20时,蛋白质的可溶出率较其它比例为高;其它因素对籽粒苋蛋白质的溶出率影响不大。因此,籽粒苋蛋白质最佳提取工艺条件采用料液比为1∶20,在pH 8~10的碱性环境下,室温浸提1 h。 相似文献
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蛋白质样品制备是双向电泳的核心。为了找到一种适合提取珍珠黄杨叶片蛋白质的方法,本文以该树种扦插苗的叶片为材料,用TCA_丙酮沉淀法、Tris-饱和酚法和2-D Clean-Up Kit提取蛋白质,并进行双向凝胶电泳,采用银染法进行检测。结果表明,TCA-丙酮沉淀法得到的样品图谱背景模糊、拖尾;Tris-饱和酚法得到的样品图谱清晰,蛋白点饱满,无纵向或横向拖尾,但有蛋白点丢失;2-DClean-Up Kit提取的蛋白质样品得到了较好双向电泳图谱。 相似文献
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土壤微生物总DNA提取方法的比较 总被引:26,自引:0,他引:26
采用4种土壤DNA提取方法提取了5种类型土壤的微生物总DNA,并对4种提取方法的DNA提取效果进行综合分析,进一步通过PCR—DGGE扩增提取DNA中的细菌16S rDNA片段,并对扩增产物进行DGGE电泳分析。结果表明,SDS-高盐缓冲液法抽提的DNA得率最高,SDS-酚氯仿抽提法的DNA得率最低。DNA的纯度,以BIO-101 DNA Extraction Kit试剂盒法最高,改进试剂盒法纯度最低。通过PCR-DGGE分析土壤微生物多样性结果表明,BIO-101 DNA Extraction Kit试剂盒法提取的DNA代表的微生物多样性最全,而SDS酚氯仿法抽提的DNA代表性最差。 相似文献
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小麦花药蛋白质组双向电泳技术体系的优化 总被引:14,自引:1,他引:14
以小麦单核期花药为材料,比较了两种不同蛋白质提取方法TCA/丙酮法和酚提取法及不同的蛋白质裂解液组成对双向电泳的影响,并在蛋白质上样量和SDS-PAGE胶浓度等方面也进行了探索与优化。结果表明,采用TCA/丙酮提取法比用酚提取法提取的蛋白质所得的2-DE胶图谱上蛋白质点数增加,图谱背景也比较清晰;样品溶解于含有硫脲和TBP的蛋白质裂解液Ⅱ中,可显著提高蛋白质的溶解性,在2-DE图谱上可分辨出554个蛋白质点,比用蛋白质裂解液Ⅰ提取的蛋白多39个点。以TCA-丙酮法提取小麦花药组织中的蛋白,用蛋白质裂解液Ⅱ[7mol/L尿素、2mol/L硫脲、4%CHAPS、2%TBP、65mmol/L DTT、0.2%载体两性电解质(其中0.1%pH 3~10,0.1%pH4~6)]溶解蛋白,以pH4~7线性17cm的IPG胶条进行双向凝胶电泳,在上样量为800μg,13%SDS-PAGE胶浓度下,蛋白质得到了更好的分离,2-DE图谱上可分辨出631个蛋白点,图谱质量最佳。优化后的双向电泳技术体系,适合于小麦花药全蛋白质的双向电泳分析。 相似文献
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本文对3种常用的土壤微生物总DNA提取方法Martin法、高盐改进法及试剂盒法进行了比较,并通过DNA得率、纯度及16S rDNA V3可变区的PCR扩增结合DGGE法(denatumg gradient gel electrophoresis),分别对3种方法进行评价。结果表明,3种方法提取的DNA均能满足土壤微生物多样性分析的要求。其中试剂盒方法操作简单,提取的DNA质量较高,但DNA得率较低且成本昂贵。Martin法和高盐改进法用时较长,DNA得率较高,纯度较低,但对后续PCR扩增和DGGE分析没有明显影响,且成本低廉。 相似文献
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传统的微生物分离培养方法,在反映茶园土壤微生物基因信息上有很大的局限性,因此,目前逐步被分子生态学的方法替代,而获得高质量、大片段、无偏好的土壤微生物总DNA则是茶园土壤微生物分子生态学研究的基础。本文采用SDS高盐法、变性剂加SDS高盐法、脱腐SDS高盐法、CTAB法和Krsek改进法5种土壤微生物DNA提取方法分别从茶园土壤微生物中提取总DNA,并对5种方法提取的DNA的片段大小、质量和产量进行了综合评价。结果表明,Krsek改进法提取到的DNA片段最大(〉23kb)、纯度最高(OD2UOD280〉1.70;OD2UOD230〉1.35)、产量较高(〉34.50μg/gdrysoil)且不需纯化就可以用于PCR扩增和RFLP分析。因此,Krsek改进法是一种高效、可靠且适合于茶园土壤微生物分子生态学研究的DNA提取方法。 相似文献
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苏打盐碱化土壤pH与团聚体中球囊霉素相关土壤蛋白含量的关系 总被引:1,自引:2,他引:1
球囊霉素相关土壤蛋白(Glomalin-related soil protein,GRSP)在土壤团聚体形成中起重要作用,与土壤团聚体稳定性正相关。土壤盐碱化破坏土壤结构,降低土壤中GRSP含量,但影响多大尺寸团聚体GRSP含量并不清楚。本文采集45个松嫩盐碱化草地土壤样品,通过干筛法分离出直径0.25、0.25~1和1~2 mm 3种不同粒级团聚体,采用Bradford法测定土壤中GRSP含量,并测定土壤盐碱化指标,经Pearson相关分析和前向选择变量多元线性回归分析,结果显示:土壤pH显著影响各粒级团聚体总球囊霉素相关土壤蛋白(T-GRSP)含量和难提取球囊霉素相关土壤蛋白(DE-GRSP)含量,二者存在显著负相关关系,特别是0.25~1 mm粒级团聚体DE-GRSP含量与土壤pH存在极显著负相关关系,可解释22.3%的DE-GRSP含量变化。土壤pH、电导率、碱解氮和有效磷对各粒级团聚体易提取球囊霉素相关土壤蛋白(EE-GRSP)影响不显著。结果表明土壤苏打盐碱化影响0.25~1 mm团粒结构中较稳定的DE-GRSP含量,可能对土壤团聚体胶联和土壤碳存储产生负影响。 相似文献
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《Communications in Soil Science and Plant Analysis》2012,43(21):2801-2808
The use of animal waste for a soil amendment is a viable option for waste management. For safe and sustainable management of waste, it is important to assess the concentrations of heavy metals (HM). An experiment was conducted to compare metals [copper (Cu), zinc (Zn), and manganese (Mn)] in cow manure (CM), duck litter (DL), poultry litter (PL), and poultry litter ash (PLA) using eight extraction solutions. Extractability of HM was highly dependent upon the type of waste as well as extracting agent. Manures differed for the release of HM in the order of PL > DL > CM. Marked decreases in extractable trace elements were observed after ashing of PL irrespective of extraction method. Except for water, extractions released HM in the order of Mn > Cu > Zn. For Zn and Mn, the amount extracted varied in the order 1 M nitric acid (HNO3) > 0.1 M HNO3 > 0.01 M HNO3 ≈ ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) > ammonium nitrate (NH4NO3) > calcium chloride (CaCl2) > ammonium acetate (NH4OAc) > H2O in PL and PLA. Peak concentration of Cu was achieved in 1 M HNO3 solution and the lowest Cu was found in NH4OAc solution. On the basis of these results, the low extractability of HM in ash could suggest that the use of burned PL would be less of a water-pollution problem in the fields. 相似文献
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超声提取-离子色谱法测定土壤中10种水溶性阴离子 总被引:1,自引:0,他引:1
采用超声提取–离子色谱法测定了土壤中F~–、CN~–、BrO_3~–、Cl~–、NO_2~–、Br~–、NO_3~–、PO_4~(3–)、SO_4~(2–)、C_2O_4~(2–)等10种水溶性阴离子含量。样品中阴离子用水浸提,提取条件为:固液比1:10,温度30℃,超声振荡时间30 min。提取完成后离心,取上清液通过0.22μm滤膜过滤后测定。在选定的离子色谱测定条件下,10种被测阴离子的检出限为0.009 7~0.31 mg/kg,不同阴离子的加标回收率为84.0%~112%,相对标准偏差(n=7)为0.09%~4.3%。 相似文献
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在田间条件下采用定位试验,研究了不同农艺措施改良盐化潮土的作用和效果。结果表明:不同农艺措施对改善土壤物理性状、促进土壤脱盐、提高作物产量方面有不同的效果。其中综合农艺措施实施5年后,使土壤容重降低0 21gcm-3、有机质增加1 25gkg-1、土壤脱盐率达29 45%、使春小麦增产27 98%。 相似文献