中国李RAPD的优化反应体系及其在品种鉴定中的应用

以5'-GACCGCTTGT-3'为随机引物,以奉化李(Prunussalicinacv.Fenghuali)为试材,对中国李RAPD反应体系进行了优化研究,结果表明:25μL反应体系中,TaqDNA聚合酶、Mg2+、引物、模板DNA和dNTPs5种主要成分的适宜浓度或用量分别是:1.0U、2.5mmol/L、20ng、40ng和0.2mmol/L。利用该优化反应体系,用10个随机引物,构建了5个中国李品种的RAPD指纹图谱;并以共有谱带率对这些品种遗传关系进行了分析,5个中国李品种的共有谱带率平均为33.2%,变异幅度为20.1%～44.9%。     

甜瓜SRAP多态性分析及在品种鉴定中的应用

以国家蔬菜工程技术研究中心甜瓜单倍体育种组提供的12份薄皮甜瓜,30份厚皮甜瓜,2份野生甜瓜为试材,该研究优化了甜瓜SRAP反应体系,筛选出10对引物组合,分析了甜瓜多态性并对品种进行鉴定.结果表明:10μL反应体系为1×Buffer lμL,引物组合各20 ng,模板DNA 20 ng,dNTPs 2.0 mmol/L,Taq DNA聚合酶0.2U.10对引物组合在2份甜瓜上共扩增出166条带,其中多态性条带104条,每对引物组合平均能扩增出10.4个多态性位点.甜瓜间遗传距离在0.08～0.79(平均为0.357),54份甜瓜被分为二大类:Ⅰ类包括1份印度野生甜瓜和3份哈密瓜;Ⅱ类可再分为2个亚类:Ⅱ-1,是12份薄皮甜瓜;Ⅱ-2,包括1份中国野生甜瓜和37份厚皮甜瓜.引物组合m21e01、m21e10和m21e11区分率分别高达79.6％、81.5％和79.6％,有助于品种的高效鉴定.     

几个Mang果品种的RAPD分析

应用１０个十聚体机引物,美国红Ｍａｎｇ,桂香Ｍａｎｇ株系的基因组ＤＮＡ进行ＲＡＰＤ分析,筛选出Ｓ２７３、Ｓ２８１和Ｓ２８６３个随机引物,适用于Ｍａｎｇ果基因组ＤＮＡ的ＲＡＰＤ扩增,结果表明迟熟红苹Ｍａｎｇ,美国红Ｍａｇｎ和桂香Ｍａｎｇ三者在ＤＮＡ序上存在差异性。     

应用RAPD方法鉴别香菇菌株的研究

作者采用单个、10-碱基的随机引物(Operon公司产品)PCR扩增香菇的多态性DNA。测试的7个引物均能扩增15个香菇菌株的DNA,扩增位点为12～19个,DNA片段大小为0.34kp～2.52kp。除菌株ATCC 28759和ATCC 28760所有引物扩增的DNA指纹图谱均相同外,其余13个菌株都有其独特的DNA谱带。结果表明,RAPD方法可用于鉴别香菇菌株间的差异,在食用菌遗传育种研究中具有广泛的用途。     

枇杷属植物及其近缘属植物亲缘关系的RAPD分析

利用RAPD分子标记技术对中国20份枇杷属植物种质资源及其近缘属植物(石楠和石斑木)进行了遗传亲缘关系及分类研究。从300条10碱基随机引物中筛选出24条引物对20份枇杷种质资源的基因组DNA进行扩增,共产生232条谱带,全部为多态性谱带(多态率为100%),表明枇杷属植物种质之间具有丰富的多态性。各种质间的相似性系数为0.33~0.77,并根据相似性系数,利用UPGMA构建了亲缘关系树状图。在相似性系数为0.485时,20份枇杷属植物及其近缘属可分为3大类:所有的枇杷属植物聚在一起构成第1类,而石楠和石斑木分别构成其余2类,这与传统的分类方法一致;但18份枇杷属种质可分为5个亚类,这与枇杷属植物的传统分类法有所不同。初步推论,开花时间和老叶叶背的茸毛可能不是判断枇杷属植物亲缘关系的必要条件,而且枇杷属植物的进化与其生存的地理环境的变迁有着密切联系。     

RAPD及其在果树上的应用

就ＲＡＰＤ的特点,操作及其在果树品种鉴定,遗传多样性检测。系谱解析和遗传图谱的建等方面的应用和进展进行了简要的阐述。     

DNA分子标记在枇杷种质鉴定中的应用

<正>目前,对枇杷品种鉴定及种质资源的分析还缺乏有效的手段,传统的种质资源鉴定方法主要有植物形态学、孢子学、同功酶及染色体核型分析等。近10多年来,随着DNA分子标记技术的发展和不断完善,其中一些DNA分子标记技术(如RAPD、SSR、AFLP等)在枇杷种质资源的分类(鉴定)中得到了成功的应用,显示出了巨大的潜力。本文对此作简要综述,为枇杷种质资源的合理保护、开发利用,培育新品种等研究提供参考。     

几个杧果品种的RAPD分析

应用１０个十聚体随机引物,对美国红杧、桂香杧和退熟红苹杧株系的基因组ＤＮＡ进行ＲＡＰＤ分析,筛选出Ｓ２７３、Ｓ２８１和Ｓ２８６３个随机引物,适用于杧果基因组ＤＮＡ的ＲＡＰＤ扩增,结果表明迟熟红苹杧、美国红杧和桂香杧三者在ＤＮＡ序列上存在差异性。     

杏品种的RAPD分析

实验从S系列(Sangon公司)100个引物中筛选出能稳定扩增的18个引物,用这些引物首次对新世纪与红丰等20个杏品种进行了扩增,均具有多态性。共扩增出218条带,106条具有多态性,多态性比例为48.6%;建立了红丰及新世纪等优新品种的DNA指纹图谱,找到了它们的特异谱带。利用特异谱带结合DNA指纹,可将参试品种鉴别出来。同时利用STATISTIC软件,根据RAPD标记相似系数采用UPGAM聚类策略,对20个杏品种进行了聚类分析。在LD=0.4时划等值线,将参试品种分为7类。     

RAPD技术及其在蔬菜育种上的应用

本文从ＲＡＰＤ技术的概念、意义、技术原理、在蔬菜遗传育种上的应用等方面作了较为全面的综述。然而任何一种分子生物技术都有它的局限性。ＲＡＰＤ技术也存在着缺陷，但其快速、简便的优势使它在基因组研究中发挥着很重要的作用，在蔬菜育种中有着其它方法不可取代的优势。     

一种高质量枇杷基因组DNA提取方法

针对枇杷叶片富含多糖、多酚及其它次生代谢物质的特点,采用改良CTAB法,通过对抽提液、沉淀液和解离缓冲液进行逐步筛选,对其基因组总DNA进行提取,并对DNA进行电泳检测、含量测定和ISSR分析。结果表明:该方法从‘大五星’枇杷幼叶、成熟叶片、花药、组培苗,与幼果中的胚珠,以及栎叶枇杷的幼叶与成熟叶片7种材料提取的基因组总DNA纯度和完整性都较好,OD260/OD280值均在1.8~2.0之间,无降解现象,RNA去除干净,能被限制性内切酶完全消化;其ISSR分析条带清晰,多态性好,表明此方法提取的枇杷基因组总DNA质量较高。     

正交试验设计在建立杜鹃花RAPD-PCR反应体系中的应用

利用正交试验对影响RAPD-PCR反应体系的各种因素进行研究,从而建立适合杜鹃花RAPD反应的最佳反应体系,最终选择杜鹃基因组RAPD-PCR的最佳扩增反应体系,即模板DNA 80ng、随机引物0.5μmol/L、dNTPs 1.1mmol/L、MgCl2 2.5mmol/L,1.2μmol/LTag-DNA聚合酶,buffer 2μL,总反应体系20μL.试验设计的6个因子、5个水平中,Mg2 、dNTPs和引物的浓度是主要因子,其中Mg2 的浓度对试验的影响最大,dNTPs和引物浓度在较低的水平就可满足需要,高浓度并没有显著提高试验效果.     

温郁金RAPD-PCR反应体系建立及条件优化

在提取纯化温郁金DNA的基础上,利用PCR扩增技术,对Mg2 、dNTP、模板DTA、引物、Taq聚合酶等反应条件进行优化,建立温郁金基因组DNA的RAPD-PCR最佳反应体系.结果表明:最佳条件是总体积为25μL,其中Mg2 (25mM)2μL,Taq 聚合酶(5 U/μL)0.3μL,引物浓度(20μM)1.0μL,模板DNA(5 ng/μL)1.0μL,dNTP(2.5 mM)2.0μL,10×PCRbuffer 2.5μL;PCR扩增程序为94℃预变性5min;94℃变性35 s,36℃退火1min,72℃复性1.5 min,共42个循环;最后72℃延伸10 min,该研究得出的体系是温郁金RAPD-PCR的最适宜反应体系,具有省时、经济、简便以及扩增条带较清晰、稳定等特点,为今后温郁金的遗传多样性研究奠定了基础.     

康凯在枇杷上的应用试验初探

0.136%康凯可湿性粉剂在枇杷采后、花蕾期和花后每次喷施1.75～7.0 g/667m2,能明显提高枇杷夏梢抽生的数量和质量,坐果率提高69.5%～108.4%,冻果率降低52.8%～78.4%,单果重及单株产量均有提高.结果表明:与清水对照相比,康凯处理过的枇杷可溶性固形物含量、可溶性总糖、糖酸比等均得到不同程度的提高,说明0.136%康凯能提高枇杷果实品质.     

枇杷套袋技术及应用

果实套袋技术能有效改善果品外观,减少病虫害的危害,降低农药残留,提高果品质量,对扩大消费市场,提高市场竞争力,增加农民收入有重要意义。主要介绍枇杷套袋技术、套袋技术注意事项以及套袋技术在枇杷生产上的应用价值。     

应用RAPD技术对香菇融合菌株进行遗传鉴定

本文应用RAPD技术与聚类分析方法,对香菇细胞融合菌株F1及亲本S1、465进行遗传分析.根据DNA扩增的指纹图谱,估算融合子与亲本的DNA相似系数并构建遗传相关性聚类图.结果表明,RAPD技术与聚类分析方法可应用于香菇细胞融合菌株的遗传鉴定.     

枇杷SSR反应体系的建立及优化

为探索适宜枇杷的SSR反应体系,利用正交设计对Mg2＋、dNTPs、引物、Taq酶和模板DNA等5种因素4个水平进行筛选和优化。结果表明：20uL反应体系中,Mg2＋、dNTPs和引物的最适浓度分别为1．5mmol．L-1、0．15mmol·L-1、0．2umol·L-1,Taq酶最适用量为1U,模板DNA最适用量为20ng;引物的最佳退火温度为51．0～60．0℃。利用该反应体系对17份枇杷种质进行扩增,电泳结果显示,不同品种间DNA谱带多态性丰富,证实该体系稳定可靠。     

北方日光温室内枇杷果实生长发育规律初报

以大红袍、冠玉和青种为试材，对北方日光温室栽培条件下枇杷果实生长发育进程进行了研究，探索不同品种果实生长发育规律。结果表明：北方日光温室内的3个枇杷品种果实纵横径生长都呈“单S”曲线。其中青种果实发育时间最短，为106d、大红袍119d，冠玉126d。     

枇杷种质资源果实可食率变异研究

对国家果树种质福州枇杷圃内168份枇杷种质的果实可食率进行了鉴定评价,结果显示,枇杷种质资源果实可食率变异系数为11.38%,呈偏态分布,可食率大于75.0%的种质有16份。不同来源地之间的枇杷种质资源果实可食率存在较大的差异,野生枇杷种质的果实可食率较栽培种质低,呈极显著差异,红肉与白肉枇杷种质之间果实可食率差异不显著。     

大丽菊杂合花色突变体的发现及RAPD鉴定

以新发现的大丽菊花色突变体为材料,选取10个具有10个碱基长度的随机引物,对5种突变个体的基因组DNA进行了RAPD分析.结果表明:10个随机引物共扩增出152条DNA条带,分子量大小在250～1 600 bp之间,其中有4个引物的扩增结果中检测到了差异性条带,在DNA水平上初步证实了5种花色突变体是由于遗传因素导致的稳定变异.