口蹄疫O型液相阻断ELISA免疫抗体检测方法的应用

应用液相阻断ELISA试验方法检测上海光明荷斯坦牧业有限公司牧场牛群经口蹄疫O型灭活疫苗免疫的奶牛血清样品2412份。经检测,2412份样品中规模奶牛场牛群免疫抗体滴度≤1∶64样品42份,抗体滴度≥1∶128样品2370份,抗体保护率为98%。     

O型口蹄疫抗体金标检测试纸条判定标准的确立

本试验旨在迅速、准确检测口蹄疫阴性血清和阳性血清,确立O型口蹄疫抗体金标检测试纸条的判定标准。通过3批次O型口蹄疫抗体金标检测试纸条,对180份猪、牛、羊口蹄疫阴性血清,197份猪、牛O型口蹄疫弱阳性血清,317份猪、牛、羊O型口蹄疫阳性血清,223份牛Asia 1、A型口蹄疫阳性血清,600份田间血清样品进行检测,同时用O型口蹄疫液相阻断ELISA和O型口蹄疫正向间接血凝2种方法检测相同的血清样品。对3种方法检测的结果进行分析,并且将试纸条的检测线和质控线的显色情况与O型口蹄疫液相阻断ELISA的抗体滴度相比较。确立了试纸条的诊断标准:试纸条抗体滴度1∶2-为口蹄疫抗体阴性;试纸条抗体滴度1∶8+为O型口蹄疫阳性血清。根据试纸条的显色结果与液相阻断ELISA的结果的关系,绘制了比色卡。试纸条的判定标准检测血清结果与液相阻断ELISA和正向间接血凝结果分别进行统计学分析,试纸条与液相阻断ELISA和正向间接血凝相关性分别为y=1.142x+0.7421,y=1.1845x+0.8623;相关系数(r)分别为0.9221和0.9033。结果显示,O型口蹄疫抗体金标检测试纸条的判定标准的确立和比色卡的绘制,实现半定量分析,更加迅速、准确,适于实验室、基层兽医站和养殖场使用。     

四种试剂盒检测猪口蹄疫O型合成肽疫苗抗体的对比试验

使用国产的4种猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体ELISA诊断试剂盒(VP1-ELISA)、猪口蹄疫O型液相阻断ELISA检测试剂盒(LB-ELISA)、猪口蹄疫正向间接血凝试剂盒、猪O型口蹄疫病毒ELISA抗体检测试剂盒(O-ELISA)同时检测猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫后的50份血清样品,阳性率分别为98.0%、94.0%、54.0%、90.0%。同时使用农业部规定的3种试剂盒分别检测20份血清样品的抗体滴度发现,VP1-ELISA试剂盒和LB-ELISA试剂盒阳性符合率为95%,平均抗体滴度相差0.7,与IHA试剂盒符合率为55%,平均抗体滴度相差3.8,故LB-ELISA试剂盒可以用来评价合成肽疫苗免疫的抗体,而IHA试剂盒不能用来检测合成肽疫苗免疫的抗体。     

偶蹄动物免疫口蹄疫O型亚洲Ⅰ型二价疫苗后O型和亚洲Ⅰ型免疫抗体监测结果差异的原因分析

偶蹄动物免疫口蹄疫O型、亚洲Ⅰ型二价灭活疫苗,监测口蹄疫O型、亚洲Ⅰ型免疫抗体滴度和合格率出现的差异,使兽医监测部门难以出具监测报告,镇动监所无法加强免疫,养殖户对疫苗质量和监测方法提出质疑。面对使用口蹄疫O型、亚洲Ⅰ型二价疫苗带来的矛盾和困扰,笔者通过对试验数据的统计和免疫抗体监测结果的分析后发现,不同的偶蹄动物免疫相同的口蹄疫O型、亚洲Ⅰ型二价灭活疫苗后,由于检测方法不同、检测的血清型不同,导致O型口蹄疫免疫抗体合格率高于亚洲Ⅰ型口蹄疫免疫抗体合格率平均值3.8%。同时将O型正向间接血凝(HA)与液相阻断(LB-ELISA)进行比较,在414份亚洲Ⅰ型口蹄疫免疫抗体检测结果小于农业部标准的样品中,O型口蹄疫免疫抗体大于或等于农业部标准有256份样品,相差61.8%。     

广东省猪群口蹄疫免疫抗体水平调查

采集广东省不同地区11个猪场的不同类型猪的血清样品3 108份,采用液相阻断-酶联免疫吸附法,以口蹄疫结构蛋白抗体滴度作为评估疫苗效力的指标。本试验共采集种公猪血清样品77份,结果显示平均抗体滴度为(1.859 1±0.078 1,1∶72);仔猪血清样品514份,平均抗体滴度为(1.793 3±0.027 9,1∶62);经产母猪血清样品604份,平均抗体滴度为(1.967 2±0.024 2,1∶92);后备母猪血清样品有1 913份,平均抗体滴度为(1.790 8±0.015 2,1∶61)。从统计结果来看,经产母猪的免疫状态是最好的,但总的来说,猪群的整体免疫水平不高,免疫形势不容乐观,口蹄疫的防治水平仍须提高。     

口蹄疫检测能力比对试验的结果分析

用RIHA、RT-PCR、LB-ELISA和NSP-3ABCELISA方法对22份盲样进行检测。抗原检测结果显示:在RIHA试验中,X049,X226,X291盲样分别为口蹄疫O型、A型和AsiaⅠ型抗原阳性样品;X146为猪传染性水泡病抗原阳性;X073、X094为阴性样品。在RT-PCR试验中,Z025、Z147扩增出长度约为634bp、483bp和278bp3条特异性的DNA片段,确定为口蹄疫病毒样品;Z113为阴性样品。在LB-ELISA中,L052、L149、L262、L421、L451O型口蹄疫抗体滴度均为1∶256,均为阳性样品;L182、L184、L213、L235、L317均为阴性样品。在NSP-3ABCELISA中,Y019、Y036为口蹄疫感染抗体阳性样品;Y137为阴性样品。     

农村散养肉猪口蹄疫免疫抗体水平调查报告

为了解农村散养肉猪口蹄疫免疫抗体水平情况,采集桂林市5个县(分别标注为A、B、C、D、E县)40个农村散养肉猪的血清样本进行检测。检测方法是用液相阻断酶联免疫吸附法,免疫抗体效力评价办法采用口蹄疫结构蛋白抗体滴度,本次调查每个县采集8个农村散养户,每户采40份肉猪血清样本。本次调查共采集肉猪血清样本1 600份。结果:A县有157份血清样本抗体滴度≥1∶64、163份≤1∶64;B县有139份血清样本抗体滴度≥1∶64、181份≤1∶64;C县有196份血清样本抗体滴度≥1∶64、124份≤1∶64;D县有168份血清样本抗体滴度≥1∶64、152份≤1∶64;E县有187份血清样本抗体滴度≥1∶64、133份≤1∶64。从调查结果不难看出,C县肉猪的免疫状态是最好的,但是从总体来看,免疫效果不容乐观。在抽检的1 600份血清中抗体滴度达到1∶64以上的仅仅有847份,免疫抗体滴度合格率仅仅为52.9%,未达到农业部的要求。     

口蹄疫O型固相竞争ELISA抗体检测试剂盒的临床应用

用口蹄疫O型固相竞争ELISA检测血清1 150份,口蹄疫O型免疫血清820份,敏感性为91.83%;试剂盒特异性评价检测血清180份,其特异性为89.4%;固相竞争ELISA和液相阻断ELISA共同检测血清100份,其相关性分析为0.964 1,R2为0.929 5,属于高度相关。3批试剂盒检测血清样品50份,检测结果差异不显著,口蹄疫O型固相竞争ELISA抗体检测试剂盒检测结果比较稳定,具有良好的批间可重复性和稳定性。     

2016年江苏省猪口蹄疫监测结果分析

为了解江苏省猪口蹄疫感染和免疫情况,采用荧光RT-PCR和ELISA方法,对收集的8000份猪组织样品和2718份猪血清样品分别进行口蹄疫病毒核酸和O型口蹄疫抗体检测.数据显示,口蹄疫病毒核酸阳性率为0;O型口蹄疫抗体合格率为68.95%.结果表明,江苏省规模场和屠宰场猪口蹄疫防控情况较好;O型口蹄疫抗体合格率略低于70%,说明仍有个别场户的口蹄疫免疫工作存在瑕疵.     

一致性检验比较牛口蹄疫病毒抗体LBE检测试剂盒

用660份牛血清比较牛口蹄疫病毒O型、A型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒检测结果的一致性,并用u检验排除抽样误差的影响。结果表明:待检血清最终稀释度数为1∶64时O型试剂盒联合检出523份口蹄疫抗体阳性和102份阴性,符合率为94.70%,结果一致性为极强(Kappa值=0.82);待检血清最终稀释度数为1∶128时O型试剂盒联合检出476份口蹄疫抗体阳性和125份阴性,符合率91.06%,结果为高度一致(Kappa值=0.75);血清最终稀释度数为164时A型试剂盒联合检出498份口蹄疫抗体阳性和120份阴性,符合率为93.64%,结果一致性为极强(Kappa值=0.81),血清最终稀释度数为1∶28时A型试剂盒联合检出354份口蹄疫抗体阳性和233份阴性,符合率为88.94%,结果为高度一致(Kappa值=0.77)。在不同包被方式下,LBE试剂盒检测待检血清牛口蹄疫病毒抗体结果一致性较好。兽医实验室可应用一致性检验,结合本单位人力、财力和物力等条件,选择适宜的牛口蹄疫病毒抗体检测试剂盒。     

安徽省2015年猪口蹄疫定点监测分析

为了解安徽省猪口蹄疫感染状况和免疫情况,使用荧光RT-PCR和ELISA检测方法,对安徽省12个生猪固定监测点采集的578份扁桃体样品和578份血清样品分别开展口蹄疫（通用型）病毒核酸、猪A型口蹄疫抗体和猪O型口蹄疫抗体检测。结果显示：猪口蹄疫（通用型）病毒核酸阳性率为0,A型抗体阳性率为25.95%,O型抗体合格率为32.87%。结果表明,安徽省中小型生猪养殖场口蹄疫防控情况较好;部分猪场使用了A型口蹄疫疫苗免疫,但效果并不理想;O型口蹄疫抗体合格率不高,除免疫时间短的因素外,说明仍有部分猪场不重视口蹄疫免疫。     

2016—2020年可克达拉市牛口蹄疫免疫抗体监测分析

[目的]为科学评估牛口蹄疫免效果,及时有效开展疫情预警预报,制定有针对性防控策略.[方法]第四师畜牧兽医工作站对2016—2020年集中免疫后牛口蹄疫免疫血清抗体检测数据进行整理分析.[结果]共检测牛O型口蹄疫免疫血清样品6797份,合格6334份,平均合格率93.19％;牛A型口蹄疫免疫血清样品5997份,合格550...     

反复冻融对血清样品中三型口蹄疫免疫抗体效价的影响

为了研究反复冻融对血清样品中免疫抗体效价的影响,随机采集50份采用口蹄疫O型、A型、亚洲1型三价灭活疫苗进行过多次口蹄疫免疫的健康奶牛血清样品,采用液相阻断酶联免疫吸附试验分别检测其中口蹄疫O型、A型、亚洲1型免疫抗体的效价。每份样品检测4次,检测时间分别为采样后、反复冻融1次后、反复冻融2次后、反复冻融3次后。冷冻条件为-20℃冷冻24 h,融解温度为25℃。统计分析样品4次检测的口蹄疫O型、A型、亚洲1型免疫抗体效价变化,采用单因素方差分析进行差异显著性分析。结果显示,采样后、反复冻融1次、反复冻融2次、反复冻融3次所测得的口蹄疫O型、A型、亚洲1型免疫抗体效价差异均不显著,表明反复冻融3次以内不会影响血清样品中免疫抗体效价。     

开阳县中小规模养殖场口蹄疫监测分析

为了解开阳县中小规模养殖场的口蹄疫防控情况,采用ELISA试验对52个中小规模养殖场猪O型口蹄疫免疫抗体和口蹄疫非结构蛋白3-ABC抗体进行检测,检测出3-ABC抗体阳性病例进一步通过RT-PCR检测口蹄疫病毒确诊。结果:猪O型口蹄疫免疫抗体共检测1 684份,合格率88.3%(1 487/1 684);口蹄疫非结构蛋白3-ABC抗体共检测1 684份,3-ABC抗体阳性9份,阳性率0.53%(9/1 684),进一步通过RT-PCR检测口蹄疫病毒,结果为阴性。结果表明,开阳县中小规模养猪场的猪O型口蹄疫免疫抗体效价达到国家农业部标准,有良好的免疫保护效果,没有检测出口蹄疫病毒,口蹄疫的防控处于良好状态。     

巴中市O型口蹄疫免疫抗体检测及免疫效果分析

为动态了解掌握巴中市各县(区)O型口蹄疫免疫效果,试验抽取440份猪、牛、羊血清,用酶联免疫吸附试验检测O型口蹄疫免疫抗体。结果显示:所有血清样品的O型口蹄疫免疫抗体合格率平均为75.53%,表明我市的O型口蹄疫免疫效果达到了农业部≥70的基本要求。     

高林屯牛口蹄疫免疫抗体水平检测与分析

为掌握高林屯牛口蹄疫的免疫现状,本研究对2017年于高林屯采集的30份牛血清样品进行O型、A型口蹄疫免疫抗体的检测与分析。结果显示高林屯牛O型、A型口蹄疫的免疫合格率均为80%,说明高林屯牛口蹄疫免疫效果整体较好。     

兔抗O型口蹄疫VLPs酶标抗体的制备及初步应用

为制备兔抗O型口蹄疫病毒样颗粒(VLPs)的酶标抗体,进一步建立O型口蹄疫病毒的ELISA检测方法,通过原核表达、体外纯化和组装O型口蹄疫VLPs,免疫家兔制备兔抗O型口蹄疫VLPs高免血清,并采用亲和层析法纯化IgG,改良过碘酸钠法制备兔抗O型口蹄疫VLPs的酶标抗体(rabbit anti-type O foot-and-mouth disease IgG-HRP)。结果显示,兔抗O型口蹄疫VLPs高免血清效价达1∶4 096,纯化后的IgG纯度达90%,效价达1∶512 000。表明获得了高纯度的兔抗O型口蹄疫VLP的酶标抗体,可用于O型口蹄疫的ELISA检测。     

基于VP1重组蛋白的口蹄疫病毒O型间接ELISA检测技术

采用RT-PCR方法扩增O型口蹄疫病毒VP1基因片段,将其克隆于pET-32a.将重组质粒转化宿主菌Rosetta,经1.0 mmol/L IPTG诱导,外源基因获高效表达.通过Western-blot以及ELISA试验证明,重组VP1蛋白与标准阳性血清发生反应.以纯化的VP1蛋白作为检测抗原包被酶标板建立了检测口蹄疫病毒O型抗体的间接ELISA方法.对355份临床血清样品的检测结果显示,建立的方法与口蹄疫病毒O型液相阻断试剂盒符合率为98.87％.表明建立的方法能够用于口蹄疫病毒O型抗体的快速分型检测.     

甘肃省牛、羊FMD亚洲Ⅰ型和O型免疫抗体水平调查与分析

采用IHA和LB-ELISA,对检测来自全省14个州市36个规模场和228个散养户的1212份牛和羊血清进行O型和Asia-Ⅰ型FMD免疫抗体检测.O型FMD检测牛647份,免疫合格559份,平均合格率为86.39%,滴度大于1:128有399份;检测羊675份,免疫合格569份,平均合格率为84.29%,滴度大于1:128的有437份.Asia-Ⅰ型FMD检测牛601份,免疫合格467份,平均合格率为77.70%,滴度大于1:128的有381份;检测羊560份,免疫合格439份,平均合格率为78.39%,滴度大于1:128的有363份.     

牛口蹄疫O型-亚Ⅰ型双价灭活疫苗、A型灭活疫苗和牛口蹄疫三价灭活疫苗免疫效果对比试验

为考察现用奶牛口蹄疫O型-亚洲Ⅰ型-A型三价灭活疫苗、奶牛口蹄疫O型-亚洲Ⅰ型二价灭活疫苗及口蹄疫A型灭活疫苗的免疫效果,选取2组未免疫犊牛,分别进行双价苗＋A型苗与三价苗的免疫接种,并采用LB-ELISA方法检测口蹄疫O型、A型免疫抗体效价.结果表明：接种21 d后,两种免疫方法免疫效果不存在显著性差异,犊牛血清O型、A型抗体平均效价≥9.9 log2,60份抗体效价≥1∶64,免疫合格率均为100％.