新城疫病毒出芽机制的研究进展

新城疫病毒(Newcastle disease virus,virus,NDV)是引起禽类急性、高度接触性传染病-新城疫(Newcastle disease,ND)的病原,给养禽业造成了严重经济损失,虽然有疫苗可用于该病的预防,但由于对病原的致病机理、免疫机理了解不充分,一直没能从根本上控制该病。近些年来,VLPs(Virus-like Particles,VLPs)技术在病毒的组装和出芽机制的研究以及某些传染病的疫苗开发上应用广泛,以VLPs技术阐述了NDV出芽的机制。     

新城疫病毒的一般生物学特性及其致病的分子基础

新城疫病毒(NDV)所致疫病鸡新城疫(ND)又称亚洲鸡瘟,是禽类的一种以呼吸道、消化道黏膜出血为典型症状的高度接触性急性败血性传染病,严重危害养禽业的发展。我国于1935年首次发现有ND的流行,但到1948年才得以最后证实。由于ND给世界养禽业造成的巨大损失,故对其病原NDV的研究一直是禽病研究的重点。现就新城疫病毒的一般生物学特性及其致病的分子学基础综述如下。     

新城疫的分子生物学诊断技术

随着新城疫病毒(NDV)分子结构、分子结构与致病性关系、强弱毒株分子结构差异等研究的深入,为新城疫(ND)分子水平上的特异性诊断技术,特别是为从病原体检测角度建立特异性诊断技术奠定了基础。其中,发展比较快的有单克隆抗体技术、RNA指纹图谱技术、核酸探针技术和基因片段的体外扩增技术等。这些技术不仅用于新城疫病毒的检测、鉴定、特性研究及致病型的确定等,还可以据此追踪病毒的来源及流行情况。笔者仅就新城疫分子生物学诊断常见技术目前的研究情况简要综述如下。     

新城疫病毒分子生物学研究进展

新城疫是由新城疫病毒（NDV）引起的一种能导致大多数禽类消化道、胃肠道和中枢神经系统损伤为主要特征的、急性高度接触性传染病。1926年该病首次被发现于印度尼西亚的爪哇,1927年Doyle在英国的新城首次分离报道并将其命名为新城疫病毒,引起的疾病称为新城疫。我国于1948年分离到NDV，但据载1935年曾有过＂鸡瘟＂流行，可能是由NDV引起。     

我国当前新城疫流行概况及防控对策

正新城疫(Newcastle disease,ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)引起的一种禽的急性、高度传染性疾病,是世界公认的最重要的2个禽类疫病之一,长期危害我国养禽业。我国对新城疫的防控和研究一直十分重视,家禽疫苗的研发和生产已达世界一流水平,免疫强度也高于其他国家。但是,基于中国养殖业现状,管理不到位、忽视生物安全等因素导致我国家禽     

禽流感病毒与新城疫病毒二重RT-PCR检测方法的建立

根据GenBank登录的禽流感病毒(AIV)M1基因与新城疫病毒(NDV)M基因核苷酸序列,设计用于扩增AIV与NDV的RT-PCR引物,建立了AIV与NDV二重RT-PCR检测方法。敏感性和特异性试验结果表明,该方法对AIV与NDV的最低核酸检出量分别为38和27 pg,可同时扩增出428 bp(AIV)与297 bp(NDV)的特异性片段,而对传染性法氏囊病毒、传染性支气管炎病毒与鸭肝炎病毒的检测结果均为阴性。该方法可用于2种病毒病的临床快速检测与流行病学调查。     

单抗夹心ELISA检测免疫鸡群新城疫病毒

用SPF鸡胚将送检的免疫鸡群泄殖腔棉拭样品盲传一代，再用新城疫单抗夹心ELISA对F1代尿囊液进行新城疫病毒(NDV)快速检测，同时用世界动物卫生组织(OIE)推荐的NDV分离及鉴定的方法加以验证。通过对3423份样品的检测，检出阳性样品453份，阴性样品2959份，可疑样品11份，两种方法的阳性符合率为99．3％，阴性符合率为99．7％。对全部阳性样品进行病毒分离，经血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验证明均含有新城疫病毒(NDV)，再将全部阳性样品分离物进一步作毒力鉴定，结果有强毒力株、中等毒力株及弱毒力株，因此用新城疫单抗夹心ELISA检测免疫鸡群泄殖腔棉拭样品F1代尿囊液新城疫病毒快速、准确率高，呈阳性者不全是NDV强毒力株感染，还有NDV中等毒力株或弱毒力株感染。     

我国新城疫分子流行病学研究进展

新城疫（Newcastle Disease,ND）是严重损害禽类健康的疾病之一，在世界范围内广泛流行，临床以高热、呼吸困难、下痢、神经紊乱、黏膜出血等症状为特征，严重危害禽类的生长繁殖及禽肉生产。新城疫由新城疫病毒（Newcastle Disease Virus,NDV）引起。NDV已有近100年的流行历史，能够感染鸡、鸭、鹅和鸽子等200多种禽类，其基因型众多，易变的基因型给新城疫防控带来巨大困难。鸟类迁徙在病毒跨境传播中起到重要作用，导致我国各地区新城疫疫情时有发生，给养禽业带来巨大的经济损失，严重制约了养禽业的健康发展。NDV分布范围广、宿主流动性强,是危害养禽业的重要病毒。为了解我国NDV的流行情况，通过对其分子流行病学及各基因型的时空分布进行分析，发现我国新城疫主要分布于广西、广东等华南地区，江苏、安徽等华东地区及陕西、甘肃等西北地区。这些地区分离出的高致病性Ⅱ类毒株包括多种基因型，其中基因Ⅱ型和基因Ⅶ型毒株为主要流行株。通过对NDV流行相关数据的整理与分析可为疫情防控和疫苗研究提供参考。     

一株新城疫病毒分离鉴定及分子特性分析

正新城疫(Newcastle disease,ND)是由新城疫病毒(New castle disease virus,NDV)所引起的禽类一种急性、烈性传染病,其主要侵害鸡和火鸡,发病率和死亡率均非常高,为危害我国养禽业的最严重疾病之一,该病为世界动物卫生组织(OIE)所规定的A类动物疫病,我国将其列为一类动物疫病,并为国家中长期动物疫病防治规划(2012-2020年)     

新城疫病毒分子检测技术

新城疫病毒是一种能导致大多数禽类消化道、胃肠道和中枢神经系统损伤为主要特征的急性热性高度接触性传染病.新城疫病毒的检测主要采用单克隆抗体技术、RT-PCR技术、荧光定量RT-PCR技术、核酸探针技术、基因芯片等分子检测技术.     

新城疫病毒xx08株HN蛋白主要抗原区的原核表达及其在抗体检测中的应用

为建立检测新城疫病毒(NDV)抗体的间接ELISA方法,构建了新城疫(ND)xx08株HN基因抗原表位集中区基因片段的重组表达质粒p ET28a-r HN,加入IPTG进行诱导表达,经SDS-PAGE鉴定表明,表达的重组蛋白大小约为28 ku。Western blot分析表明,该重组蛋白具有良好的反应性。以纯化的HN蛋白为包被抗原建立检测NDV抗体的间接ELISA方法,优化试验条件后,抗原最适包被浓度为5μg/m L,血清最适稀释比例为1∶80,与HI试验结果符合率较高,且与鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)、鸡传染性支气管炎病(IBV)、鸡禽流感病毒(AIV)和鸡马立克氏病毒(MDV)等标准阳性血清无交叉反应。表明建立的间接ELISA方法可以用于临床新城疫抗体的检测。     

鸭源新城疫病毒的分离与鉴定

[目的]分离并鉴定鸭源新城疫病毒。[方法]从安徽地区鸭病料中分离新城疫病毒,测定其鸡胚半数感染量(EID_(50))、鸡胚平均致死时间(MDT)和1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)。[结果]2株新城疫病毒均为强毒。通过RT-PCR技术对这2株鸭新城疫病毒的F基因进行序列测定与分析,结果发现F基因裂解位点为~(112)RRQKRF~(117),符合NDV强毒株裂解位点氨基酸序列。F基因遗传进化树分析发现,AH1株属于基因Ⅶ型,而AH2株属于基因Ⅵ型,来源于鸽源病毒。[结论]水禽新城疫病毒(NDV)的感染来源复杂,应避免将不同种类的家禽混合饲养。     

用胶体金免疫电镜技术检测新城疫病毒

应用柠檬酸三钠还原法制备了20 nm的胶体金颗粒标记NDV抗体,并且用直接电镜、免疫电镜和胶体金免疫电镜技术比较观察了新城疫病毒.证明胶体金免疫电镜技术作为检测NDV的检测方法具有简单、快速、准确和无污染等优点.     

鸡新城疫的流行特点和综合防治措施

<正>新城疫(Newcastle Disease,ND)是由新城疫病毒引起的一种禽类急性、高度接触性传染病,又名禽副粘病毒,被世界动物卫生组织定为法定必报传染病,我国列其为一类动物疫病。该病主要危害鸡、珠珠鸡和火鸡,强毒株可使鸡群全群毁灭。人类可因接触病禽和活毒疫苗而引起结膜炎或淋巴腺炎。该病是世界禽类两个重大传染病之一,也是长期危害我国养禽业最严重的疫病之一。目前,我国流行的NDV毒株的基因型极其复杂,有     

鸭三种病毒性疾病多重PCR检测方法的建立及初步应用

为了一次性检测临床样品中是否存在鸭新城疫病毒(NDV)、鸭瘟病毒(DPV)或鸭坦布苏病毒(DTMUV)感染,本研究根据GenBank已登录的3种病原的保守基因序列,分别设计了3对特异性引物,通过优化扩增条件,建立了可同时检测NDV、DPV和DTMUV的多重PCR检测方法。特异性检验表明,该多重PCR方法可同时扩增出NDV(510bp)、DPV(400bp)、DTMUV(300bp)的特异片段,对其他鸭常感染病毒扩增结果均为阴性;敏感性测定表明,该多重PCR技术最低能检出1.02×10~4拷贝·μL~(-1) NDV、3.50×10~3拷贝·μL~(-1) DPV和1.17×10~4拷贝·μL~(-1) DTMUV。采用建立的多重PCR方法对250份临床样品进行检测结果显示,其检测结果与该3种病毒的常规单一PCR检测结果符合率为100%。以上结果表明,本研究建立的多重PCR检测方法具有快速、特异性强、敏感性高等优点,适用于临床样品中上述3种病原的检测。     

用单抗夹心ELISA快速检测鸡新城疫病毒

采用传统的病毒分离的方法将免疫鸡群泄殖腔棉拭样品盲传一代，再用新城疫单抗夹心ELISA对F1尿囊液进行新城疫病毒(NDV)检测。结果表明本方法具有良好的特异性，NDV阳性样品检出率很高，且鸡禽流感病毒(AIV)对此无干扰作用；分别检测阳性样品453份、阴性样品2959份，与动物世界卫生组织(OIE)推荐的病毒分离及鉴定、毒力试验的经典检测方法相比较，符合率为99．3％、99．7％；测定的变异系数为8％，稳定性较好，同时本法比经典的检测方法缩短检测时间7d。结果表明用单抗夹心ELISA法检测鸡泄殖腔棉拭样品F1尿囊液新城疫病毒实用、准确、特异、稳定、快速。     

疫区蛋鸡的新城疫病毒感染率及其免疫状态的研究

为探讨疫区鸡感染新城疫病毒和其免疫状态的关系 ,对疫区 13个蛋鸡场的蛋鸡新城疫抗体水平、新城疫病毒阳性率进行了检测。检测结果表明 :ND抗体水平低于 6(log2 )与高于 6(log2 )的鸡的NDV阳性平均检测率之间存在极显著差异 (P <0 .0 1) ;强毒攻击时 ,ND抗体水平低于 6(log2 )与高于 6(log 2 )的鸡的发病率之间也存在极显著差异 (P <0 .0 1)。这表明新城疫病毒易于突破新城疫抗体水平低的鸡体免疫系统并能增殖 ;还表明新城疫抗体水平高低仍能体现鸡群是否具有承受新城疫病毒攻击的能力和新城疫的体液免疫状态 ,但其起完全保护的阈值比人们以前所公认的完全保护阈值 3 (log2 )升高 ;新城疫病毒检测呈阳性的绝大多数鸡群的新城疫抗体水平表现极不均匀 ;新城疫抗体水平只能表示鸡新城疫体液免疫状态 ,不能作为判断机体是否感染新城疫病毒的标准。     

鸭源新城疫病毒的分离鉴定及生物学特性

新城疫（ND）是新城疫病毒（NDV）引起的禽类急性、高度接触性和致死性的传染病,对养禽业的危害极其严重,是危害鸡、鸽、某些珍禽等陆生禽类的主要传染病。1997年我国报道了家养水禽鹅发生新城疫的病例,且发病率高,从而改变NDV对水禽不致病之说。近年来,我国也有家鸭感染NDV的病例报道,但未引起更为严重的流行和发病。作者从鸭泄殖腔拭子中分离到1株NDV,并对该株NDV的生物学特性进行了研究。     

Development and Application of a Diagnostic Kit for Detecting NDV

根据新城疲病毒(NDV)对鸡红细胞的凝集以及相应抗体对病毒血凝的抑制的原理设计出新城疫抗体监测试剂盒,主要用于鸡新城疫抗体水平的监测,为正确实施新城疫疫苗适时接种提供依据。试剂盒包括新城疫阳性血清、新城疲阴性血清、4单位新城疫抗原和10ml/L醛化红细胞。经对50多份血清检测结果表明,用于血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验的醛化红细胞与新鲜红细胞无显著性差异(P>0.05),试剂盒能准确检测出鸡群新城疫抗体水平,具有操作简便,适用,易于保存等特点。     

鸡非典型新城疫的综合防控

鸡新城疫(AvianNewcastleDisease,ND)是由新城疫病毒(Newcastlediseasevirus,NDV)引起的一种高度接触性、败血性传染病,主要特征是下痢、呼吸困难、神经机能紊乱、黏膜和浆膜出血。随着养鸡业免疫技术的发展和饲养管理水平的不断提高,典型新城疫得到了很好的控制,但非典型新城疫却屡屡发生,是危害