禽流感H5N1亚型不同株抗原抗体相互检测相关性试验

禽流感病毒（Avian Influenza Virus,AIV）是禽流行性感冒（简称禽流感,Avian Influenza,AI）的病原。其中高致病性的H5N1亚型AIV可以造成鸡群的大批死亡,对家禽养殖业影响严重,并可引起人的感染和死亡。通过接种疫苗能有效地控制禽流感的传播,在禽流感疫苗免疫效力的评价过程中,监测免疫鸡血清抗体是最常用、最可行的方法。2009年农业部批准重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型,Re-5株）和重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（H5N1,Re-5株+Re-4株）制造,2012年重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型,Re-6株）及重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（H5N1,Re-6株+Re-4株）取代以上两个产品,2014年,北方出现了新的7.2分支毒株,而禽流感Re-4株疫苗和Re-6株疫苗对这种新型流行株的保护效力并不佳。2014年4月11日,农业部发布“中华人民共和国农业部公告第2093号”,制定了重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型, Re-7株）和重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（Re-6株+Re-7株）2种兽药产品制造及检验规程,全国将主要以Re-6与Re-7两种疫苗联合免疫为新的趋势。本试验分别用不同毒株的禽流感试验抗原与不同毒株禽流感疫苗免疫鸡的血清通过HI试验相互检测,对抗体效价进行分析,从而得出不同毒株的相关性。     

禽流感H5N1亚型不同株抗原抗体相互检测相关性试验

禽流感病毒（Avian Influenza Virus,AIV）是禽流行性感冒（简称禽流感,Avian Influenza,AI）的病原。其中高致病性的H5N1亚型AIV可以造成鸡群的大批死亡,对家禽养殖业影响严重,并可引起人的感染和死亡。通过接种疫苗能有效地控制禽流感的传播,在禽流感疫苗免疫效力的评价过程中,监测免疫鸡血清抗体是最常用、最可行的方法。2009年农业部批准重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型,Re-5株）和重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（H5N1,Re-5株＋Re-4株）制造,2012年重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型,Re-6株）及重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（H5N1,Re-6株＋Re-4株）取代以上两个产品,2014年,北方出现了新的7．2分支毒株,而禽流感Re-4株疫苗和Re-6株疫苗对这种新型流行株的保护效力并不佳。2014年4月11日,农业部发布“中华人民共和国农业部公告第2093号”,制定了重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型,Re-7株）和重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（Re-6株＋Re-7株）2种兽药产品制造及检验规程,全国将主要以Re-6与Re-7两种疫苗联合免疫为新的趋势。本试验分别用不同毒株的禽流感试验抗原与不同毒株禽流感疫苗免疫鸡的血清通过HI试验相互检测,对抗体效价进行分析,从而得出不同毒株的相关性。     

不同禽流感疫苗和不同接种剂量免疫麻花鸡的免疫效力试验

对我国目前推广的5种不同禽流感疫苗进行了免疫效果的比对分析;对麻花鸡群以不同免疫剂量进行接种,比较分析了疫苗剂量对禽流感免疫效果的影响;对比结果表明,重组禽流感灭活疫苗（H5N1亚型,Re-1株）、禽流感灭活疫苗（H5N2亚型,N28株）、禽流感（H5＋H9）二价灭活疫苗（H5N1Re-1＋H9N2Re-2株）抗体水平高,效果稳定,这3种疫苗为乌鲁木齐市麻花鸡禽流感防控中的疫苗首选;不同免疫剂量的对比试验结果表明,最佳禽流感疫苗接种剂量为0.5ml。     

新疆商品代AA肉鸡接种禽流感疫苗的免疫效力观察

分别应用禽流感灭活疫苗（H5亚型,N28株）、禽流感（H5N2＋H9N2）二价灭活疫苗（N28株＋SD696株）、禽流感（H5＋H9）二价灭活疫苗（H5N1Re-1＋H9N2Re-2株）和禽流感-新城疫重组二联活疫苗（rL—H5株）4种禽流感疫苗,接种不同批次的商品代AA肉鸡,通过血凝抑制试验测定免疫后不同时期的抗体水平,确定各种疫苗对商品代从肉鸡的免疫效果。结果表明,在免疫20d后,禽流感（H5＋H9）二价灭活疫苗（H5N1Re－1＋H9N2Re－2株）刺激肉鸡群产生的HI抗体均高于禽流感灭活疫苗（H5亚型,N28株）、禽流感（H5N2＋H9N2）二价灭活疫苗（N28株＋SD696株）和禽流感－新城疫重组二联活疫苗（rL—H5）．差异显著（P〈0．05）。     

重组禽流感病毒H_5亚型二价灭活苗(H_5N_1,Re-5株+Re-4株)的免疫效果评价

为评价H5N1高致病性禽流感二价灭活苗（H5N1,Re-5株＋Re-4株）的免疫效果。选择健康无禽流感免疫史的62日龄肉鸡20羽作为保护期外组（Ⅰ组）;选择健康并有2次H5N1亚型Re-5株疫苗免疫史的110日龄肉鸡19羽作为保护期内组（Ⅱ组）。每羽胸肌注射二价苗0.5 mL。试验证实,重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（H5N1,Re-5株＋Re-4株）免疫注射后,未见临床异常反应,一次免疫注射后即可达到群体合格率70%以上。     

商品代AA肉鸡接种禽流感疫苗的免疫效力观察

分别应用不同禽流感疫苗接种不同批次的商品代AA肉鸡,通过血凝抑制试验测定免疫后不同时期的抗体水平,确定各种疫苗对商品代AA肉鸡的免疫效果。结果表明,在免疫20天后,禽流感（H5＋H9）二价灭活疫苗（H5N1 Re-1＋H9N2 Re-2株）刺激肉鸡群产生的HI抗体均高于禽流感灭活疫苗（H5亚型,N28株）、禽流感（H5N2＋H9N2）二价灭活疫苗（N28株＋SD696株）和禽流感-新城疫重组二联活疫苗（rL-H5株）,与后三种疫苗接种商品代AA肉鸡的免疫抗体相比差异显著（P〈0.05）。     

不同禽流感疫苗对蛋鸭免疫效果比对试验

2007-2008年,通过对重组禽流感病毒灭活疫苗(H5N1亚型,Re-1株)与禽流感(H5-H9)二价灭活疫苗(H5N1Re-1+H9N2Re-2株)免疫效果比对试验,结果显示:禽流感(H5-H9)二价灭活疫苗的H5亚型免疫效果优于重组禽流感病毒灭活疫苗(H5N1亚型,Re-1株)的效果,H9亚型达到免疫保护。     

乌昌地区三黄鸡免疫不同禽流感疫苗及不同免疫剂量的抗体水平测定和效力对比试验

用5种不同的禽流感疫苗以不同免疫剂量、不同免疫次数接种乌昌地区三黄鸡,定期检测禽流感免疫抗体,结果表明,重组禽流感病毒灭活疫苗(H5N1亚型,Re-1株)、Inactivated Vaccine of Avian Influenza(H5N2)和禽流感(H5+H9)二价灭活疫苗(H5N1Re-1+H9N2 Re-2株)等3种疫苗均能刺激机体产生良好的免疫抗体,而禽流感-新城疫重组二联活疫苗(rL-H5株)和禽流感重组鸡痘病毒载体活疫苗(H5亚型)的免疫抗体十分低下。经不同免疫次数的比较试验表明,重组禽流感病毒灭活疫苗(H5N1亚型,Re-1株)、Inactivated Vaccine of Avian Influenza(H5N2)和禽流感(H5+H9)二价灭活疫苗(H5N1Re-1+H9N2 Re-2株)二次免疫的H5抗体水平明显高于经一次免疫的抗体水平,且免疫持续期长。     

禽流感H_5和H_9混合疫苗免疫肉鸽的效果试验

将禽流感H5亚型二价灭活疫苗（H5N1,Re-4＋Re-5）和H9亚型（SS株）灭活疫苗等量均匀混合,采用不同剂量不同次数分别注射。用血凝和血凝抑制试验方法检测H5亚型（Re-4、Re-5）和H9亚型（SS株）抗体效价。试验表明：以较小剂量0.5ml/只,间隔21d二免能产生整齐、持久、高滴度保护抗体,据此提出鸽H5和H9亚型禽流感多价混合疫苗的参考免疫程序。     

禽流感灭活疫苗免疫效果评价试验

随机抽取6个厂家的重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗(Re-6株+Re-8株)和6个厂家的禽流感二价灭活疫苗(H5N1 Re-6株+H9N2 Re-2株)进行免疫效果评价试验。结果表明,二免后28 d,H5亚型二价灭活疫苗组的免疫抗体合格率在95.24%以上;二价灭活疫苗组H5和H9亚型抗体合格率在94.74%以上,免疫效果较好。     

重组鸡白细胞介素6对重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗(H5N1,Re-6株+Re-7株)免疫增强作用的观察

为评价重组鸡白细胞介素6(rChIL-6)在商品鸡体内对重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗(H5N1,Re-6株+Re-7株)免疫增强作用,将rChIL-6与重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗(H5N1,Re-6株+Re-7株)采用肌肉注射方式免疫57日龄麻鸡,分别在疫苗接种前和接种后第7、14、21、35、42天,检测H5N1亚型禽流感病毒(Re-6、Re-7)血凝抑制(HI)抗体水平。结果表明:与灭活疫苗同时注射rChIL-6组比单一注射疫苗组的H5N1 Re-6抗体滴度可提高1.6 log2,Re-7抗体滴度可提高1.8 log2。提示rChIL-6对重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗(H5N1,Re-6株+Re-7株)有显著的免疫增强作用。     

高致病性禽流感免疫及其正确操作

目前，农业部批准生产和使用的高致病性禽流感疫苗有五种，分别是：重组禽流感灭活疫苗（H5N1亚型．Re-1株）、禽流感重组鸡痘病毒载体活疫苗（凡亚型）、禽流感一新城疫重组二联活疫苗（Re-5株）、禽流感灭活疫苗（H5亚型，N28株）、禽流感H5（N28株）-H9二价灭活疫苗。     

政务

正农业部调整高致病性禽流感疫苗种毒2015年12月10日,农业部办公厅发布农办医(2015)51号公告,为提高疫苗与流行毒株的匹配性,更好地防控禽流感,农业部决定调整高致病性禽流感疫苗生产种毒。公告指出,调整后疫苗为重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗(Re-6株+Re-8株)和重组禽流感病毒H5亚型三价灭活疫苗(Re-6株+Re-7株+Re-8株),用于预防H5亚型禽流感病毒引起的禽流感。     

不同高致病性禽流感疫苗的免疫效果试验

应用重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型,Re-1株）,禽流感-新城疫重组二联活疫苗（rL-H5株）对三组肉鸡进行禽流感免疫效果观察,首免用重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型,Re-1株）,二免用禽流感-新城疫重组二联活疫苗（rL-H5株）。结果表明：接种重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型,Re-1株）的免疫效果比接种禽流感-新城疫重组二联活疫苗（rL-H5株）的效果好;首免用重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型,Re-1株）,二免用禽流感-新城疫重组二联活疫苗（rL-H5株）的效果比仅接种重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型,Re-1株）的效果好。     

重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型）对鸭和鹅的免疫效果观察

由H5N1亚型禽流感病毒（Avian influenza virus,AIV）引起的高致病性禽流感（highly pathogenic avian influenza, HPAI）是禽类的一种烈性传染病,疫苗免疫是禽流感防控中的重要环节。本试验采用重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1,Re-5株）和重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（H5N1、Re-5株+Re-4株）进行了鸭和鹅的免疫试验,对免疫鸭和鹅的抗体水平进行了动态监测。试验结果表明,两种疫苗对鸭和鹅均具有良好的免疫效果。基于试验结果提出了鸭和鹅禽流感免疫程序：2 w左右首免,4~5 w时二免,开产前三免,此后每隔4~5个月加强免疫一次。     

重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗田间免疫效果观察

为了解不同厂家重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗现地免疫效果及抗体消长规律,指导实践应用,特进行本试验。1材料和方法1.1疫苗哈药集团生物疫苗有限公司(A公司)重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗(H5N1,Re-5株+Re-4株),     

重组H5亚型禽流感病毒三价灭活疫苗免疫效果的评价

为了评价重组H5亚型禽流感病毒三价灭活疫苗的免疫效果,在2016年7月至2017年8月期间,对免疫重组H5亚型禽流感病毒三价灭活疫苗(H5N1,Re-6株+Re-7株+Re-8株)的家禽采集了1 999份血清样品,采用血凝与血凝抑制方法进行检测,结果为H5亚型禽流感病毒Re-6株免疫合格率为86.84%,H5亚型禽流感病毒Re-7株免疫合格率71.44%,H5亚型禽流感病毒Re-8株免疫合格率为67.78%。结果表明,免疫重组H5亚型禽流感病毒三价灭活疫苗后,不同毒株的抗体、不同种类的家禽、不同免疫次数的抗体水平均有差异。     

H5亚型高致病性禽流感病毒抗原性变异分析

为深入了解我国H5亚型高致病性禽流感病毒的抗原性变异情况及其规律,对我国2012—2015年分离的H5亚型高致病性禽流感病毒进行了HA基因的扩增、测序与遗传进化分析。结果发现这些流行毒株主要分布在第2.3.2.1分支、第2.3.4.4分支和第7.2分支。制备流行毒株的单因子阳性血清,与相应疫苗株进行交叉血凝抑制试验,计算抗原相关系数,并对各分支流行毒与相应疫苗之间的HA1主要抗原位点差异进行分析。结果表明,Re-4、Re-5、Re-6、Re-7、Re-8疫苗株之间的血凝抑制抗原相关系数在0.17~0.67之间,表明不同分支之间的抗原性有较大差异。随着时间的推移,分支内流行毒与疫苗之间的血凝抑制抗原相关性差异会越来越大,抗原性变异程度增加,这与HA1主要抗原位点差异分析的结果一致。因此,要取得理想的防控效果,必须及时更新疫苗,使用与流行毒匹配性更好的疫苗。这些数据为深入了解H5亚型高致病性禽流感病毒的抗原变异和对该病毒的防控提供了技术支持。     

H5N1亚型禽流感变异株灭活疫苗种毒Re-4株的生物学特性及免疫原性研究

本实验对经反向遗传方法构建的重组禽流感H5N1亚型变异株灭活疫苗种毒Re-4株的生物学特性及免疫效力进行研究.将Re-4株接种SPF鸡胚后37℃培养72 h,鸡胚存活,无病变,HA滴度达29;以0.1 mL(106.0EID50/0.1 mE)的剂量鼻腔感染4周龄SPF鸡7 d后血清HI抗体转阳,无任何症状,也不排毒;SPF鸡静脉致病指数(IVPI)为0;以Re-4重组株为种毒制备灭活疫苗,免疫SPF鸡后,3周后平均HI抗体效价达8.75 log2:免疫鸡对亲本强毒株CKSX/06,以及变异株CKNX/06和流行株GSGD/96攻击提供完全保护.以上结果表明变异株灭活疫苗种毒Re-4株对SPF鸡胚和SPF鸡无致病性、适合鸡胚增殖、抗原针对性强,并且以该毒株制备的灭活疫苗具有良好的免疫效力,是研制预防H5N1亚型禽流感病毒山西变异株的理想疫苗种毒株.     

使用禽流感疫苗应注意的几个问题

目前,用于禽流感强制免疫的疫苗主要有三种：禽流感-新城疫重组二联活疫苗（rl—H5）、重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（H5N1,Re-5＋Re-4株）、禽流感H5—H9二价灭活疫苗。不论是活疫苗还是灭活苗,影响禽流感免疫效果的因素很多,实践中应对疫苗种类的选择、防疫程序的制订、接种途径、操作方法给予充分的重视,才能尽量减少免疫失败或不良反应。