德式乳杆菌D-乳酸脱氢酶基因的克隆与表达

利用PCR的方法从德式乳杆菌的DNA中扩增得到D-乳酸脱氢酶基因,构建重组克隆质粒(pMD19-T-DLDH),转化DH5α进行蓝白斑筛选,得到阳性克隆提取质粒双酶切验证。连接pET-32a表达质粒,构建重组表达质粒,提取质粒双酶切、测序验证,测序结果与原序列基本相符。得到重组表达质粒pET-32-DLDH转化BL21大肠杆菌IPTG诱导表达,SDS-PAGE显示有明显大小约为19Ku特异蛋白条带。     

木聚糖酶XynB的纯化与酶学性质

木聚糖酶作为一类重要的木糖苷键水解酶对水解半纤维素有着重要的作用。本研究利用大肠杆菌BL21将木聚糖酶XynB的进行高效表达，重组酶蛋白经诱导表达和破胞后纯化，达到电泳纯化，其大小与预测理论值相符。     

高产海藻糖突变菌株YUV3海藻糖合酶基因克隆及原核表达

海藻糖合酶(Trehalose synthase,TreS)属于α-淀粉酶家族(α-amylase family),是生物体内通过TreS途径生成海藻糖的一种酶类。利用PCR技术,从本试验室筛出的高产海藻糖突变菌株YUV3中扩增了海藻糖合酶基因(TresY),将其克隆到原核表达载体pET-28a(+),得到重组质粒P-TresY,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,重组蛋白经SDS-PAGE分析,得到一条分子量约为110kDa的特异条带,并经Western blotting分析鉴定,表明成功构建重组质粒P-TresY并在大肠杆菌中表达,为进一步的研究奠定基础。     

化学生物学综合创新实验——基于pMAL蛋白融合表达系统的蛋白纯化

化学生物学是当代出现的一门新兴交叉学科,其专业实验课程的建设成为很多高等院校教学改革中的重要课题。本文介绍了一个基于麦芽糖结合蛋白的蛋白质纯化的系统,使用E.coli克隆载体pMAL-p5X,适用于表达及纯化重组蛋白质。可得到无亲和标签的目的蛋白,减低其对蛋白质的影响,优于以往的蛋白质亲和层析方法。此实验可作为化学生物学专业本科或研究生综合性创新实验内容。     

不同超声条件重组油体乳液制备及其稳定性研究

为构建稳定的重组油体乳液,研究了不同超声功率（200、400W）和不同超声时间（6、12、24min）对制备重组油体乳液稳定性的影响。为揭示不同超声条件与重组油体乳液稳定性的关系,采用动态激光散射、激光共聚焦显微镜和圆二色谱,研究了不同超声条件制备的重组油体乳液流体动力学半径、微观结构和Oleosin蛋白的二级结构变化。结果表明,利用超声处理制备的重组油体乳液乳化性、储藏稳定性和界面吸附能力远高于未经超声处理的乳液,并且随着超声时间的延长,乳液粒径逐渐变小,乳滴形状规则、分布均匀,乳液表面负电荷增加;当超声条件为200W、24min时,制备的重组油体乳液最为稳定,其乳化活性指数和乳化稳定性指数分别高达652.2m2/g和605.2min;不同超声处理改变了Oleosin蛋白的二级结构,影响其与磷脂酰胆碱的结合能力,进而改变乳液在油-水界面吸附特性,证明适宜强度的超声处理有利于重组油体乳液的形成。     

肿瘤坏死相关凋亡诱导配体对前列腺癌及膀胱癌细胞增殖、凋亡的作用

目的:研究重组并纯化的肿瘤坏死因子凋亡诱导配体(TRAIL)蛋白对前列腺癌及膀胱癌细胞增殖及凋亡的影响。方法:将不同浓度的TRAIL蛋白与培养的前列腺癌细胞(PC-3细胞)和膀胱癌细胞(5637细胞)共孵育24 h后,采用细胞增殖实验及流式细胞术检测肿瘤细胞的增殖及凋亡。结果:PC-3细胞株中,与未处理组比较,TRAIL蛋白浓度在20、40、80、160 ng·ml-1时细胞增殖率均有显著性差异;而在5637细胞株中,与未处理组比较,TRAIL蛋白浓度在5、10、20、40 ng·ml-1时细胞增殖率均有显著性差异。流式细胞实验结果也证实,随TRAIL蛋白浓度的增高,两种肿瘤细胞凋亡率增加。结论:重组并纯化TRAIL蛋白可通过抑制前列腺癌及膀胱癌细胞的增殖,诱导其凋亡而产生抗肿瘤的作用。     

牦牛肉成熟前后差异蛋白质组学分析

宰后成熟是改善肉类品质的重要方法。通过测定p H值确定牦牛肉成熟终点,研究新鲜牦牛肉与宰后成熟牦牛肉的差异蛋白质组学,为改善牦牛肉品质提供理论依据。选取青海大通牦牛,取背最长肌采用超速离心、双向凝胶电泳(2-DE)分离蛋白,应用PDQuest 8.0软件分析寻找差异蛋白质斑点,并经高效液相色谱串联离子阱质谱鉴定。结果表明:从背最长肌蛋白质组2-DE图谱中筛选出54个差异表达的蛋白质斑点,质谱鉴定出18个差异表达的蛋白质,其中14个蛋白质在成熟肉中表达量下降,1个只在新鲜肉中表达,3个只在成熟肉中表达,筛选出的差异表达蛋白质包括代谢酶、结构蛋白以及应激蛋白,说明青海大通牦牛肉成熟过程中代谢酶、结构蛋白及应激蛋白发挥了重要作用。实验结果对进一步阐明牦牛肉的成熟机制具有重要参考意义。     

pGAP-毕赤酵母表达系统的研究进展

三磷酸甘油醛脱氢酶(GAP)启动子具有很强的组成型表达能力,在近年来广泛应用于巴斯德毕赤酵母表达外源蛋白。文中通过对pAOX1、pFLD1、pGAP3种表达载体的比较,阐述了pGAP表达系统在生产外源蛋白中的优点及国内外现阶段的相关应用。     

大豆KTi基因和BBi基因双价RNAi表达载体的构建

以KTi基因的ihpRNA种子特异性表达载体p7αP-GUS-KTiS为模板,采用PCR技术克隆含有KTi基因的完整ihpRNA构件,并将其克隆到pMD18-T载体,对重组子进行PCR检测和限制性内切酶分析,并进行序列比对;然后以BBi基因ihpRNA种子特异性表达载体p7αP-GFP-BBiS为基础,利用限制性内切酶BstⅪ单酶切,将KTi基因的完整ihpRNA构件连入其中。最后利用冻融法转化根癌农杆菌,并进行PCR鉴定。结果表明:PCR扩增得到含有KTi基因的完整ihpRNA构件,构建成重组克隆载体pMD18-T-KRNAi,并构建成双价ihpRNA种子特异性表达载体pKTi-BBi-RNAi,并转化得到含有pKTi-BBi-RNAi的农杆菌EHA105。成功构建同时具有大豆胰蛋白酶抑制剂KTi基因和BBi基因的双价RNAi种子特异性表达载体,KTi基因和BBi基因的ihpRNA表达框架成功转入农杆菌中。     

杨树皮部贮藏蛋白的季节性变化研究

氮的再吸收和储藏可减少春季林木从土壤中吸收的氮量。论述杨树皮部储藏蛋白季节性变化以及皮部储藏蛋白的累积、分配、诱导和表达,并对研究进行展望,以期为木本植物的相关研究提供参考。     

日粮蛋白水平对生长獭兔生产性能的影响

由于配制饲料的不尽合理,加上选育的相对滞后,使獭兔生产性能不能最大程度发挥。为此,我们在加紧獭兔选种选育的同时,进行了长期獭兔日粮适宜营养水平的研究。     

CAD线图数据处理的GM(1,N)模型与方法

运用灰色系统理论，通过优化模型系数与背景取值建立了灰色多因素灰色动态GM（1，N）模型。该模型克服了现有GM（1，N）模型的不足，扩宽了GM（1，N）模型的应用范围。运用该模型的GM（1，2）、GM（1，3）线图处理实例表明该方法简单实用，值得在计算机辅助设计中推广应用。     

灰色预测模型粮食产量预测比较研究

鉴于粮食生产系统的复杂性和信息不完全性,在对粮食生产系统灰色关联分析的基础上,确定出影响粮食产量的主要因子,然后建立灰色GM(1,N)预测模型;应用同一原始数据和GM(1,1)预测模型进行了比较,证明GM(1,N)预测模型具有较高的预测精度,较好地拟合了粮食产量的发展趋势。     

预测水泥砒砂岩强度的Markov灰色残差模型

为了研究Markov-灰色残差GM(1,1)模型预测水泥固化砒砂岩抗压强度的精准度和适用性,先对抗压强度数据进行了一系列的处理,建立灰色GM(1,1)模型和灰色残差GM(1,1)模型,然后基于马尔克夫过程构建Markov-灰色残差GM(1,1)模型,并以此模型来估算水泥固化砒砂岩的抗压强度.结果表明,灰色残差GM(1,1)模型的检验精度得到了很大的提升且各项检验指标基本上都达到了1级,明显优于灰色GM(1,1)模型.马尔克夫过程便于确定残差修正值的正、负号,采用Markov-灰色残差GM(1,1)模型对不同水泥掺量下90 d龄期的水泥固化砒砂岩的抗压强度进行了预测,相对误差由原来的1.77%~4.01%降低至0.60%~2.36%,平均相对误差由2.63%减小至1.25%,模型的预测精度明显提高.该研究可以为水泥固化砒砂岩以及其他水泥基工程材料抗压强度的预测提供一种简易而可靠的新方法.     

应用灰色新陈代谢GM(1,1)模型预

研究了灰色系统理论在中长期城市需水量预测中的应用。由于常规GM(1,1)模型被用于预测时，精度较高的仅仅是最近的几个数据，越往未来发展，该模型的预测意义就越弱。针对常规GM(1,1)模型存在的不足，建立了灰色新陈代谢GM(1,1)需水量预测模型。并利用此模型对北方某缺水城市未来10年的需水量进行了预测。结果表明：模型精度较高，预测误差较小。对于中长期城市需水量预测这样复杂的问题, 灰色新陈代谢预测模型具有预测精度高、简捷实用等优点，该方法可作为中长期城市需水量预测预测的工具之一。     

苹果渣的开发利用途径

果渣是果汁生产的副产品，目前尚未得到充分利用。为此，通过对果渣的成分进行分析，提出了以苹果渣为原料生产饲料、饲料蛋白、苹果粉以及提取果胶、柠檬酸、果醋和天然香料等开发利用途径。     

南方地区冬小麦白粉病预测模型的研究

由于南方地区冬小麦白粉病的预测是一项多因素的复杂工程,因而针对传统预测方法的不足,提出了一种基于灰色系统GM(1,1)理论和BP神经网络相结合的预测模型。灰色系统GM(1,1)模型理论建模方法简单,计算量小,而BP算法特别适合于对GM(1,1)模型进行残差修正,利用两者的结合可以建立较高精度的预测模型。利用该模型对南方某地区冬小麦白粉病进行了预测,结果表明,该模型准确有效,适用于该地区的冬小麦白粉病的预测。     

基于新陈代谢GM（1,1）-Markov链模型的有效灌溉面积预测

采用新陈代谢GM（1,1）模型对全国有效灌溉面积的动态变化进行初次拟合和预测,并根据有效灌溉面积时间序列波动的随机性,利用Markov链模型对新陈代谢GM（1,1）模型的残差进行修正,以概率形式确定出未来全国有效灌溉面积的动态变化区间,并依此模型预测未来10年全国有效灌溉面积的发展趋势。结果表明,该模型预测结果准确可靠...     

基于灰色GM(1,1)的农业机械化水平预测模型

根据1986～2005年我国农业机械化综合水平统计数据,并对由于我国耕地面积统计滞后使得在机耕水平计算中存在误差进行了合理分析和修正,结合数据平滑处理,建立了基于灰色GM(1,1)的我国农业机械化综合水平预测模型.通过残差检验和后验差检验方法对预测结果进行了检验,模型拟合精度较好.采用模型对2006年我国农业机械化综合水平值进行预测,结果表现出较高的预测精度,进一步验证了所建模型的可行性.运用该模型对我国2007～2020年间农业机械化综合水平进行预测,结果表明到2020年我国综合机械化水平将达到68%左右.通过定性分析及与其他预测结果比较,模型表现出较好的预测能力.     

新陈代谢GM(1,1)模型在兵团农机总动力预测中的应用

借助灰色系统理论,利用兵团农机总动力的历史数据,建立并对比分析了GM(1,1)模型和新陈代谢GM(1,1),对兵团农业机械总动力进行预测,为以后兵团农业机械化的发展提供一定的参考。