无乳链球菌对体外培养的奶牛乳腺成纤维细胞瘦素及其受体表达的影响

为研究无乳链球菌对奶牛乳腺成纤维细胞(BMFB)瘦素(Leptin)及其长型受体(OB-Rb)表达的影响,本研究将不同浓度热灭活的无乳链球菌(0、10~5 cfu/mL、10~6 cfu/mL和10~8 cfu/mL)作用于BMFB,分别于不同作用时间采用荧光定量PCR(qPCR)方法检测Leptin及OB-Rb mRNA转录水平,western blot方法检测Leptin及OB-Rb蛋白的表达。各组总体变化规律结果显示,无乳链球菌作用BMFB后,除6 h、12 h 10~6 cfu/m L和10~8 cfu/mL作用浓度外,其余作用时间实验组Leptin mRNA的转录水平及蛋白表达量与对照组相比显著升高(p0.05);各作用时间实验组OB-Rb mRNA的转录水平及蛋白表达量与对照组相比极显著升高(p0.01)。上述研究结果表明,热灭活的无乳链球菌能够促进BMFB的Leptin及OB-Rb mRNA的转录水平和蛋白的表达,为奶牛乳腺纤维化的防治提供依据。     

金黄色葡萄球菌对体外培养的奶牛乳腺成纤维细胞PDGF-BB及其受体PDGFRβ表达的影响

为研究不同浓度的金黄色葡萄球菌对奶牛乳腺成纤维细胞(BMFB)血小板源性细胞生长因子(PDGF-BB)及其受体PDGFRβ表达的影响,采用不同浓度的热灭活金黄色葡萄球菌(0、105、106和108 CFU/mL)作用于BMFB细胞,分别于不同的时间点(6、12、24和48h)采用RT-PCR法检测PDGF-BB及PDGFRβmRNA表达,Western-blot法检测PDGF-BB及PDGFRβ蛋白的表达。结果显示,金黄色葡萄球菌作用于BMFB后,PDGF-BB mRNA表达量的升高呈明显的时效关系和量效关系(P0.05);PDGF-BB蛋白表达升高呈明显的时效关系(P0.05)。PDGFRβmRNA的表达量较对照组升高,呈正量效关系和正时效关系,在12h达到峰值后下降,同时mRNA表达量呈负量效关系(P0.05);PDGFRβ蛋白表达量呈正时效关系(P0.05)。本研究证实了金黄色葡萄球菌可以上调BMFB PDGF-BB及PDGFRβmRNA和蛋白的表达。     

病原体相关分子模式(PAMP)诱导对奶牛乳腺成纤维细胞TLR4、NOD2、IL-6、IL-8和TNF-α mRNA表达的影响

通过观察病原体相关分子模式(pathogen associated molecular pattern,PAMP)诱导对奶牛乳腺成纤维细胞(bovine mammary fibroblast,BMFB)TLR4、NOD2、IL-6、IL-8和TNF-αmRNA表达的影响,揭示BMFB的免疫应答功能。本试验以BMFB为研究对象,分别用100 mg/L lipid A和10 mg/L胞壁酰二肽(MDP)诱导24 h,采用半定量RT-PCR检测细胞中TLR4、NOD2、IL-6、IL-8和TNF-αmRNA表达的情况。结果显示,BMFB可表达TLR4、NOD2、IL-6、IL-8和TNF-αmRNA;与对照组相比,lipid A组TLR4、IL-6、IL-8和TNF-αmRNA的表达水平显著上调(P0.05);胞壁酰二肽(MDP)组NOD2、IL-6、IL-8和TNF-αmRNA的表达水平显著上调(P0.05)。结果表明,BMFB可能通过表达TLR4和NOD2识别PAMP,进而上调炎症细胞因子的表达。     

围生期奶牛能量负平衡与免疫抑制的关系

为了探讨围生期奶牛能量负平衡与免疫抑制的关系,试验随机选取2个集约化牛场围生期奶牛各60头,以能量负平衡为判定标准,β-羟丁酸(BHBA) 1. 2 mmol/L、游离脂肪酸(NEFA)0. 4 mmol/L、葡萄糖(GLU)0. 3 mmol/L为发病组,BHBA 1. 2 mmol/L、NEFA 0. 4 mmol/L、GLU0. 3 mmol/L为对照组,对试验牛能量代谢指标、矿物质代谢指标、免疫功能指标进行组间独立样本t检验和Spearman相关性分析,并利用二元Logistic回归分析预测疾病,最后利用受试者工作特征曲线(ROC)分析确立分界值和诊断效果。结果表明:发病组奶牛血液中Ca、Mg、白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)的水平和对照组奶牛相比差异极显著(P0. 01),发病组奶牛血液中C反应蛋白(CRP)、结合珠蛋白(HP)、肿瘤坏死因子(TNF-α)的水平和对照组奶牛相比差异显著(P0. 05),并且发病组奶牛血液中的Ca、Mg水平低于对照组,IL-1、IL-2、IL-6、HP、CRP、TNF-α的水平高于对照组; IL-1、IL-2、IL-6、HP、TNF-α水平与BHBA浓度呈显著或极显著正相关(P0. 05或P0. 01),Ca水平与GLU浓度呈极显著正相关(P0. 01),IL-2、HP水平与GLU浓度呈显著负相关(P0. 05),Ca、P、Mg水平与NEFA浓度呈显著或极显著负相关(P0. 05或P0. 01),IL-2、HP、TNF-α水平与NEFA浓度呈显著正相关(P 0. 05);经二元Logistic回归分析确定Ca、IL-1、IL-2、IL-6、HP、TNF-α水平6项指标与围生期泌乳奶牛免疫抑制相关;经ROC分析确立了HP、TNF-α2项免疫抑制指标的预警值为HP 29. 49 ng/L、TNF-α219. 90 ng/L。     

鼠李糖乳杆菌GR-1缓解大肠杆菌诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞炎性反应

为明确鼠李糖乳杆菌GR-1(L.rhamnosus GR-1)在大肠杆菌感染原代奶牛子宫内膜上皮细胞(BEECs)过程中调节炎性反应的机制，本试验将BEECs分为4个组，分别是对照组(加入5 mL培养基)、E.coli攻菌组(加入5 mL浓度为1×10⁵ CFU/mL大肠杆菌)、L.rhamnosus GR-1单独处理组(提前3 h加入5 mL浓度为1×10⁷ CFU/mL L.rhamnosus GR-1)和L.rhamnosus GR-1保护组(加入5 mL浓度为1×10⁷ CFU/mL L.rhamnosus GR-1孵育3 h后去掉上清液，再加入5 mL浓度为1×10⁵ CFU/mL大肠杆菌);采用光学显微镜观察E.coli对BEECs形态的损害情况，实时荧光定量PCR检测相关基因的转录水平，Western blot检测TLR2和NF-κB2的蛋白表达。结果显示，E.coli攻菌6 h后，与E.coli攻菌组相比，L.rhamnosus GR-1保护组BEECs形态保持完整，且TLR2、TL...     

热灭活无乳链球菌对奶牛乳腺成纤维细胞TGF-β_1及其受体表达的影响

研究无乳链球菌(GBS)对奶牛乳腺成纤维细胞(BMFB)转化生长因子β_1(TGF-β_1)及其受体TβRⅠ表达的影响。6代和7代BMFB,在6、12、24、48h时间点,分别用无血清培养液和10~5、10~6、10~8CFU/mL的不同浓度的热灭活GBS作用于BMFB细胞。RT-qPCR法检测TGF-β_1及TβRⅠmRNA的表达,Western blot法检测TGF-β_1和TβRⅠ蛋白的表达。与对照组相比,TGF-β_1mRNA的表达量明显升高,于24h达到最大值(P0.05);TGF-β_1蛋白的表达于12h达到最大值,24h蛋白表达量开始明显降低(P0.05)。TβRⅠmRNA的表达量较对照组的升高,在48h达到峰值(P0.05);TβRⅠ蛋白表达量在12h低于6h,24h达到峰值,之后又下降(P0.05)。说明热灭活无乳链球菌对BMFB TGF-β_1及TβRⅠmRNA和蛋白的表达有促进作用。     

体外法研究pH与脂多糖或组胺的交互作用对奶山羊瘤胃上皮细胞紧密连接蛋白mRNA表达量的影响

本试验旨在采用体外法研究p H与脂多糖(LPS)或组胺(HIS)的交互作用对奶山羊瘤胃上皮细胞紧密连接蛋白mRNA表达量的影响。选用8只体况良好,体重、泌乳量相近的萨能奶山羊作为瘤胃上皮供体。采用3×3双因素试验设计,山羊屠宰后采集瘤胃上皮,插入到尤斯灌流仪器(Ussing chamber)半室中央,在浆膜侧半室加入5 m L缓冲液,黏膜侧加入配制好的不同处理的培养液5 m L,每个处理3个重复。试验1:因素1为p H,分别为7.4、5.5、5.2;因素2为LPS浓度,分别为0、30、60 k EU/m L。试验2:因素1为p H,分别为7.4、5.5、5.2;因素2为HIS浓度,分别为0、0.5、10.0 ng/m L。采集培养80 min后的瘤胃上皮,测定其紧密连接蛋白Claudin-1、Claudin-4、Claudin-7、Occludin、zonula occludens-1(ZO-1)mRNA表达量。结果显示:1)p H与LPS的交互作用对Claudin-1、Claudin-7、ZO-1 mRNA表达量影响显著(P0.05)。与p H 7.4×0 k EU/m L LPS组相比,降低p H或添加LPS均显著降低了Claudin-1、Claudin-7 mRNA表达量(P0.05),ZO-1 mRNA表达量有整体降低的趋势,在p H 5.2×60 k EU/m L LPS组最高。2)p H与HIS的交互作用对Claudin-1、Claudin-7、ZO-1 mRNA表达量影响显著(P0.05)。p H 5.5×0.5 ng/m L HIS组Claudin-1 mRNA表达量最低,但与p H 5.2×0.5 ng/m L HIS组差异不显著(P0.05)。p H 7.4×10.0 ng/m L HIS组Claudin-7 mRNA表达量显著低于p H 7.4×0 ng/m L HIS组(P0.05),但与p H 5.5×10.0 ng/m L HIS组差异不显著(P0.05)。与p H 7.4×0 ng/m L HIS组相比,降低p H或添加LPS有提高ZO-1 mRNA表达量的趋势,且p H 5.2×10.0 ng/m L HIS组显著提高(P0.05)。结果提示,亚急性瘤胃酸中毒(SARA)发生后,p H与LPS或HIS交互作用于瘤胃上皮,降低瘤胃上皮紧密连接蛋白mRNA表达量,进而增大瘤胃上皮黏膜通透性。     

非酯化脂肪酸对体外培养犊牛原代肝细胞中炎性因子表达及其活性的影响

在建立犊牛原代肝细胞体外培养模型的基础上，通过培养液中添加不同浓度的非酯化脂肪酸（Nonesterifiedfatty acids，NEFAs），运用实时荧光定量PCR和ELISA方法，测定NEFAs对肝细胞中炎性因子TNFα、IL-6和IL-1β的mRNA表达及其活性的影响。结果显示，NEFAs作用肝细胞9h后，与对照组相比，高浓度NEFAs（1．8mmol／L）组肝细胞中TNFα、IL-1β的mRNA表达水平显著增加（P〈0．05），IL-6的mRNA表达水平在2．4retool／L时极显著增加（P〈0．01），低浓度NEFAs（0．6、1．2mmol／L）组肝细胞中TNFα、IL-1β和IL-6的mRNA表达水平无显著差异（P〉0．05）；并且TNFα、IL-1G的活性在NEFAs浓度达到1．8、2．4mmol／L显著高于对照组（P〈0．01），且呈剂量依赖性作用，IL-6的活性在在NEFAs浓度达到1．8mmol／L显著高于对照组（P〈0．01），在2．4mmol／L也高于对照组，但差异不显著。结果表明，高浓度NEFAs在-定程度上能引起或加剧奶牛肝细胞炎性反应，可能是导致产后奶牛肝功能炎性损伤主要因素。     

大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌对奶牛睾丸间质细胞炎症反应和睾酮分泌的影响

探讨不同数量大肠埃希菌(E.coli)和金黄色葡萄球菌(S.aureus)对奶牛睾丸间质细胞(LCs)炎性因子、类固醇合成快速调节蛋白(StAR)以及睾酮(T)分泌的影响。通过体外培养LCs,选取生长状态良好的第3代LCs进行试验。根据E.coli和S.aureus作用数量,试验各分为6组,即用不同数量的E.coli(0、10~4、10~5、10~6、10~7、10~8 CFU/mL)和不同数量的S.aureus(0、10~4、10~5、10~6、10~7、10~8 CFU/mL)感染LCs。通过实时荧光定量PCR检测相关炎性因子和StAR mRNA表达的变化;用牛睾酮(T)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒检测睾酮分泌水平的变化。结果表明,E.coli数量为10~8 CFU/mL和S.aureus数量为10~7 CFU/mL时,IL-6和IL-1βmRNA的表达量最高,与其他组相比较增加极显著(P<0.01);E.coli数量为10~4、10~5、10~6、10~7、10~8 CFU/mL时感染LCs后,StAR mRNA表达量显著低于对照组(P<0.05);S.aureus浓度为10~6、10~7和10~8 CFU/mL时,StAR mRNA的表达量显著低于对照组(P<0.05);分别用E.coli和S.aureus感染LCs 12 h,睾酮分泌量与对照组相比无显著变化(P>0.05)。结果表明,LCs被E.coli和S.aureus感染12 h,能引起LCs的炎症反应,同时抑制StAR mRNA的表达,但对睾酮的分泌无显著影响。     

添加不同种类二糖对奶牛体外瘤胃发酵与微生物蛋白合成的影响

本试验旨在研究不同种类二糖对苜蓿瘤胃发酵与微生物蛋白合成的影响。试验选用3头健康的,装有永久性瘤胃瘘管的中国荷斯坦奶牛作为瘤胃液供体动物(600 kg左右),利用体外批次培养方法,以苜蓿和玉米为饲料源做体外发酵基质,然后添加蔗糖、乳糖以及异麦芽糖(添加水平分别为0%、0. 5%、1. 5%、3. 0%)。结果表明:随着三种二糖添加水平的提高,瘤胃体外潜在产气量显著增加(P0. 05)、慢速降解部分极显著增加(P0. 01);瘤胃总挥发性脂肪酸浓度、乙酸/丙酸值极显著增加(P0. 01)、氨态氮浓度极显著降低(P0. 01);乳酸有降低的趋势;瘤胃微生物蛋白极显著增加(P0. 01),微生物蛋白合成效率极显著提高(P0. 01)。二糖种类与添加水平对潜在产气量、慢速降解部分、总挥发酸浓度、氨态氮浓度存在显著互作影响(P0. 05),对瘤胃微生物蛋白合成、乳酸浓度不存在显著互作影响(P0. 05)。综上,添加乳糖对瘤胃发酵功能的微生物蛋白质合成影响最显著。     

IGF-Ⅰ对奶牛乳腺上皮细胞乳脂和乳蛋白表达的影响

为了研究外源添加不同浓度的胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)对奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)乳脂和乳蛋白含量的影响,试验选取生长状态良好的第三代乳腺上皮细胞进行培养,试验组添加浓度分别为25,50,75μg/m L的IGF-Ⅰ,对照组仅添加与试验组等体积的完全培养基,用高效液相色谱法检测乳用三酰甘油的表达量,用Western-blot法测定培养12,24,48,72小时时的细胞乳蛋白中α-酪蛋白和κ-酪蛋白的表达量。结果表明:添加25μg/m L IGF-Ⅰ的试验Ⅰ组,细胞乳脂表达极显著高于对照组及其他试验组(P0. 01);试验组乳蛋白的表达均显著或极显著高于对照组(P0. 05或P0. 01)。说明IGF-Ⅰ对BMECs乳脂和乳蛋白的表达具有一定促进作用。     

苜蓿黄酮对奶牛乳腺上皮细胞乳蛋白、乳脂和乳糖合成的影响

本试验旨在研究苜蓿黄酮对体外培养奶牛乳腺上皮细胞乳蛋白、乳脂和乳糖合成相关基因表达的影响。将乳腺上皮细胞分成5组,每组培养基中分别含有0、25、50、75、100μg/m L苜蓿黄酮,细胞在37℃,5%CO2培养箱中培养72 h,然后检测相关基因的表达。结果表明:添加苜蓿黄酮具有降低乳腺上皮细胞的m TOR相对表达量的趋势(P=0.09),25μg/m L组的S6K1和e IF4E相对表达量显著低于50μg/m L组(P0.05),而对氨基酸转运蛋白无影响;苜蓿黄酮具有降低FATP1相对表达量的趋势(P=0.06),50μg/m L组PPAR-γ、SCD1和FASN相对表达量最高均显著高于0μg/m L(P0.05)组;50μg/m L组的Glut1和Glut4相对表达量显著高于25μg/m L组(P0.05),0μg/m L组的Glut8相对表达量显著低于50~100μg/m L组(P0.05),而β-1,4-Gal T相对表达量显著高于其他各组(P0.05),25μg/m L组的HK2相对表达量显著低于0μg/m L组(P0.05)。结果提示,苜蓿黄酮能够调节乳蛋白、乳脂和乳糖的合成。     

亮氨酸水平对奶牛乳腺上皮细胞增殖及κ-酪蛋白合成相关基因表达的影响

本试验旨在研究添加不同水平亮氨酸对乳腺上皮细胞体外增殖及κ-酪蛋白(CSN3)合成相关基因表达的影响。选用中国荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞进行体外培养,以不含有亮氨酸的培养基为对照组(0×组),试验组培养基分别添加0.112 5(0.25×组)、0.225 0(0.5×组)、0.450 0(1×组)、0.900 0(2×组)、1.800 0(4×组)、3.600 0(8×组)、7.200 0(16×组)、14.400 0 mmol/L(32×组)的亮氨酸。试验采用噻唑蓝(MTT)比色法检测奶牛乳腺上皮细胞增殖;运用实时定量PCR检测CSN3合成相关基因相对表达量。结果表明:亮氨酸能够提高乳腺上皮细胞的相对增殖率。24和48 h时,除0.25×组外,其余各组与对照组相比细胞均差异均显著(P0.05);72 h时,各组与对照组相比差异均显著(P0.05);其中2×组的促增殖作用都达到最强。亮氨酸能够促进哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)、核糖体蛋白S6激酶1(S6K1)、蛋白质酪氨酸激酶2(JAK2)、转录激活因子5(STAT5)和CSN3基因的表达,抑制真核细胞翻译启动因子4E结合蛋白1(4EBP1)基因的表达,其中2×组对m TOR、S6K1、JAK2、STAT5和CSN3基因的上调表达最强,而对4EBP1基因的下调表达最强。总之,添加亮氨酸能够促进奶牛乳腺上皮细胞增殖和CSN3合成相关基因(除4EBP1)表达,亮氨酸水平为0.900 0 mmol/L时,其促进作用均达到最大。     

脂多糖对体外培养山羊瘤胃上皮细胞的影响

为了鉴定脂多糖(LPS)对体外培养的山羊瘤胃上皮细胞炎性因子表达及浓度的影响,试验采用体外培养细胞法培养山羊瘤胃上皮细胞,添加不同浓度的LPS(1,5,10,50,100 mg/L)刺激山羊瘤胃上皮细胞,用MTT法筛选最佳刺激浓度,收集细胞;经qRT-PCR法分析核因子κb(p65)[NF-κb(p65)]、肿瘤坏死因子α(TNFα)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)基因mRNA相对表达量。结果表明:50 mg/L组细胞抑制率(IR)接近10%,初步确定LPS抑制细胞生长最佳浓度为50 mg/L; 50 mg/L组NF-κb(p65)的mRNA相对表达量极显著高于其他浓度组(P0. 01); 10 mg/L组TNFα的mRNA相对表达量极显著高于1,5,100 mg/L组(P0. 01),50 mg/L组次之; 10 mg/L组IL-1β的mRNA相对表达量极显著高于其他浓度组(P 0. 01),50 mg/L次之; 50 mg/L组IL-6的mRNA相对表达量最高,极显著高于1 mg/L组和100 mg/L组(P0. 01),与5,10 mg/L组相比差异不显著(P0. 05)。说明LPS体外诱导山羊瘤胃上皮细胞炎性反应的最佳浓度为50 mg/L。     

放养对松辽黑猪生长性能、血清生化指标及肉质营养成分的影响

为了研究放养对松辽黑猪生长性能、血清生化指标及肉质营养成分的影响,试验采用单因子随机分组设计,选择体重(99. 0±3. 0) kg去势松辽黑猪公猪30头,随机分为圈养组和放养组,每组5个重复,每个重复3头猪。圈养组在5个6 m2(2 m×3 m)的水泥地面饲养,放养组在5个2 500 m2(50 m×50 m)树林中放养,均饲喂同一种日粮,自由采食,试验期为75 d。结果表明:与圈养组比较,放养组平均日增重显著提高(P0. 05),料重比极显著降低(P0. 01),血清中总胆固醇(CHOL)、三酰甘油(TG)含量显著降低(P0. 05),血糖(GLU)含量极显著降低(P0. 01);背最长肌中粗脂肪含量显著提高(P0. 05);非必需氨基酸(NEAA)和风味氨基酸(FAA)含量极显著提高(P0. 01),必需氨基酸(EAA)和支链氨基酸中的缬氨酸含量呈下降趋势,但差异不显著(P0. 05),油酸和总脂肪酸含量显著提高(P0. 05)。说明放养能够改善松辽黑猪生长性能和血清生化指标,促进猪只快速生长并通过提高风味氨基酸和不饱和脂肪酸含量提高猪肉营养成分,改善猪肉风味。     

21日龄仔猪断奶过程不同肠段细胞外基质重要蛋白表达规律的研究

本试验旨在研究21日龄仔猪断奶过程不同肠段细胞外基质(ECM)重要蛋白的表达规律。选用24头21日龄的断奶仔猪随机分配到6个栏中,分别于断奶后0、7、14和28 d每栏随机选择1头仔猪进行麻醉后处死,采集十二指肠、空肠和回肠样品,测定ECM相关基因和蛋白的表达量。结果表明：1)与0 d相比,7、14和28 d十二指肠Ⅰ型胶原蛋白α2链(COL1A2)、Ⅲ型胶原蛋白α1链(COL3A1)、Ⅳ型胶原蛋白α2链(COL4A2)、Ⅴ型胶原蛋白α1链(COL5A1)、Ⅵ型胶原蛋白α1链(COL6A1)、纤维黏连蛋白1 (FN1)、肌腱蛋白C (TNC)和整合素α1(ITGA1)的mRNA相对表达量显著降低(P<0.05),且14 d十二指肠COL1A2和FN1的mRNA相对表达量显著低于28 d(P<0.05),14 d十二指肠COL3A1的mRNA相对表达量显著低于7和28 d(P<0.05),7 d十二指肠整合素β2(ITGB2)的mRNA相对表达量显著低于14和28 d(P<0.05)。2)与0 d相比,7、14和28 d空肠COL1A2、COL3A1、COL4A2...     

不同杂交组合商品猪的肉质研究

本研究选用二元长大（L×Y）、三元杜长大（D×LY）、四元皮杜长大（PD×LY）3个杂交组合猪群为实验动物,分别就各自肉质特性进行了测定。结果表明：D×LY肉色评分、嫩度测定结果最佳;PD×LY失水率、熟肉率、嫩度最差,其中熟肉率、嫩度与其它组间差异显著（P〈0．05）;D×LY肌肉剪切力值最小,与L×Y剪切力值差异不显著（P〉0．05）,但两者与PD×LIY差异极显著（P〈0．01）。肌纤维直径PD×LY〉L×Y〉D×LY,D×LY与L×Y肌纤维直径比较接近,差异不显著（P〉0．05）,而PD×LY与其它两个组合差异极显著（P〈0．01）。粗蛋白含量PD×LY〉D×LY〉L×Y,其中PD×LY达23．49％,PD×LY与其余两组合间差异均极显著（P〈0．01）,其余两组合间差异不显著（P〉0．05）;肌内脂肪含量PD×LY最低,与其余两组合间差异均极显著（P〈0．01）,D×LY最高,为2．92％,与L×Y组合间差异不显著（P〉0．05）。     

金黄色葡萄球菌对奶牛乳腺成纤维细胞TGF-β1/Smad信号通路及其转分化的影响

为探索金黄色葡萄球菌(S.aureus)对奶牛乳腺成纤维细胞(BMFB)TGF-β1/Smad信号通路及其转分化的影响,用热灭活金黄色葡萄球菌(0、10~4、10~5、10~6、10~7和10~8 CFU·mL~(-1))刺激BMFB,24h后采用Real-time PCR方法检测TGF-β1、α-SMA和collagen-ⅠmRNA的转录量,Western blot方法检测α-SMA、collagen-Ⅰ及p-Smad2/3蛋白的表达量。使用TGF-β1受体特异性抑制剂SB-431542预处理细胞,再用10~5 CFU·mL~(-1)热灭活金黄色葡萄球菌刺激细胞,24h后采用Real-time PCR方法检测α-SMA和collagen-ⅠmRNA的转录量,Western blot方法检测α-SMA、collagen-Ⅰ及p-Smad2/3蛋白的表达量,免疫荧光法检测collagen-Ⅰ蛋白的表达量。结果显示,不同浓度热灭活金黄色葡萄球菌处理细胞的TGF-β1mRNA的转录量显著升高(P0.05或P0.01),其中以10~5CFU·mL~(-1)刺激组的TGF-β1mRNA的转录量最高。不同浓度灭活的金黄色葡萄球菌处理细胞的α-SMA、collagen-Ⅰ及p-Smad2/3的表达量均能显著升高(P0.05或P0.01),其中以10~5 CFU·mL~(-1)刺激组的α-SMA、collagen-Ⅰ及p-Smad2/3的表达量最高。抑制剂SB-431542能够极显著抑制α-SMA、collagen-Ⅰ及p-Smad2/3的表达量(P0.01)。结果提示,金黄色葡萄球菌能够通过TGF-β1/Smad信号通路诱导奶牛乳腺成纤维细胞转分化为肌成纤维细胞,本研究为揭示金黄色葡萄球菌性乳腺炎发生硬化的机制奠定基础。     

益生菌制剂对生长后期育肥猪生长性能和养分表观消化率的影响

为了研究益生菌制剂对生长后期育肥猪生长性能和养分表观消化率的影响,试验选择出栏前60天左右育肥猪54头,随机分成3组,对照组饲喂基础日粮,试验1组在基础日粮中添加3 g/kg的益生菌制剂A(枯草芽孢杆菌数为1×10~7cfu/kg),试验2组在基础日粮中添加3 g/kg的益生菌制剂B(乳酸菌数为1×108cfu/kg、枯草芽孢杆菌数为1×10~(10)cfu/kg、酵母菌数为1×10~(10)cfu/kg)。测定各组生长后期育肥猪生长性能和养分表观消化率。预试期5 d,正试期45 d。结果表明:在整个试验期间,试验1组和试验2组育肥猪在平均日采食量、平均日增重、料重比等方面与对照组比较均差异不显著(P0. 05);试验1组和试验2组粗蛋白和钙的表观消化率略高于对照组,但差异不显著(P0. 05)。说明在本试验中,益生菌制剂对生长后期育肥猪生长性能和养分表观消化率的作用效果不显著。     

地榆提取物对多重耐药大肠埃希氏菌的抑菌活性及机制研究

为探讨地榆不同部位提取物对多重耐药大肠埃希氏菌(MDR E.coli)体外抑菌效果及抑菌机制,通过系统溶剂提取法萃取制备地榆石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水部位提取物,用微量肉汤稀释法检测各部位提取物对MDR E.coli的抑菌活性,筛选最佳抑菌活性部位提取物,并通过对MDR E.coli的细胞壁、细胞膜、菌体总蛋白合成的影响探讨抑菌机制。结果表明,地榆正丁醇部位提取物对MDR E.coli的抑制作用最强,其最小抑菌浓度(MIC)为3.125 mg/mL,在浓度为MIC和0.5×MIC时作用菌体12 h, MDR E.coli菌量分别为(2.37±0.59)×10~(6 )CFU/mL和(2.05±0.57)×10~8 CFU/mL;培养基中碱性磷酸酶(AKP)活性分别为(1.498±0.023)U/L和(0.768±0.088)U/L;在260 nm处培养基上清液OD值分别为0.363±0.003和0.168±0.009,均极显著高于对照组(P0.001);菌体总蛋白条带出现明显缺失。地榆正丁醇部位提取物对MDR E.coli的抑菌作用最强,其作用机制是通过破坏菌体细胞壁、增大菌体细胞膜通透性,干扰细菌总蛋白合成抑制细菌的生长。