GDF9对绵羊卵丘细胞增殖的影响

本试验旨在探究生长分化因子9（GDF9）对卵丘细胞扩展相关基因和激素受体基因表达量及激素分泌的影响,为GDF9在绵羊卵泡发育中的作用提供依据。以绵羊卵丘细胞为研究对象,通过在低血清细胞培养液中添加不同浓度（0、50、100、200、400 ng/mL）的GDF9,培养绵羊卵丘细胞48 h后,提取细胞总RNA,利用实时荧光定量PCR技术,以β-actin为内参基因,检测卵丘细胞扩展相关基因透明质酸合酶2（HAS2）、前列腺素内过氧化物合酶2（PTGS2）、穿透素3（PTX3）及激素受体相关基因卵泡刺激素受体（FSHR）、促黄体生成素受体（LHR）和雌激素受体（E₂R）的mRNA相对表达量;利用酶联免疫吸附法（ELISA）测定培养液中卵丘细胞分泌的雌二醇（E₂）和孕酮（P₄）含量。结果显示：在细胞培养液中添加200 ng/mL GDF9时,HAS2、PTX3、FSHR、E₂R和LHR的mRNA相对表达量极显著高于对照组与其他处理组（P<0.01）;PTGS2 mRNA相对表达量极显著高于对照组、50和400 ng/mL GDF9组（P<0.01）,显著高于100 ng/mL GDF9组（P<0.05）。当添加400 ng/mL GDF9时,各基因mRNA相对表达量均极显著低于200 ng/mL GDF9组（P<0.01）;E₂分泌量极显著高于对照组与50 ng/mL GDF9组（P<0.01）,显著高于100 ng/mL GDF9组,与200 ng/mL GDF9组差异不显著（P>0.05）。100、200和400 ng/mL GDF9组P₄分泌量显著高于对照组（P<0.05）,与50 ng/mL GDF9组没有显著差异（P>0.05）,且3组之间差异不显著（P>0.05）。综上所述,GDF9能够促进绵羊卵丘细胞扩展,并参与绵羊卵丘细胞激素分泌的调控。     

绵羊卵丘细胞细胞周期同步化对核移植胚胎发育的影响

供体细胞周期同步化是影响体细胞核移植成功率的重要因素之一.试验分别对绵羊卵丘细胞采用血清饥饿和接触抑制的方法进行细胞周期同步化处理,使用流式细胞仪检测各组细胞周期的分布.结果发现,与对照组相比,卵丘细胞经血清饥饿24~72 h后,显著地增加了G₀/G₁期细胞的百分比(P <0.05);接触抑制24~72 h,G₀/G₁期细胞所占比例与血清饥饿组无显著差异(P >0.05),但显著高于对照组(P <0.05);用经血清饥饿与接触抑制的供体细胞进行核移植后,重构胚卵裂率、桑椹胚率和囊胚率差异不显著(P >0.05),但二者囊胚率显著高于对照组(P <0.05).上述结果证实,血清饥饿和接触抑制均能使绵羊卵丘细胞周期同步化至G₀/G₁,均可用作绵羊体细胞核移植的供体细胞细胞周期同步化处理.     

BMP15对绵羊卵丘细胞扩展相关基因及激素受体基因表达量的影响

为探究添加骨形态发生蛋白15(BMP15)对绵羊卵丘细胞体外培养扩展相关基因及激素受体表达量的影响,本实验采集健康绵羊离体卵巢,分离卵丘-卵母细胞复合体收集卵丘细胞进行体外培养,分别在培养液中添加终浓度0、25、50、100、200 ng/mL的BMP15,以0 ng/mL为对照组,采用Real-time PCR方法检测BMP15处理的卵丘细胞中扩展相关基因(HAS2、PTGS2、PTX3)及激素受体基因(FSHR、E_2R、LHR)的表达水平。结果表明:相较于对照组及其他浓度处理组,添加100ng/mLBMP15极显著提高了HAS2、PTGS2、PTX3和FSHR、E_2R、LHR表达量。推测BMP15能够促进绵羊卵母细胞体外培养过程中卵丘细胞扩展,添加BMP15不仅能够上调FSHR、E_2R、LHR的表达,还能促进卵丘细胞激素分泌。     

动态添加FSH对绵羊卵巢皮质组织体外培养的影响

本研究旨在探索促卵泡素(FSH)对体外培养绵羊卵巢原始卵泡和组织活性的影响。通过稳定或动态方式添加不同浓度FSH(1、10、50、100ng·mL-1),用组织学和免疫组化PCNA方法来评估FSH对体外培养绵羊卵巢皮质组织中原始卵泡激活、生长、存活以及颗粒细胞增殖活性的影响;此外通过测定培养液中雌激素含量,评估卵巢组织体外培养过程中活性的保持。结果表明,先升后降动态添加FSH对于卵泡发育、存活和生长以及颗粒细胞的增殖具有全面的促进作用;同时组织分泌雌激素能力也高于其他组。以稳定方式添加时,50ng·mL-1FSH在培养1d时显示对卵泡发育的显著促进作用(P0.05),添加10ng·mL-1以上浓度的FSH可以促进卵泡存活和生长(P0.05)。在整个培养期内,各培养组中雌激素产量持续增加,说明卵巢活性在本培养体系中可以得到很好的维持。本试验结果表明FSH可能参与早期卵泡的发生,动态添加FSH更有利于体外培养卵泡的发育和组织活性的维持。     

外源激素FSH提高滩羊繁殖率初探

采用阴道栓塞、FSH和加强饲养管理相结合的方法,对35只空怀滩母羊进行两个胎次67只次的处理.结果表明,外源激素FSH诱导滩母羊同期发情和第一情期配种妊娠率综合比较,以撤拴前12 h和撤拴同时两次肌注FSH的处理方法效果较好;繁殖季节60IU和非繁殖季节70～/80IUFSH能有效的诱导滩母羊的同期发情,并增加母羊的排卵数;采用适宜的外源激素处理基本实现滩羊一年两产并诱导一产多羔,两胎次共处理67只次,母羊年繁殖率为179.10%,年只均繁殖成活羔羊1.56只,母羊只均增加收入54.67元.     

绵羊卵丘细胞对裸卵体外成熟及孤雌发育影响的研究

本研究探讨绵羊卵丘细胞对裸卵体外成熟和后期发育的影响。实验分为4组,对照组为卵丘-卵母细胞复合体(COCs);裸卵(DO)组;COCs与DO共培养组(CODO);卵丘细胞(CC)与DO共培养组(CCDO)。体外成熟培养18 h后,检测各组卵子成熟质量并进行孤雌发育研究。结果表明:CODO和CCDO组中裸卵活率显著高于DO组(P<0.05),但显著低于COCs组(P<0.05),且COCs组中卵子活率极显著高于DO组(P<0.01);在极体排出率方面,CODO、CCDO和DO3组差异不显著(P>0.05),但是它们都显著低于COCs组(P<0.05)。COCs、CODO、CCDO和DO 4组卵裂率差异均不显著(P>0.05)。然而,DO组的囊胚率显著低于CODO和CCDO组(P<0.05),极显著低于COCs组(P<0.01),但CODO和CCDO 2组中裸卵的囊胚率差异不显著(P>0.05)。总之,无论散在的卵丘细胞还是COCs均能提高裸卵体外成熟及后期发育潜力。     

绵羊裸卵与卵丘-卵母细胞共培养对体外成熟及孤雌发育的影响

本研究探讨了在绵羊卵母细胞体外成熟过程中裸卵(DO)与卵丘-卵母细胞复合体(COCs)共培养对成熟质量及后期发育的影响。试验分3组:对照组(COCs);COCs与DO共培养组(CODO)和裸卵组(DO)。结果表明:对照组中COCs与CODO组中COCs的活率和极体排出率差异均不显著(P>0.05),而CODO组中COCs的极体排出率却显著高于该组中的裸卵(P<0.05);CODO组中裸卵与DO组中裸卵在极体率方面差异不显著(P>0.05),但在活率方面CODO组中的裸卵却显著高于DO组(P<0.05)。虽然3组卵裂率之间差异均不显著(P>0.05),而就囊胚率而言,对照组中COCs与CODO组中COCs之间囊胚率差异不显著(P>0.05),但都显著高于CODO和DO 2组中的裸卵(P<0.05);此外,DO组裸卵的囊胚率显著低于CODO组中的裸卵(P<0.05)。总之,在体外成熟共培养过程中,裸卵对COCs的成熟和后期发育影响不大;而COCs则可以显著提高裸卵的成熟率和后期发育潜力。     

蒙古绵羊卵丘细胞ghrelin部分序列的鉴定

为了研究生长激素释放多肽(ghrelin)mRNA是否在蒙古绵羊卵丘细胞中表达,试验根据Gen-Bank中报道的绵羊ghrelin序列设计1对特异性引物,以蒙古绵羊卵丘细胞中的RNA为模板,采用实时定量RT-PCR技术扩增蒙古绵羊ghrelin的cDNA,并进行测序分析。结果表明:扩增得到的蒙古绵羊ghrelin cDNA为ghrelin的部分序列,将测序结果与已发表的绵羊ghrelin序列进行比对发现,233个碱基中有1个碱基的差异,该差异不影响翻译后多肽的序列;该cDNA片段包含长度为231 bp的开放读码框(ORF),编码77个氨基酸的绵羊ghrelin前原肽。     

体外培养的绵羊卵丘/颗粒细胞周期特征分析

作者探讨了体外培养的绵羊卵丘/颗粒细胞在不同生长状态、不同传代次数的细胞周期特征。流式细胞仪分析结果显示:第3代和第13代细胞生长至50%~60%汇合、70%~80%汇合和完全汇合时处于G0/G1期细胞的比例分别为76.6%±1.7%、83.4%±1.65%、84.53%±2.27%和66.8%±1.84%、72.8%±2.09%、76%±3.41%。低代细胞处于G0/G1期的比例显著高于高代细胞(P<0.05),高汇合度的细胞处于G0/G1期的比例显著高于低汇合度的细胞(P<0.05)。这表明核移植时选用低代高汇合度的培养细胞为宜。     

FSH处理对奶牛活体采卵的影响

本试验研究了FSH激素处理与非激素处理组在活体采卵获卵数上的差异。结果表明:处理组的平均获卵数显著高于对照组(P<0.05)差异显著,优质卵母细胞率虽有所提高(P>0.05),但差异不显著。     

FSH对绵羊卵母细胞体外核成熟的影响

为了探讨FSH对绵羊卵母细胞核成熟的影响,本试验将绵羊卵母细胞体外成熟24 h,并在成熟过程中的4个不同时间段内添加FSH,统计各个时间段卵母细胞的生发泡破裂(germinal vesicle break down, GVBD)及第一极体排出情况。结果显示：①在体外成熟培养的前4 h或前8 h添加FSH,经体外成熟的卵母细胞其生发泡破裂率与不添加FSH组无显著差异;②在体外成熟的4~24 h或8~24 h添加FSH,其第一极体排出率与不添加FSH组有极显著差异。说明,在本试验条件下,FSH对绵羊卵母细胞体外成熟具有显著的促进作用,是在减数分裂的恢复后到减数分裂完成之间的某一阶段起的促进作用。     

FSH对绵羊卵母细胞体外发育能力的影响

为了探讨绵羊卵母细胞体外成熟过程中促卵泡素(FSH)的适宜添加量,试验将FSH分为0.01,0.02,0.03 IU/mL 3个浓度梯度,用于绵羊卵母细胞的体外成熟与体外受精,统计第一极体排出率、卵裂率和囊胚率。结果表明:不同浓度FSH对第一极体排出率影响差异不显著(P>0.05),体外受精后以0.02 IU/mL组效果最好,卵裂率显著高于0.03 IU/mL组(P<0.05),但与0.01 IU/mL组相比差异不显著(P>0.05);0.02 IU/mL组囊胚率与其他2组相比显著升高(P<0.05)。     

白藜芦醇对体外培养的水牛卵丘细胞增殖活力及其相关基因mRNA表达的影响

【目的】研究白藜芦醇(resveratrol, RES)对水牛卵丘细胞体外培养过程中细胞增殖活力、激素分泌、卵丘扩展及抗凋亡和抗氧化能力的影响。【方法】用不同浓度(0(对照组)、1、10、20、30、40、50和60μmol/L)RES培养卵丘细胞,用CCK-8试剂盒测定细胞增殖活力,筛选最佳RES处理浓度及时间用于后续试验。用ELISA法测定培养液中卵丘细胞分泌的雌二醇(estradiol, E₂)和孕酮(progesterone, P₄)的含量,实时荧光定量PCR法测定卵丘细胞扩展、凋亡和抗氧化相关基因的相对表达量。【结果】与对照组相比,在体外培养24～36 h内,1、10和20μmol/L RES组水牛卵丘细胞的增殖活力均有升高趋势,10μmol/L RES处理36 h细胞活力最强,因此用于后续试验中细胞的处理。体外培养36 h时,10μmol/L RES组细胞增殖能力和E₂、P₄的分泌显著增加(P<0.05);10μmol/L RES组卵丘细胞扩展相关基因穿透素3(PTX3)、前列腺素...     

FSH使用方法对无角道塞特绵羊超数排卵的影响

为探讨FSH的种类、剂量及注射次数和注射季节对绵羊超数排卵的影响,采用中国科学院动物所、宁波、加拿大生产的FSH对206只无角道塞特绵羊进行了超排处理,观察了供体发情率、回收胚胎数、可用胚胎数、退化胚及未受精卵比率以及供体的表现.结果,无论那种FSH,在适当的剂量范围都可有效进行超排,中国科学院FSH与宁波FSH联合使用可提高回收胚胎数和可用胚胎数;与6次递减注射相比,7次或8次递减注射的结果更为理想;秋季的超排效果优于春、夏和冬季.供体对激素处理表现复杂多变的超排反应,同时也出现卵子受精失败现象.结果表明,外源FSH只能在一定程度上控制超排反应,进一步的研究应考虑外源性FSH与内分泌反应的关系.     

米非司酮对小鼠精子穿透卵丘细胞层的影响

本研究旨在探讨米非司酮（mifepristone,RU486）对小鼠精子穿透卵丘细胞层的影响。分别添加20 μg/mL RU486到精子获能液或穿卵培养液,检测小鼠精子顶体反应发生比率和穿透卵丘细胞层能力。结果显示,添加RU486能够极显著抑制孕酮（P₄,5 μg/mL）诱导的精子顶体反应（P ＜0.01）;并极显著减少穿透卵丘细胞层到达卵子透明带的精子数量及在卵子-卵丘细胞复合体（OCC）中精子发生顶体反应的比率（P＜0.01）;同时添加P₄和RU486情况下,相比单独添加RU486,虽然P₄能够极显著地促进精子穿透卵丘细胞层到达透明带,但对OCC中的精子顶体反应没有明显作用。综上表明,RU486能够抑制P₄诱导的顶体反应并影响小鼠精子穿透卵丘细胞层过程,揭示P₄/孕酮受体（PGR）通路在小鼠精子穿卵过程中具有重要作用。     

利用外源激素提高绵羊生母率效果的研究

输精前给供试母羊肌注不同剂量的外源激素２０￣３０、４０￣５０、６０￣１００μｇ。母羊的生母率分别为５６．９３％、６０．３６％、５７．３０％，平均生母率５８．６３％，比理论频率（１：１）与对照组高８．６３￣７．５３个百分点（Ｐ〈０．０５），其中以４０￣５０μｇ组较理想。     

VEGF shRNA表达质粒的构建及对绵羊卵泡颗粒细胞增殖的影响

本研究根据绵羊VEGF基因mRNA序列设计并合成3条shRNA寡核苷酸片段,构建表达质粒并通过脂质体介导转染绵羊卵泡颗粒细胞,采用MTT、ALP方法检测VEGF shRNA重组质粒对绵羊卵泡颗粒细胞增殖的影响及Western Blot方法检测VEGF蛋白的表达。结果表明:经酶切和测序鉴定,成功构建了表达shRNA的3条重组质粒;3条VEGF shRNA质粒均可抑制绵羊卵泡颗粒的增殖,VEGF蛋白表达水平也明显降低,从而说明VEGF能够促进绵羊卵泡颗粒细胞的增殖。     

外源激素催乳对小牛泌乳的影响

<正>乳腺生物反应器由于具有其他生物反应器无可比拟的优势一直都受到各国科学家的重视,所以被广泛用于食用或药用蛋白的生产,尤其是牛乳腺生物反应器。但是众所周知,转基因牛生产     

外源生殖激素对母猪繁殖力的影响

注射用氯前列醇钠(PG-Cl)是PGF2α类似物,PG-Cl作用选择性较强,活性高,用量小,毒副作用少,又不影响泌乳,是较理想的前列腺素类似物药物。其主