精子功能相关精浆蛋白质的蛋白组学研究进展

精浆蛋白质对生殖过程中的精子功能有显著影响,包括顶体反应、精子获能、精子贮存、精子竞争和受精。精浆蛋白质的研究已有很长的历史,而且牛精浆蛋白、热休克蛋白、富含半胱氨酸分泌蛋白等几种主要的精浆蛋白质已被成功分离鉴定。蛋白质组学研究方法和技术的迅速发展,为全面解析精浆蛋白质组提供了新的研究策略,提高了研究者探索精浆蛋白质未知领域的效率。作者综述了精子功能相关精浆蛋白质研究的相关信息及近年来精浆蛋白质组的研究进展,从蛋白质水平上阐述了精浆蛋白质与精子获能、贮存及受精等功能的关系。     

17℃保存对猪精子亚组分蛋白酪氨酸磷酸化的影响及中药保护作用

实验旨在分析17℃保存对获能精子蛋白酪氨酸磷酸化的影响,通过精子蛋白亚组分分离及酪氨酸磷酸化鉴定,研究精浆以及中药水提液对保存精子获能相关蛋白酪氨酸磷酸化的影响。选择获能指标-酪氨酸磷酸化分析新鲜猪精子和17℃保存猪精子,提取精子全蛋白、膜蛋白、核蛋白以及骨架蛋白,利用WB分离及鉴定酪氨酸磷酸化差异。结果显示:17℃保存条件下,获能精子在40～45、46～50 ku分子量膜蛋白酪氨酸磷酸化程度减弱;未获能精子在30～35 ku分子量胞浆蛋白磷酸化程度增强,出现似"获能"现象;精浆在保存中起到提供营养的作用但易导致细菌滋生;中药水提液对精子保存过程中的保护效果体现在精子获能培养后,鞭毛中段、主段酪氨酸磷酸化和新鲜精子无明显差异。     

秦岭大熊猫精浆指标对精液品质的影响

精浆生化指标和精液品质的研究是开展雄性大熊猫生殖技术的基础。精浆成分在精子获能、受精以及保护精子在雌性生殖道内运行等过程中发挥重要功能。本试验通过对4只雄性秦岭大熊猫精浆中果糖、柠檬酸、锌(Zn)和活性氧(reactive oxygen species, ROS)含量的测定,分析比较其与精液品质的相关性,以期为提高秦岭大熊猫精液品质和精液保存质量提供参考。结果显示,果糖浓度与秦岭大熊猫的精子活率、顶体和质膜完整性无显著相关性;Zn含量与精子活率、顶体和质膜完整性呈极显著正相关;柠檬酸含量与精子活率、顶体和质膜完整性呈正相关;ROS含量与精液品质呈显著负相关性。结果表明,在精液保存过程中,可以通过调整精浆中Zn、柠檬酸及ROS含量提升秦岭大熊猫精液品质。     

精浆浓度对4℃保存犬精液品质的影响

为了解精浆对犬精子低温保存的影响,试验通过离心分离鲜精的精浆和精子,将商业化稀释液与精浆混合,制备不含精浆和含25%、50%、75%、100%精浆的稀释液,并用该稀释液于4℃保存犬精子,定期对精子活力、活率、精子运动性、精子质膜完整性进行检测。结果表明:含25%精浆的稀释液保存效果最佳,保存120 h后,精子活力、活率仍超过40%;不含精浆和含50%精浆的稀释液保存效果次之。说明在低温保存犬精液时存在一定浓度的精浆有利于精子存活,在实际生产中,稀释液中含有25%的精浆,即鲜精与稀释液进行1∶3稀释,对维持精子在低温条件下的存活可能有较好的效果。     

除精浆冷冻精液研究进展

冷冻精液就是使精子在超低温（－１９６℃）下半永久性保存精子生存能力的一种技术。自从英国人Ｐｏｌｇｅ等将甘油用于冷冻保存牛精液取得成功以来的５０年里，该技术研究与应用取得了飞速的发展，尤其在乳牛上的应用效果已同鲜精无明显差异。然而近年来的研究发现精浆中亦同时存在着许多尚未被人类所了解清楚的蛋白质成分。这些物质对精子，尤其是冷冻后精子的品质有十分不利的作用。因此国外畜牧工作者已相继在牛、羊、马、猪等畜种上开展了去除精浆对冻后精子品质影响的研究，获得了良好效果。但国内尚未见此方面的系统报道，因此本文将…     

精浆胞外囊泡对精子功能的作用研究进展

近年来,体液中的胞外囊泡受到特别关注,许多物种精浆中均含有胞外囊泡,这些精浆胞外囊泡可以影响精子功能,还可作为雄性动物繁殖力或人类不孕不育相关疾病的标志.本文综述了精浆胞外囊泡对精子功能作用的研究进展,以期更好地理解精子受精能力的调控机制,同时为畜牧生产中提高雄性动物繁殖力和男性生育相关疾病治疗提供一定的思路和参考.     

哺乳动物精浆生化指标对精液品质的影响

为了研究哺乳动物精浆生化指标对精液品质的影响,试验通过分析精浆糖类、蛋白质、微量元素对精液品质的影响,阐明了精浆成分对动物精液品质的重要作用。结果表明:精浆糖类是精子活动的能量来源;精浆中的蛋白质对顶体反应、精子获能、精子贮存、精卵识别和受精等功能具有显著影响;微量元素可直接参与多种酶促反应和蛋白质的结构组成。     

羊精液常温保存及影响因素

羊精液的常温保存是羊人工授精过程中的重要环节,此项技术已成功运用于生产实践中。目前,对于羊精液常温保存的研究主要集中在稀释液组分和各组分配比等方面。本文结合国内外羊繁殖的实际情况,针对羊精液常温保存稀释液成分、各组分浓度以及外界因素对羊精子的影响等研究进展进行综述,旨在延长羊精液常温保存时间,提高羊精液常温保存质量,为羊精液常温保存的研究提供一定参考。     

精浆含量对绒山羊精液低温保存效果的影响

为了研究精浆含量对绒山羊精液低温保存效果的影响,试验以低倍稀释(1∶2)为对照组,研究以高倍稀释(1∶10,高倍稀释组)和离心洗涤(洗涤组)两种方式去除精浆后的精子保存效果,再人为添加不同浓度精浆(0、10%、20%,30%、40%)于低温保存稀释液中,测定精子活率、运动速率、顶体完整性、质膜完整性及线粒体活性等精液品质指标。结果表明:高倍稀释组在各时间段内的精子活率、运动速率[直线速率(VSL)、曲线速率(VCL)及平均路径速率(VAP)]、质膜完整率均显著高于对照组和洗涤组(P0.05);高倍稀释组的精子顶体完整率和线粒体活性与对照组和洗涤组相比无显著差异(P0.05);在外源添加不同浓度精浆的试验中,10%、20%精浆组的精子活率、质膜完整率及运动速率均显著高于其他组(P0.05),而10%、20%精浆组之间无显著差异(P0.05),但20%精浆组的各项精子质量指标略高于10%精浆组。说明在低温保存山羊精液时存在一定浓度的精浆可以有效提高保存效果,在本试验条件下10%～20%的精浆添加量比较适宜,但20%精浆组的保存效果相对更好。     

山羊精液的保存

山羊的精液保存,尤其是冷冻保存一直困扰着养羊业的发展。笔者就山羊精液的保存进行了研究。1影响山羊精液保存的因素卵黄或乳汁是精液保存中常用的传统成份,可使精子免受稀释或低温的刺激,从而保证精子的正常形态和活力,并维持正常的受精能力。山羊尿道球腺(BU S)能分泌卵黄凝集酶(EY CE),E Y C E催化卵黄卵磷脂水解为脂肪酸和溶血卵磷脂,溶血卵磷脂对山羊精子的保存有毒副作用。山羊B U S分泌的蛋白质与乳汁成分相互作用,可导致精子活率的降低。因此,山羊精液中的精浆成分对精液的保存是不利的,所以在采精后要除掉精浆。目前,常用的…     

水牛精子活力相关的精浆外泌体差异蛋白质组学研究

为探索水牛高低活力精子的差异表达蛋白质（Differentially Expressed Proteins,DEPs）变化，并揭示水牛精子活力相关蛋白质的分子调控机制，本研究通过液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）技术，对成年摩拉水牛精浆、精子、精浆外泌体蛋白质种类及表达量进行比较分析。按照精子活力分为高活力组（0.67±0.02）和低活力组（0.34±0.04），分别提取其精浆外泌体蛋白质进行差异表达分析，鉴定到DEPs共160个。通过GO分析和KEGG通路分析发现，DEPs显著富集到精子部位的顶体素结合蛋白（ACRBP）、精子发育相关的生物调节过程以及“FcγR介导的吞噬作用”、“PPAR信号通路”等多个信号通路。通过构建精浆外泌体DEPs互作网络进一步分析发现，ACRBP、IZUMO1、SPACA1、ADAM2等蛋白质在精子发育调控通路发挥重要作用。     

骨桥蛋白在长白公猪生殖细胞中的表达及其与繁殖性能的相关性

本试验旨在研究骨桥蛋白（osteopontin,OPN）在长白公猪生殖细胞中的表达和定位,并探究其与公猪繁殖性能的相关性。试验采集了长白公猪精液和不同阶段（3日龄、3月龄、6月龄和12月龄）的睾丸组织,通过蛋白印迹的方法检测OPN蛋白在精液和不同月龄睾丸中的表达,通过免疫组化的方法对OPN蛋白在公猪睾丸细胞中进行定位;同时,根据配种胎次≥ 20胎,3次配种公猪为同一头的标准,筛选并采集17头长白种公猪精液,统计相对应的1 388头母猪的生产成绩,计算得到公猪繁殖性能指标（包括窝产总仔数、窝产活仔数、分娩率和繁殖力）。低温离心精液分离得到精子和精浆,丙酮法提取精浆蛋白,Lysis buffer方法提取精子蛋白,最后运用BCA和ELISA的方法检测精子和精浆中OPN蛋白的含量,分析OPN蛋白与公猪繁殖性能的相关性。蛋白印迹结果显示,OPN在精子、精浆和各月龄阶段的长白公猪睾丸中均以两种形式表达（67.4和33.7 ku）,且67.4 ku的形式在3月龄公猪睾丸中表达量最高;免疫组化的结果显示,OPN在长白公猪的初级精母细胞、次级精母细胞和精子细胞中表达,在精母细胞、支持细胞和间质细胞中无表达;BCA和ELISA结果显示,精子中的OPN蛋白含量是精浆中的7倍（P<0.05）,精液中的OPN蛋白与公猪窝产活仔数显著正相关（P<0.05）。本试验结果表明,OPN在各阶段的长白公猪睾丸中都有表达,且在精子和精浆中也有表达,这可能与公猪的繁殖性能有关,从而为后期OPN蛋白在公猪受精力的研究奠定基础。     

骨桥蛋白在长白公猪生殖细胞中的表达及其与繁殖性能的相关性

本试验旨在研究骨桥蛋白(osteopontin,OPN)在长白公猪生殖细胞中的表达和定位,并探究其与公猪繁殖性能的相关性。试验采集了长白公猪精液和不同阶段(3日龄、3月龄、6月龄和12月龄)的睾丸组织,通过蛋白印迹的方法检测OPN蛋白在精液和不同月龄睾丸中的表达,通过免疫组化的方法对OPN蛋白在公猪睾丸细胞中进行定位;同时,根据配种胎次≥20胎,3次配种公猪为同一头的标准,筛选并采集17头长白种公猪精液,统计相对应的1 388头母猪的生产成绩,计算得到公猪繁殖性能指标(包括窝产总仔数、窝产活仔数、分娩率和繁殖力)。低温离心精液分离得到精子和精浆,丙酮法提取精浆蛋白,Lysis buffer方法提取精子蛋白,最后运用BCA和ELISA的方法检测精子和精浆中OPN蛋白的含量,分析OPN蛋白与公猪繁殖性能的相关性。蛋白印迹结果显示,OPN在精子、精浆和各月龄阶段的长白公猪睾丸中均以两种形式表达(67.4和33.7 ku),且67.4 ku的形式在3月龄公猪睾丸中表达量最高;免疫组化的结果显示,OPN在长白公猪的初级精母细胞、次级精母细胞和精子细胞中表达,在精母细胞、支持细胞和间质细胞中无表达;BCA和ELISA结果显示,精子中的OPN蛋白含量是精浆中的7倍(P0.05),精液中的OPN蛋白与公猪窝产活仔数显著正相关(P0.05)。本试验结果表明,OPN在各阶段的长白公猪睾丸中都有表达,且在精子和精浆中也有表达,这可能与公猪的繁殖性能有关,从而为后期OPN蛋白在公猪受精力的研究奠定基础。     

精浆对猪精子冷冻效果影响的研究

为优化猪精子冷冻技术,提高解冻后精子的活力和受精能力,本试验分别以含精浆浓度为10%、20%和30%的冷冻保护剂处理精子,以冷冻前、解冻后精子活力和质膜完整性,解冻后精子进行体外受精(IVF)的卵裂率和囊胚率等作为检测指标,同时以含有卵黄的Tris-柠檬酸－葡萄糖(Tris-citric acid-glucose,TCG)冷冻基础液作为对照研究精浆对猪冷冻精子的保护作用。结果显示,在含有10%精浆浓度的稀释液中,冷冻前质膜完整性,解冻后精子活率、质膜完整性、IVF囊胚率相对于对照组均显著提高(P<0.05);当含有10%精浆的冷冻精液解冻后用于人工授精时,与配母猪妊娠率、窝产仔数、窝产活仔数等仍显著低于鲜精授精组(P<0.05)。上述结果表明,含10%精浆的冷冻保护剂能提高精子的冷冻后活力和IVF胚胎发育率,但用于人工授精配种与鲜精相比还有一定差距。     

补饲硒和维生素E对高温季节山羊精液品质、抗氧化酶活性及热休克蛋白表达的影响

试验旨在研究在海南夏季高温饲养条件下,山羊补饲硒和维生素E对其精液品质、抗氧化酶活性及热休克蛋白表达的影响。选用16只健康状况良好、体重相近的海南黑山羊成年公羊,随机分成4组,分别饲喂基础日粮(对照组)、基础日粮+0.5mg/kg Se(Se组)、基础日粮+100mg/kg VE(VE组)和基础日粮+0.5mg/kg Se+100mg/kg VE(Se+VE组),试验期93 d。试验期结束前1周采集精液,评价精液品质、测定精浆抗氧化酶活性和精液热休克蛋白表达。结果表明,与对照组相比,补饲Se和VE对海南黑山羊射精量影响差异不显著(P>0.05);补饲Se和VE能显著提高海南黑山羊的精子密度和精子活力(P<0.05),极显著降低精子畸形率(P<0.01);极显著增加精浆谷胱甘肽过氧化物酶活性和总抗氧化能力(P<0.01),显著增加超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性(P<0.05),显著降低丙二醛浓度(P<0.05);补饲Se和VE还极显著降低了精液HSP70和HSP90mRNA的表达水平(P<0.01),但各补饲组之间对精液品质改善效果和热休克蛋白表达丰度的影响存在一定差异。综上所述,补饲Se和VE有助于提高热带地区夏季高温季节山羊精子密度、精子活力,降低畸形率,同时还能增强精浆中抗氧化酶的活性,改善精液品质,进而起到缓解环境热应激的效果。     

解冻稀释液中添加精浆对冻融猪精子品质的影响

【目的】 探究冷冻前添加热休克蛋白A8(heat shock protein A8, HSPA8)和解冻后添加不同浓度精浆(seminal plasma, SP)对冻融猪精子的影响。【方法】 采用手握法采集长白猪精液, 添加0.5 μg/mL HSPA8到猪精液冷冻保护剂中进行细管分装, 投入液氮中保存3周后进行解冻, 解冻后添加不同浓度精浆(0、10%、30%和50%), 对冻融后长白猪精子的运动能力、质膜完整性、顶体完整性、细胞凋亡、线粒体膜电位、鱼精蛋白缺乏及体外获能水平等进行评估。【结果】 与对照组相比(无HSPA8和精浆), 添加0.5 μg/mL HSPA8处理组(无精浆)的精子直线速度(VSL)、曲线速度(VCL)、平均路径速度(VAP)和前向性运动(STR)均显著提升(P<0.05), 精子直线性运动(LIN)和运动的摆动性(WOB)均无显著差异(P>0.05);精子质量参数中活力、质膜完整性和顶体完整性均显著升高(P<0.05), 细胞凋亡水平与线粒体膜电位均显著降低(P<0.05);精子鱼精蛋白缺失率显著降低(P<0.05);精子蛋白酪氨酸磷酸化水平显著提高(P<0.05)。之后在解冻液中添加不同浓度的精浆, 与添加0.5 μg/mL HSPA8处理组(无精浆)相比, 精浆添加量达到50%时, 精子VSL、VCL、VAP、LIN、STR和WOB均显著提升(P<0.05);精子活力、质膜完整性、顶体完整性和线粒体膜电位均显著提高(P<0.05), 细胞凋亡水平显著降低(P<0.05);精子鱼精蛋白缺失率显著降低(P<0.05);精子蛋白酪氨酸磷酸化水平显著提高(P<0.05)。【结论】 在冷冻基础液中添加0.5 μg/mL HSPA8和解冻稀释液中添加50%精浆联合使用可以有效改善冻融精子质量, 将会对猪精液的冷冻保存及商业化生产提供一定的参考。     

精浆和精子对母兔子宫免疫及孕向发育的影响

在结扎子宫颈的情况下,分别在兔同一子宫的两侧子宫角剖腹注入生理盐水(对照)、精浆或精子以研究精浆和精子对子宫免疫和孕向发育的影响。试验共用母兔18只,每组6只。在注入后72 h时处死试验用兔,取子宫进行一般测量,并切片染色,用图象采集分析系统进行研究。结果表明:1)注入子宫的精浆和精子,都能明显降低黏膜中的肥大细胞数量和增加子宫角中冲洗液内的细胞数(P0.01)。精浆与精子相比,精浆降低黏膜中肥大细胞数量的作用更大(P0.05);而精子提高子宫角冲洗液内细胞数的作用更强(P0.01)。2)无论精浆还是精子,都能显著(P0.05)或极显著(P0.01)促进子宫(子宫角指数、子宫角长度和子宫角直径)、子宫壁(子宫壁厚度、黏膜层厚度、黏膜上皮层厚度和肌层厚度)、黏膜腺体(腺体数和腺上皮的厚度)以及黏膜血管的孕向发育。精浆与精子相比,就子宫、子宫壁及黏膜血管的孕向发育来说,精浆的作用更明显(P0.05或P0.01);而对子宫黏膜腺体孕向发育的作用,精浆和精子间没有明显差异(P0.05)。     

除精浆对海门山羊精液冷冻效果影响的初步研究

选用海门山羊进行除精浆对精液冷冻效果影响的研究。选用三个处理组进行除精浆试验 ,结果表明以 10 0 0r/min ,10分钟处理组效果最好 ,其冷冻解冻后精子活力显著高于对照组 (P <0 0 5 ) ,采精穿卵试验 (SPA)亦表明其精子穿卵活力显著高于对照组 (P <0 0 5 )。研究表明除精浆后进行海门山羊精液冷冻具有良好的效果。     

羊精浆生化指标与精子质量常规参数相关性分析

实验旨在探究羊精浆生化指标与精子质量常规参数之间的相关性，选择2～3岁、健康状况良好的13只山羊和10只绵羊，分别检测精子数、浓度、活力、曲线速率、直线速率、平均速率、线性指数、直线指数和振动指数等精子质量常规参数；检测相应精浆的14项生化指标，并与精子质量常规参数进行关联分析。结果表明：绵羊的鲜精活力达78%以上，精子密度达2 167.78×106/mL，精浆中含有蛋白质、酶、胆固醇、甘油三酯等多种生化成分；山羊鲜精活力达88%，精子密度达1 205.02×106/mL，精浆中含丰富的蛋白质以及多种生化酶成分。山羊精浆中总蛋白（TP）、球蛋白（GLB）、白蛋白（ALB）、果糖胺（FUN）、肌酸激酶（CK）、肌酐（CREA-S）高于绵羊（P<0.01），总胆固醇（TC）也高于绵羊（P<0.05）；绵羊精浆中乳酸脱氢酶（LDH）、甘油三酯（TG）、钙（Ca）、磷（P）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）高于山羊精浆同组分（P<0.01）。绵羊和山羊精浆TP与精子数量呈正相关（P>0.05），天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、TC、FUN、ALT、GLB、LDH与精子活力呈正...     

除去精浆对波尔山羊冷冻精液品质的影响

以波尔山羊精液为实验材料,采用二步稀释法在降温前以葡萄糖-卵黄液为洗涤液,应用离心洗涤法对波尔山羊精液进行1000r/min离心处理,制作细管冻精,并进行超微结构分析.结果表明:经离心处理的冻精精子活率极显著优于对照组(P<0.01),精子顶体完整率极显著高于对照组(P<0.01) ,精子存活时间不同处理间未见显著差异(P>0.05).精浆中包含有多种物质,充当精子载体的作用,并可稀释精子,为精子提供代谢物质.试验中除去精浆后精子活率、 顶体完整率均优于对照组,表明除去精浆对冷冻后的精子品质有提高作用.