2株山羊溶血性曼氏杆菌鉴定与分型

为了研究感染羊引起肺炎的溶血性曼氏杆菌的分子特征,分别从2只山羊肺部分离细菌,在血琼脂平板上分离纯化后,经培养、革兰染色镜检、生化试验、16S rDNA序列鉴定,结合临床症状鉴定这2株细菌为溶血性曼氏杆菌,分别命名为NH1、NH2。采用PCR方法,对2株溶血性曼氏杆菌进行血清型1型、2型和6型的鉴定,结果2株细菌均为血清型2型。采用多位点序列分型法对2株溶血性曼氏杆菌的7个管家基因扩增并测序,结果等位基因adk、aroE、deoD、gapDH、gnd、mdh和zwf的序号分别为1、1、3、1、1、1和4, 2株分离菌序列型一致,均是ST46。通过纸片扩散试验检测细菌对抗菌药物的敏感性,MH1对链霉素耐药,对多西环素和妥布霉素中介,对其他13种药物均敏感;MH2对链霉素中介,对其他15种药物均敏感。     

1株奶牛源溶血性曼氏杆菌的分离鉴定与生物学特性研究

为了对送检奶牛肺脏组织进行病原菌的分离鉴定并研究分离病原菌的生物学特性,试验采用细菌的分离纯化、革兰氏染色镜检、理化试验及16S rDNA序列分析对分离菌进行鉴定,并检测其血清型、多位点序列分型(MLST)、毒力基因、致病性和耐药性。结果表明：该菌株能发酵葡萄糖、乳糖和麦芽糖等,不发酵甘露糖;革兰氏染色镜检显示该菌呈红色的球杆状,为革兰氏阴性菌;16S rDNA序列分析结果显示该菌株为溶血性曼氏杆菌,命名为202102NF,为血清型1型;202102NF的7个管家基因adk、aroE、deoD、gapDH、gnd、mdh和zwf序列号分别为1,2,1,2,1,2,1,序列型为ST1;202102NF携带LKTA、GCP、POMA、NANH、ADHE、HF等多种毒力基因;小鼠腹腔注射202102NF 18 h内死亡,镜检可见攻毒组的小鼠肝脏和肾脏发生肿大、颜色加深,肺部出现出血斑,肠道有大量炎性渗出物;202102NF对诺氟沙星中介,对多黏菌素B、头孢噻肟、左氧氟沙星等17种抗菌药物均敏感。说明202102NF为血清型1型的溶血性曼氏杆菌,其序列型为ST1,携带多种毒力基因,具有较强的毒...     

云南羊溶血性曼氏杆菌的分离鉴定及药敏试验

采用PCR鉴定、16S rDNA基因鉴定方法,对从云南某羊场病羊肺脏中分离到的1株革兰氏阴性小球杆菌进行系统鉴定,并对分离株的致病性和药物敏感性进行研究。鉴定结果表明:分离株溶血性曼氏杆菌PCR鉴定为阳性;分离株16S rDNA基因序列与GenBank上公布的其它溶血性曼氏杆菌同源性为96%~99%,与溶血性曼氏杆菌D171参考株同源性高达99%,因此将分离株系统鉴定为溶血性曼氏杆菌。致病性实验表明:分离株对小白鼠有致病性,该分离株对头孢呋辛、头孢曲松等头孢类抗生素和四环素最为敏感。本研究为我国南方省份曼氏杆菌病的防控和深入研究奠定了基础。     

西藏绵羊溶血性曼氏杆菌分离鉴定及药敏特性研究

为探究西藏自治区山南市某地农户饲养的绵羊大批死亡的原因,采集病死羊心脏、脾脏、小肠、肺脏、气管等病料,进行细菌培养、分离鉴定、PCR检测、血清型鉴定、毒力基因检测及药敏特性分析。结果显示:从病死羊肺脏病料中分离出一株溶血性曼氏杆菌,血清型为2型;特异性PCR检测为阳性,证明分离菌株为溶血性曼氏杆菌;药敏试验结果显示,分离的溶血性曼氏杆菌对大多数临床常用抗生素敏感;主要毒力基因lktA检测为阳性。该研究首次从西藏绵羊分离出溶血性曼氏杆菌,并研究了其药敏特性,为该病的诊断与治疗提供了参考。     

绵羊肺脏中溶血性曼氏杆菌的分离鉴定及其药物敏感性分析

为了对引起绵羊肺炎的病原进行分离、鉴定和耐药性分析,本研究通过无菌采集绵羊肺脏并对细菌进行分离纯化、生化试验和PCR鉴定,然后对所得到的溶血性曼氏杆菌分离株进行药物敏感性研究。结果显示,分离纯化得到的细菌为革兰氏阴性短杆菌,具有弱溶血性,经生化试验和PCR鉴定为溶血性曼氏杆菌;耐药性分析显示该菌株对恩诺沙星、庆大霉素、四环素等大部分药物敏感。本研究为绵羊溶血性曼氏杆菌感染的有效防制提供有用的信息和数据。     

一例羊皮下脓肿病原的分离鉴定及药敏试验

为确定某羊场一例羊皮下脓肿病的病原，将病料样本接种于TSA固体培养基进行病原分离，然后对分离菌进行革兰氏染色镜检、生化鉴定、药敏试验和生物信息学分析。结果分离到1株革兰氏阳性球菌和1株革兰氏阴性短杆菌，经生化鉴定以及16S rDNA PCR扩增、测序、同源性分析，鉴定该分离菌株为金黄色葡萄球菌和溶血性曼氏杆菌；2株细菌对头孢曲松、链霉素、四环素、多西环素、左氧氟沙星等多种药物敏感。     

一起藏绵羊溶血性曼氏杆菌和多杀性巴氏杆菌混合感染的实验室诊断

为查明2021年四川省甘孜州某藏绵羊养殖场呼吸道疾病的发病病因,本研究采用PCR方法对送检的5份深部鼻腔棉拭子进行了“山羊副流感病毒3型、牛病毒性腹泻-黏膜病病毒、牛冠状病毒、多杀性巴氏杆菌、溶血性曼氏杆菌、绵羊肺炎支原体、丝状支原体簇成员”等常见呼吸道病原的检测。结果显示：多杀性巴氏杆菌和溶血性曼氏杆菌为阳性,其他病原为阴性;通过细菌分离培养成功获得5株溶血性曼氏杆菌和5株多杀性巴氏杆菌;分型结果显示5株溶血性曼氏杆菌为A2型,5株多杀性巴氏杆菌为D型。结合临床症状,确诊该场藏绵羊的呼吸道疾病是由A2型溶血性曼氏杆菌和D型多杀性巴氏杆菌混合感染所致。     

牛源荚膜血清A1型溶血性曼氏杆菌的分离鉴定及生物学特性研究

探明一起牛运输热的病原及生物学特性,本研究采集病死牛心血、肺脏,对其进行细菌分离、生化试验和PCR鉴定,并对分离株进行毒力基因检测、致病性研究。结果显示,该分离菌为革兰氏阴性菌,呈球状或短杆状、两端钝圆、两极浓染。生化试验结果显示,分离菌能发酵葡萄糖、麦芽糖、阿拉伯糖、甘露醇、甘露糖、乳糖、木糖等碳水化合物,不发酵脲酶和吲哚,产生少量酸而不产气,符合溶血性曼氏杆菌的生化特性。PCR鉴定为荚膜血清A1型溶血性曼氏杆菌,并完成了毒力基因的检测。结果表明,引起该批牛运输热的病原为携带毒力基因的荚膜血清A1型溶血性曼氏杆菌,本研究结果为进一步研究溶血性曼氏杆菌的致病机制、防控措施等提供参考。     

我国东北部分地区牛溶血性曼氏杆菌的分子流行病学研究

为了解牛溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,Mh)在我国牛群中的流行情况,本研究于2014年～2019年在东北部分地区采集健康牛、患病牛的鼻拭子和肺脏样品进行细菌的检测、分离和鉴定,并对分离株进行遗传进化分析。对牛溶血性曼氏杆菌的检测结果显示,不同年份、不同地区采集样品的总检出率为23.5%(28/119),其中健康牛的检出率为13.46%(7/52),明显低于临床发病或死亡牛样品的检出率31.34%(21/67)。采用特异性分型PCR检测发现,Mh分离株分为A1、A2和A6三个血清型,从健康牛分离的Mh株的主要血清型为A2型,而从发病或死亡牛主要分离的Mh是A1和A6型。遗传进化分析表明,A1和A6型分离株位于同一进化分支,菌株间16S rDNA和lktA基因的序列同源性均为100%;而它们与A2型分离株的亲缘关系较远,16S rDNA和lktA基因的序列同源性分别为99.8%～99.9%和85.8%～86.7%;此外,A1和A6型分离株的lktA同属于lktA1等位基因亚型,而A2型分离株属于lktA2和lktA8亚型,与A1和A6型相比呈现出较强的序列多样性。综上所述,Mh在我国东北部分地区牛群中的存在较为普遍,且A1和A6血清型是牛群中Mh的主要致病血清型。本研究获得的流行病学数据为我国牛群中溶血性曼氏杆菌的病原学以及疫苗研究提供科学依据。     

1株黄牛源多源曼氏杆菌的分离鉴定与转铁结合蛋白B结构预测

为确定引起肺炎病死黄牛的病原，从牛鼻拭子中分离纯化得到1株细菌，经生化试验和分子生物学方法鉴定为多源曼氏杆菌。利用生物信息学软件MEGA7.0对巴氏杆菌科细菌的16S rDNA和巴氏杆菌科、奈瑟菌科细菌的转铁结合蛋白B(TbpB)进行系统进化分析，并对TbpB进行了结构预测。结果显示，分离株16S rDNA基因序列与牛曼氏杆菌ZY190616株、肉芽肿曼氏杆菌ATCC49244株、多源曼氏杆菌10299株相似性最高，位于同一簇内，相似性超过97%;分离株TbpB序列与溶血曼氏杆菌、多源曼氏杆菌相似性较高，位于同一簇内，但与其他菌的TbpB序列相似性较低；TbpB结构模拟显示其序列与已经测定结构的溶血曼氏杆菌TbpB序列相似性较高。药敏试验显示该菌氨基糖苷类、β-内酰胺类抗生素有较强的耐药性，对头孢哌酮和氟喹诺酮类药物敏感小鼠致病性试验证实该分离菌株致死量约为2×10⁹CFU。结果表明，该分离株为多源曼氏杆菌，其TbpB序列与溶血曼氏杆菌和多源曼氏杆菌相似性较高。本研究为后续毒力基因相关研究和疫苗开发提供了理论基础。     

三株羊溶血性曼氏杆菌的分离与鉴定

试验从3例送检山羊的肺脏组织内均分离得到一种细菌,经分离培养、革兰染色、镜检、生化试验和16S r DNA基因序列分析,证明3株分离菌是溶血性曼氏杆菌。药敏试验结果表明3株分离菌对阿米卡星、美洛西林、多西环素等18种药物均敏感。     

肉牛溶血性曼氏杆菌的分离鉴定及耐药性分析

为探究四川省某肉牛养殖场从外地引种的西门塔尔牛出现体温升高、咳嗽和呼吸困难等症状的病原,本实验采集24份病牛鼻腔棉拭子,随机挑取10份进行细菌的培养、分离鉴定以及分离菌株的耐药性分析;同时采用特异性检测溶血性曼氏杆菌的PCR方法对全部病牛鼻腔棉拭子进行检测。结果显示,从10份病牛鼻腔棉拭子中分离鉴定出10株溶血性曼氏杆菌,分型PCR方法结果显示其中8株为荚膜血清6型,其余2株未定型;药敏试验结果显示,溶血性曼氏杆菌分离株对大多数氟喹诺酮类、氨基糖苷类、四环素类药物敏感,对部分β-内酰胺类和酰胺醇类药物耐药;特异性检测溶血性曼氏杆菌的PCR方法从24份鼻腔棉拭子中检测出23份阳性样品,表明该群病牛溶血性曼氏杆菌的感染率很高。本研究为该牛场的呼吸道病的防控提供了参考。     

牛溶血曼氏杆菌的分离鉴定及药敏试验

对1例不明原因死亡牛肺脏进行了病原学分离及鉴定。根据已报道的溶血曼氏杆菌基因序列,设计合成引物。通过细菌分离、染色、16S rRNA、溶血曼氏杆菌特异性PCR扩增、荚膜血清型及生化试验来确定该菌株。结果确定该牛感染了溶血曼氏杆菌,进一步分型确定为血清6型。成功从牛肺脏中分离到该菌株,从药敏试验结果可以看出该菌对大多数药物敏感。该试验对牛溶血曼氏杆菌病临床用药具有参考意义,也为牛溶血曼氏杆菌病临床诊断与治疗提供了技术参考。     

1株鸭疫里默氏杆菌的全基因组测序及耐药性与遗传进化分析

【目的】了解鸭疫里默氏杆菌的耐药性、基因组结构与遗传变异程度,为鸭疫里默氏杆菌耐药性与基因组研究提供参考。【方法】本研究对1株从病死鸭脑组织分离的鸭疫里默氏杆菌疑似菌株进行了PCR鉴定、耐药性检测及全基因组框架图测序,并基于16S rDNA与管家基因对其进行了遗传进化分析。【结果】测序数据经过质控与过滤后成功组装为1个包含38个contigs的基因组框架,使用Abricate软件、CARD在线数据库共检测出6种不同的耐药基因,其中4种与耐药表型符合;将基因序列提交至MLST数据库,发现了一种新ST型,定为ST93。构建的16S rDNA和管家基因进化树结果表明,分离菌株与2株鸭疫里默氏杆菌具有较近的亲缘关系。【结论】分离鉴定得到1株鸭疫里默氏杆菌,该菌株为多药耐药菌株,其基因组中携带多个耐药基因;鸭疫里默氏杆菌的基因变异程度较大,且存在跨区域流行传播风险。在临床用药时应注意合理用药,及时监控抗性基因的水平转移,防止鸭疫里默氏杆菌跨区域流行。     

安徽地区鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及药物筛选

为了解本地区鸭疫里默氏杆菌的流行血清型及耐药情况,笔者采集了各地疑似鸭疫里默氏杆菌感染的病鸭病料。无菌采集脑、心血、肝等组织接种于血清营养琼脂,进行细菌的分离培养。将疑似菌株进行革兰氏染色镜检。提取细菌DNA进行PCR鉴定和序列测定。通过玻片凝集试验和药敏试验,确定分离菌株的血清型和耐药性。结果共分离到37株鸭疫里默氏杆菌。玻片凝集试验显示,分离的鸭疫里默氏杆菌属于1型、2型、6型、7型、10型、11型及未知血清型,其中1型和2型所占比例最高。药敏试验结果显示,分离到的菌株对头孢类、喹诺酮类和氯霉素类药物敏感性较高。     

某牛场犊牛呼吸道疾病的诊断与药敏试验

2017年3月份,黑龙江省五常市某规模化奶牛场发生犊牛急性肺炎,为了确诊其病因,无菌采取7份呼吸道症状犊牛鼻拭子进行细菌分离鉴定,同时进行生化试验、PCR鉴定和药敏试验。结果表明:共分离得到3株细菌,符合大肠杆菌、巴氏杆菌、溶血性曼氏杆菌生化特性;PCR引物能有效扩增巴氏杆菌OmpH基因、溶血性曼氏杆菌lkt A基因和大肠杆菌Sta基因;分离的大肠杆菌对恩诺沙星、环丙沙星、阿米卡星中敏,巴氏杆菌对恩诺沙星、阿莫西林、青霉素高敏,溶血性曼氏杆菌对阿米卡星、头孢唑林、青霉素高敏;经检查7份鼻拭子中大肠杆菌感染1份,溶血性曼氏杆菌感染1份,巴氏杆菌感染5份。说明该牛场细菌污染严重,应引起重视。     

猪支气管败血波氏杆菌的分离鉴定

为了确定引起青岛市某猪场发病的主要病原菌,本试验对该猪场送检的病死猪进行剖检,从肺脏中分离得到一株细菌,随后进行分离菌的形态观察、生化试验、细菌16S r RNA基因测序与药敏试验。结果显示该株分离菌为革兰氏阴性杆菌;生化试验结果表明该株菌分解氨基酸、不分解糖类,与支气管败血波氏杆菌的生化试验结果大致相同;16S r RNA基因序列与支气管败血波氏杆菌(Gen Bank序列号:AP014582.1)同源性为100%;药敏试验结果表明该株分离菌对部分氟喹诺酮类、氨基糖苷类药物敏感。细菌分离鉴定和药敏试验的结果为猪场发生该病时如何用药治疗提供参考依据。     

贵州省鹅源1型鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定与致病性研究

从贵州省某临床发病鹅群分离出细菌1株,经形态学、生化特性、基因序列分析和血清型鉴定,证实该菌为1型鸭疫里默氏杆菌(AR).人工感染试验表明,分离RA对10 d雏鹅肌肉接种半数致死量(LD50)为1.096×107cfu,死亡鹅脑、肝脏处可分离到相应RA.结果为贵州省养鹅业疫病防控及在防疫鸭疫里默氏杆菌病免疫接种时选择适宜的疫苗提供参考.     

1株羊源溶血性曼氏杆菌的分离鉴定、药敏试验及致病性研究

[目的] 对某养殖场由呼吸道症状引发的山羊死亡病例进行病原学诊断,并对分离到的病原进行药敏试验及致病性分析。[方法] 无菌条件下剖检并采集死亡羊只肺脏及气管组织,接种于TSA固体培养基,37 ℃培养22~24 h;挑取疑似菌落,纯化后进行革兰染色镜检和生化鉴定;对经表型鉴定的分离菌株进行16S rDNA PCR扩增、测序,并进行遗传进化树构建和同源性分析;采用微量肉汤稀释法对分离菌株进行药敏试验;利用动物攻毒试验确定分离菌株对羔羊的致病性。[结果] 从临床样本中分离到1株细菌,命名为DMQ-Y-Mh。纯化后的分离菌株镜检为革兰阴性短杆菌,经生化鉴定以及16S rDNA PCR扩增、测序、同源性分析,将分离菌株鉴定为溶血性曼氏杆菌（Mannheimia haemolytica）。分离菌株对环丙沙星、阿奇霉素、庆大霉素敏感,对左氧氟沙星、土霉素、氟苯尼考中度敏感,对替米考星、恩诺沙星、泰乐菌素耐药。攻毒羔羊于72 h内死亡,剖检眼观气管及肺脏支气管内有黏性分泌物;肺脏组织有深红色病灶,与正常肺脏组织界限明显,可再次从死亡羔羊肺脏及气管组织分离到溶血性曼氏杆菌。[结论] 溶血性曼氏杆菌是造成该养殖场发生羊只死亡的病原菌,药敏试验结果为指导临床用药提供了参考。     

多杀性巴氏杆菌和溶血性曼氏杆菌混合感染引起山羊肺炎的诊断

青海省湟中区某山羊场发生呼吸道疾病,为确定引起本次呼吸道疾病的病原,笔者对病死羊进行剖检,并进行病原分离、鉴定。同时,采用PCR方法,对多杀性巴氏杆菌、溶血性曼氏杆菌、绵羊肺炎支原体和丝状支原体等呼吸道相关病原进行分子检测。结果发现,患羊临床表现以咳嗽、呼吸困难、精神萎靡和鼻内有粘性分泌物为特征的肺炎,细菌分离获得多杀性巴氏杆菌和溶血性曼氏杆菌,未分离获得其他细菌性病原和支原体。PCR检测发现多杀性巴氏杆菌和溶血性曼氏杆菌阳性。根据临床症状、剖检变化和实验室检测,最后确诊为由多杀性巴氏杆菌和溶血性曼氏杆菌共同感染山羊引起的肺炎。