鸭疫里氏杆菌南昌分离株的16S rDNA鉴定与药敏分析

为了对从南昌某疑似鸭疫里氏杆菌病的病死雏鸭大脑、肝脏中分离得到的1株菌株进行16S rDNA鉴定,并筛选敏感药物,试验采用染色镜检、PCR扩增、测序与序列比对分析及药敏纸片扩散法等对分离株进行研究。结果表明:经染色镜检,分离菌呈革兰氏染色阴性,菌体为单个或成双排列的小杆菌,无芽孢,将其命名为NC-RA1;PCR扩增得到大小约为1 500 bp的条带;分离株NC-RA1与鸭疫里氏杆菌16S rDNA基因同源性高达99%;分离株NC-RA1对氟苯尼考、替卡西林-克拉维酸、头孢噻肟敏感,对四环素中度敏感,对庆大霉素、卡那霉素等药物耐药。说明该分离株为鸭疫里氏杆菌,并且可以用氟苯尼考、替卡西林-克拉维酸、头孢噻肟对其进行防治。     

3株松鼠葡萄球菌的鉴定及耐药性分析

为了对从2017年送检的3个病例中分离得到的病料进行病原菌鉴定,试验采用细菌分离、纯化、生化鉴定及16S rDNA基因PCR扩增与序列分析法进行鉴定,并对分离菌进行药敏试验。结果表明:共分离得到3株分离菌,分别命名为J1、J2、J3株,3株分离菌均能发酵蔗糖和麦芽糖,产酸,不能发酵甘露醇和乳糖;PCR扩增分离菌,得到500 bp的目的条带,与NCBI中已知序列进行比对,均为松鼠葡萄球菌(同源性达99%);3株松鼠葡萄球菌对多西环素、阿莫西林、环丙沙星等药物敏感。说明3株分离菌为松鼠葡萄球菌,其对药物有不同程度的敏感性。     

北京鸭关节炎病例的细菌分离与鉴定

从表现为关节炎症状的北京鸭体内分离到23株细菌,通过16S rDNA测序鉴定,确定分离株分别属于葡萄球菌、棒状杆菌和大肠杆菌,另有一株球菌尚不明分类地位。药物敏感试验结果显示,阿莫西林、阿米卡星等对分离菌具有较好的抑菌作用,而氟苯尼考、阿奇霉素等抑菌效果较差。选取12个代表菌株进行动物试验,结果表明分离菌单独对肉鸭没有明显致病作用,说明这些细菌可能仅作为条件性致病菌存在于鸭场环境中。     

1株奶牛源约翰逊不动杆菌的分离鉴定

旨在了解从奶牛垫料中分离得到1株革兰阴性菌的病原特征,本研究通过形态学观察、生化试验、染色镜检、16S rDNA同源性分析等方法对分离菌进行鉴定,并采用药敏试验测定药物敏感性,小鼠攻毒试验确定分离菌株毒力情况.结果 表明,分离菌为革兰阴性菌;扩增的16S rDNA序列长度为1283 bp,与约翰逊不动杆菌的核苷酸相似性...     

一株鸡源性肠球菌的鉴定及耐药机制分析

本试验旨在鉴定一株从肉鸡体内分离的广谱耐药菌,并从分子生物学角度对该株细菌的耐药机理进行探讨。根据《常见细菌系统鉴定手册》标准对该菌进行培养特性、生化试验鉴定,设计1对16S rDNA通用引物扩增其16S rDNA并测序鉴定;根据该菌的药物敏感性试验结果设计了12对引物扩增其基因组上耐药基因。细菌培养特性和生化试验结果显示该菌为一株肠球菌,PCR扩增出大小为1465 bp的目的片段,药敏试验显示该株细菌耐受多种抗生素,PCR扩增其耐药基因发现存在ant(6)-iv、OXA-10、tetM、CTX-M-1、TEM基因。最终鉴定该株细菌为一株肠球菌,耐药基因的存在是其产生耐药性的原因之一。     

石河子地区奶牛乳房炎源肠球菌的分离鉴定及耐药性分析

为了解石河子地区奶牛乳房炎源肠球菌的分布情况及耐药性,采集石河子地区乳房炎奶牛奶样进行肠球菌的分离,通过生化特性鉴定和16S rRNA通用引物进行PCR扩增,选用19种抗菌药物对肠球菌进行了耐药性试验。结果表明:从患乳房炎奶牛的乳样中分离出10株肠球菌;通过生化特性鉴定和16S rRNA通用引物进行保守区PCR扩增后测序确定其中有4株是屎肠球菌,6株是粪肠球菌;分离菌株对杆菌肽、新霉素、青霉素、头孢氨苄和卡那霉素基本全部耐药,对氯霉素、氟苯尼考和恩诺沙星相对敏感,两种肠球菌中未发现万古霉素耐药株。     

貂源停乳链球菌似马亚种的分离鉴定

为了研究引起水貂肺炎死亡的病因,对送检的病死水貂进行剖检。从病死水貂病料中分离出了一株革兰阳性球菌,对其进行菌落形态观察、生化鉴定以及16S rDNA序列分析,构建系统进化树并进行同源性分析,同时对该菌株进行药敏试验。结果表明：根据分离菌的形态特征、生物化学特性,结合16S rDNA序列测定与进化树分析,将其鉴定为链球菌属的停乳链球菌似马亚种。药敏试验结果显示,该菌株对青霉素、阿莫西林、莫西沙星等药物敏感,但对四环素有较强的耐药性。     

猪源水獭漫游球菌的鉴定与耐药性分析

本实验从临床送检病死白猪的心血病料中分离得到一株革兰阳性球菌,对分离菌进行分离培养,观察其生长特性,进行生化特性和药物敏感性鉴定,并对其16S rRNA进行PCR扩增,测序结果表明,该菌为水獭漫游球菌。药敏试验显示,分离株对美洛西林有较高的敏感性;但对广谱类氟苯尼考、诺氟沙星、左氧氟沙星及大部分氨基糖苷类抗菌素都有较强的耐药性。     

羊源屎肠球菌的分离鉴定与生物学特性研究

某养殖场羔羊突然死亡,为了查明死亡原因,采集病死羔羊病变肺脏等进行细菌的分离培养,分离到1株革兰阳性、短链状排列的球菌,在血琼脂培养基上呈β溶血。通过对该菌的16S r RNA进行扩增和序列分析,其与屎肠球菌的同源性高达99%,应用通用引物对16S～23S rRNA的序列进行PCR扩增产生2个条带,分别为522 bp和619 bp。用Vitek 2全自动微生物分析仪鉴定为屎肠球菌,可能性为98%。该菌对万古霉素和米诺环素敏感,对青霉素、庆大霉素等药物表现耐药。结果显示,分离到的细菌为屎肠球菌,且该菌具有多重耐药性,本实验为兽医临床肠球菌的分离和鉴定提供了参考。     

多元摩拉菌分离株生物被膜形成能力及其致病和耐药情况研究

为了研究分离的猪多元摩拉菌生物被膜形成能力及相关特性，了解其致病性和耐药情况，试验采集天津市某猪场因患猪繁殖与呼吸道综合征并继发细菌感染而导致死亡的猪的心脏、肺脏进行细菌分离培养、生化试验、16S rDNA基因序列测定，并对分离菌进行药敏试验、生物被膜及相关基因检测、PK-15细胞黏附试验、致病力研究及毒力基因检测。结果表明：分离菌为革兰氏阴性球菌且多成对排列；氧化酶试验呈阳性，不分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、蕈糖、木糖，PCR产物大小为868 bp,结合16S rDNA测序结果经BLAST比对鉴定为摩拉菌属成员，与多元摩拉菌(M.pluranimalium)序列的同源性达99.71%,将分离菌命名为M.pluranimalium 1120;M.pluranimalium 1120对氟苯尼考、林可霉素、阿莫西林、恩诺沙星、左氧氟沙星耐药，对头孢噻肟中度敏感，对头孢曲松敏感；在培养至第60小时时生物被膜形成量达到峰值，并检测到生物被膜基因LuxS、LpxM、CRP、nanH、SiaB;对PK-15细胞的平均黏附率为13.3%,黏附能力较弱；对小鼠致病性弱，腹腔注射1×10¹¹     

狐狸源小肠肠球菌分离鉴定与药敏试验

为确定某养殖场患病死亡狐狸的病原菌,本试验对病死狐狸进行剖检和细菌分离培养、生化鉴定以及16S rDNA鉴定、动物致病性试验和药敏试验。结果显示,分离菌株为革兰阳性球菌,经过生化鉴定和16S rDNA序列分析,确定分离菌株为小肠肠球菌,并命名为E.hirae QHD-1;动物回归试验结果显示,分离菌株E.hirae QHD-1对小鼠具有较强的致病性,LD_(50)为1.26×10~4 CFU;药敏试验结果显示,分离菌株E.hirae QHD-1对氨苄西林和恩诺沙星等药物敏感,对替米考星、阿米卡星等耐药;毒力因子检测结果显示,该分离株具有较强的致病力。毛皮动物小肠肠球菌的感染病例尚未见有报道,本试验丰富了狐狸病原菌相关的研究,并为防控该菌引起的疾病提供了重要参考资料。     

1例摩氏摩根菌引起BALB/c小鼠感染的诊治

本试验对某实验动物养殖场送检的一批BALB/c小鼠进行剖检,观察病理变化,对病变组织进行细菌的分离纯化鉴定。利用16S rRNA基因对分离细菌进行PCR扩增、测序及系统进化树分析。分离菌株进行动物回归试验和药敏试验。经形态学及分子生物学鉴定,分离菌株为摩氏摩根菌,对小鼠有很强的致病性。药敏试验表明,该菌耐药性高,仅对新霉素、链霉素、左氧氟沙星、氟苯尼考敏感,选用敏感药物新霉素和氟苯尼考进行联合用药,疫情得到有效控制。     

奶山羊D型产气荚膜梭菌的分离鉴定

为鉴定2018年夏季昆明市某奶山羊场持续发生羊急性死亡原因,从该场采集病料进行细菌分离鉴定、小鼠毒力试验、毒素基因检测及序列分析、16S rDNA序列分析比较和药敏试验。结果显示:引起羊发病的病原菌鉴定为D型产气荚膜梭菌;对其2个毒素基因α、ε及16S rDNA序列分析结果表明,毒素基因及16S rDNA高度保守,不同毒素型的菌株16S rDNA序列100%同源,经BLAST比对的2个毒素基因与参考序列之间核苷酸完全同源;分离株在接种小鼠后48 h死亡,表明其毒力较强;药敏试验结果表明,分离菌对恩诺沙星、青霉素、氟苯尼考、呋喃唑酮、氯霉素等抗生素均高度敏感,而对卡那霉素、庆大霉素和链霉素等耐药。试验结果可为羊产气荚膜梭菌感染的临床用药提供参考。     

16S rDNA序列分析法鉴定鸡源肠道乳酸菌

从北京郊区某散养鸡场健康成年鸡肠道中分离纯化得到12株未知菌,分别提取DNA,采用16S rDNA扩增通用引物,经PCR扩增后,测定其16S rDNA序列,测序结果与Gen Bank数据库中的序列作对比,根据序列相似性,利用MEGA软件,对12株未知菌序列构建进化树。经鉴定5株为乳酸杆菌、3株为唾液乳杆菌、2株为肠球菌、1株为罗伊氏乳杆菌及1株为葡萄球菌。结果表明,16S rDNA序列分析技术与传统方法相比具有简便和快速等优点,提高鉴定效率,可进行乳酸菌种级水平鉴定,适合用于实验室内对乳酸菌的鉴定。     

细菌分离与基因扩增确诊水貂出血性肺炎

经细菌分离培养与小鼠接种实验,从急性死亡、鼻孔流血和剖检表现为出血性肺炎的急性死亡水貂脏器中分离获得可使小鼠死亡的革兰阴性,单个、成双或呈短链状的中等大小杆菌。应用绿脓杆菌16S核糖体DNA引物进行PCR扩增与序列分析,得到与预期片段大小相一致的片段,经序列测定证明与假单胞菌属的绿脓杆菌16S核糖体DNA序列相一致。药敏试验表明该细菌对氟苯尼考敏感,临床应用该药后疫情得到迅速控制。     

猪源肠球菌中氟苯尼考耐药性调查及fexA基因环境研究

本研究旨在调查猪场中肠球菌对氟苯尼考的耐药性,检测氟苯尼考耐药基因,并测定肠球菌中氟苯尼考耐药基因fexA的基因环境,从而分析其可能的传播机理。以四川某猪场分离鉴定的50株肠球菌为研究材料,开展分离株对氟苯尼考的药物敏感性试验。运用PCR技术检测分离株中氟苯尼考耐药基因cfr、fexB、fexA、floR和estDL136。运用热不对称性PCR（TAIL-PCR）技术获得fexA基因周围序列信息,分析其基因环境。运用反向PCR技术验证序列中环化结构的存在,同时运用交叉PCR技术检测20株猪源肠球菌fexA基因的基因环境。结果显示,在分离出的50株肠球菌中,有34株对氟苯尼考耐药（MIC ≥ 16 mg/L）,耐药率为68%。PCR结果显示,20株含有fexA基因,28株含有fexB基因,14株同时含有这两种基因。TAIL-PCR和测序结果显示,分离株DKC5中fexA基因存在于12 945 bp的Tn554转座子中。Tn554转座子可形成环化结构,其中的重复序列可形成含有2 395 bp的环化结构。本试验结果表明,猪源肠球菌对氟苯尼考耐药率较高,主要由fexA和fexB基因介导,fexA基因存在于Tn554结构中。预测fexA基因是经两次插入整合后进入DKC5分离株基因组序列的,这为fexA基因的水平传播提供了遗传依据。     

杂交鲟维氏气单胞菌的分离鉴定及其耐药性分析

试验旨在对贵州省某养鱼场发病杂交鲟体内分离的优势菌株进行鉴定、致病力探究及耐药性分析。本试验通过革兰染色、生化鉴定、细菌16S rDNA基因分析、动物回归试验、药敏试验、部分毒力基因检测与耐药基因检测。结果显示:分离菌为革兰阴性短杆菌,细菌16S rDNA扩增测序与比对,得大小为1 477 bp的片段,其片段基因序列与GenBank中的维氏气单胞菌序列相似度达99.00%,药敏试验显示:分离菌对环丙沙星、氟苯尼考、头孢哌酮等药物敏感,对四环素、磺胺异唑、苯唑西林药物出现耐药,耐药基因检测显示:分离菌含有耐磺胺基因(Sul1,sul2)、Ⅰ类整合子(Intl1)3种耐药基因,毒力基因检测显示:分离菌含有气溶素(Aer)和粘附素(Aha)两种毒力基因。综合本试验结果,分离菌为维氏气单胞菌(A.veronii),含有毒力基因,并对环丙沙星、氟苯尼考、头孢哌酮等药物敏感。本试验对贵州地区鲟发病流行的病因做出准确诊断,为该地区细菌性鱼病预防与合理用药提供依据。     

猪粪便中致病性病原菌检测与耐药性分析

为了检测猪粪便中的致病微生物并分析其耐药性,试验采用细菌分离培养、生化试验、16S rRNA PCR检测与测序、致病性试验等方法对从镇江地区不同养猪场采集的100份粪便样品进行病原菌鉴定,采用K-B药敏纸片法测定致病性病原菌的耐药性。结果表明:从100份粪便样品中分离得到大肠杆菌25株、沙门氏菌17株、金黄色葡萄球菌15株,其中致病性大肠杆菌20株,致病性沙门氏菌15株,致病性金黄色葡萄球菌10株;分离菌16S rRNA PCR扩增得到大小约为1 492 bp的目的条带;57株分离株的PCR产物测序结果与GenBank中参考株基因序列的同源性高于97.0%;致病性大肠杆菌对阿莫西林、环丙沙星、磺胺间甲氧嘧啶等12种药物的耐药率在65.0%～95.0%之间,致病性沙门氏菌对阿莫西林、氟苯尼考、庆大霉素等12种药物的耐药率在46.7%～100%之间,致病性金黄色葡萄球菌对阿莫西林、庆大霉素、氟苯尼考等9种药物的耐药率在50.0%～100%之间,且存在多重耐药性。     

竹鼠源棒状杆菌分离鉴定及致病性分析

从病死竹鼠体内分离到1株细菌,通过形态学观察、生化试验鉴定、16S rDNA基因测序分析及系统进化树构建等方法对分离菌种属进行确定,并采用纸片扩散法进行药敏试验,PCR方法检测耐药基因和毒力基因,人工感染小鼠试验确定分离菌的致病力。病原鉴定显示,分离菌为革兰阳性杆菌,16S rDNA基因测序及BLAST比对显示其与棒状杆菌序列相似度达92.1%～99.2%,结合生理生化鉴定结果确定分离菌为棒状杆菌;药敏试验显示,该分离菌对氟苯尼考、头孢氨苄和青霉素等药物敏感,对复方新诺明、四环素和红霉素等药物表现耐药,耐药基因检测结果显示为oqxB、tetX、sul1和ermF阳性,与药敏试验表型一致;该菌对小鼠有致病性,毒力基因检测发现,分离菌携带fyuA和papA。本研究为竹鼠棒状杆菌病预防及合理用药提供依据。     

猪源乳酸菌分子生物学鉴定及黏附性特征

采用16S rDNA序列分析法对实验室分离得到的3株乳酸菌(标号分别为H菌、031菌和HN菌)进行分类鉴定.结果显示H菌、031菌和HN菌16S rDNA序列相似性为99％的对应菌株分别是唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)和约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii);以永生化猪小肠上皮细胞ZYM-SIEC02作为体外模型,通过革兰氏染色法观察,结果表明:H菌在4h、8h、12h、16h、20h、24h和28h对猪小肠上皮细胞的黏附性不同,其中以孵育16h和20h的菌黏附性最好,处于该菌生长稳定期,单个细胞黏附细菌个数分别达到14.61±7.23和15.20±4.18个.