一种有效提取无核荔枝幼胚总RNA的方法

笔者采用改良CTAB法从富含多酚的无核荔枝幼胚中提取总RNA,并用甲醛变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计对所提RNA质量进行检测,旨在为多糖、多酚含量较高的植物材料RNA的提取提供一种有效方法。     

花生幼胚RNA提取方法研究

花生(ArachishypogaeaL.)幼胚体积很小,不易剥取且富含多糖、酚类等化合物,因此以花生幼胚为材料提取RNA时会遇到很大困难.采用改进的Trizol法和异硫氰酸胍一步法成功提取出了高质量的花生幼胚总RNA,后续实验证明具有良好的逆转录活性.介绍了花生幼胚快速剥取的方法.     

油松成熟胚总RNA的提取方法

[目的]对油松成熟胚总RNA的提取方法进行比较,以期得到完整的高质量油松成熟胚RNA。[方法]以油松成熟胚为材料,用SDS法、Trizol法和CTAB法及改良的SDS法对油松成熟胚总RNA进行提取,以紫外分光光度计测OD值,并用琼脂糖凝胶电泳检验提取效果。[结果]改良SDS法提取的RNA产率高,完整性好,A260/A280为1.97,A260/A230为2.08,28 S、18 S、5 S条带清晰且28 S亮度是18 S的2倍。通过RT-PCR检测,ds cDNA片段的弥散带分布范围在0.3～3.0 kb,进一步验证改良的SDS法可获得高质量的RNA,用于后续的分子生物学研究。[结论]改良SDS法成本低,操作简单,提取时间短,RNA质量好,是多酚多糖植物总RNA提取比较有效的方法。     

荔枝原生质体培养再生植株（简报）

荔枝原生质体培养再生植株（简报）俞长河陈振光吕柳新（福建农业大学园艺系，福州３５０００２）关键词荔枝；原生质体；幼胚；培养；再生植株中图分类号Ｓ６６７．１以荔枝（ＬｉｔｃｈｉｃｈｉｎｅｎｓｉｓＳｏｎｎ．）主栽品种下番枝的幼胚为材料，诱导出松散颗粒状...     

提高无核葡萄胚挽救中幼胚成苗率的研究

 【目的】提高无核葡萄胚挽救中幼胚的成苗率。【方法】以7个杂交组合的胚珠为试材,研究不同基因型、不同胚珠发育培养基、添加不同氨基酸及低温处理采后幼果对无核葡萄胚成苗率的影响。【结果】在无核葡萄胚离体发育中,母本和父本对胚的成苗均有影响;在二倍体无核葡萄作母本的杂交组合中,以二倍体无核葡萄作父本比以四倍体有核葡萄作父本更有利于胚的成苗。在3种不同配方的培养基中,适宜于无核葡萄离体幼胚发育和成苗的培养基是MM4。ER添加4 mmol?L-1脯氨酸培养基最有利于无核葡萄胚的发育。低温处理3 d对红宝石无核×森田尼无核和红宝石无核×黑奥林胚的成苗促进最大。【结论】无核葡萄胚挽救的适宜培养基是ER+4 mmol?L-1脯氨酸或MM4培养基,低温处理幼果3 d能有效提高二倍体无核葡萄×二倍体无核葡萄胚挽救中胚的成苗率。     

荔枝皮多酚提取工艺研究

通过单因素试验与正交试验研究荔枝皮多酚的最佳提取工艺。结果表明,荔枝皮多酚的最佳提取工艺如下:提取温度70℃,乙醇浓度60%,料液比1∶7,第1次提取时间40 min,在此提取工艺条件下荔枝皮多酚提取物的平均得率为13.70%,荔枝皮多酚的平均含量为5.40%。     

奥迪亚无核葡萄胚抢救技术研究

以奥迪亚无核葡萄为试材,对其果实发育及胚抢救技术进行了研究。结果表明：花后49 d是奥迪亚无核葡萄幼胚抢救的最佳时期;NN69＋NAA 0.2 mg/L＋GA 0.4 mg/L＋BA 0.5 mg/L是奥迪亚无核葡萄的最佳胚抢救培养基,其胚发育率达到76.67%,胚萌发率达到26.67%;低温培养可促进其幼胚的发育。     

观赏山梨叶片总RNA的提取及质量分析

为了从富含多糖和多酚等物质的观赏山梨幼叶中提取和分离出高质量的RNA,利用Trizol法、改良的Trizol法、异硫氰酸胍法、硼砂-CTAB法和硼砂-SDS法提取观赏山梨叶片总RNA。通过RNA产率、纯度、电泳图谱和RT-PCR结果等分析来确立适用于观赏山梨RNA分离的方法。结果表明,硼砂-SDS法提取的RNA呈现出28S rRNA,18S rRNA和5S rRNA三条较清晰的条带,RNA的得率和纯度均较高、很少有降解。RT-PCR结果进一步证实了硼砂-SDS法提取的观赏山梨叶片总RNA可用于分子生物学的下游试验。此方法简便易行,成本也较低,适合于富含多糖、多酚植物材料RNA的提取。另外4种方法获得的RNA得率、纯度较低,降解严重,有较多小分子和盐存在,因此不适合用于观赏山梨总RNA的提取。     

无核荔枝种子败育的胚胎学研究

无核荔枝是一个珍贵品种,由于其上有双蒂果同时发育、无种子（完全无核）、假种子丰富、无明显大小年之分等特征,值得大力推广,无核荔枝的大孢子在发育各个阶段均可出现败育现象,结果导致无法形成胚,这是产生无核的主要原因。     

富含多糖·多酚植物组织RNA的提取

[目的]介绍一种适合于富含多糖、多酚植物材料的RNA提取方法。[方法]采用改进的异硫氢酸胍法提取植物材料的RNA,用紫外分光光度计测定其浓度和纯度,并通过RT-PCR进一步检测其质量。[结果]提取总RNA中的28、18、5s条带清晰,比例适中,OD260nm/OD280nm。为1．8—2．0。以提取的总RNA反转录合成的cDNA为模板,能扩增出预期长度的片段,无非特异性产物。[结论]该方法简便易行,成本较低,适合于富舍多糖、多酚植物材料的RNA提取。     

荔枝胚性愈伤组织基因枪转化系统的建立

荔枝是我国南方重要热带亚热带特产果树之一 .建立高效、稳定的荔枝转基因系统 ,对于应用现代生物技术进行荔枝的品种改良具有重要意义 [1] .我们在已建立的荔枝胚性愈伤组织 ( embryogenic callus,EC)体胚发生系统 [2 -4] 及其基因枪转化初步探讨 [5] 的基础上 ,进一步进行了 EC基因枪转化系统的建立研究 ,为将目的基因导入荔枝奠定了重要基础 ,并获得荔枝细胞工程研究中很有价值的有抗性筛选标记的荔枝胚性细胞系 .本研究中 ,以荔枝品种下番枝 (东刘 1号 )幼胚诱导的、长期继代保持的 EC为试验材料 ,建立了荔枝 EC高效遗传转化系统 :…     

葡萄胚挽救技术优化及无核和玫瑰香味新种质创制

【目的】研究葡萄玫瑰香味性状,为无核香味葡萄育种提供重要的材料基础,探究亲本基因型、胚发育形态以及生长调节剂对胚萌发的影响,进一步优化无核×玫瑰香味组合胚挽救体系,并结合分子标记技术初步对杂交后代进行无核性状鉴定。【方法】利用顶空固相微萃取结合气质联用方法,对10个玫瑰香味和无玫瑰香味葡萄品种的果实香味物质含量进行测定,从中筛选出浓香型品种作为亲本;结合课题组前期研究结果,以6个玫瑰香味品种为父本,5个欧洲无核品种为母本,配置13个杂交组合;无菌条件下,从幼果中剥离杂种胚珠,离体黑暗培养8周,随后将发育的杂种幼胚接种于添加不同激素浓度和比例的胚萌发培养基中,通过优化胚萌发培养基配方,提高幼胚萌发率和成苗率。幼苗经温室炼苗后,将成活的F1代移栽至大田。利用分子标记早期辅助选择具有无核性状的F1代杂种株系。【结果】萜烯类物质是玫瑰香味的主要呈香物质,8个玫瑰香味品种均能检测到萜烯类物质,其总含量为0.0246—1.3824。筛选出‘亚历山大’‘阳光玫瑰’‘玫瑰香’等玫瑰香味物质含量相对较高的品种,可作为杂交亲本,用于创制兼具无核和玫瑰香味新种质;利用胚挽救技术从13个杂交组合获得杂种株系1 284个,移栽成活697株;以‘红宝石无核’和‘火焰无核’作为母本的后代成苗率较高,以‘阳光玫瑰’‘爱神玫瑰’‘红亚历山大’为父本的胚挽救成苗较好,其中‘红宝石无核’ב爱神玫瑰’杂交后代胚发育率和成苗率相对较高,分别为48.59%和51.71%;幼胚萌发率以WPM为基础培养基,添加1.0 mg·L-1 KT+0.5 mg·L-1NAA+1.0 mg·L-1 ZT的生长调节剂时较高,达11.33%,高于对照的7.41%;分别利用3种无核相关分子标记GLSP1-569、SCF27-2000和SCC8-1018,对101个株系进行无核性状检测,表明使用不同的标记在27个株系均检测到特异性条带,初步确定以上携带无核特异条带的株系为无核株系。【结论】‘亚历山大’和‘阳光玫瑰’的香味物质含量高,并且与欧洲葡萄杂交后其胚挽救效率高,是合适的香味父本材料;而‘红宝石无核’‘火焰无核’适合作为母本。胚萌发培养时,以WPM培养基添加适当浓度的KT及ZT有较好的促生根效果。通过分子标记对杂交F1代无核性状检测率为26.73%。目前开发的玫瑰香味标记较少,本研究获得的杂种后代可为研究玫瑰香味基因标记提供重要的试材。     

无核葡萄胚挽救技术研究

[目的]研究无核葡萄胚挽救过程中的一些主要影响因素,为今后开展无核葡萄胚挽救育种提供参考。[方法]以6个无核葡萄杂交及自交组合未成熟胚珠为试材,研究了接种时期、培养基及激素浓度对无核葡萄胚挽救效果的影响。[结果]各组合适宜的胚珠接种时期为：火星无核×无核白鸡心在花后40d,金星无核×康能无核在花后55d,优无核×布朗无核在花后45d;采用ER为基本培养基更有利于胚珠的发育和萌发;不同品种的胚珠对培养基中IBA浓度要求不同,幼胚发育程度较高,败育时期较晚的胚珠,适合较低的IBA浓度,胚发育程度较低,败育较早的胚珠则需要较高的IBA浓度。[结论]接种时期、培养基种类和培养条件对无核葡萄胚挽救的成功都非常重要,且各条件的确立要视具体品种而定。     

南方地区无核葡萄胚挽救及其取样时间研究

[目的]探讨无核葡萄品种离体培养的培养条件,并确定最佳取样时期.[方法]选取南方无核葡萄品种中5个自然授粉胚珠和4个杂交组合的胚珠为试材,通过形态学观察确定取样时间,探索适宜南方无核葡萄品种的胚挽救程序.[结果]适宜火焰无核×寒香蜜、碧香无核、火焰无核、奥迪亚无核等的胚挽救程序为授粉后30 ～40 d剥取胚珠接种在ER培养基,暗培养90d,取胚转入WPM培养基上成苗.[结论]该研究可为提高幼胚离体发育和萌发成苗率提供科学依据.     

无核荔枝MYB转录因子基因克隆及进化分析

为获得在无核荔枝中胚珠退化过程中差异表达全长MYB转录因子基因,并为其功能研究打下基础,根据从已构建的无核荔枝胚珠败育SSH消减文库中得到的差异表达的MYB转录因子EST序列,提取高质量的总RNA,运用SMART RACE技术,获得一个1177bp的MYB基因核苷酸序列。生物信息学分析表明,该序列含有879 bp的开放阅读框,推测的蛋白质为292个氨基酸,具有2个SANT结构功能域,在系统发育树上与大豆MYB基因亲缘关系最近。该基因为MYB基因家族中的新成员。     

无核葡萄胚挽救中影响胚发育的因子

 【目的】提高无核葡萄胚挽救育种效率。【方法】以12个无核葡萄品种或株系的自然授粉胚珠和6个杂交组合的胚珠为试材,研究不同配方的培养基、不同培养基相态、低温处理、光照和暗培养对无核葡萄的胚发育率的影响。同时,研究花后不同时间取样,摘取果粒取出胚珠培养的适宜时间。【结果】在供试的8种培养基中,Nitsch＋GA3 0.5 mg?L-1＋IAA 1.5 mg?L-1和MM3培养基最适宜于无核葡萄离体幼胚的发育,其次是ER培养基。在供试的固相、液相和固液双相的3种相态培养基中,以固液双相培养基进行无核葡萄品种底来特离体胚珠培养为最好。在胚珠离体培养阶段进行低温培养,降低了胚发育率。暗培养有利于幼胚的发育,可提高胚发育率。不同无核葡萄品种和组合在花后摘取果粒,取出胚珠进行离体胚挽救的适宜时间不同,无核白为35 d、森田尼无核为40 d、火焰无核为40 d、底来特为60 d、黎明无核为55 d、无核紫为70 d、优无核为50 d、皇家秋天为70 d、奇妙无核为60 d、奥迪亚无核为40 d、红宝石无核×贵妃玫瑰为70 d。【结论】本研究中不同无核葡萄品种进行胚挽救宜选择Nitsch＋GA3 0.5 mg?L-1＋IAA 1.5 mg?L-1、MM3或ER培养基,在（25±2）℃常温下进行固液双相暗培养,有助于提高胚挽救效率。     

荔枝胚性愈伤组织染色体数目变异研究初报

荔枝 ( Litchi chinensis Soon.)是我国南方著名的一种热带亚热带木本果树 .自然界的荔枝皆为二倍体 .利用体细胞无性系变异 ,人工筛选出非整倍体或多倍体材料 ,对于丰富荔枝种质资源、育种以及基因定位和功能研究等方面有重要价值[1 ,2 ] .自 1 996年以来 ,我们以“下番枝”、“乌叶”、“元红”等荔枝品种为材料 ,从幼胚、花药等外植体诱导出胚性愈伤组织 ,进行长期继代保持和植株再生研究 ,以期通过体细胞胚胎发生获得非整倍体或多倍体变异材料 .直接用解离液 [酒精 (体积分数为 0 .95 ) +浓 HCl(体积比 =1∶ 1 ) ]解离胚性愈伤组织 ,…     

一种有效的葡萄叶片总RNA提取方法

RNA的提取技术是现代分子生物技术的基础,植物RNA的提取比较困难.实验以新鲜的葡萄叶片为材料,采用SDS、CTAB相结合的方法,进行酚/氯仿的提取,消除了DNA及植物中较多的多糖、多酚等污染,提取到较纯净的总RNA,此方法适合于葡萄叶片总RNA的提取,试剂简单经济,实验结果稳定,重现性强.     

葡萄胚挽救技术优化及无核和玫瑰香味新种质创制

【目的】研究葡萄玫瑰香味性状,为无核香味葡萄育种提供重要的材料基础,探究亲本基因型、胚发育形态以及生长调节剂对胚萌发的影响,进一步优化无核×玫瑰香味组合胚挽救体系,并结合分子标记技术初步对杂交后代进行无核性状鉴定。【方法】利用顶空固相微萃取结合气质联用方法,对10个玫瑰香味和无玫瑰香味葡萄品种的果实香味物质含量进行测定,从中筛选出浓香型品种作为亲本;结合课题组前期研究结果,以6个玫瑰香味品种为父本,5个欧洲无核品种为母本,配置13个杂交组合;无菌条件下,从幼果中剥离杂种胚珠,离体黑暗培养8周,随后将发育的杂种幼胚接种于添加不同激素浓度和比例的胚萌发培养基中,通过优化胚萌发培养基配方,提高幼胚萌发率和成苗率。幼苗经温室炼苗后,将成活的F₁代移栽至大田。利用分子标记早期辅助选择具有无核性状的F₁代杂种株系。【结果】萜烯类物质是玫瑰香味的主要呈香物质,8个玫瑰香味品种均能检测到萜烯类物质,其总含量为0.0246—1.3824。筛选出‘亚历山大’‘阳光玫瑰’‘玫瑰香’等玫瑰香味物质含量相对较高的品种,可作为杂交亲本,用于创制兼具无核和玫瑰香味新种质;利用胚挽救技术从13个杂交组合获得杂种株系1 284个,移栽成活697株;以‘红宝石无核’和‘火焰无核’作为母本的后代成苗率较高,以‘阳光玫瑰’‘爱神玫瑰’‘红亚历山大’为父本的胚挽救成苗较好,其中‘红宝石无核’ב爱神玫瑰’杂交后代胚发育率和成苗率相对较高,分别为48.59%和51.71%;幼胚萌发率以WPM为基础培养基,添加1.0 mg·L^-1 KT+0.5 mg·L^-1 NAA+1.0 mg·L^-1 ZT的生长调节剂时较高,达11.33%,高于对照的7.41%;分别利用3种无核相关分子标记GLSP1-569、SCF27-2000和SCC8-1018,对101个株系进行无核性状检测,表明使用不同的标记在27个株系均检测到特异性条带,初步确定以上携带无核特异条带的株系为无核株系。【结论】'亚历山大'和'阳光玫瑰' 的香味物质含量高,并且与欧洲葡萄杂交后其胚挽救效率高,是合适的香味父本材料;而‘红宝石无核’‘火焰无核’适合作为母本。胚萌发培养时,以WPM培养基添加适当浓度的KT及ZT有较好的促生根效果。通过分子标记对杂交F₁代无核性状检测率为26.73%。目前开发的玫瑰香味标记较少,本研究获得的杂种后代可为研究玫瑰香味基因标记提供重要的试材。     

几种无核葡萄品种的胚珠和胚的败育进程

无核葡萄胚败育是一个极其复杂的生物学过程[1]。Ledbetter(1989)等曾描述过大孢子体发育及受精和合子胚的第一次分裂过程,但未谈到合子胚的发育和败育问题[2]。张莉等(1991)曾报道过几种无核葡萄胚珠和胚发育的特点[3]。但胚珠败育与胚的败育是否存在相关性和同步性,败育的相关基因是否是同一基因,这些问题尚不清楚。为此,我们以江苏地区近年引进的5个无核葡萄品种为试验材料,进一步观察其胚珠和胚的发育和败育进程。1　材料与方法供试品种5个:森田尼无核、克瑞森无核、奥迪亚无核、幻想无核和优无核,均为种子败育型无核品种。5个品种…