~(125)I对农作物污染的研究

本文研究了~(125)I对玉米、小麦、大麦等5种作物幼苗,及植物叶片,卒孕—抽穗期水稻,结荚期大豆,抽穗期冬麦,开花期豌豆等的污染。结果表明,在相同污染条件下,各种植物幼苗被污染的水平不同,~(125)I可由污染叶片向新生叶片、豆荚、根部转移,也可由茎表面横向转移至内部,~(125)地可由土表向深层移动。     

~(125)I标记斜纹夜蛾(Spodoptera litura)病毒DNA探针的制备

用~(125)I碘化法标记斜纹夜蛾病毒DNA(SLNPV-DNA),所制备的~(125)I-DNA用于膜上DNA-DNA分子杂交实验。结果证明,~(125)I-SLNPV-DNA探针具有特异性,可供应用。     

五指山小型猪生长激素及其受体基因的克隆与序列分析

动物生长发育调控是一个高度复杂而精细的生理过程,受多种因素如神经、体液、遗传、营养及环境等的影响。其中,动物神经内分泌生长轴各因子(激素、受体、结合蛋白等)及其基因对动物的生长发育起着关键的作用。正常情况下,下丘脑接受体内外的信息,生长激素释放激素(grow thhorm one releasing horm one,GHRH)和生长抑素(som atostatin,SS),调节垂体生长激素(grow thhorm one,GH)的分泌,GH通过与生长激素结合蛋白(grow th horm one b ind ing protein,GHBP)结合而运输,与靶器官上的生长激素受体(grow th horm one receptor,GHR)结合,促使类胰岛素生长因子(insu lin-like grow th factors,IGFs)的产生并进入血液循环,IGFs再通过其结合蛋白(insu lin-likegrow th factor b ind ing protein,IGFBP)转运到全身组织细胞,促使组织细胞的生长与分化。五指山猪(Wuzhishan Pig,WZSP)是一种原产于中国海南省山区的小型猪。五指山猪成年体重仅为35 kg,是正常猪体重的15%~30%,是一种频临灭绝的珍稀物种。五指山猪具有以下特征:体型小,性成熟早,肉质好,耐近交和遗传稳定。为了开发和应用这一珍稀猪种的遗传资源,中国农业科学院北京畜牧兽医研究所从1989年就已经开始对五指山猪进行近交系培育,现在已经获得五指山猪近交系18代(近交系数为0.974),但五指山猪的矮小机理至今不明。为了探讨五指山猪矮小的分子机理,对五指山猪生长激素及其受体基因进行了克隆和序列分析。从纯种近交16代五指山猪的垂体和肝组织提取总RNA,根据GenBank中猪生长激素及其受体基因的序列(登录号分别为X53325,NM214254)设计特异性引物,对五指山猪生长激素及其受体基因进行扩增,然后对PCR产物进行回收、克隆测序。测序结果表明,五指山猪生长激素基因开放阅读框长651 bp,编码216个氨基酸,其中包含26个氨基酸的信号肽;生长激素受体基因编码区编码639个氨基酸,其中包含18个氨基酸的信号肽。运用生物学软件DNAssist 2.2将五指山猪和普通猪的生长激素基因编码区进行比对发现,五指山猪生长激素基因的编码区有4个突变:26号位置发生C→T突变,该突变导致缬氨酸代替丙氨酸;65号位置发生G→A突变,该突变导致谷氨酰胺替换精氨酸;114号位置发生T→C突变,252号位置发生A→G突变,但是这两个突变都未引起所编码氨基酸的变化。五指山猪和普通猪生长激素受体基因比对发现,1143号位置的G→T突变引起天冬氨酸替换谷氨酸;1225号位置的G→T突变导致丝氨酸替换丙氨酸;1666号位置C→G突变导致缬氨酸替换亮氨酸;1739号位置C→G突变导致丙氨酸被甘氨酸所代替;1801号位置G→A突变导致缬氨酸被异亮氨酸代替;1248号位置G→A突变,1287号位置G→A突变和1827号位置G→C突变均为同义突变,未引起相应编码氨基酸的变化。五指山猪生长激素基因有两处氨基酸替换,这两处替换发生在信号肽区,对成熟蛋白的结构和功能没有影响,但是有可能会影响蛋白的运输。五指山猪生长激素受体基因突变都发生在生长激素受体的胞内结构域,这些突变可能改变生长激素受体的空间构像,从而对生长激素受体的胞内信号转导产生一定的影响,影响生长激素-生长激素受体-胰岛素样生长因子轴的信号级联,削弱生长激素的促生长作用。     

猪下丘脑生长激素释放激素（GHRH）基因克隆及用作DNA探针的研究

猪生长激素释放激素（Growth Hormone Releasing Hormone，GHRH）是猪下丘脑中分泌的一种多肽类激素。研究表明，注射GHRH可以显著提高猪的生长速度和瘦肉率。其作用机理是GHRH作为垂体生长激素（Growth Hormone， GH）的正性调控因子，能促进垂体合成和分泌GH。由于注射GHRH给生产带来了诸多不便，因此近年来人们尝试通过一些促生长添加剂来增加猪下丘脑中GHRH的合成，进而促进垂体GH的合成与分泌来提高猪的生长速度和胴体瘦肉率。     

用~(15)N标记肥料研究旱地冬小麦氮肥利用率与去向

在黄土旱塬 2年的田间试验表明 ,在特殊干旱年里小麦施氮肥增产仍很显著 ,但氮肥效果受到明显抑制 ,施氮处理间小麦产量差异不显著。播种前土壤水分含量对旱作小麦产量有决定性作用。15N微区试验表明 ,尿素作基肥混施入耕层后 ,小麦当年利用率为 3 6 6%～ 3 8 4% ,土壤残留率为 2 9 2 %～ 3 3 6%。氮肥的后效显示 ,土壤残留的氮素可被第 2茬小麦部分利用 ,占施氮量的 2 1 %～ 2 8% ,相当于 0～ 40cm土壤残留氮的 6 7%～ 8 7%。土壤残留的氮素主要集中在 0～ 40cm土层中 ,土壤剖面中残留氮随土壤深度增加而减少。膜间种植对小麦产量、氮肥利用率在试验年里没有显示作用 ,但大大增加了氮肥在土壤中的残留率。     

诱导表达猪生长激素pGH载体系统构建及其在PK15细胞中表达验证

为实现外源生长激素(GH)基因在特定时间、空间的可控表达,本研究构建四环素(TET-ON)表达载体系统,并在细胞水平对该载体系统进行诱导活性验证。结果表明:(1)成功构建了重组载体pTRE-GH12;(2)筛选建立了可诱导表达GH的细胞系;(3)利用强力霉素(doxycycline,DOX)诱导阳性细胞克隆并检测外源GH的表达,QRT-PCR结果表明,实验组细胞在DOX诱导后表达活性是诱导前264.481倍;对照组细胞在DOX诱导前诱导后表达无明显变化,实验组和对照组细胞间差异极显著(P<0.01),实验组DOX诱导前后差异极显著(P<0.01);(4)Western杂交后灰度分析结果和QRT-PCR趋势一致,实验组和对照组细胞间GH蛋白表达量差异极显著(P<0.01),实验组DOX诱导前后GH蛋白表达量差异极显著(P<0.01)。研究结果提示,四环素(TET-ON)诱导猪生长激素(GH)表达系统实现了可控表达,为以后制备可诱导表达GH的转基因动物提供了技术基础。     

~(15)N示踪-质谱计法直接定量稻田土壤反硝化作用氮素损失的可行性研究

采用自行设计的气样前处理装置 ,包括进样口、还原铜管、高效脱氧管和液氮冷阱 ,建立了1 5N示踪 质谱计法直接测定反硝化作用气态氮素损失 (N2 +N2 O)的方法。测得空气中N2 的1 5N自然丰度平均为 0 36 5 9% (理论值为 0 36 6 0 % )、绝对误差的平均值为 0 0 0 0 2 %、C V %为 0 0 9% ,与质谱计的设计精度完全吻合 ;不同气样1 5N丰度测定的C V %在 0 0 3%～ 1 0 8%之间 ,反硝化作用源丰度测定的C V %在 1 2 2 %～ 5 2 1 %之间 ,表明本研究所用的前处理装置对气样中O2 、CO2 及H2 O等杂质气态的清除是十分有效的。另一方面 ,由于1 5N损失的计算是以1 5N原子百分超为基础的 ,计算结果表明 ,当气样的1 5N原子百分超小于 0 0 1 4% (相应的1 5N丰度为 0 380 % )时 ,测得的1 5N损失的C V %有可能大于 5 % ,为此建议气样1 5N丰度最好能大于 0 380 % ,以确保测定结果的精确度。     

~(14)C-甲基异柳磷的标记及其在花生和大豆植株内的转运和分布

本文报道(14)~C-甲基异柳磷的标记合成,花生与大豆植株对(14)~C-甲基异柳磷的吸收及其在体内的转运和分布。花生和大豆的根和叶对甲基异柳磷都有一定的吸收能力。花生根系的吸收能力较大豆根系的吸收能力强,但花生叶片的吸收能力则弱于大豆叶片的吸收能力。试验结果还表明,该农药具有一定的双导性,可在两种供试植株的木质部和韧皮部内转运。但在木质部内的转运速度较在韧皮部内快。     

土壤样品中~(137)Cs和~(210)Pb活度分析比对研究

本文介绍了国际原子能机构(IAEA)组织的5个土壤样品中137Cs和210Pb活度分析的国际比对结果。本实验室比对用HPGe低本底γ谱仪对土壤样品进行测量,用LabSOCS(Laboratory Sourceless Calibration Software)进行系统无源效率刻度。通过IAEA的评价指标对结果进行评价表明,所测定的5个土壤样品中137Cs和210Pb活度结果都满足达标的要求,成功通过了IAEA的比对。IAEA公布的所有参加的18个实验室的比对结果显示,137Cs活度测定结果有82%的实验室属可接受,而210Pb活度测定结果只有33%的实验室属可接受。对这次国际比对总结分析经验和不足:137Cs与210Pb相比,其分析不确定性相对小,分析误差容易控制;210Pb是土壤中本身存在的放射性核素,其穿透能力较低,受土壤母质和本底的影响,其分析误差不容易控制。     

放射性核素~(95)Zr在土壤中吸附的研究

应用同位素示踪技术研究了95Zr在小粉土、黄红壤、青紫泥和海泥中的吸附 ,并研究了不同比活度95Zr对土壤吸附比的影响 ,测定了吸附等温线。结果表明 ,95Zr进入淹水土壤后迅速被土壤吸附达到吸附平衡。不同土壤有不同的饱和吸附率 ,海泥 >青紫泥 >小粉土 >黄红壤     

大豆黄酮对产蛋鸡生产性能、血液指标及激素分泌的影响

选用44周龄海兰褐商品蛋鸡208只,随机分为4组,分别在基础日粮中添加大豆黄酮0、5、10和15mg/kg,研究了日粮中添加不同水平大豆黄酮对不同时期产蛋鸡生产性能及相关激素水平、血液生化指标及激素分泌的影响。结果表明:添加大豆黄酮在试验各期均可以提高产蛋率、改善料蛋比,15mg/kg组可以显著提高日产蛋量;10和15mg/kg组可以显著提高游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)水平,极显著提高游离甲状腺素(FT4)水平;5mg/kg组极显著降低血清IGF-1含量,15mg/kg组极显著提高血清IGF-1含量,各处理组血清胰岛素水平均极显著高于对照组;随着大豆黄酮添加量的增加,血清总胆固醇、甘油三酯、血清低密度脂蛋白胆固醇、血清高密度脂蛋白胆固醇、血糖、血清尿酸呈递减趋势。大豆黄酮可以明显改善44-56周龄海兰褐蛋鸡的生产性能、内分泌激素水平,并降低血液中胆固醇含量。     

利用放射免疫法测定水中克百威的研究

本研究建立了水样中克百威残留的放射免疫分析方法 (RIA) ,与传统的分析方法相比 ,前处理简单 ,灵敏度更高。研究结果表明 ,该方法的检出限为 0 1 75ng ml,用放射免疫测定法与高效液相色谱法检测相同水样中克百威的残留 ,两者的线性相关系数为 0 9985。     

Bt晶体蛋白Cry1Ac放射免疫检测技术研究

通过苏云金芽孢杆菌(Bt)HD-73培养,提取Bt晶体蛋白Cry1Ac,经酶解后获得高抗虫活性蛋白。免疫新西兰白兔得到高纯度的Bt晶体蛋白1Ac抗体,用125I标记抗原,研究和建立了Bt晶体蛋白Cry1Ac的放射免疫检测技术,该试剂盒用磁性微粒作分离剂,不需离心即可分离,简化了测定步骤,检测结果达到国外同类产品(酶联免疫试剂盒)的水平。     

卵清蛋白基因表达放射免疫分析法

应用竞争结合原理建立了卵清蛋白基因表达的放射免疫分析法。采用氯胺T法标记卵清蛋白,~(125)Ⅰ-OA比活度达32～43μCi·μg~(-1),冻干后在常温下保存,有效期2～3个月;以(鸡)卵清蛋白作免疫原制备出的抗血清特异性强,与其他生物大分子无交叉反应,亲和常数为3.8×10~9L/M,50％结合率为1:1.6×10~5(最终稀释度);用双抗-PEG作分离剂沉淀免疫复合物,其方法灵敏度为0.17ng,可检范围为0.25～16ng,批内、批间变异系数分别为2.99％和8.96％。该方法能有效地直接检测类卵清蛋白含量,可作为一种特异、灵敏、简便、可靠的分析技术,应用于卵清蛋白基因表达生物基因工程研究。     

血清雌二醇放射免疫试剂盒的研制

制备了雌二醇抗体 (抗E2 6 CMO BSA)和12 5I放射配体E2 6 CMO histamine 12 5I,建立了血清雌二醇放射免疫分析方法 ,其特点是通过微量标记法提高标记物比活度 ,不用乙醚萃取直接测定血清样本 ,简化了测量步骤 ,缩短了测量时间 ,且试剂稳定时间可延长至 2个月以上。应用本法可以快速测量动物及人的血清样本 ,2 5～ 3h即可得出结果。     

绍鸭垂体LHRH放射受体结合法及其结合特性

以促性腺激素释放激素(LHRH) 的高效类似物(D Lys6)LHRH 作为示踪物。在垂体膜制剂和胶原酶及胰酶分散的体外培养的垂体细胞水平上,研究了绍鸭垂体LHRH 受体的结合特性。106 个垂体细胞与125I ( D Lys6) LHRH 在4 ℃孵育90 min能获得较高的结合率,经24h 孵育后结合率显著下降。125I (D Lys6)LHRH 与垂体膜制剂的结合率随膜制剂的浓度增加而增加,在每管相当于1 ～2 个垂体浓度范围内呈正相关。特异性结合随125 I ( D Lys6 ) LHRH 量的增加而增加, 实验结果经Scatchard 分析揭示出特异性结合与结合和游离125I ( D Lys6)LHRH 之比呈线性关系,预示绍鸭垂体对( D Lys6)LHRH 存在同一类高亲和力的结合位点。垂体膜制剂和垂体整体细胞的平衡解离常数( Kd) 分别为0-34n M 和0-43n M ,两个Kd 值相近且垂体整体细胞显示出较大的最大结合容量(Bmax) ,这说明本研究的酶法消化分散垂体细胞对其LHRH 受体的损伤较小。( D Lys6) LHRH(10 - 11 ～10 - 6 M) 能取代示踪物的特异性结合。本研究结果验证了绍鸭垂体LHRH 受体的存在并提供了其基本结合特性。     

单克隆抗体孕酮放射免疫分析的研究

应用抗孕酮单克隆抗体,建立了单克隆抗体的孕酮放射免疫分析法。试验确定了单克隆抗体的稀释度、最适DCC配比、最佳温育条件和闪烁液中样品抽提达平衡所需的时间。两条标准曲线的回归方程分别为Y_1=7.67—2.40X_1(BPA_1、r_1=-0.977)和Y_2=7.74—2.43X_2(BPA_2.r_2=-0.858)。鉴定结果表明,方法灵敏度为75pg,可测范围为75—6400pg,批内与批间变异系数分别为6.1％和10.4％。回收率分别为102.2±9.7％(BPA_1)和97.7±9.5％(BPA_2)。样品稀释试验表明,测定方法的平行性较好。     

家鸡催乳素放射免疫测定法的建立

本文建立了测定鸡血浆样品中催乳素(chPRL) 的放射免疫测定方法。所用试剂为标准chPRL( AFP 10328B) ,碘标chPRL( AFP 4444B) ,一抗为免抗chPRL(AFP 151040789) 抗血清,二抗驴抗免IgG 抗血清。碘标采用氯胺T 改进法,减少了氯胺T 的用量,并省略了偏重亚硫酸钠的使用,碘标chPRL 比放射性为29μCi/ug 。测定的灵敏度为0-34ng/ ml, 标准曲线的ED75 、ED50 和ED25 分别为1-30 ,3-71 和10-60ng/ ml。样品批内和批间变异低于15 % 。母鸡血浆样品倍比稀释产生的结合抑制曲线与标准曲线平行;测定不同繁殖状态母鸡血浆样品chPRL 显示出显著差异且变化规律符合繁殖活动的变化。证明本方法可用于测定家鸡血浆chPRL 浓度。     

放射免疫法测定畜产品中的己烯雌酚

本文采用DES-MCME-BSA复合物免疫家兔,制备兔抗DES抗血清。其滴度为1:1250,亲和常数为1.1×10~9L/mol,与己烷雌酚和双烯雌酚的交叉反应分别为4.58％和2.14％,与17β-雌二醇、孕酮、甲地孕酮、睾酮和丙酸睾酮的交叉反应均<0.01％。应用制得的抗血清,建立了DES的放射免疫测定法。其最小检测量为2pg/管,平均回收率90.4±7.6％,批内和批间变异系数分别为5.4％和10.4％,表明本法灵敏、可靠,适于大批样品的常规筛检。