马立克氏病皮肤(羽囊)琼扩抗原的研制及应用

鸡马立克氏病(MD)琼脂扩散试验(琼扩)抗原大多数都是含羽髓的羽毛经浸提挤压制成。为探讨更简便的方法,我们将MD的病、死鸡皮肤打碎,离心制成MD琼扩抗原,取得满意效果,现报告如下。1 材料和方法1.1 抗原和血清:MD琼扩抗原和阳性血清、     

鸡MD琼扩阳性率与肿瘤出现率之间关系的初步研究

对临诊怀疑为马立克氏病(MD)的32只不同日龄和品种的鸡,同时作血清和羽髓琼扩试验,并对所有患鸡进行内脏肿瘤检查。共检出琼扩阳性鸡27只(84.38％),单一血清阳性者6只,单一羽髓阳性者9只,血清和羽髓同时阳性者12只。检出肿瘤患鸡21只(65.63％),其中单一血清阳性者仅2只,单一羽髓阳性者8只,血清和羽髓同时阳者10只,而两者同时阴性者1只。6以单一血清阳性者中有2只发生肿瘤,9只羽髓阳性者中有8只发生肿瘤,12只血、羽双阳性者中有10只发生肿瘤,5只血、羽双阳性者中有1例发生肿瘤。初步结果表明,羽髓琼扩阳性和羽髓、血清双 阳性患鸡中MD肿瘤的发生率相对较高。     

鸡马立克氏病发病年龄与最佳检测法的试验

<正> 鸡马立克氏病(MD),是由B群疱疹病毒所引起的肿瘤性传染病。1985年,笔者对某鸡场有明显临床症状的MD病鸡群,从45日龄开始,分别采用羽囊琼扩检测和血清琼扩检测进行试验,观察了羽囊中沉淀抗原和血清中沉淀抗体的消长规律,得出不同日龄病鸡的最佳     

血清琼扩与羽囊琼扩诊断鸡马立克氏病的比较试验

目前对鸡马立克氏病(MD)的实验室诊断主要是用血清琼脂扩散试验来检测MD抗体。该方法虽然特异可靠,但抓鸡采血比较困难,而且也影响鸡的产蛋性能。利用羽囊琼扩试验来检测MD病毒虽有报道,但实际应用不多,其特异性和检出率与血清琼扩究     

HVT免疫鸡羽毛根中病毒抗原的检测

１日龄非免疫鸡,ＨＶＴ常规剂量免疫后,于第３周起,每周采集一次羽毛根,分别作常规ＭＤＶ琼扩抗原的检测。结果显示,在免疫事第３～８周检测,均未观察到特异性ＡＧＰ沉淀线,若取较多数量的富含羽髓的羽毛根,经２ｍｌ磷酸缓冲液（ＰＢＳ）浸提,浓缩胶浓缩约４０倍后,再作上述检测,则分别于免疫接种后的第３～５周都有特异性的,ＡＧＰ沉淀线出现,且与感染细胞上清中浓缩的ＨＶＴ及ＭＤＶ琼扩抗原所形成的沉淀线基本吻合,     

鸡马立克氏病诊断技术

近年来,鸡马立克氏病在我县大面积发生和流行,青县畜牧局分别彩临床检查病理剖检、羽毛囊琼扩和血清琼扩进行诊断。现将结果报告如下：１典型临床病例诊断对５０例有明显临床症状（采食减少,消瘦,拉稀,发育不良和／或瘫痪、劈叉）和典型剖检病变（肝、脾、肾、心、肺。肠、卵巢或睾丸）临床诊断为鸡马立克氏病阳性（阳性率１００％）的病例,于剖检前分别采集新生羽毛髓和血清,进行羽毛囊琼扩和血清琼扩试验,结果为：羽毛囊琼扩阳性４１例,阳性率８２％;血清琼扩阳性２２例,阳性率４４％。结果表明,临床诊断为马立克阳性的鸡,羽…     

HVT免疫鸡羽毛根中病毒抗原的检测

１日龄非免疫鸡,ＨＶＴ常规剂量免疫后,于第３周起,每周采集一次羽毛根,分别作常规ＭＤＶ琼扩抗原的检测,结果显示：在免疫后第３～８周检测,均未观察到特异性ＡＧＰ沉淀线;若取较多数量的富含羽髓的羽毛根,经２ｍｌ磷酸缓冲液（ＰＢＳ）浸提、浓缩胶浓缩约４０倍后,再作上述检测,则分别于免疫接种后的第３～５周都有特异性的ＡＧＰ沉淀线出现,且与感染细胞上清中浓缩的ＨＶＴ及ＭＤＶ琼扩抗原所形成的沉淀线基本吻合,而第６周检测时,仅与ＨＶＴ阳性血清呈微弱阳性,用同样方法对免疫后第６周后的检测结果均表明为阴性。由此推断,免疫鸡羽毛根中含有较低水平的、并与致病性ＭＤＶ抗原具有交叉反应性的ＨＶＴ琼扩抗原,但采用常规ＡＧＰ法不能直接检测到。     

鸡MD琼扩阳性率与肿瘤出现率之间关系的初步研究

对临诊怀疑为马立克氏病（ＭＤ）的３２只不同日龄和品种的鸡现时作血清和羽髓琼扩散试验，并对所有患鸡进行内脏肿瘤检查，共检出琼扩阳性鸡２７只（８４．３８％），单一血清阳性者６只，单一羽髓阳性者９只，血清和羽髓同时阳性者１２只。检出肿瘤鸡２１只（６５．６３％），其中单一血清阳性者仅２只，单一羽髓阳性者８只，血清和羽髓同时阳者１０只，而两者同时阴性者１只。６只单一血清阳性者中有２只发生肿瘤，９只羽髓阳性者     

禽白血病净化措施的研究——禽白血病卵清琼脂扩散试验的研制(Ⅱ)

本试验选取2批计746只试验鸡,累计对应采取其卵样和羽样1102只次,进行了禽白血病(Avian Leukosis AL)卵清琼脂扩散试验的研制工作。试验证明此法与羽髓琼扩法的阳性符合率较高,检出率的差异不显著(P>0.05),表明其敏感性与羽髓琼扩试验是相近的。通过对3份AL卵清样品检查出禽白血病C型肿瘤病毒粒子,从而证实AL卵清琼扩试验的特异性。试验结果,表明pH8.6的BBS稀释琼脂制板效果优于0.01MpH7.4的PBS。     

鸡马立克氏病(MD)的特异性诊断 Ⅰ、使用已知阳性血清作免疫扩散试验诊断MD的研究

使用已知抗马立克氏病病毒(MDV)血清进行免疫扩散试验,共检查了1,933只鸡的羽髓材料,其中未感染MDV的健康鸡104只(全部阴性),实验感染MDV的鸡475只(469只阳性,占98.73％),火鸡疱疹病毒(HVT)免疫的鸡56只(全部阴性),实验感染鸡成髓细胞增生性白血病病毒(AMV)的鸡107只(全部阴性),实验感染鸡新城疫(ND)、传染性支气管炎(IB)和传染性喉气管炎(ILT)病毒的鸡各60只(全部阴性),非MD发病鸡场的鸡545只(19只阳性,占3.48％),MD发病鸡场的鸡466只(252只阳性,占54.08％)。在实验感染鸡中,MDV羽髓抗原的最早检出时间大约在感染后的第13～14天,最适检出时间大约在20～30天。临床耐过鸡的羽髓抗原检出率随时间的延长而降低。另外,把在非MD发病鸡场检出的羽髓抗原阳性鸡的抗凝全血接种于5日龄的鸡胚卵黄囊,接种后14天检查绒毛尿囊膜,在大多数接种胚中可见典型的病毒痘斑,说明羽髓抗原阳性鸡的血流中确实含有MDV;也就是说,用已知MDV阳性血清检查羽髓抗原来诊断MD的免疫扩散试验是特异而可靠的。     

根据羽毛病变诊断马立克氏病

马立克氏病是在病毒感染后经较长时间的潜伏期之后才发病的.现已清楚,在此期间,产生多种病理学上的症象,特别令人注目的病变有羽囊上皮MD 病毒的感染.过去,已经有人报道了根据羽轴根部 MD 病毒特异抗原,或末梢血液中的附在 MD肿瘤表现的抗原阳性细胞而作出 MD 的诊断.本文作者们发现,从病雏鸡羽毛的羽髓部见到了非常清楚的 MD 病变.作者历时10多年研究结果:羽毛所表现的 MD 病变可能作为早期预见本病发生的标志,因此,我们把这种检查方法称为“MD 羽毛检查诊断法”.本文介绍本法开发过程有关 MD 病变的研究及在诊断上的应用.     

禽呼肠病毒琼扩抗原和血清的制备

以禽呼肠病毒S1133毒株尿囊腔接种10日龄无特定病原体(SPF)鸡胚,无菌收集24 h～120 h的死胚尿囊液,加1 mL/L的甲醛灭活,浓缩制得琼扩抗原;用该抗原制成灭活苗两次免疫SPF鸡,无菌采血分离制备阳性血清;选用SPF鸡无菌采血分离制备阴性血清.经过效价测定制备16单位琼扩抗原,8单位阳性血清;取免后的SPF鸡血样4个20～2-5稀释分别与1单位～8单位琼扩抗原做琼扩试验,确定了应该用4单位或8单位琼扩抗原做工作抗原;并以血清中和试验为参照证明琼扩试验在血清抗体监测中的可行性.本研究成功制备了禽呼肠病毒琼扩抗原与血清,为用琼扩试验定量检测禽呼肠病毒感染禽和疫苗免疫禽的抗体奠定了基础.     

DIG核酸探针检测病鸡羽髓MDV的研究

拔取病鸡含羽髓的羽毛,用免疫琼扩试验检测,检出率为80％;将病鸡羽髓经超声波处理、SDS和蛋白酶K裂解、经酚和氯仿抽提后,用乙醇沉淀病毒核酸,用我们研制的以Digoxigenin标记的MDV核酸探针检测,检出率为100％。结果表明,核酸探针是检测MDV灵敏特异的方法。     

锗-132对肉用雏鸡免疫功能的影响及其临床应用初探Ⅰ.锗-132对鸡马立克氏病抑制效果的观察

选用1日龄肉用雏鸡150只,随机分为两组,在人工感染鸡马立克氏病病毒(MDV)的基础上,分别饲喂基础日粮加100ppm锗-132(Ⅰ组)和基础日粮(Ⅱ组).临床观察60d,以琼扩试验定期对羽毛囊上皮鸡MDV特异性抗原、血清鸡MDV特异性抗体进行检测,同时进行病理学检查.结果,Ⅰ组的发病率、病死率及死亡率显著低于Ⅱ组,表明锗-132对鸡MD及其肿瘤病变的发生与发展有明显的抑制作用.     

检测禽白血病病毒抗原的琼扩试验与酶联免疫吸附试验的比较

以检测羽髓中禽白血病病毒抗原的琼扩试验(AD)与检测卵清和泄殖腔棉拭中禽白血病病毒抗原的酶联免疫吸附试验(ELISSA)对两群鸡进行对比试验表明,AD 阳性率为63%和35.5%,ELISA 阳性率为10%和6.5%,ELISA 从卵清和泄殖腔棉拭中各检出阳性鸡7只,两者都为阳性的仅1只鸡,各右6只为单阳性,而 AD 法可检出 ELISA 的全部阳性鸡。从 ELISA净化的无白血病鸡群中,用 AD 法检出5.6%和15%的阳性鸡。跟踪试验表现,AD 阳性鸡,在 ELISA 多次检查中逐渐显示阳性。用 AD 法和 ELISA 同时检查羽髓,阳性率分别为55.2%和74.8%。     

纸膜免疫金银染色诊断马立克氏病的研究

本研究建立的纸膜免疫金银染色法(P-IGSS)诊断马立克氏病(MD),既可检测抗原,又可检测抗体.检测抗原的灵敏度为0.39μg/点,检测抗体的灵敏度为1.4μg/点.P-IGSS 和琼脂扩散试验(AGP)对抗体检出率分别为42.44%和37.78%,对羽髓抗原检出率分别为96.67%和90%.与9种鸡传染病阳性血清和3种鸡传染病抗原不发生交叉反应.     

鸡骨型白血病免疫琼扩与放射摄片诊断的比较

为了探索特异性免疫学诊断方法对鸡骨型白血病(OP)的检测效果。用双盲法分批采样同时进行羽髓琼脂扩散试验和胫骨X线摄片检查对比,共检834只鸡(433羽属天然自发OP鸡群,401羽属人工诱发实验鸡群)。结果羽髓琼扩试验的OP阳性检出率为3．48％(29／834：)。阳性病理符合率为75．86％(22／29)。阳性误诊(假阳性)率24．13％(7／29),阴性误诊(假阴性)率36．15％(291／805)。而X线摄片检查的OP阳性检出率为38．37％(320／834)。X线阳性完全可获病理组织学证实,不存在假阳性或假阴性。把禽白血病羽髓琼扩试验试用于检测鸡骨型白血病尚属初次报道,其阳性检出率低而误诊率高,尚不宜作OP检测手段。放射摄片诊断的阳性检出率高而误诊率低,可快速诊断,故适用于OP检疫。     

用切向流超滤的方法浓缩IBD琼扩抗原半成品的试验

本实验用切向流超滤的方法对IBD琼扩抗原半成品进行10倍浓缩,并对浓缩前后的样品进行检验,检验的结果表明用该方法进行IBD琼扩抗原半成品的浓缩效果显著,且耗时短,无损失,是一种适用于该琼扩抗原浓缩环节的方法。     

兔粘液瘤免疫扩散试验的研究

用４种兔粘液瘤琼扩抗原，测定了琼扩试验的最佳条件，结果表明，以ｐＨ７．４ＴＮＥ缓冲液，０．４ｃｍ孔距为最佳，抗原应少量分装，冷冻保存，室温融化使用．经阳性血清干粉吸收试验，琼扩抑制试验，混合血交叉试验，表明琼扩试验是特异的，与禽痘病毒，兔病毒性出血症阳性血清不出现交叉反应。     

DIG核酸探针检测病鸡羽髓MDV的研究

拔取病鸡含羽髓的羽毛，用免疫琼扩试验检测，检出率为８０％；将病鸡髓经超声波处理、ＳＤＳ和蛋白酶Ｋ裂解、经酚和氯仿抽提后，用乙醇沉淀病毒核酸，用我们研制的以Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记的ＭＤＶ核酸探针检测，检出率为１００％，结果表明，核酸探针是检测ＭＤＶ灵敏特异的方法。