鸡新城疫血凝抑制试验用阳性血清国家标准品的研制

为制备标定HI试验用的鸡新城疫阳性血清国家标准品,以鸡新城疫La Sota株病毒和灭活疫苗免疫SPF鸡制备鸡新城疫高免血清。将检验合格的鸡新城疫阳性血清以鸡阴性血清稀释为HI效价与国际标准血清完全一致后,用于标准品制备。对该标准品进行了物理性状、无菌检验、真空度测定、剩余水分检验、均匀性检测和稳定性试验,检测结果均符合要求。以国际标准品为参比,测定了该标准品的HI效价为1∶60与协作标定结果基本一致。该标准品以国际标准品溯源的国际单位含量为320 IU/mL,为鸡新城疫的相关研究提供了物质基础。     

猪细小病毒血凝抑制试验抗原、阳性血清与阴性血清的制备与鉴定

猪细小病毒（Porcine Parvovirus,PPV）血凝抑制试验抗原、阳性血清和阴性血清在猪细小病毒制品的效力检验中不可或缺,对猪细小病毒相关生物制品的质量控制至关重要。试验采用PPV 7909株病毒同步接种PK-15细胞制备血凝抑制试验抗原,用制备的抗原乳化后免疫豚鼠制备阳性血清,同时用未免疫的阴性豚鼠制备阴性血清。对抗原、阳性血清和阴性血清进行鉴定,结果表明,制备的PPV血凝抑制试验抗原HA效价达1:512;阳性血清HI效价达1:1024;阴性血清HI效价＜1:8,且特异性均良好。利用制备的血凝抑制试验抗原、阳性血清与不同PPV疫苗株的灭活抗原、阳性血清进行交叉反应试验,结果表明,制备的抗原与阳性血清具备良好的血清学交叉反应性,可用于PPV制品的统一评价。     

不同免疫途径对鸡新城疫疫苗免疫效果的影响

为探讨不同免疫接种途径对鸡新城疫(ND)弱毒疫苗免疫效果的影响,我们将健康1日龄海兰蛋公鸡雏鸡(48只)随机分为滴鼻免疫组、肌肉注射免疫组、后海穴常规剂量免疫组和后海穴半剂量免疫组,每组12只.分别于第14日龄和28日龄接种新城疫IV系弱毒苗(LaSota株)1羽份/只,后海穴半剂量免疫组接种0.5羽份/只.分别于免疫前和免疫后7、14、21d和28d称重,无菌操作采血,分离血清,检测血清中的血凝抑制效价(HI).结果显示:与常规途径免疫组相比,后海穴常规剂量免疫组和后海穴半剂量免疫组可显著增强鸡血清NDV特异性HI效价(P＜0.05),且显著提高试验鸡只的日增重(P＜0.05);滴鼻免疫组与肌肉注射免疫组相比,虽然增加了HI效价,但统计学比较差异不显著(P＞0.05).试验结果说明后海穴接种鸡新城疫疫苗可显著提高鸡血清NDV的HI效价,提高鸡生产性能,同时节约疫苗用量.     

接种不同剂量的新城疫疫苗对鸡免疫应答的影响

采用不同剂量的鸡新城疫La系疫苗免疫鸡,经HI实验检测血清抗体效价,结果显示当免疫剂量为3倍时HI效价最高。     

鸡传染性支气管炎病毒(M41株)血凝抑制试验抗原的制备及检验

用传染性支气管炎病毒(IBV)M41株毒种接种11日龄鸡胚,收获感染鸡胚病毒液,将新鲜的病毒液用小型盒式超滤浓缩系统浓缩,然后用高速离心机离心,去上清,沉淀用原病毒液体积1/100的HA缓冲液悬浮,制备出100倍浓缩的IBV病毒液;将100倍浓缩的IBV病毒液中加入15%^20%的A型魏氏梭菌滤液,充分混匀,放37℃恒温振荡器感作2h,取出置2-8℃条件下48 h.制备出了5批IBV M41株HI杭原.检验结果显示:5批HI抗原的性状均为白色混浊液体,底部有少量沉淀;无菌检验为阴性,HA效价为1:128～1:512,5批杭原与IB阳性血清呈阳性反应,HI效价为81og2,而与阴性血清、新城疫阳性血清、H9亚型禽流感阳性血清、H5亚型禽流感阳性血清及产蛋下降综合征阳性血清呈阴性反应,HI效价低于21og2.各项检验结果均符合要求.     

接种不同剂量的新城疫疫苗对鸡免疫应答的影响

采用不同剂量的鸡新城疫La系疫苗免疫鸡，经HI实验检测血清抗体效价，结果显示当免疫剂量为3倍时HI效价最高。     

复方黄芪对鸡新城疫灭活疫苗免疫效果的影响

为探讨复方黄芪制剂对鸡新城疫灭活疫苗免疫效果的影响,将300只1日龄海兰褐雏鸡随机分成Ⅰ组(低剂量添加组)、Ⅱ组(中剂量添加组)、Ⅲ组(高剂量添加组)、Ⅳ组(阴性对照组)和Ⅴ组(阳性对照组)。7日龄时,除阴性对照组不免疫外,其余各组鸡均颈背部皮下注射新城疫灭活疫苗,0.25mL/羽,同时Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组分别按10、20、40g/kg体重,灌服复方黄芪制剂,每天1次,连续5d。然后在免疫后第7、14、21、28、35天时,从各组中随机选取8只健康鸡无菌采集心血1.0mL,分离血清,用于鸡新城疫HI抗体、SOD和IFN-γ的测定。结果表明,新城疫HI抗体效价,血清中SOD和IFN-γ的活性或浓度,复方黄芪中剂量组均高于其余各组,且与低剂量添加组、阳性对照组相比,呈显著(P0.05)或极显著差异(P0.01)。说明复方黄芪按20g/kg体重的剂量给雏鸡口服,能显著提高雏鸡的新城疫HI抗体水平,同时也能提高雏鸡SOD和IFN-γ的水平。     

黄芪、白术水煎剂对鸡新城疫疫苗免疫效果的影响

探讨鸡口服黄芪、白术水煎剂对鸡新城疫疫苗免疫效果的影响。给7日龄健康梅岭土鸡连续7 d饮用口服黄芪或白术水煎剂,12.5 g/kg.d,后分2次间隔14 d滴鼻接种鸡新城疫Ⅳ系弱毒苗(LaSota株)。分别在首免前、及免疫后1、2、3、4周采血,分离血清,用血凝抑制试验检测鸡新城疫抗体效价(HI)。结果显示,口服中药组的鸡血清HI效价高于未服中药对照组,黄芪水煎剂组于二免后1周,白术水煎剂组于二免后1、2周,HI效价显著高于未服中药对照组。结果表明,在疫苗免疫之前给鸡口服白术水煎剂或黄芪水煎剂可以显著增强免疫效果。     

复方黄芪制剂对鸡新城疫灭活疫苗免疫效果的影响

为探讨复方黄芪制剂对鸡新城疫灭活疫苗免疫效果的影响,将300只7日龄海兰褐雏鸡随机分成Ⅰ组(低剂量添加组)、Ⅱ组(中剂量添加组)、Ⅲ组(高剂量添加组)、Ⅳ组(阴性对照组)和Ⅴ组(阳性对照组)。7日龄时,除阴性对照组不免疫外,其余各组鸡均颈背部皮下注射新城疫灭活疫苗,0.25 ml/羽,同时Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组分别按10 g/kg、20 g/kg和40 g/kg体重,灌服复方黄芪制剂,每天1次,连续5 d。然后在免疫后第7、14、21、28 d和35 d时,从各组中随机选取8只健康鸡无菌采集心血1.0 ml,分离血清,用于鸡新城疫HI抗体、SOD和IFN-γ的测定。结果表明:新城疫HI抗体效价,血清中SOD和IFN-γ的活性或浓度,复方黄芪中剂量均高于其余各组,且与低剂量添加组、阳性对照组相比,呈显著(P0.05)或极显著差异(P0.01)。说明复方黄芪按20 g/kg体重的剂量给雏鸡口服,能明显提高雏鸡的新城疫HI抗体水平,同时也能提高雏鸡SOD和IFN-γ的水平     

进口法国种鸽新城疫病毒的分离和鉴定

用鸡成纤维细胞和鸡胚从30只进口法国种鸽中分离出一株病毒,细胞培养物的HA效价为3log2,尿囊液的HA效价为4log2,新城疫阳性血清能抑制这种血凝作用,HI效价均为7log2,禽流感阳性血清不能抑制这种血凝作用.通过透射电镜观察、毒力测定等最终确认,分离出的病毒为新城疫病毒.     

青海高原地区鸡流行病血清学调查分析

随着青海高原地区禽类及其产品市场流通日益频繁,鸡病发生及危害不断增加,为随时掌握鸡病疫情动态和观察鸡病免疫效果,全面防控疫病,我们从2000年至2004年对该地区鸡流行病进行了连续几年的血清学检测和分析。1方法与材料1.1方法:禽流感、鸡传染性法氏囊病、鸡白痢、用琼脂扩散免疫试验,检测血清中特异性抗体。鸡新城疫用血凝抑制试验,即微量血凝试验(HI),按常规微量法检测血清中HI抗体效价。禽白血病用酶联免疫吸附试验(ELISA)。1.2材料:禽流感、鸡白痢、鸡传染性法氏囊病琼脂扩散试剂,标准抗原、阳性血清、阴性血清由哈尔滨兽医研究所…     

ELISA 检测新城疫病毒抗体

用鸡红细胞凝集解脱法提纯的新城疫病毒(NDV)抗原包被酶标板,最适抗原浓度为0.1μg～8μg/孔;鸡血清的最适稀释倍数为1:400.该抗原与马立克氏病等七种禽病抗血清不发生交叉反应.与血凝抑制试验(HI)比较.在检测的233份血清样本中,ELISA 阳性124份(占53%);HI 效价1:8以上者为84份(占36%);84份 HI 阳性样品,ELISA 亦为阳性;40份 HI 阴性样品,ELISA却为阳性;没有 ELISA 阴性而 HI 阳性的样本.两法可追求检测结果一致的为193/233(占83%).     

一例鸡新城疫病毒和大肠杆菌混合感染的诊断

解剖5只送检的临床发病鸡及病死鸡,发现4只剖检鸡均有腺胃乳头出血、直肠和泄殖腔出血,喉头有大量粘液等病变,2只鸡的气囊出现混浊.采集病料,处理后接种10日龄SPF鸡胚,发现鸡胚在48h左右死亡,收集死亡鸡胚的尿囊液,用1%的鸡红细胞进行血凝试验(HA),结果HA效价为27左右,进一步用新城疫阳性标准血清进行血凝抑制试验(HI),实验表明HI为阳性;对肝脏病料中进行细菌分离培养,结果 18h后麦康凯琼脂平板上,长出红色的菌落群,经生化鉴定为埃希氏大肠杆菌.由此可断定,该鸡群混合感染了新城疫病毒和大肠杆菌.     

蛋黄氯仿提取液是鸡新城疫HI试验的适用材料

蛋黄氯仿提取液是新城疫HI试验的适用材料,在4℃冰箱保存一年,效价不降低,是HI试验中稳定而方便的抗体来源,可取代阳性血消。免疫母鸡卵黄抗体效价的出现晚于血清,且通常低于血清1～2个稀释度。     

间接ELISA法检测鸡新城疫抗体

应用醛化的鸡红细胞经吸附释放方法获得纯化的新城疫病毒(NDV),经triton X-100处理并反复冻融制备新城疫 ELISA抗原.应用抗鸡Ig轻链单抗1B7辣根过氧化物酶结合物建立了定量检测NDV抗体水平的ELISA方法.确立了将鸡血清100倍稀释检测ELISA效价(ET)的回归方程y=0.941 28 x 0.206 77,r=0.981 63,可用于定量测定.血凝抑制(HI)方法与ELISA方法的比较试验表明,ELISA法的敏感性是HI方法的3倍以上.应用建立的ELISA方法比较了卵黄、气管及胆汁中局部抗体与血清抗体的差异.     

一种鸡抗猪丁型冠状病毒阳性血清的制备方法

为研究能否用鸡制备出猪丁型冠状病毒(PDCoV)阳性血清。将PDCoV用BEI灭活制备抗原,抗原与矿物油佐剂乳化制备疫苗,疫苗多次免疫SPF鸡,采集血清,检测血清中和效价、将血清用于IFA检测PDCoV。血清中和效价随免疫次数增加逐渐增高,4免后14日的中和效价平均值为1300;中和效价1000左右的血清混合作为阳性血清,1000倍稀释可用于IFA检测PDCoV。实验说明,用鸡制备PDCoV阳性血清的方法成立,制备的阳性血清可用于中和实验、IFA检测PDCoV。     

抗鸡新城疫病毒特异性血清的制备与鉴定

为制备外源病毒检验用抗鸡新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)的特异性血清,对300只3~4周龄的SPF鸡进行了基础免疫和加强免疫。最后一次免疫后21 d采血并分离血清,血清经混合、分装、冷冻真空干燥后,对其进行无菌检验、外源病毒检验、剩余水分测定、中和效价测定和特异性检验。结果表明,制备的抗NDV特异性血清无菌检验、外源病毒检验和剩余水分测定均符合现行《中华人民共和国兽药典》规定;血清中和效价为1∶2 089,与NDVLa Sota株毒种中和指数为108.2,与其它禽类病毒的中和指数均不大于10,通过AGP、ELISA、HI等试验确定血清中不含其他禽源外源病毒抗体。该研究为鸡新城疫活疫苗或毒种的外源病毒检验提供了具有良好特异性和高效价的中和用血清。     

非免疫鸡血清中鸡新城疫病毒抗体的测定

对重庆市荣昌县6个乡镇的41个散养养鸡户,按常规方法采取并分离未经鸡新城疫疫苗免疫的1264份成年鸡血清,采用微量法进行红细胞凝集（HA）试验和红细胞凝集抑制（HI）试验检测鸡新城疫病毒抗体的滴度。其结果表明：鸡新城疫阳性率为8．73％,可疑率为4．76％,阴性率为86．51％,从而证明该地区新城疫病毒感染较严重。     

免疫复合物疫苗用于鸡新城疫病毒感染的研究

以鸡新城疫病毒上海株sh09作为抗原,与鸡新城疫卵黄抗体IgY按照一定的比例配置免疫复合物疫苗。用无特定病原鸡进行免疫分组试验,实验分为对照组、灭活苗组、免疫复合物疫苗组3组,每隔1周取鸡测定血凝抑制(Hemagglutination Inhibition,HI)抗体效价。攻毒实验在免疫实验的基础上增加1组常规弱毒苗组。结果表明,制备的复合物疫苗在鸡体内HI抗体效价上升较显著,其免疫效果比常规疫苗好,能很好地应对强毒株的攻击。     

鸡新城疫基因Ⅶ型灭活标记疫苗（MG7株）最小有效免疫剂量的研究

为科学指导鸡新城疫基因Ⅶ型灭活标记疫苗（MG7株）的临床免疫剂量,通过测定免疫鸡HI抗体滴度和攻毒保护试验,进行了10日龄和30日龄SPF鸡最小有效免疫剂量的研究。动物实验使用10 μL、20 μL和40 μL三种不同免疫剂量,免疫疫苗后21 d检测HI抗体效价,10日龄SPF鸡001批次疫苗HI抗体平均效价依次为：4.8、6.2和6.5,攻毒保护率依次为80%、100%和100%,30日龄SPF鸡HI抗体平均效价依次为：5.0、6.3和6.5,攻毒保护率依次为70%、100%和100%,结果表明,新城疫灭活标记疫苗（MG7株）HI 抗体效价和保护效力呈正相关, 免疫剂量与HI 抗体效价和保护效力也呈正相关。用NDV基因Ⅶ型强毒G7株进行攻毒保护试验,两种日龄鸡在20 μL的免疫剂量下,疫苗仍能达到良好的免疫保护效果。