大肠杆菌刺激蝇蛆产生抗菌肽浓度和抑菌活性的测定

[目的]确定大肠杆菌菌液刺激蝇蛆产生浓度高、活性强的抗菌肽时间和蝇蛆饲喂家禽的安全性。[方法]采用不同浓度的大肠杆菌菌液分别与麸皮混合饲喂蝇蛆,于10、24、48 h分别收集存活蝇蛆并对其粗提取抗菌肽,通过考马斯亮蓝法和抑菌试验分别测定各试验组抗菌肽粗提液的浓度和抑菌力,同时用CFU计数法测定细菌培养的家蝇幼虫的细菌含量以确定其作为绿色抗生素的安全性。[结果]浓度为3.0×107cfu/ml的大肠杆菌作用24 h的蝇蛆组产生的抗菌肽浓度最高、活性最强,且蝇蛆体内细菌含量为1.6×105cfu/g,低于国家规定的饲料细菌标准含量最低值(2×106cfu/g)。[结论]为进一步利用动物死尸、畜禽粪便生物转化蝇蛆产生大量安全、浓度高且活性强的蝇蛆抗菌肽作为绿色抗生素运用于禽类养殖业奠定了基础。     

围产期奶牛 Nod-2 受体表达变化及其对中性粒细胞呼吸爆发功能的影响

【目的】围产期奶牛对细菌性疾病的易感性升高。本研究的目的在于探讨 Nod-2 受体在围产期奶牛中性粒细胞（PMN）中的表达变化及其对 PMN 细胞呼吸爆发功能的影响,以揭示 Nod-2 在围产期奶牛免疫机能改变中的作用。【方法】 采用 RT-PCR 法检测围产期和非围产期泌乳奶牛外周 PMN 细胞中 Nod-2 mRNA 的表达变化;全血分别用佛波醇酯（PMA）和 Nod-2 受体特异性配体胞壁酰基二肽 MDP 刺激,采用流式细胞仪检测 PMN 呼吸爆发功能。【结果】围产期奶牛 PMN 细胞 Nod-2 mRNA 表达量显著低于非围产期奶牛（P＜0.05）;受 PMA 刺激后,围产期奶牛 PMN 呼吸爆发功能显著低于非围产期奶牛（P＜0.05）;受 MDP 刺激后,围产期奶牛 PMN 呼吸爆发功能亦较非围产期奶牛下降。【结论】围产期奶牛对细菌性疾病易感性升高可能与 Nod-2 mRNA 表达下调有关。     

围产期相关激素对奶牛中性粒细胞功能调控及其与免疫抑制的相关性分析

围产期奶牛要经历妊娠、分娩和泌乳等生理过程,激素分泌模式和营养代谢模式均发生剧烈变化。由此导致的中性粒细胞功能低下是造成乳房炎、子宫炎等炎症性疾病高发的重要原因。妊娠末期、奶牛生殖相关激素分泌模式变化明显,而围产期相关激素如雌二醇、孕酮、催乳素等对奶牛中性粒细胞活化、趋化黏附、跨膜迁移、呼吸爆发、吞噬杀菌和胞外诱捕网形成等不同功能表型的影响和作用途径尚未完全明确。围绕这一科学问题,明确围产期相关激素对奶牛中性粒细胞不同功能表型的影响及相关调控机制,为全面认识围产期奶牛免疫抑制的形成机制、有效保障围产期奶牛健康提供研究基础和决策参考。     

泥鳅抗菌肽的制备及其抑菌效果的研究

采用Tris-HCl法提取泥鳅抗菌肽,SephadexG-50凝胶过滤层析分离泥鳅抗菌肽,并通过微量反映法测定泥鳅抗菌肽对株嗜水气单胞菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度（MIC）。结果表明：泥鳅抗菌肽对株嗜水气单胞菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的MIC分别为0.195、3.125、12.50μg/μL,具有较好的抗菌活性。     

草鱼肠道抗菌肽的提取及体外抑菌效果初步研究

将新鲜草鱼肠道组织经超声破碎、乙酸浸提后,再经Sephadex G50和Sephadex G25 凝胶柱过滤层析,收集各组分,采用药敏纸片法检测各组分的抗菌活性.收集具有抗菌活性的组分,经Tricine SDS-PAGE,考马斯亮蓝染色后分析获得1条较明显的蛋白带,相对分子质量约为6 200.该抗菌肽对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和嗜水气单胞菌均表现出较强的抗菌活性,说明抗菌肽对维持鱼类肠道微生物区系稳定具有重要作用.     

蚯蚓水解液对大肠杆菌的抑菌效果

对经4、5、6h水解的蚯蚓水解液进行离心和过滤2种处理,采用滤纸片法和打孔法测定蚯蚓水解液对大肠杆菌的抑菌效果.结果表明:经5h水解的蚯蚓水解液对大肠杆菌抑菌效果最好.     

乙酰乙酸抑制脂多糖诱导的奶牛中性粒细胞炎症信号通路的激活

为研究乙酰乙酸(Acetoacetic acid,AcAc)对奶牛中性粒细胞炎症信号通路的影响,以脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的奶牛中性粒细胞炎症模型为研究对象,利用qRT-PCR、生化和酶联免疫吸附法(ELISA)测定IL-1β、IL-6、TNF-α和IKKβ激酶活性。结果表明:1)qRT-PCR结果显示,与对照组相比较,LPS处理组IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA的表达显著增强(P0.01)。与LPS处理组比较,LPS+AcAc混合处理组,其表达量显著下调(P0.05);2)生化检测结果显示,与对照组相比较,LPS处理组中性粒细胞IKKβ激酶活性显著增强(P0.01)。与LPS处理组比较,LPS+AcAc混合处理组IKKβ激酶活性则显著降低(P0.05);3)ELISA结果显示,与对照组相比较,LPS增加促炎因子TNF-α、IL-6和IL-1β的释放。相对于LPS处理组,LPS+AcAc混合处理组促炎因子的释放则显著降低(P0.01)。综上,AcAc可以抑制LPS诱导的奶牛中性粒细胞炎症信号通路的激活,具有一定的抗炎功能。     

人工合成抗菌肽对棉花黄萎病菌的抑菌效果

大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)是引起棉花黄萎病的真菌病害,广泛存在于中国的产棉区,使棉花产量和品质大幅下降。虽然,人们长期以来一直在寻找抗病基因,但很难在陆地棉中发现。为了寻找对棉花黄萎病菌有强抑制作用的抗菌肽或基因,人工设计和合成了20条抗菌肽(简称"人工肽"),通过抑菌圈法从中筛选到3条最有潜力的人工肽(D4E1、D51和D28),并与2条天然抗菌肽(Decoralin和Pseudin,简称"天然肽")进行对比,用于鉴定其对棉花黄萎病菌的抑菌活性。结果表明,D4E1和D51这2条人工肽的抑菌活性最强,在多肽质量浓度为20μg/mL时,几乎能100%地抑制黄萎病菌的菌丝生长和孢子萌发,显示出高抗特性。同时,实验采用生物信息学软件和反相高效液相色谱法测定了抗菌肽疏水活性,结果表明反相高效液相色谱保留时间可以更有效地表示抗菌肽的疏水活性,从而能更准确推测抗菌肽的抑菌活性。上述研究结果说明:1)如果有一个好的人工设计,人工肽对黄萎病菌的抑制效果会比天然肽更佳;2)人工肽的氨基酸序列可推导出核苷酸序列,作为抗棉花黄萎病的候选基因,用转基因育种技术可获得抗病新品种。     

奶牛中性粒细胞功能活性研究进展

中性粒细胞(PMN)是奶牛乳房抵抗细菌感染的重要防御屏障,当乳腺感染后,PMN在细胞因子的诱导下向炎症部位聚集并发挥吞噬杀菌功能。然而,奶牛乳和血液中的PMN的功能活性却存在着差异。文章综述了PMN在奶牛体内的生长、迁移、凋亡、PMN的功能活性及其影响因素,对了解和防治奶牛乳腺炎具有一定的参考价值。     

奶牛中性粒细胞功能活性研究进展

中性粒细胞（PMN）是奶牛乳房抵抗细菌感染的重要防御屏障,当乳腺感染后,FMN在细胞因子的诱导下向炎症部位聚集并发挥吞噬杀菌功能。然而,奶牛乳和血液中的PMN的功能活性却存在着差异。文章综述了FMN在奶牛体内的生长、迁移、凋亡、FMN的功能活性及其影响因素,对了解和防治奶牛乳腺炎具有一定的参考价值。     

抗菌肽Folicidin-3在大肠杆菌中融合表达及抑菌活性

根据抗菌肽Fowlicidin-3氨基酸序列,选用大肠杆菌(Escherichia coli)偏嗜密码子,设计合成117 bp的Fowlicidin-3a和102 bp的Fowlicidin-3b基因.将这2个基因克隆到突变载体,构建出表达载体pET-32 a-C-Fowlicidin-3a和pET-32a-Tev-C...     

红线虫抗菌肽提取条件的工艺优化

以红线虫(Limnodrilus hoffmeisteri)为材料,采用0.01 mol/L EDTA-2Na的0.9%NaCl溶液为浸提液提取有抑菌活性的多肽,以料液比、时间、pH值对红线虫抗菌肽提取条件进行3因素3水平正交试验优化提取工艺,并对处理结果进行多重比较。试验结果表明,红线虫抗菌肽对大肠杆菌没有抑菌效果,对金黄色葡萄球菌有一定抑制效果;影响浸提效果的主要因素为料液比,次要因素为浸提时间和pH值,提取的最优处理组合:料液比1 g∶15 mL,浸提时间8 h,浸提液pH值为7.2。     

黄粉虫抗菌肽对耐药粪肠球菌抑菌效果的研究

[目的]探究黄粉虫抗菌肽对耐药粪肠球菌抑菌效果.[方法]用浓度为1×108 CFU/mL的粪肠球菌菌液与麸皮混合饲喂诱导黄粉虫幼虫,在24h后提取黄粉虫抗菌肽,用考马斯亮蓝法(Bradford法)测定黄粉虫抗菌肽粗提液浓度,采用试管稀释法测定青霉素、庆大霉素对粪肠球菌的最小抑菌浓度(MIC),用多步诱导法筛选出青霉素和庆大霉素耐药的粪肠球菌,用Kirby Bauer法测定黄粉虫抗菌肽对耐青霉素和庆大霉素的粪肠球菌的抑菌活性.[结果]经粪肠球菌诱导24h后提取的黄粉虫抗菌肽浓度,显著高于未用粪肠球菌诱导的对照组(P＜0.05),其抑菌活性也显著高于对照组(P＜0.05),并且诱导黄粉虫抗菌肽组对耐青霉素、庆大霉素粪肠球菌的抑菌效果显著高于抗生素组(P＜0.05).[结论]黄粉虫抗菌肽对耐药粪肠球菌具有显著的抑菌效果.     

植酸对大肠杆菌抑菌机理的研究

为了研究植酸对大肠杆菌的抑菌机理,测定了植酸对大肠杆菌的抑菌效果、最小抑菌浓度、细菌生长曲线、菌液碱性磷酸酶(AKP)含量及电导率,并观察了细菌超微结构。结果表明,植酸对大肠杆菌有较强的抑菌效果,且随着浓度的增大而增强,植酸对大肠杆菌的最低抑菌浓度(体积分数)为0.4%;与不添加植酸的对照相比,植酸改变了大肠杆菌的生长规律,使细胞破损严重,细胞壁和细胞膜通透性增加,细胞质外渗,菌液中AKP含量和电导率增大。     

中草药制剂对猪链球菌和大肠杆菌的体外抑菌效果

为了观察中草药对猪场常见病原菌的体外抑菌效果,选取20种单味中草药及其组配的5组复方药物,按常规法制备水提取物,采用试管2倍稀释法分别检测单味中草药及复方药物对猪大肠杆菌和猪链球菌的体外抑菌活性.结果表明:单味中草药及复方中草药对二者均具有一定的抑制作用.     

抗菌肽NK-lysin生物信息学分析及其抑菌作用研究

为分析猪源抗菌肽NK-lysin的理化性质和蛋白结构,并研究猪源抗菌肽在小鼠体内的抑菌效果,以猪小肠组织cDNA为模板进行PCR扩增和测序,通过生物信息学相关软件和工具对其测序结果进行分析。试验选用60只小鼠,随机分为4组(预防组、细菌模型组、治疗组和对照组),设置不同的大肠杆菌和猪源抗菌肽给药方案。结果表明,猪源抗菌肽NK-lysin为稳定的,半衰期在大肠杆菌中(体内)长,与白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)和颗粒性蛋白B(Granzyme B,GZMB)具有相互作用;预防组和治疗组小鼠存活率分别为80.00%和86.67%。综上所述,猪源抗菌肽在小鼠体内安全且具有一定的抑菌作用。     

抗菌肽NK-lysin生物信息学分析及其抑菌作用研究

为分析猪源抗菌肽NK-lysin的理化性质和蛋白结构,并研究猪源抗菌肽在小鼠体内的抑菌效果,以猪小肠组织cDNA为模板进行PCR扩增和测序,通过生物信息学相关软件和工具对其测序结果进行分析。试验选用60只小鼠,随机分为4组(预防组、细菌模型组、治疗组和对照组),设置不同的大肠杆菌和猪源抗菌肽给药方案。结果表明,猪源抗菌肽NK-lysin为稳定的,半衰期在大肠杆菌中(体内)长,与白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)和颗粒性蛋白B(Granzyme B,GZMB)具有相互作用;预防组和治疗组小鼠存活率分别为80.00%和86.67%。综上所述,猪源抗菌肽在小鼠体内安全且具有一定的抑菌作用。     

茶叶抗菌肽粗提物的抑菌活性及其对冷却肉保鲜的影响

为了制备茶叶抗菌肽粗提物并将其应用在冷却肉保鲜上,以龙井茶叶为材料提取茶叶抗菌肽粗提物,采用平板抑菌法检测茶叶抗菌肽粗提物的抑菌活性,通过细胞膜渗透率、磷离子泄漏、DNA结合和透射电子显微镜等指标分析茶叶抗菌肽粗提物对细菌的作用机制,通过微生物菌落数量和pH值两个指标评价茶叶抗菌肽粗提物对冷却肉的防腐保鲜效果。结果表明:提取的茶叶抗菌肽粗提物主要包括分子量小于18.4 ku的多肽,其对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌均具有抑菌活性,可造成细菌细胞膜渗透率增强,引起细菌细胞外磷离子浓度增加,造成细菌细胞膜不完整、出现破损,但不与细菌基因组DNA结合。茶叶抗菌肽粗提物可以显著抑制冷却肉中微生物的生长,延缓pH值上升,延长保鲜时间,对冷却肉具有防腐保鲜作用,具有较高的开发利用价值。     

林蛙皮抗菌肽的提取及其某些特性的测定

从长白山产林蛙皮肤中分离到具有抗菌活性的蛋白、多肽混合物LPⅠ，经凝胶过滤，进一步分离纯化，获得一种具有抗菌尖性的多肽物质LPⅡ。抑菌试验表明，对于多种革兰氏阴性细菌、革兰氏阳性细菌以及真菌，LPⅠ具有一定的抑菌作用；LPⅡ具有较中的抗菌作用。SDS－PAGE电泳分析表明：LPⅡ为单一区带，测定其分子量为6．3ku。