大叶榉愈伤组织诱导与继代培养的影响因素

以大叶榉种子的子叶、胚轴、顶芽、嫩枝叶片和茎段等为外植体 ,对大叶榉进行愈伤组织诱导及继代培养研究 .结果表明 :不同外植体的愈伤组织诱导能力有差异 ,其诱导率按高低顺序排列依次为子叶、胚轴、叶片、茎段和顶芽 ;愈伤组织质地、颜色、生长速度与基本培养基、外源激素有很大的关系 ,基本培养基以 WPM培养基最好 ;最佳诱导培养基不适合继代保存 ;在培养基中附加抗氧化剂并调整激素种类 ,可较好地防止褐变现象     

不同抗氧化剂对银杏愈伤组织褐变影响的研究

以银杏幼叶为外植体,对银杏进行愈伤组织诱导和继代培养.通过正交试验设计,研究了不同浓度的3种激素配合使用对银杏愈伤组织诱导的效果,筛选出诱导银杏愈伤组织的最佳培养基MS+3mg/LNAA+3mg/L6-BA.研究了在银杏愈伤组织继代过程中,不同浓度的4种抗氧化剂对褐变抑制的效果,筛选出最佳抗氧化剂及其浓度10 mg/LVc.4种抗氧化剂对抑制褐变的效果如下Vc>PVP>柠檬酸>Ac,其中,PVP的最佳浓度为1 g/L.继代过程中,光照条件对愈伤组织褐变程度有一定的影响.     

牡丹愈伤组织诱导和继代培养体系的建立

以牡丹为材料,研究了不同外植体、激素对愈伤组织诱导和继代增殖的影响,结果表明:①牡丹子叶、胚轴是诱导愈伤组织的最佳外植体;②牡丹子叶愈伤组织诱导的最佳培养基为:MS+Ca2+;③牡丹愈伤组织增殖的最佳培养基为:MS+2,4-D 0.5 mg.L-1+NAA 1.5 mg.L-1+Vc 500 mg.L-1;④在培养基中添加500 mg.L-1Vc或去除Cu2+,具有较好的抗褐化效果。     

板栗愈伤组织诱导及外植体褐化研究

以‘泰山1号’板栗新梢茎段为试材,采用正交试验设计和单因素试验法,研究了不同培养基、消毒时间、外植体、激素、蔗糖含量、抗氧化剂及光照条件对愈伤组织诱导及外植体褐化的影响。结果表明:‘泰山1号’板栗愈伤组织诱导的最佳培养基是WPM培养基;用0.1%Hg Cl2消毒13~15 min,外植体褐化率明显降低;以茎段(带顶芽)为外植体,蔗糖浓度为30 g·~(-1),愈伤组织诱导率最高;愈伤组织诱导最佳激素组合为:6-BA1.0mg·L~(-1)+NAA0.2 mg·L~(-1);100 mg·L~(-1)VC和6 g·L~(-1) PVP能有效抑制外植体褐化;先暗培养两周再进行光培养,可显著降低外植体褐化率。     

朱樱花组培快繁技术研究

研究对朱樱花籽苗、幼苗茎段和叶片,成年植株茎段和嫩叶等不同外植体和不同生长调节剂对朱樱花愈伤组织诱导的影响,结果表明:不同外植体诱导愈伤组织的能力是:籽苗茎段带节茎段叶片,籽苗茎段和带节茎段是愈伤组织诱导的最佳外植体。用种子播种一个月后的籽苗作为外植体,愈伤组织诱导率高且不会褐化,其诱导最佳培养基配方为BA1.0mg/L+NAA2.0mg/L,诱导率为100%;多年生嫩茎产生的愈伤组织丛生芽诱导率为0%,以幼苗产生的愈伤组织进行丛生芽诱导,最佳培养基配方为BA2.0mg/L+NAA1.5mg/L,诱导率为100%。通过对1%升汞对外植体消毒时间的不同实验,得出1%升汞消毒外植体6min褐化率、污染率明显减少。     

曼地亚红豆杉愈伤组织诱导试验

以5年生曼地亚红豆杉当年生枝条的茎段、芽苞、叶片和幼嫩根为外植体,以MS添加不同质量浓度的2,4-D,NAA,KT为培养基进行愈伤组织诱导试验。结果表明:曼地亚红豆杉愈伤组织诱导培养基中生长素与细胞分裂素的比例应在10∶1左右;2,4-D与NAA的比例应在2∶1左右。当年生茎段是进行曼地亚红豆杉愈伤组织诱导的较好外植体,诱导率高,愈伤组织生长也较好。暗培养条件更有利于愈伤组织的诱导,诱导率高,且诱导出的愈伤组织质量好。35℃温水浸泡30 min的处理对抑制褐化有理想的效果,外植体褐化现象得到了极大抑制。     

喜马拉雅红豆杉愈伤组织的诱导

采用喜马拉雅红豆杉的幼叶、幼嫩茎段、幼根为材料,比较不同外植体、基本培养基、植物生长调节剂的配比、抗氧化剂以及培养条件对愈伤组织诱导的影响。结果表明,幼叶做为外植体时,其诱导率高于幼嫩茎段和幼根,愈伤组织量大;MS、1/2MS、B5和WPM基本培养基上均能诱导出愈伤组织,其中MS基本培养基上诱导效果最好,显著高于其他的基本培养基;MS培养基上添加1 mg/L 6-BA和0.5 mg/L 2,4-D配合使用时,诱导率达到93.6%,愈伤组织生长也最旺盛;基本培养基MS中添加1 mg/L Vc时褐变现象得到极大抑制,愈伤组织生长较好;暗培养有利于愈伤组织的诱导,且诱导出的愈伤组织质量好。     

植物生长调节剂对黑果枸杞愈伤组织诱导、增殖及分化的影响

为建立黑果枸杞高频再生体系及进行细胞突变体筛选、遗传转化奠定基础,以黑果枸杞叶片、茎段和腋芽为外植体,以MS为基本培养基,附加不同浓度的植物生长调节剂进行愈伤组织的诱导、增殖及不定芽分化研究。结果表明:诱导愈伤组织的最佳培养基为MS+2,4-D 2.0mg/L+6-BA 0.5mg/L;在愈伤组织的继代培养过程中,高浓度的2,4-D有利于愈伤组织的诱导,但对愈伤组织的生长有一定的抑制作用,最佳培养基为MS+2,4-D 1.0mg/L+6-BA 0.5mg/L;在愈伤组织的再分化过程中,6-BA对再生芽的分化效果最好,出芽率高,且多诱导出丛芽,最佳培养基为MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.10mg/L。试验表明:黑果枸杞叶片、茎段和腋芽均可诱导愈伤组织,茎段诱导率最高;筛选出了茎段愈伤组织诱导、增殖及再生芽分化的适宜培养基,为其细胞工程育种及规模化生产提供支撑。     

牡丹愈伤组织的诱导及愈伤褐化抑制的研究

以凤丹为试验材料,比较不同外植体,不同基本培养基,不同激素组合对愈伤诱导率的影响;结果表明,以子叶和胚轴为外植体,在培养基1/2改良WPM+2,4-D1.0 mg·L-1+6-BA1.0 mg·L-1+水解酪蛋白500mg·L-1+L-谷氨酰胺150 mg·L-1+蔗糖30g·L-1+琼脂7g·L-1的培养基中诱导率最高,可达100%。同时研究了愈伤褐化抑制,结果表明,以1/2改良WPM为最佳基本培养基;PVP和植物凝胶的效果最好,褐化指数分别为31.11%与30.00%;黑暗、低温、较短的继代周期都能不同程度的减缓愈伤褐化。     

广藿香愈伤组织的诱导和增殖

以广藿香的幼叶、茎段为外植体,接种于附加不同浓度的2,4-D、NAA、6-BA、KT、TDZ及其组合的MS固体培养基上进行愈伤组织的诱导,结果表明:单独使用5种激素在一定范围内均能诱导出愈伤组织;最佳组合培养基为MS+6-BA 1.0 mg.L-1+2,4-D 0.1 mg.L-1。进一步研究发现,茎段和叶片诱导的愈伤组织的生长曲线都呈“S”型,且生长周期均为18 d。     

油茶两物种花药培养愈伤组织诱导试验

对小果油茶和广宁红花油茶的花药进行离体培养,并诱导形成愈伤组织。试验结果表明,广宁红花油茶花药具有很强的愈伤组织诱导能力,而小果油茶褐化严重,诱导率很低。培养基及其激素种类与浓度组合对愈伤组织诱导有很大影响,且两种油茶表现出一致性,在最好的MS+2,4-D0.6mg·L-1+NAA0.4mg·L-1和B5+2,4-D1.2mg·L-1+6-BA0.4mg·L-1培养基中,广宁红花油茶诱导率高达94.67%和91.00%,小果油茶则分别为8.00%和3.34%。低温预处理6～12d有助于提高诱导率。MS培养基有利于愈伤组织生长增殖。还就小果油茶花药褐化等问题进行了讨论。     

Effects of sodium nitroprusside on callus browning of Ficus religiosa: an important medicinal plant

Tissue browning is a major problem in tissue culturing of woody plants, especially for Ficus religiosa which occurs by the accumulation and oxidation of phenolic compounds. This study aimed to determine the effect of different concentrations of sodium nitroprusside on the appearance of callus browning from leaf explants. The results indicate that callus browning was significantly reduced by supplementation of sodium nitroprusside to the MS medium and supplemented with 2.26μM of 2,4-dichlorophenoxyacetic acid and 0.22μM of 6-benzyl amino purine. The accumulation of hydrogen peroxide and phenolic compounds in the callus tissues decreased at the 50 μM concentration of sodium nitroprusside. Although catalase and peroxidase activities decreased at the 50μM concentration, the activity of superoxide dismutase and polyphenol oxidases, as well as proline content, increased exponentially. Sodium nitroprusside could be useful for the formation of non-embryogenic callus with high levels of metabolic activity for the production and isolation of secondary metabolites.     

银白杨不定芽诱导与增殖分化研究

为建立优良银白杨离体快繁再生体系,培育速生高产的银白杨苗木,以西藏银白杨叶片、茎段作为不定芽诱导的初始材料,以MS为基本培养基,对不定芽诱导中产生的愈伤组织进行二次不定芽诱导,研究不同激素浓度及配比对银白杨不同材料不定芽诱导与增殖分化的影响。研究表明:6-BA∶NAA为5∶1是银白杨不定芽诱导的最优激素浓度配比,银白杨不定芽诱导的最佳培养材料为当年生带腋芽茎段;6-BA(0.5mg/L)+NAA(0.1mg/L)+KT(0.2mg/L)为愈伤组织诱导不定芽最优激素浓度组合;不定芽增殖的最优激素7浓度组合为6-BA(0.5mg/L)+NAA(0.2mg/L)+KT(0.2mg/L)+IBA(0.2mg/L),平均增殖系数最高。综合考虑得出:MS+6-BA(0.5mg/L)+NAA(0.1mg/L)为银白杨不定芽诱导分化的最佳培养基,不定芽诱导的最佳材料为银白杨当年生带腋芽茎段;愈伤组织不定芽诱导的最佳培养基为MS+6-BA(0.5mg/L)+NAA(0.1mg/L)+KT(0.2mg/L);不定芽增殖的最佳培养基为MS+6-BA(1.0mg/L)+NAA(0.2mg/L)+KT(0.2mg/L)+IBA(0.2mg/L),pH5.8。     

Effects of plant growth regulators,carbon sources and pH values on callus induction in Aquilaria malaccensis leaf explants and characteristics of the resultant calli

The endangered tropical tree, Aquilaria malaccensis, produces agarwood for use in fragrance and medicines. Efforts are currently underway to produce valuable agarwood compoundsn tissue culture. The purpose of this study was to develop an optimal growth medium, specifically, the best hormone combination for callus suspension culture. Using nursery-grown A. malaccensis, sterilized leaf explants were first incubated on basic Murashige and Skoog(MS) gel medium containing 15g/L sucrose and at pH 5.7. Different auxin types including 1-naphthaleneacetic acid(NAA), 2,4-dichlorophenoxyacetic acid(2,4-D), and indole-3-butyric acid(IBA), were tested at various concentrations(0.55, 1.1 and 1.65 μM) using the basic medium. Leaf explants were incubated for 30 days in the dark. Callus induced by 1.1 μM NAA had the highest biomass dry weight(DW) of 17.3 mg; however the callus was of a compact type. This auxin concentration was then combined with either 6-benzylaminopurine(BAP) or kinetin at 0.55, 1.1, 2.2 or 3.3 μM to induce growth of friable callus. The 1.1μM NAA + 2.2μM BAP combination produced friable callus with the highest biomass(93.3mg DW). When testing the different carbon sources and pHs, sucrose at 15g/L and pH at 5.7 yielded highest biomasses at 87.7mg and 83 mg DW, respectively. Microscopic observations revealed the arrangement of the friable cells as loosely packed with relatively large cells, while for the compact callus, the cells were small and densely packed. We concluded that MS medium containing 15 g/L sucrose, 1.1 μM NAA + 2.2 μM BAP hormone combination, and a pH of 5.7 was highly effective for inducing friable callus from leaf explants of A. malaccensis for the purpose of establishing cell suspension culture.     

弗吉尼亚栎不定芽增殖及试管苗再生影响因子研究

[目的]探析弗吉尼亚栎组织培养中不定芽增殖和生根的关键影响因子,建立弗吉尼亚栎试管苗再生体系,为弗吉尼亚栎无性系选育提供技术支撑。[方法]以弗吉尼亚栎带芽茎段为外植体,采用不定芽增殖途径,研究弗吉尼亚栎组织培养过程中外植体选择、褐化控制以及培养基选择、激素配比对不定芽增殖和生根的影响。[结果]表明:向培养基中添加抗坏血酸、硫代硫酸钠和活性炭均显著降低外植体的褐化半径(p<0.05),其中,外植体在含有3.00、5.00 g·L^-1活性碳的培养基中褐化半径最小。基本培养基筛选试验表明:以1/4MS或WPM为基本培养基时,平均芽长和芽数明显优于MS培养基。不定芽增殖最佳培养基为1/4MS+1.20 mg·L^-1 6-BA,培养周期40 d,增殖倍数可达6.6。最佳生根培养基为1/4MS+0.50 mg·L^-1 IBA+0.50 mg·L^-1NAA,生根率达53.33%,且根粗壮,木质化程度较高。组培苗移植到灭菌河沙中,平均成活率达57.78%。[结论]培养基成分和激素配比是影响弗吉尼亚栎不定芽增殖和试管苗再生的主要因子,低盐培养基(1/4MS或WPM)不仅可以促进不定芽增殖,且能够减轻外植体褐化;还发现野外取材的外植体极易褐化,而来源于无菌苗的外植体,褐化程度明显低于野外取材的外植体。     

樟树胚萌发早期影响因素及植株再生

【目的】植物体细胞胚胎发生和植株再生受多重因素影响。为了完善樟树体细胞胚胎发生培养技术,提高其遗传转化效率,满足樟树用材的需要。【方法】本研究以樟树未成熟种子为试材,探讨了预处理、不同采种时间、活性炭、肌醇及激素浓度对樟树胚萌发早期的影响,并对不同种源樟树胚性愈伤组织诱导体细胞胚胎发生、分化、生根等进行研究。【结果】预处理对樟树幼胚萌发无显著性影响;不同的采种时间对胚萌发率和平均出芽数影响很大;随着活性炭浓度的升高,胚萌发率呈现先升高后下降的趋势;肌醇浓度对樟树幼胚萌发率和平均出芽数均无显著性影响;对6-BA、NAA、IBA和链霉素进行正交设计试验,其影响的主次顺序为:6-BA> NAA>链霉素> IBA;长沙和郴州种源樟树胚性愈伤组织诱导率最高,达66.67%,但生长情况最好的是长沙和岳阳种源胚性愈伤组织;岳阳、郴州、醴陵、长沙、怀化、娄底愈伤组织诱导体胚发生最大诱导率分别为56.41%、42.31%、48.96%、64.71%、63.25%、56.31%;各种源樟树生根率良好,长沙种源有最高生根率89.25%,郴州和醴陵种源樟树最佳生根激素配比为1 mg/L IBA+0.1 mg/L IAA,其余种源生根最适激素均为1 mg/L IBA+0.1 mg/LNAA。【结论】浸泡处理不利于幼胚后期生长发育;附加150 mg/L的活性炭,培养基褐化率较低;6-BA对幼胚早期萌发占主导作用;实验时选择7月未成熟合子胚的长沙种源樟树最佳。