受体裂解酶实验室制备方法及在血清处理上的应用

哺乳动物（包括人）和禽类血清中往往含有非特异性血凝抑制因子，因此，在利用血凝抑制试验（HI）进行血清抗体测定之前，有必要对血清中非特异性因子进行排除。热灭活是一种排除非特异性因子的有效方法，但对特异性抗体破坏较大。红细胞吸附试验是一种常用而有效的方法，但这种方法仅对禽类血清中的非特异性血凝抑制因子有效，对哺乳动物血清效果不理想。利用受体裂解酶（RecentorDe－stroyingEnzyme，RDE）处理血清，即适用于禽类血清，也适用于哺乳动物血清，美国已在流感和禽流感诊断中广泛应用。本文将报道RDE的实验室制备方法及…     

青海高原地区鸡流行病血清学调查分析

随着青海高原地区禽类及其产品市场流通日益频繁,鸡病发生及危害不断增加,为随时掌握鸡病疫情动态和观察鸡病免疫效果,全面防控疫病,我们从2000年至2004年对该地区鸡流行病进行了连续几年的血清学检测和分析。1方法与材料1.1方法:禽流感、鸡传染性法氏囊病、鸡白痢、用琼脂扩散免疫试验,检测血清中特异性抗体。鸡新城疫用血凝抑制试验,即微量血凝试验(HI),按常规微量法检测血清中HI抗体效价。禽白血病用酶联免疫吸附试验(ELISA)。1.2材料:禽流感、鸡白痢、鸡传染性法氏囊病琼脂扩散试剂,标准抗原、阳性血清、阴性血清由哈尔滨兽医研究所…     

不同种禽红细胞对禽流感血清抗体检测的影响

为摸清不同种禽红细胞对禽流感血清抗体检测结果的影响,本试验通过对经20%鸡红细胞吸附处理后和不进行任何处理的鸡、鸭和鹅的禽流感阳性血清,分别用1%的鸡红细胞、鸭红细胞和鹅红细胞进行血凝试验(HA)和血凝抑制试验(HI)。结果发现,用鸡红细胞检测水禽血清会出现非特异性的凝集,经20%鸡红细胞吸附处理后能去除水禽血清中部分的非特异性凝集因子,而选用相应的禽红细胞进行禽流感抗体检测则不存在非特异性的影响。因此,进行禽流感血清抗体检测时应选用各自对应的禽红细胞。     

水禽禽流感HI抗体检测方法的探讨

2003年国家质量监督检验检疫总局出台了<高致病性禽流感诊断技术>(GB/T18936-2003)[1],标准中要求采用鸡红细胞作为血凝与血凝抑制试验的指示细胞监测禽流感抗体,这对于免疫鸡血清中的相应抗体水平监测比较合理[2-4],但对鸭、鹅及其他免疫禽类进行HI抗体水平监测时,常出现非特异性凝集现象[2-3],对检测结果的判定影响较大.有鉴于此,本试验拟对禽流感疫苗免疫后的水禽血清HI抗体检测方法进行探讨,研究适合免疫水禽禽流感HI抗体检测的方法.     

祛除禽流感HI试验中鹅血清非特异反应现象的研究

目前禽流感抗体水平监测采用GBT18936-2003的方法,此方法中要求采用1%鸡红细胞来进行血凝和血凝抑制试验,以测定禽流感的抗体水平,此方法较适用于免疫鸡相应抗体水平的测定[1-3],用于鹅抗体检测时常出现非特异凝集现象,试验结果很难判定。鉴于此,在利用血凝抑制试验进行血清抗体检测之前,有必要对血清中非特异性血凝抑制因子与非特异性凝集因子(非病毒性凝集因子)加以祛除。本试验对免疫后的鹅血清HI抗体检测方法进行探讨,寻求适合鹅血清HI抗体检测的方法。     

用鸭红细胞悬液消除非特异性凝集因子对鸭禽流感HI试验的影响

禽流感自1878年在意大利首次发生以来,该病不断蔓延。近年来,在许多国家和地区出现暴发和流行,成为严重危害养禽业健康发展的一种主要家禽传染病。加强禽流感的监测是预防和控制禽流感的重要措施。目前,基层单位大都采用微量红细胞血凝抑制试验(简称HI试验)来检测家禽禽流感血清抗体。但在检测过程中,笔者发现依照国标的要求采用鸡红细胞悬液来检测水禽禽流感血清抗体时,常常存在非特异性凝集现象。本试验用鸭红细胞悬液替代鸡红细胞悬液来检测水禽禽流感血清HI抗体,探讨是否能消除非特异性凝集因子对鸭禽流感HI试验的影响,现报道如下。1…     

新城疫抗体水平检测方法与注意事项

新城疫是一种禽类的高度接触性传染病,严重威胁养禽业的健康发展。研究详细阐述新城疫抗体水平检测方法:血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验,通过对鸡体内血清血凝效价和血凝抑制效价进行检测,判定鸡群是否需要进行新城疫免疫接种和治疗,具有临床指导意义,同时概括试验的注意事项。     

不同种禽类红细胞悬液对HI结果的影响

红细胞凝集抑制试验能够用于监测某些畜禽传染病,如新城疫、禽流感等的抗体水平,由于动物血清中存在某些非特异性血凝物质,致使血凝抑制试验的结果出现非特异性血凝现象。本实验采用鸡、鸭和鹅的红细胞分别与同一份血清进行血凝抑制实验,结果表明,用鸡红细胞来检测鸭、鹅血清抗体效价时,出现非特异性血凝的血清份数较少;而用鸭、鹅红细胞来检测鸡血清的抗体效价时,出现非特异性血凝的血清份数较多。     

免疫或人工感染鸡副嗜血杆菌发生的血清学应答

免疫或人工感染鸡副嗜血杆菌(Hpg)血清变异型A或C的鸡发生的血清学应答可用特异性的血球凝集(HA)抗原和普通的HA抗原进行检查。免疫或人工感染Hpg血清变异型A的鸡能产生针对Hpg血清变异型的特异性的HA抗原和Hpg普通的HA抗原的血凝抑制(HI)抗体;大部分鸡用血清变异型C免疫后第3周能检出两种HA抗原型的HI抗体,以后滴度逐渐下降;大多数鸡人工感染血清变异型C只产生对普通HA抗原的HI抗体,很少的鸡产生对血清变异型的特异性的HA抗原的HI抗体。     

抗禽流感H9亚型血凝素单克隆抗体的病毒中和作用

通过血凝抑制(HI)和鸡胚中和试验(VN)证实，本实验室制备的抗禽流感H9M2单抗11A5和11B2株可特异性地抑制H9亚型禽流感病毒的血凝特性，而与禽流感H5和H7亚型以及其他具有血凝性感染禽类的病毒(如新城疫等)不反应。两株单抗腹水HI效价均达到15Log2。中和试验表明：上述两株单抗均可有效抑制H9N2病毒在SPF鸡胚中的增殖，使病毒失去血凝活性．测得11A5和11B2株腹水对H9N2禽流感病毒的半数保护量分别为10^-3.35和10^-4.58。该单抗的研制成功对于进一步建立快速鉴别诊断禽流感H9亚型病毒具有重要意义。     

血凝性脑脊髓炎病毒血凝抑制试验方法的研究

为检测某猪场的猪感染血凝性脑脊髓炎病毒的情况,用250 mL/L 的鸡红细胞和200 g/L的高岭土去除非特异性物质,使用4单位抗原及5 mL/L鸡红细胞做HI 试验,发现这些条件较适宜。用此法对其他5 种猪传染病抗血清进行检查,发现均不产生非特异性血清学反应。另外,本试验用滤纸吸附血清与分离血清做HI比较试验,其HI价差异不显著,从而为以后进行血清学调查提供了一种便利的方法。用分离的HEV与日本HEV 67N毒株抗原进行比较,两者的HI价一致。     

H3N2亚型犬流感病毒血凝及血凝抑制试验的研究

为优化H3N2亚型犬流感病毒(CIV)的血凝抑制(HI)试验方法,本研究应用不同种类红细胞进行CIV的血凝(HA)试验,应用不同种类红细胞和不同血清处理方法进行CIV的HI试验,评价其对HA和HI试验的影响。结果表明,H3N2亚型CIV对鸡和犬红细胞的凝集性最好,对小鼠、猪和牛红细胞的凝集性较差。HI试验应用鸡红细胞悬液效果最好,受体破坏酶(RDE)和高碘酸钾处理可以有效去除犬血清中非特异血凝抑制素,但高碘酸钾对血清特异性抗体有损耗。本研究筛选出H3N2亚型CIV HI试验的最佳方法,为犬流感的血清学诊断提供技术支持。     

一例藏鸡新城疫病毒的分离鉴定与病指数试验

取疑似新城疫病毒(NDV)感染的病料进行9日龄鸡胚接种,结果分离到一株病毒.该病毒具有血凝性,血凝活性能被新城疫阳性血清所抑制.减蛋综合征(EDS)阳性血清,传染性支气管炎阳性血清、禽流感H5、H9单因子血清进行血凝抑制(HI)交叉试验发现,该病毒不能抑制血凝活性,动物回归试验出现与新城疫病毒感染鸡相一致的症状,可确认该病为新城疫病毒感染.根据NDV毒力测定标准,MDT＞90 h,ICPI为0.38,IVPI值为0,可判定为新城疫弱毒株.     

浅谈血凝试验（HA）和血凝抑制试验（HI）影响因素及应用

血凝试验（HA）和血凝抑制试验（HI）是目前兽医实验室常用的检测方法,作为血清诊断技术之一,是利用某些病毒具有凝集红细胞的特性,且这种特性能被特异性抗血清抑制的原理,用于已知病毒检查血清中相应抗体状态和已知血清鉴定未知病毒的一种兽医实验室最常用的实验方法。HA和HI试验具有特异性好、操作方便、可同时进行大量样本试验、对试验环境要求不高等优点,     

卵白素—生物素(Avidin-Biotin)斑点免疫结合 试验检测鸡败血支原体(MG)、滑液囊文原体(MS)

败血支原体(MG)、滑液囊支原体(MS)是鸡慢性呼吸道病和传染性滑膜炎的病因。可造成养鸡业的重大损失。目前利用快速血清平板试验(RSP),血凝抑制(HI)及ELISA试验检测MG,MS抗体,但ELISA存在非特异性,HI和RSP又有假阳性反应。同时这几种试验的敏感性较差,往往不能检测较低水平的抗体,不利于该病的早期诊断。     

鹅副黏病毒甘肃地方毒株的分离和初步鉴定

鹅副黏病毒病是一种由鹅传播的新型急性传染病,该病与鸡感染新城疫具有相类似的临床症状和病理变化。2019年1月从甘肃某鹅场病鹅体内分离到一株副黏病毒,将病料处理后接种10日龄鸡胚,进行血凝试验(HA)和血凝抑制试验(HI),最后进行动物试验。结果表明:该病毒具有血凝活性,可以用标准的新城疫阳性血清抑制血凝活性,可能导致未接种新城疫免疫鸡胚的100%死亡。动物试验证明该病毒对鸡具有100%的发病率和致死率。     

鸭禽流感免疫抗体血凝检测及其应用

鸭是禽流感传播链中的一个重要环节,能否有效防控鸭禽流感的关键之一是使用科学的检测方法.目前,是参照禽流感血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验标准(GB/T18936-2003)[1],但是,鸭体内含有非特异性抑制因子,血清中的唾液酸残基会模拟红细胞受体,同红细胞受体竞争与流感病毒血凝素的结合,因而会导致非特异性抑制结果(假阳性)的出现,用鸡红细胞悬液检测水禽禽流感血清抗体时,常常存在非特异性凝集现象,出现前带和后带现象,有时能严重影响结果的判定.为此,本文采用不同种家禽的红细胞悬液做重复试验,探讨水禽血清的处理方法及不同种的家禽红细胞悬液对水禽禽流感血清抗体检测的影响, 在临床应用中,可为鸭禽流感免疫技术提供参考依据.     

猪穴位免疫鸡IBV疫苗后猪血清中抗鸡IBV抗体效价的变化

在猪后海穴注射免疫鸡IBV疫苗,应用间接血凝抑制试验(HI)观察免疫后不同时间猪血清中抗体效价的变化趋势。结果:仔猪50日龄、57日龄、71日龄分别强化免疫IBVH120灭活苗3次后,血清中HI效价逐渐增高,二免后7天达17log2,较常规颈部肌肉注射免疫猪高2-3log2;育肥猪分别在130、138、146、151日龄时进行4次H120、H94强化免疫,随着免疫次数的增多,血清HI效价逐渐增高,但不如仔猪的增高明显。结果说明猪穴免疫鸡IBV苗后,猪能对鸡IBV产生特异性免疫应答反应,且后海穴免疫引起的免疫应答较非穴位强。     

鸡传染性支气管炎微量血凝抑制试验方法的研究

用胰酶处理鸡传染性支气管炎病毒(IBV)制成血凝(HA)抗原,HA＝1:16384,用此抗原建立了微量血凝抑制试验(HI)方法检测IBV阳性血清。IBV阳性血清鸡胚病毒中和试验(NT)结果与HI效价呈正相关,相关系数r＝0.29,HI效价达1:8以上可保护鸡胚抵抗200个MLD的IBV攻击,表明HI抗体是保护性抗体,该方法具有较大的实用价值。     

乌苏市高致病性禽流感血清学监测

高致病性禽流感对养禽业的危害十分严重。禽类在免疫后的抗体水平直接关系到养禽业的发展。用血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验对高致病性禽流感抗体水平进行监测显得十分重要和必要。对乌苏市22个规模化鸡场的206份鸡血清样品进行了H5亚型禽流感(AIH5)免疫抗体的测定。所检206份血清样品中,有162份血清样品合格,占所检样品的78.6%,所抽样的规模化养鸡场AIH5疫苗的总体免疫水平合格。