卡拉库尔羊卵巢中促性腺激素受体蛋白的分布

在自然发情情况下,取10只卡拉库尔羊卵巢,采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法(SP)方法观察卡拉库尔羊卵巢中促卵泡素受体(FSHR)、促黄体素受体(LHR)分布情况。分别选取连续的5张阳性切片,图像分析。结果显示:FSHR、LHR阳性细胞主要分布于卵泡颗粒细胞、膜细胞和卵母细胞。卡拉库尔羊原始卵泡卵母细胞中便有2种受体阳性细胞分布,在各级卵泡中2种受体阳性细胞数量随卵泡发育水平呈正向增加趋势。     

INHA在多浪羊和卡拉库尔羊卵巢的定位

为从形态学角度理解内分泌调节过程,揭示抑制素对绵羊卵巢调节作用机制,对多浪羊和卡拉库尔羊卵巢中抑制素分布进行免疫组化SP方法定位。分别选取相邻的5张连续切片,电镜观察,图像分析。结果显示:多浪羊、卡拉库尔羊抑制素阳性物质主要见于膜细胞和细胞间质。多浪羊与卡拉库尔羊在其初级卵泡和次级卵泡中抑制素的阳性细胞率显著高于原始卵泡和成熟卵泡(P0.05),且抑制素水平在腔前卵泡之前达到高峰,随后下降。     

LH受体在山羊结状神经节中的分布

为了检测山羊迷走神经结状神经节中是否有促黄体生成素受体(LHR)的存在,探讨促黄体生成素(LH)是否能够影响结状神经节内脏感觉神经元的功能活动。本试验采用免疫组织化学SP法观察LHR在结状神经节中的分布特征,利用IPP 6.0图像半定量分析系统分析LHR在结状神经节中阳性神经元和阳性非神经元上的表达量差异。结果显示,LHR主要分布在神经元细胞膜和细胞质中,呈棕黄色为强阳性。在带核的神经元中,神经元细胞核呈圆形空泡状,LHR为阴性反应。神经元群间的神经纤维呈淡黄色,LHR为弱阳性。LHR在神经元胞体上的相对表达量极显著高于节内其他阳性非神经元结构(P0.01)。结果表明,山羊结状神经节内脏感觉神经元是LH作用的主要靶细胞,提示LH有可能通过作用于结状神经节内脏感觉神经元胞体上的LHR参与调节内脏器官感觉信息的传导。     

促卵泡素受体和促黄体素受体在乏情期和怀孕期牦牛卵巢中的表达

应用免疫组织化学技术和图象分析方法对乏情期、怀孕期牦牛卵巢的促卵泡素受体(FSHR)、促黄体素受体(LHR)的表达特点进行了研究。结果表明,牦牛卵巢的皮质、髓质、颗粒层和膜内层、黄体中都分布有FSHR和LHR。且牦牛卵巢皮质、髓质中的FSHR光密度值在乏情期显著大于怀孕期(P0.05);怀孕期无黄体侧卵巢颗粒层和膜内层中FSHR光密度值均大于乏情期和怀孕期有黄体侧(P0.05)。怀孕期有黄体侧卵巢皮质处LHR光密度值最大,乏情期次之,怀孕期无黄体侧最小,各组间差异显著(P0.05);在怀孕期无黄体侧卵巢髓质处LHR光密度值显著小于怀孕期有黄体侧和乏情期(P0.05);在乏情期、怀孕期无黄体侧和怀孕期有黄体卵巢颗粒层和膜内层处LHR光密度值之间差异均不显著(P0.05)。表明牦牛卵巢中FSHR和LHR随着生殖阶段的不同而变化。     

INHβB、FSHR和LHR在牦牛不同生殖生理阶段卵巢组织中的表达及差异性分析

为了从受体角度研究抑制素(INH)、促卵泡素(FSH)和促黄体素(LH)对牦牛不同生殖生理阶段卵巢发挥的功能,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、蛋白印迹技术(Western blot)和免疫组织化学技术(IHC)检测抑制素受体(INHβB)、促卵泡素受体(FSHR)和促黄体素受体(LHR)在牦牛发情期、间情期和妊娠期卵巢组织中的表达和定位。结果显示,INHβB在妊娠期牦牛卵巢组织中的表达量显著高于发情期和间情期(P<0.05),而FSHR在发情期的表达量显著高于间情期和妊娠期(P<0.05),LHR则在间情期的表达量显著高于发情期和妊娠期(P<0.05);这3个受体主要分布在卵泡颗粒细胞、卵丘细胞、黄体细胞和卵泡膜上。结果表明,INHβB、FSHR和LHR在牦牛发情期、间情期、妊娠期卵巢组织中均有表达,但其表达量存在一定差异,提示INH、FSH和LH在牦牛不同阶段对卵泡生长发育、卵泡成熟、排卵及黄体的形成发挥着不同的作用,该结果为进一步研究牦牛生殖活动中INH与FSH、LH的互作机制提供参考。     

3个品种绵羊超数排卵处理后卵巢上促黄体素受体表达差异的研究

本研究旨在探讨在具有不同超数排卵效果的绵羊品种中,在进行超排处理后其卵巢上的促黄体素受体(LH receptor,LHR)分布情况,为进一步研究二者的相关性以及据此为改进超排效果奠定基础.根据超数排卵效果的优劣依次选择3个我国地方绵羊品种:小尾寒羊、白滩羊和乌珠穆沁羊.在常规超排最后一次注射FSH后的8、16和24 h分别各取3只绵羊的卵巢,采用免疫组织化学法观察3个品种绵羊卵巢上LHR的分布情况.结果表明:LHR存在于3个地方品种绵羊卵巢有腔卵泡的颗粒细胞和膜细胞上,但在早期卵泡上不表达；各品种绵羊的近成熟卵泡上LHR阳性细胞率都显著高于相应的次级卵泡(P＜0.05)；3品种绵羊近成熟卵泡中LHR的阳性变化率存在显著差异,从高到低依次为小尾寒羊＞白滩羊＞乌珠穆沁羊(P＜0.05).籍此可以得出以下结论:LH对绵羊早期卵泡发育的诱导可能不需要通过其特异性受体起作用；3品种绵羊近成熟卵泡中LHR的阳性变化率与超排效果是一致的,表明超数排卵的效果可能与绵羊卵巢上的LH受体分布存在一定的联系.     

FSH对多浪羊子宫和卵巢组织及血清生殖激素的影响

为了探讨外源激素卵泡刺激素(FSH)在诱导绵羊超数排卵过程中子宫和卵巢形态、卵泡数量及8种生殖激素浓度变化情况,试验选取30只健康经产多浪羊,随机均分为超数排卵(DC)组和同期发情(DT)组,同时埋植孕酮缓释硅胶栓(CIDR),记为第0天;DC组在埋栓后第11,12,13天依次递减注射FSH,DT组不做处理;在埋栓后第13天两组均撤栓并注射前列腺素(PG)。从埋栓第11天开始每组屠宰3只多浪羊,至第15天结束,摘取子宫和卵巢,观察子宫和卵巢形态,记录卵巢优势卵泡数量,采用ELISA试剂盒检测外源FSH处理后多浪羊血清中8种生殖激素FSH、促黄体生成素(LH)、雌激素(E2)、孕酮(P₄)、促性腺激素释放激素(GnRH)、PG、抑制素(INH)和瘦素(LEP)浓度的变化。结果表明：多浪羊经过埋栓处理后卵巢中优势卵泡数量随着时间推移先增加后减少,DC组的平均优势卵泡数量高于DT组。第15天DC组个别卵巢表面可观察到“红体”出现,而DT组未发现。在注射FSH后,DC组中FSH和LH激素浓度持续增加,第13,14天时显著高于第10～12天(P<0.05);E2浓度先...     

猪三种不同直径卵泡中颗粒细胞的比较研究

为探究不同直径有腔卵泡中猪卵巢颗粒细胞的生理机能差异,以期为后续生殖毒理学研究奠定基础。采用剖剪法获取猪卵巢内三种直径范围的有腔卵泡（小型〈2mm,中型2-5mm,大型≥5mm）并获得颗粒细胞,台盼蓝染色方法计算细胞存活率,倒置显微镜下观察细胞形态并计算细胞纯度,实时定量方法检测促卵泡刺激素受体基因（FSHR）及促黄体生成素受体基因（LHR）的表达进一步鉴定颗粒细胞,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定细胞生长曲线。结果显示从大中小三种不同直径有腔卵泡中获得的猪卵巢颗粒细胞存活率分别为68%、75%、72%,纯度分别为97%、95%、90%;细胞生长曲线表明,从24h开始进入对数生长期,并于120h达到最大值,且中型卵泡中获得的颗粒细胞生长增殖状态最佳;实时定量结果显示FSHR在猪三种直径的有腔卵泡颗粒细胞中均表达阳性,且呈现差异。     

成年猪促卵泡生成素水平的动态研究

前言促卵泡生成素(Follicula-stimulatingHormone-FSH)是腺垂体嗜碱性细胞合成和分泌的一种重要的生殖激素。它对雌性动物的一系列生殖机能产生深刻的影响,主要是刺激卵巢的生长,增加卵巢的体积和重量,促进卵泡颗粒细胞的增生和发育,对卵子的成熟     

促黄体生成素受体在雌性山羊颈动脉体的分布

检测促黄体生成素受体(LHR)在雌性山羊颈动脉体(CB)中存在及其分布特点,为促黄体生成素(LH)是否对CB起调节作用提供形态学基础。取雌性山羊的CB进行LHR免疫组织化学(SP)法染色观察与分析。结果表明:LHR免疫阳性物质在颈动脉体中分布广泛;镜下可见,在CB的小球结构内,Ⅰ型、Ⅱ型细胞的细胞膜LHR免疫阳性物质呈棕黄色,为强阳性,在其细胞质和细胞核中LHR免疫阳性物质呈黄色,为中等阳性;CB的间质组织中,血管内皮细胞LHR免疫阳性物质呈棕黄色,为强阳性;此外间质还可见许多点状或线状的非细胞阳性结构,呈淡黄色,为弱阳性。对实质细胞群和间质组织平均光密度的分析结果表明,CB的实质细胞是LH作用的主要靶细胞之一,提示LH可能通过CB实质细胞上的LHR来介导生物学效应,影响CB的实质细胞对血液内化学刺激的感知,间接的影响动物机体心血管的功能。     

Effect of GDF9 on Sheep Cumulus Cell Proliferation

The purpose of this study was to investigate the effect of growth differentiation factor 9 (GDF9) on the gene expression of cumulus cells expansion and hormone receptors as well as hormone secretion,in order to provide evidence for the role of GDF9 in the development of sheep cumulus cells.Sheep cumulus cells were used as the research object in this study,and were cultured for 48 h by adding different concentrations (0,50,100,200,400 ng/mL) GDF9 to low serum cell culture medium.Total RNA were extracted from the cells,using β-actin as the reference gene,Real-time quantitative PCR technology were used to detect the cumulus cells expansion related genes hyaluronic acid synthase gene 2 (HAS2),prostaglandin lead oxide synthase 2 (PTGS2),pentraxin 3 (PTX3) and hormone receptor genes follicle-stimulating hormone receptor (FSHR),luteinizing hormone receptor (LHR) and estrogen receptors (E₂R).Using the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) method to test the content of E₂ and P₄.The results showed that HAS2,PTX3,FSHR,E₂R and LHR mRNA relative expression of 200 ng/mL GDF9 group was extremely significantly higher than the control group and other GDF9 groups (P<0.01),PTGS2 mRNA relative expression was extremely significantly higher than the control group and 50,400 ng/mL GDF9 groups (P<0.01),and significantly higher than 100 ng/mL GDF9 group (P<0.05).When added 400 ng/mL GDF9,the relative mRNA expression of all the mentioned-above genes were all extremely significantly lower than that of the 200 ng/mL GDF9 group.Moreover,the E₂ secretion level was extremely significantly higher than that of the control group and 50 ng/mL GDF9 group (P<0.01),significantly higher than that of the 100 ng/mL GDF9 group(P<0.05),while had no significant difference from the 200 ng/mL GDF9 group (P>0.05).When added 100,200 and 400 ng/mL GDF9,the concentration of P₄ was significantly higher than the control group (P<0.05),and there was no significant difference from the 50 ng/mL group (P>0.05),and there was no significant difference between 100,200 and 400 ng/mL GDF9 groups (P>0.05).To sum up,GDF9 could promote the expansion of sheep cumulus cells and participated in the regulation of hormone secretion of sheep cumulus cells.     

GDF9对绵羊卵丘细胞增殖的影响

本试验旨在探究生长分化因子9（GDF9）对卵丘细胞扩展相关基因和激素受体基因表达量及激素分泌的影响,为GDF9在绵羊卵泡发育中的作用提供依据。以绵羊卵丘细胞为研究对象,通过在低血清细胞培养液中添加不同浓度（0、50、100、200、400 ng/mL）的GDF9,培养绵羊卵丘细胞48 h后,提取细胞总RNA,利用实时荧光定量PCR技术,以β-actin为内参基因,检测卵丘细胞扩展相关基因透明质酸合酶2（HAS2）、前列腺素内过氧化物合酶2（PTGS2）、穿透素3（PTX3）及激素受体相关基因卵泡刺激素受体（FSHR）、促黄体生成素受体（LHR）和雌激素受体（E₂R）的mRNA相对表达量;利用酶联免疫吸附法（ELISA）测定培养液中卵丘细胞分泌的雌二醇（E₂）和孕酮（P₄）含量。结果显示：在细胞培养液中添加200 ng/mL GDF9时,HAS2、PTX3、FSHR、E₂R和LHR的mRNA相对表达量极显著高于对照组与其他处理组（P<0.01）;PTGS2 mRNA相对表达量极显著高于对照组、50和400 ng/mL GDF9组（P<0.01）,显著高于100 ng/mL GDF9组（P<0.05）。当添加400 ng/mL GDF9时,各基因mRNA相对表达量均极显著低于200 ng/mL GDF9组（P<0.01）;E₂分泌量极显著高于对照组与50 ng/mL GDF9组（P<0.01）,显著高于100 ng/mL GDF9组,与200 ng/mL GDF9组差异不显著（P>0.05）。100、200和400 ng/mL GDF9组P₄分泌量显著高于对照组（P<0.05）,与50 ng/mL GDF9组没有显著差异（P>0.05）,且3组之间差异不显著（P>0.05）。综上所述,GDF9能够促进绵羊卵丘细胞扩展,并参与绵羊卵丘细胞激素分泌的调控。     

Effects of Oxytropis glabra DC Poisoning on the Reproductive Organs in Hetian Sheep Ewes

The study was aimed to research the effects of Oxytropis glabra DC (O.glabra DC) poisoning on reproductive organs coefficent, reproductive performance and related gene expression in Hetian sheep ewes. The sera, hypothalamus, pituitary and ovary of Hetian sheep ewes cases poisoning of O. glabra DC were collected, the organ exponent and contents of GnRH, FSH, LH, E₂ and P₄ in serum were measured, then the mRNA expression of reproductive genes were measured. The result demonstrated that the index of hypothalamus, pituitary and ovary were extremely significantly higher than normal sheep (P < 0.01),the follicle number on the surface of the ovaries in poisoning groups were significantly lower than normal sheep (P < 0.05). The result of hematoxylin-eosin staining showed that the nuclear of neuronal cells in hypothalamus were pyknosis and hyperchromatic; The nuclear of cells in pituitary deformation and hyperchromatic, cytoplasm decreased; The primary oocyte in ovary dissolved, disappeared, interstitial blood vessel expanded. The content of GnRH, FSH, LH, E₂ and P₄ in serum in poisoned Hetian sheep ewes were extremely significantly lower than normal sheep (P < 0.01). The mRNA expression levels of Kiss-1, GPR54, ERα in hypothalamus, GnRHR in pituitary and FSHR and LHR in ovary were extremely significantly lower than normal sheep (P < 0.01). The result showed that O. glabra DC poisoning could affect Hetian sheep ewes reproductive system by affecting microstructure and ultrastructure of hypothalamus-pituitary-ovarian axis.     

小花棘豆中毒对和田羊母羊繁殖器官的影响

试验旨在探讨小花棘豆（Oxytropis glabra DC）中毒对和田羊母羊繁殖器官指数、性激素水平和相关基因mRNA表达量的影响。以小花棘豆中毒和田羊母羊为研究对象,采集血清后屠宰,采集试验羊的丘脑、垂体和卵巢组织,测定其脏器系数,检测血清中促性腺激素释放激素（GnRH）、促卵泡素（FSH）、促黄体素（LH）、雌二醇（E₂）和孕酮（P₄）含量的变化,并检测各组织中相关繁殖基因的表达。结果显示,小花棘豆中毒和田羊母羊丘脑、垂体和卵巢指数均极显著升高（P < 0.01）,且卵巢表面卵泡数显著下降（P < 0.05）,HE染色表明丘脑神经元细胞固缩、浓染;垂体中细胞核变形、浓染,胞浆减少;卵巢中初级卵母细胞溶解、消失,间质血管扩张。小花棘豆中毒和田羊母羊血清中GnRH、FSH、LH、E₂和P₄含量均极显著下降（P < 0.01）,丘脑中Kiss-1、GPR54、ERα mRNA,垂体中GnRHR mRNA和卵巢中FSHR、LHR mRNA表达量均极显著下降（P < 0.01）。结果表明,小花棘豆毒性成分可通过丘脑-垂体-性腺轴影响和田羊母羊的生殖系统。     

促性腺激素受体在雌性水牛生殖器官的表达定位研究

为研究促性腺激素受体(FSHR、LHR)在广西雌性水牛生殖器官中的分布情况,运用免疫组化SABC法对处于不同发情周期(卵泡期、黄体期)成年水牛的卵巢、子宫、输卵管中FSHR、LHR分别进行染色定位。结果表明,FSHR/LHR阳性细胞在卵巢主要见于卵巢内膜细胞及卵泡颗粒细胞;子宫主要见于子宫内膜上皮细胞和腺体细胞;输卵管主要见于柱状上皮纤毛细胞。其中,随着发情周期不同,FSHR、LHR的表达量也有所差异,卵巢中卵泡期FSHR、LHR的表达量均高于黄体期;子宫中FSHR的表达量卵泡期高于黄体期,LHR的表达量黄体期高于卵泡期;而输卵管并没有显著差异。     

microRNA Identification of Ovaries in Qira Black Sheep by Solexa Sequencing

With the purposes of providing basic information for further studies of Qira Black sheep reproduction activities such as folliculogenesis and hormone secretion, characterization of microRNA(miRNA) expression in Qira Black sheep ovary tissues was studied.In this study, the small RNA isolated from total RNA of Qira Black sheep ovary tissues were sequenced by Solexa and then bioinformatics analysis were performed.The results showed that 9527311 clean reads were obtained, and the 21-23 nt small RNA was the major RNA in the total sequences.434 ovary conservative miRNA and 57 new miRNA were identified.Among them, there were 167 conservative including 8 new miRNA exceeded 100 in the expression levels.The study succeeded to construct the expression library of miRNA which were abundant and differentially expressed in Qira Black sheep ovary tissues.     

利用Solexa测序技术鉴定策勒黑羊microRNA

试验旨在挖掘、分析策勒黑羊卵巢组织microRNA(miRNA),为进一步研究特定miRNA参与策勒黑羊卵泡发育及激素分泌等相关生殖活动的机制奠定理论基础。从策勒黑羊卵巢组织中提取总RNA,分离、构建小片段RNA文库,进行Solexa测序和生物信息学分析。结果表明,共获得9527311条干净序列读数,小RNA序列长度主要分布在21~23 nt;共鉴定出434个策勒黑羊卵巢组织表达的保守miRNA,其中表达量在100以上有167个;鉴定出57个候选miRNA,其中表达量在100以上有8个。测序成功获取了策勒黑羊卵巢组织miRNA序列及表达谱,卵巢组织miRNA表达丰富且表达量各异。