仔猪血清大豆抗原蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立

【目的】研究并建立大豆抗原蛋白血清抗体间接ELISA检测方法。【方法】首先用大豆抗原蛋白对仔猪进行致敏,然后采用棋盘滴定法确定最佳抗原包被质量浓度及血清稀释倍数,并对其他条件进行优化,最终建立检测血清大豆抗原蛋白11S、7S抗体的间接ELISA方法,确立待测血清判定标准,并对建立的ELISA方法进行重复性、准确性和敏感性检测。【结果】建立的ELISA方法的最佳反应条件为:11S抗原蛋白最适包被质量浓度为2.0μg/mL,包被作用时间37℃下2h;将10g/L BSA作为封闭液,37℃封闭1h;待测血清37℃作用1h;酶标二抗最适稀释度为1∶1 500,37℃作用1h;显色剂最佳显色时间15min。7S抗原蛋白的最适包被质量浓度为2.5μg/mL,包被作用时间37℃下2h;将10g/L BSA作为封闭液,37℃封闭1h;待测血清37℃作用1h;酶标二抗最适稀释度为1∶1 500,37℃作用1h;显色剂最佳显色时间25min。11S和7S抗原蛋白间接ELISA检测方法的批内、批间变异系数均小于10%,重复性较好,灵敏度较高。【结论】建立了仔猪血清大豆抗原蛋白抗体间接ELISA检测方法,该法具有很强的特异性和敏感性,可用于大豆抗原蛋白11S、7S过敏反应的临床诊断。     

磁小体的碱性磷酸酶活性分析

为测定磁小体的碱性磷酸酶活性及作为磁性免疫ELISA固相载体的可行性,设置不同显色时间、温度及pH条件,分析比较磁小体与商业化碱性磷酸酶的酶活。结果表明:商业化碱性磷酸酶显色时间较短,非常灵敏,但对温度和pH要求严格;微量的磁小体,需经过较长的显色时间,才能使显色剂显色,但温度和pH对磁小体的显色反应影响较小。通过不同的蛋白变性剂进行处理,表明磁小体的类碱性磷酸酶活性是其表面蛋白作用的结果。但磁小体微弱的显色能力,在磁性免疫ELISA检测时,没有显著影响。因此,磁小体可作为磁性免疫ELISA的固相载体,用于免疫检测。     

酯交换植物油中甾醇测定方法研究

采用国标铁矾显色法(GB/T 5009.128-2003)测定酯交换植物油中甾醇的含量,通过与改进的Lieberman-Burchard比色法和毛地黄皂苷测定结果进行对比分析,确定了最佳显色剂用量、显色剂组成比例及显色时间.研究结果表明国标铁矾显色法最佳显色条件为:显色剂用量2 mL,显色剂组成比例1:9,显色时间15...     

蔬菜储藏过程中亚硝酸盐含量的测定方法研究

以盐酸萘乙二胺为显色剂,利用UV-9200型紫外可见分光光度计,测定了丽江市销售的几种蔬菜中亚硝酸盐的含量,并确定该测定方法的最佳试验条件。结果表明:pH值在3～4,显色温度15～25℃,显色剂用量为1.0 mL,显色时间在15 min后加水定容到50 mL在最大吸收波长538 nm处测定吸光度。进一步对蔬菜储藏过程和不同储藏条件下亚硝酸盐含量的变化趋势情况进行了研究。     

抗鸡传染性支气管炎病毒单克隆抗体的临床应用研究

采用纯化的抗鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）多抗作为第一抗体，抗ＩＢＶ单克隆抗体作为第二抗体，应用ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法诊断鸡ＩＢＶ病。以多抗包被浓度为１：８０稀释，单抗１：４稀释，显色反应时间３０ｍｉｎ为最佳工作条件。该方法快速、简便、准确、特异性强。ＩＢＶ发病鸡服用１：１０稀释的单抗１ｍｌ／羽一次后有良好治疗效果。健康鸡服用单抗后无任何变态反应。初步建立了抗ＩＢＶ单克隆抗体制剂及安全的治疗方法与诊断系统。     

抗鸡传染性支气炎病毒单克隆抗体的临床应用研究

采用纯化的抗鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）多抗作第一抗体，抗ＩＢＶ单克隆抗体的第二的抗体，应用ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法诊断鸡ＩＢＶ，以多抗包被浓度为１：８０稀释，单抗１：４稀释，显色反应时间３０ｍｉｎ为最佳工作条件。该方法快速，简便，准确，特异性强，ＩＢＶ发病鸡服用１：１０稀释的单抗１ｍｌ／羽一次后有良好治疗效果，健康鸡服用单抗后无任何变态反应。初步建立了抗ＩＢＶ单克隆抗体制剂及安全的治疗方法与诊断     

植物酯酶检测有机磷农药残留影响因素的研究

分析了固定方式、pH值、温度、农药浓度和显色剂类型对植物酯酶检测有机磷农药残留的影响,比较了两种固定方式检测农残的灵敏度,结果表明:离子交换法比微乳板法敏感性略高;固化酯酶的最适合pH值约为5.6,游离酯酶的最适合pH值约为4.8;固化酯酶与游离酯酶的最适温度相同,但固化酶活力对温度响应的峰型较游离酶略陡,不同农药对植物酯酶的抑制效果差异较大,其中敌敌畏最灵敏,对硫磷的灵敏度最差,且随着农药稀释浓度的增加,检测灵敏度逐渐下降。实验还发现,液体显色剂在室温40 min后显色能力显著下降,因此固体显色剂更适用于农残的快速检测。     

显色剂法测定锌元素影响因素的探讨

研究了新型显色剂与锌的显色反应。在pH=9.24的硼砂-氢氧化钠缓冲溶液中,锌与新型显色剂反应形成红色的偶氮配合物的实验过程中,酸度、显色时间、显色剂用量、干扰离子的等因素的探讨。     

新型鸭呼肠孤病毒σB和σC蛋白间接ELISA方法的建立

以纯化的新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)NP03株重组σB和σC蛋白作为包被抗原,对反应条件进行优化,建立检测NDRV抗体的间接ELISA方法。优化后的最佳条件为:σB蛋白包被浓度为12.5μg·mL~(-1);σC蛋白包被浓度为6.25μg·mL~(-1);封闭液为15%FBS;血清稀释度为1∶80;酶标二抗稀释度为1∶400;底物37℃显色5min。该方法对MDRV、DHV、MPV和MD-GPV阳性血清均无交叉反应,具有良好的特异性。该方法与NDRV全病毒间接ELISA相比较,符合率高达92.5%。本研究进一步丰富了NDRV抗体的检测方法。     

显色条件对酸性土壤有效磷测定的影响研究

为了探讨应用Bray-Kurtzl法测定有效磷时显色条件对磷标准曲线以及样品有效磷含量的影响,在标线溶液和样品浸提液中加入钼锑抗显色剂后,分别放置于20、25、30℃水浴或空气中显色30 min,测定其吸光度。结果表明:标准曲线溶液在20℃和25℃的空气和水浴中、30℃的空气中均无法完全显色,导致吸光度偏低;在30℃水浴中能很好地显色,得到合格的标准曲线。样品浸提液则对显色条件要求不高,各条件下均能得到相似的结果。     

3,5-二硝基水杨酸法测定椰子纳塔发酵液中总糖含量研究

建立了椰子纳塔发酵液中总糖含量的测定方法.探索了吸收光谱、显色剂用量、显色时间、HCI浓度等测试条件.结果表明,波长550 nm处溶液的吸光度与葡萄糖含量有良好的线性关系,线性范围为0.2～11.0 mg/mL,R=0.9994;最佳显色剂量为2 mL.最佳显色时间为2 min,最佳水解总糖的HCI浓度为3 mol/L,样品平均回收率为100.08%(RSD=1.38%,n=5).说明该方法重复性好,可作为常规分析方法使用.     

吸光光度法测定土壤和水中的钙

本文研究了对氯偶氮胂与钙的显色反应的有关问题。根据对氯偶氮胂与钙形成稳定络合物的性质，提出了测定土壤浸出液和天然水中微量钙的吸光光度法。试验表明，在ｐＨ＝１２￣１３的ＮａＯＨ介质中，对氯偶氮胂与Ｃａ＾２＋形成蓝色络合物，最大吸收波长为６３５ｎｍ。络合物的摩尔吸光系数ε６３５＝１．３×１０＾４。测定时Ｃａ＾２＋浓度在０￣１．６ｍｇ·Ｌ＾－１范围内符合比耳定律。络合物中Ｃａ＾２＋与显色剂的摩尔比为１：     

显色剂加入方式及结果计算方法对土壤磷酸酶测定结果的影响

为探讨有色显色剂的加液方式及加入量对显色后溶液吸收值的影响、标准曲线的绘制及结果计算方法对土壤磷酸酶测定值的影响,取广东橡胶园0~20 cm土样为材料,以磷酸苯二钠为基质,酶解土壤释放出酚,与显色剂氯代二溴对苯醌亚胺反应,以标准曲线法求出样品测试液的酚浓度,比较以不同加液方式加入不同量的显色剂对溶液吸收值的影响,同时比较用直线或一元二次曲线等两种标准曲线回归方程对样品测试液酚浓度的影响。结果表明:以胶头滴管滴加或以移液枪用多次重复使用过的吸嘴加入显色剂,显色后溶液吸收值变异系数达3.33%~6.44%,而以活塞式定量加液器加入,其变异系数在1.28%以下,且随着加入量增大变异系数降低至0.51%,重现性好;当配制的标准曲线浓度范围较宽且相应吸收值较高(接近0.9),以曲线法求得的标准曲线回归方程决定系数(R2=0.999 8)大于直线回归的(R2=0.999 7),且曲线法求出的土壤无基质对照及试剂空白酚浓度比直线法更有实际意义。     

磷钒钼黄分光光度法测定果蔬中的磷

利用磷离子与钒钼酸铵反应生成稳定黄色络合物的性质,以水为溶剂,采用分光光度法测定果蔬中的磷及其含量。用磷矾钼黄分光光度法研究了显色体系的吸收波长、显色剂用量、显色时间、显色温度、pH值以及干扰离子对果蔬中磷离子测定时的影响。结果表明,在波长440 nm、显色时间10 min、显色温度25℃、pH值7.5等条件下,吸光值最大,灵敏度及准确度较高,回收率为93.8%～100.8%。     

黄瓜花叶病毒（CMV）高效价抗血清的制备及其在ELISA中的应用

以提纯的ＣＭＶ作为抗原，经静脉注射，肌肉注射和足垫注射等对家兔进行免疫，获得高效价的抗血清（琼脂双扩散效价为１／２５６），在间接ＥＬＩＳＡ试验过程中，用ＰＢＳ＋０．０５％，ＴｒｉｔｏｎＸ－１００作为样本研磨液，用１：１６０００稀释度的ＣＭＶ抗血清或２μｇ／ｍｌＣＭＶ抗血清的ＩｇＧ作为第一抗体，用１：１０００稀释度的冻干辣根过氧化物酶标记的羊抗兔的ＩｇＧ作为第二抗体，以待测样本光密度值与阴性对照光密     

SDG分离富集-1-(5-溴-2-吡啶偶氮)-2-萘酚-6-磺酸光度法测定环境样品中的微量汞

以５－Ｂｒ－ＰＡＮ－Ｓ为显色剂,研究了测定汞的显色条件。在ｐＨ９．０的氨性缓冲液中,形成１：１型的稳定配合物,配合物的最大吸收峰位于５５８ｎｍ波长处,表观摩尔吸光系数ε＝２．０×１０４Ｌ／（ｍｏｌ·ｃｍ）。汞量在０～８０μｇ／２５ｍＬ范围内符合比尔定律。采用巯基葡聚糖凝胶分离水中共存离子富集汞,提高了方法的选择性。本法用于水样分析,结果令人满意     

改进的分光光度计法测定食源性多肽血管紧张素转化酶的抑制活性

在传统检测食源性多肽血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽体外活性方法的基础上,结合纸层析测定马尿酸的方法对其进行改进,建立了一种新的分光光度法用于测定样品中ACE的抑制活性.结果表明:该方法确定的显色反应吸收波长为459 nm;最佳显色温度为40℃;最佳显色时间为30 min;最佳显色剂质量分数为0.5%;用卡托普利和有ACE抑制活性的棉籽蛋白肽作为样品进行检测验证,结果表明,此方法简便、灵敏、准确、重复性好,可用于筛选食源性ACE抑制肽.     

不同输精间隔和输精深度对鸡人工授精受精率的影响

采用随机单位组设计方案，设计５个输精间隔，３个输精深度，研究了输精间隔和输精深度对种蛋受精率的影响。结果表明，用生理盐水作稀释剂，按１：１稀释，输精量为０．０５ｍｌ，每隔５ｄ输精效果最佳，种蛋的受精率可达９３．１７％。输精深度以１．５￣２．０ｃｍ受精率最高。输精间隔与输精深度的交互作用不明显。     

金叶女贞中熊果酸的提取工艺研究

[目的]筛选金叶女贞中熊果酸的最佳提取工艺。[方法]采用纤维素酶解法提取金叶女贞中熊果酸,以5%香草醛及高氯酸作为显色剂,通过正交试验确定显色的最佳条件,在波长550 nm处用分光光度法测定熊果酸的含量。[结果]最佳显色条件为：0.3 ml浓度5%香草醛、1.0 ml高氯酸、温度60℃,此条件下女贞花中熊果酸提取率达2.037%。[结论]正交试验表明,在最佳提取工艺条件下,熊果酸的提取率比较理想;提取试验表明,在金叶女贞不同器官中,果实中熊果酸含量最高。     

HSPAF的合成及分光光度法测定微量钯的应用

１，５－二（２－羟基－５－磺酸基苯基）－３－乙酰基甲Ｚａｎ（ＨＳＰＡＦ），是一种新的显色剂，以２－氨基－４－磺酸基苯酚和ＮａＮＯ２为原料，经重氮化，偶合，在ｐＨ＝５的溶液中，加丙酮析出，经多次提纯，干燥用元素分析了ＨＳＰＡＰ的组成，该试剂与Ｐｄ＾２＋有显色反应，研究结果表明：在酸性溶液中，能形成稳定的红色络合物，其组成为ｎ（Ｐｄ＾２＋）：ｎ（ＨＳＰＡＦ）＝１：１，最大吸收波长为５３２ｎｍ，表观摩尔