看麦娘对甲基二磺隆靶标抗性的快速检测

甲基二磺隆是防除小麦田看麦娘Alopecurus aequalis等禾本科杂草的主要除草剂品种之一,但目前中国山东、江苏及安徽等地已有部分看麦娘种群对其产生了抗性。ALS基因197位点突变是看麦娘对甲基二磺隆产生抗性的重要机理,根据突变型和野生型看麦娘在197位点处碱基序列的不同,本研究设计出了一种衍生性酶切扩增多态性序列(dCAPS)分子标记方法,可用于197位点突变的快速检测。通过在引物D197F序列的3′ 端引入一个错配碱基,扩增所得不同种群看麦娘的ALS片段经限制性内切酶BamH I酶切后表现出多态性:野生敏感型分别产生了200和36 bp的2个条带;纯合突变型因无法被切开,只有236 bp的一个条带;而杂合突变型则同时产生了上述3个条带。该dCAPS检测结果准确、可靠,与经典的整株水平测定结果一致,并且可同时检测197位点上任一形式的突变。研究结果可为看麦娘等禾本科杂草对甲基二磺隆靶标抗性的快速检测提供理论依据。     

与番茄枯萎病抗病基因I-1连锁的AFLP和SSR分子标记

本研究以番茄枯萎病抗病品种‘05045’与感病品种‘051451’为亲本配制杂交组合。用870对AFLP引物及319对SSR引物对348个F2代分离群体进行连锁分析,得到4个与番茄枯萎病抗病基因I-1连锁的AFLP标记和2个SSR标记,分别是E41M60-D、E41M62-C、E86M36-B、E32M44-E和SSR108、SSR276,与抗病基因I-1的连锁遗传距离分别为4.7、5.3、8.9、11.5cM和6.1、9.3cM。     

与番茄枯萎病抗病基因Ⅰ-1连锁的AFLP和SSR分子标记

本研究以番茄枯萎病抗病品种‘05045’与感病品种‘051451’为亲本配制杂交组合。用870对AFLP引物及319对SSR引物对348个F2代分离群体进行连锁分析,得到4个与番茄枯萎病抗病基因I-1连锁的AFLP标记和2个SSR标记,分别是E41M60D、E41M62C、E86M36B、E32M44E和SSR108、SSR276,与抗病基因I-1的连锁遗传距离分别为4.7、5.3、8.9、11.5cM和6.1、9.3cM。     

利用错配碱基引物的ASO-PC R检测小麦赤霉病菌对多菌灵中抗菌株Codon200TTC→TAC基因型

采用在引物3'端引入错配碱基,建立了特异性检测小麦赤霉病菌对多菌灵中抗菌株(Codon200TTC→TAC)基因型的ASO-PCR分子检测技术.结果表明含有错配碱基的引物对NT-7 Rl/NT-7 Err5 F能够特异性检测小麦赤霉病菌对多菌灵的中抗菌株(Codon200TTC→TAC),扩增条件为94℃预热5 min;94℃变性60S,56℃退火60S,72℃延伸60S,35个循环;最后72℃延伸15 min.并利用26种常见植物病原真菌验证了所设计引物的PCR扩增特异性.整个检测过程快速,操作简单,结果准确,在6小时内完成.     

利用错配碱基引物的ASO-PCR检测小麦赤霉病菌对 多菌灵中抗菌株Codon200 TTC→TAC基因型

 采用在引物3′端引入错配碱基,建立了特异性检测小麦赤霉病菌对多菌灵中抗菌株(Codon²⁰⁰ TTC→TAC)基因型的ASO-PCR分子检测技术。结果表明含有错配碱基的引物对NT-7 R1/NT-7 Err5 F能够特异性检测小麦赤霉病菌对多菌灵的中抗菌株（Codon²⁰⁰ TTC→TAC）,扩增条件为94℃预热5 min;94℃变性60 S,56℃退火60 S,72℃延伸60 S, 35个循环;最后72℃延伸15 min。并利用26种常见植物病原真菌验证了所设计引物的PCR扩增特异性。整个检测过程快速,操作简单,结果准确,在6小时内完成。     

番茄黄萎病抗病基因Ve的AFLP和SSR分子标记

 本研究以番茄抗病品种05046与感病品种051355配制杂交组合,接种鉴定F1代及F2代分离群体的黄萎病发生情况,结果表明,番茄黄萎病属单基因显性遗传。用545对AFLP引物和101对SSR引物对两个亲本、抗感池及F2代分离群体进行AFLP和SSR分析,得到3个与番茄抗黄萎病基因Ve连锁的AFLP标记和1个SSR标记,分别是E66M84-A、E78M84-D、E66M40-A和SSR599,与抗病基因Ve的连锁遗传距离分别为10.3、14.2、30.5 和12.5 cM。     

进境番茄种子中番茄花叶病毒的检测与鉴定

利用双抗夹心 酶联免疫吸附试验(DAS-ELISA)和反转录 聚合酶链式反应（RT-PCR）方法对来自韩国的番茄种子进行种传病毒检测。结果表明,在该批番茄种子中检测到番茄花叶病毒（ToMV）和烟草花叶病毒（TMV）。PCR产物测序结果表明,ToMV特异引物（ToA/ToB）与TMV特异引物（TA/TB）扩增的片段均为ToMV的外壳蛋白（CP）基因及3′非编码区（3′ UTR）,该片段与其他ToMV分离物的核苷酸序列相似性为98.2%~99.9%。本研究利用重新设计合成TMV和ToMV特异引物对该批种子进行RT PCR检测,仅ToMV特异性引物（ToMf1/ToMr1）扩增到670 bp的预期片段,TMV特异引物（TMf1/TMr1）则未出现特异性扩增,表明重新设计的引物可准确区分ToMV和TMV。以上结果证实该批番茄种子仅携带ToMV。     

我国栽培番茄部分品种LescPtoF基因序列多态性的初步研究

根据已报道的番茄抗细菌性斑点病基因Pto家族成员之一LescPtoF的序列特征设计一对引物,通过PCR扩增,从我国10个抗病栽培番茄品种和3个感病品种获得13个同源序列。Blast结果表明,2个来自抗病品种和2个来自感病品种的核苷酸序列均和报道的LescPtoF完全一致。其余9个核苷酸序列和LescPtoF序列相似性最低为91%,它们之间相似性最低为87%。具有完整读码框的11个核苷酸序列所编码氨基酸与LescPtoF蛋白相似性最低为84%,11个氨基酸序列之间相似性最低也为84%。研究结果表明我国栽培番茄品种LescPtoF基因同源序列的分布具有多态性。     

感细菌性斑点病的番茄品种存在LescPtoF基因的同源序列

根据已报道的番茄Pto基因家族成员之一LescPtoF基因的序列特征设计引物,通过PCR扩增从3个感病番茄品种中获得3个同源序列。Blast结果表明其中两个序列和报道基因完全一致,另外一个和报道基因的序列相似性为99%,表明感病番茄品种中也存有LescPtoF基因的同源序列。     

大豆猝死综合症病原菌北美种的PCR鉴定

 应用等位基因特异性PCR(allele-specific PCR,AS-PCR)技术,建立了大豆猝死综合症(sudden death syndrome of soybean,SDS)病原菌北美种Fusarium virguliforme与其近似种Fusarium phaseoli(菜豆根腐病菌)的鉴别方法。针对翻译延长因子(EF-1α)基因上的3个SNP(单核苷酸多态性)位点,参照引物设计原则和等位基因特异引物(allele-specific primer,ASP)的要求设计了1对引物Fsg-α-1/2,能特异地扩增F.virguliforme,产生327 bp的电泳条带。另外,根据ITS区序列设计了1对通用引物Fu1/2,能扩增F.virguliforme和F.phaseoli,产生452 bp的电泳条带。本实验在传统的AS-PCR基础上进行改进,引入Fu1/2作为阳性质控引物,将ASP的特异性与双重PCR的严谨性相结合,建立了简便可靠的SDS病原菌鉴定方法。