猪源肺炎克雷伯菌的分离与鉴定

从9只病死猪肺、肝脏中分离到4株革兰氏阴性杆菌,并对分离菌株进行形态学、培养特性、生化特性和分子生物学的鉴定,确定分离的菌株为肺炎克雷伯菌肺炎亚种。根据GeneBank上肺炎克雷伯菌16S rRNA可变区序列设计1对引物,4株细菌基因组DNA均可扩增到1段大小为127 bp特异性片段,经测序与已知肺炎克雷伯菌相应序列的同源性为100%,鉴定4株细菌均为猪源肺炎克雷伯菌。动物毒性试验证明其对小鼠有较强的致病性。     

猪亚利桑那菌的初步分离与鉴定

从陕西关中某猪场分离到1株革兰氏阴性杆菌,经细菌学分离及生化试验,初步鉴定为猪源亚利桑那菌,该菌对小白鼠有很强的致病作用。药敏试验结果表明,该菌株对氯霉素、链霉素、丁胺卡那霉素等抗生素高度敏感,对青霉素、氨苄青霉素、环丙杀星等抗生素不敏感。     

1株猪源乳酸杆菌的分离鉴定与益生特性

微生态制剂是发展绿色养猪业的关键,乳酸杆菌是目前应用的微生态制剂中最重要的有益菌组成成分之一.本研究分离、鉴定并筛选出了1株耐酸和耐胆盐能力较强的乳酸杆菌,命名为乳酸杆菌L5株.雏鸡安全性试验、抑菌试验和肠黏液糖蛋白黏附性试验结果显示,所筛选的乳酸杆菌L5株具有良好的生物安全性、抑菌性和肠道黏附能力.     

广西猪源沙门菌的分离·鉴定和耐药性研究

[目的]了解广西地区猪源沙门菌的流行情况、耐药现状及致病力情况。[方法]从广西不同地区11个规模猪场采集99份病料,进行细菌的分离、菌体形态特征观察以及生化鉴定,对分离菌进行常用抗生素药物敏感试验,最后对分离株进行小鼠致病性试验。[结果]从99份病料里分离到21株沙门菌,分离率21%。药敏试验表明,分离菌株对阿米卡星、头孢噻肟、氨曲南、左氟沙星具有较高的敏感性,对青霉素G、氨苄西林、阿莫西林、复方新诺明等产生较高的耐药性。致病性试验表明9株分离菌株可导致小白鼠死亡,致死率为43%。[结论]分离菌株存在较严重的耐药现象及较强的致病性。该研究为该地区有效控制沙门菌病的发生以及兽医临床上的合理用药提供可靠的理论依据。     

2株石油降解菌的分离鉴定

为了筛选高效石油降解菌株,通过富集驯化培养,从江汉油田石油污染土样中筛选能以石油为唯一碳源生长的菌株。经过划线培养获得单菌落,并通过形态观察、生理生化及分子生物学分析对菌株进行了初步鉴定和系统分类。结果分离获得2株石油降解效率较高的菌(分别记为G-40和G-94),初步鉴定G-40为侧孢芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporus),G-94为热带假丝酵母菌(Candida tropicalis)。     

一株广谱性农药降解菌的分离与鉴定

从杭州农药厂废水排放口污泥中分离到１株能降解部分拟除虫菊酯和一硫代磷酸酯类杀虫剂的广谱性降解菌ＹＦ１１．该菌球杆状，大小（１．５￣１．７）μｍ×（２．５￣２．８）μｍ，革兰氏阴性，４根周生鞭毛。菌落圆形，边缘整齐，表面光滑，凸状隆起。生长最适温度３０℃，最适ｐＨ７．０￣７．５，好氧，氧化酶阳性，能利用蔗糖、阿拉伯糖、山梨糖、乳糖、七叶灵、果糖等，但不能利用淀粉和核糖、ＤＮＡ中Ｇ＋Ｃ含量为６１．７ｍ     

1株鹌鹑源鸡白痢沙门菌的分离鉴定及致病性初探

为查明某养殖场鹌鹑大量死亡的原因,采集病死鹌鹑的脏器进行病原的分离鉴定,测定疑似细菌的耐药情况,并进行动物回归试验.结果表明:病死鹌鹑剖检病变主要表现为肝脏肿大呈土黄色,肾脏肿大;分离菌株在麦康凯培养基上呈无色、半透明菌落;能发酵赖氨酸和β-半乳糖苷;采用选择性培养基培养和多重PCR(mPCR)试验确定其为鸡白痢沙门菌;该菌对苯唑西林等6种抗菌药耐药,呈现多重耐药性;气囊接种鹌鹑的半数致死量(LD50)为9.5×105 cfu.这一研究说明鹌鹑的死亡是由鸡白痢沙门菌引起的,为鹌鹑的种群防控净化提供了理论依据.     

猪源莫拉菌的分离鉴定与部分生物学特性分析

从病死仔猪心脏中分离到一株革兰阴性菌,对该细菌进行形态学观察、生化鉴定、16S rDNA序列测定,确认该菌为猪源莫拉菌属亚种,将该菌株命名为猪源莫拉菌-ZY20001。对菌株进行致病性试验、药敏试验和部分耐药基因的检测。结果显示,该菌引起小鼠胸腔积液,不致死,对红霉素、青霉素、多粘菌素等21种抗生素药物表现不同程度的敏感,对哌拉西林耐药。菌株ZY20001具有TEM型β-内酰胺酶耐药基因,表型与基因型不符。该实验可为深入研究莫拉菌的分类进化及药物治疗提供参考依据,同时对青霉素耐药表型与基因型关系所做的初步探讨也丰富了流行病学调查资料。     

一株肉牛源致病肺炎克雷伯菌的分离鉴定

【目的】确定导致某牛场牛呼吸系统疾病并引起急性死亡的病原。【方法】采集病牛鼻液样品并从中分离出1株优势菌株,进而对分离菌株进行形态鉴定、生化鉴定、16S rRNA鉴定、小鼠接种试验以及耐药性分析。【结果】分离菌镜检为革兰氏阴性球杆菌;除精氨酸双水解试验呈阳性外,其他生化特性均与肺炎克雷伯菌相符合;其16S rRNA序列与GenBank中肺炎克雷伯菌株之间的同源性均达99%。因此,可将分离菌确定为肺炎克雷伯菌,并将其命名为7Y-1。在小鼠接种试验中,用1.01×10⁸ CFU/mL菌液腹腔注射8只SPF级昆明鼠(0.2 mL/只),16～36 h内小鼠全部(8/8)死亡。剖检见肺、肝、脾和肾等多个组织器官充血肿大,肠道积气积液、部分肠段充血、肿胀;组织学观察可见肺、肝、脾淤血、出血、肾小球肾炎变化;药敏试验结果显示:分离菌株对人医常用碳青霉烯类的亚胺培兰、美罗培兰、氨基糖苷类的阿米卡星以及磺胺类的磺胺异噁唑等抗生素耐药,对兽医临床常用的头孢曲松、头孢西丁、头孢唑林、卡那霉素、庆大霉素和氟苯尼考等抗生素高度敏感。【结论】本试验从病牛分离到对小鼠强致死性的肺炎克雷伯菌株...     

1株草甘膦降解菌的分离鉴定及特性

为利用生物降解草甘膦修复污染土壤,以多年施用草甘膦除草剂的农田土壤为材料,采用富集培养及逐级驯化方法,对长期施用草甘膦的农田土壤中分离得到1株草甘膦高效降解菌进行了研究.结果显示:被分离出的菌株HX-5,能以草甘膦为唯一碳源和氮源生长,对草甘膦的最高耐受浓度为4 g/L.形态观察及生理生化特征研究,鉴定为节杆菌属(Arthrobacter sp.).通过单因素试验确定了HX-5菌株生长的最适温度为30℃、最适pH 7.0及无机盐培养基中添加草甘膦的最适起始浓度为1.2 g/L,在此条件下培养6d,草甘膦的降解率达74.83％.     

广西猪伪狂犬病病毒GXA株的分离鉴定

从广西某猪场大批死亡的新生仔猪分离1株病毒，该病毒株在PK-15出现细胞病变，在电镜下可见到典型的伪狂犬病病毒粒子，细胞培养物接种家兔出现伪狂犬病症状。进而用所分离病毒的DNA作为模板，应用特异性引物，通过聚合酶链式反应扩增出伪狂犬病病毒gp50基因中433-651之间217bp长的特异性片段。分离的病毒为猪伪狂犬病病毒，并将其命名为猪伪狂犬病病毒GXA株。     

一株猪粪降解菌的筛选、评价及鉴定

发酵床是目前国内规模化养猪企业广泛采用的粪污处理模式,其关键在于投加的微生物菌剂。为了分离出能高效降解猪粪的菌株,采用NH₃选择性培养基对土壤微生物菌株进行初筛,共得到7株氨氮降解率大于70%的菌株。通过猪粪发酵模拟实验对分离株的NH₃抑制效果进行初步评价,结果表明,7株菌株均能不同程度地减少猪粪发酵过程中氨的释放量,其中Z10菌株的NH₃抑制效果最为显著。针对猪粪除臭及促进猪粪腐熟效果开展了Z10菌株应用效果评价。除臭试验结果显示,Z10菌株对猪粪臭气中NH₃与H₂S均有较好的抑制作用,在21 d发酵周期内, NH₃与H₂S的释放量较对照组分别减少了38.66%与50.03%。促腐熟试验结果显示,Z10组种子发芽率与发芽指数分别达到了83.33%与88.55%,而对照组发芽率与发芽指数仅为68.35%与59.12%。生化鉴定显示,Z10菌株无蛋白酶活性,具有较弱的糖化酶、淀粉酶及脂肪酶的活性,但表现出较强纤维素降解活力,其纤维素酶活...     

小鹅瘟病毒的分离与初步鉴定

从死亡的具有典型小鹅瘟症状的7日龄雏鹅肝中分离到1株病毒．选用未免疫小鹅瘟疫苗的健康母鹅所产的12日龄鹅胚，进行鹅胚接种试验，雏鹅表现出典型鹅瘟临床症状和剖检特征；鸡胚致死率达到25％；不能凝集多种动物红细胞；能凝集黄牛精子，经琼脂扩散试验，用此株病毒感染的鹅胚液能与小鹅瘟病毒阳性血清发生特异性反应．综上所述，这株病毒初步鉴定为小鹅瘟病毒．     

产乳酸芽孢杆菌RS-1菌株的分离及鉴定

为了得到可以产乳酸的芽孢杆菌,通过加热富集培养及特异性MRS培养基结合溶钙圈的方法,从发酵制品、土样及腐烂水果等样品中分离纯化出15株具有产乳酸能力的芽孢杆菌。将这些菌株进行纯化培养,利用纸层析法和EDTA定钙法进行定性和定量研究,筛选出1株产乳酸能力较高的菌株,命名为RS-1。并对其进行形态鉴定,生理生化鉴定及16S rDNA全序列分析,最终鉴定此菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。     

红色素产生菌H1的分子生物学鉴定

从青岛近海海洋沉积物中分离得到1株红色素产生菌H1,利用PCR技术扩增该菌株的16S rDNA核苷酸序列,通过琼脂糖凝胶电泳得到1条约1 500 bp的16S rDNA片段.运用Blast程序与数据库中已存在的细菌16S rDNA核苷酸序列进行相似性比较,表明该菌株与Kocuria rosea的相似性最高,为99.54%,可以认为属于同1个种.选取10株同源性较高的典型菌株序列,进行多序列比对,构建了菌株H1的系统发育树.     

黄曲霉毒素B1高效降解菌株的筛选鉴定及其降解

以香豆素为唯一碳源,利用微生物去毒法,初步筛选出32株生长良好的活性菌株,再添加AFB1标准品(菌液毒素终质量浓度2.5μg/m L),通过高效液相色谱(HPLC)检测AFB1降解率,结果显示,从鸡粪中分离并命名为F6的菌株高效降解黄曲霉毒素B1,降解率达83%。对菌株F6进行细胞形态及生理生化特性鉴定,初步判断为芽胞杆菌属,16S rRNA序列同源性比对分析,与蔬菜芽胞杆菌国际标准株ATCC700005(登录号NR043325.1)核苷酸同源性为99.3%,由此可确定,F6菌株为蔬菜芽胞杆菌,命名为Bacillus oleronius GX01(登录号KP297896)。分离菌株F6发酵液各组分,检测得上清液AFB1降解率达83%,而菌悬液、胞内液的AFB1分别仅为22.8%、17.4%,初步鉴定其降解活性成分可能为胞外酶。     

MSB1细胞上MATSA的分离鉴定及纯化

将培养收获的M SB 1细胞用磷酸盐缓冲液洗涤3次后,调整细胞浓度为2×106/mL,然后每毫升细胞悬液加2 IU木瓜蛋白酶和1 mm o l/L的L-胱氨酸溶液0.1 mL,混匀后37℃作用1 h以分离M SB 1细胞表面M AT-SA。对木瓜蛋白酶处理前后的M SB 1细胞进行间接荧光抗体染色以检测M ATSA的分离情况。获得的M ATSA粗提物经超滤浓缩和Sephadex G-75凝胶纯化后,用SDS-PAGE检测纯化的结果。试验结果表明,从M SB 1细胞表面分离到M ATSA,经电泳获得了纯化的M ATSA,其相对分子质量约为35 ku。结果为M ATSA单克隆抗体的制备及其相关的研究奠定了基础。     

H5N1型禽流感模型侵染病毒的构建与鉴定

【目的】构建含有H5N1型禽流感病毒HA、NA的侵染模型病毒,并对构建的模型病毒进行侵染活性及特异性检测。【方法】采用PCR方法扩增出H5N1型AIVHA和NA基因,经纯化回收后将其分别克隆至真核表达载体pcDNA4.0中,构建pcDNA-HA、pcDNA-NA。然后采用磷酸钙共转染方法,将pcDNA-HA、pcDNA-NA和含有LUC报告系统的HIV骨架表达载体pNL4-3.Luc.R-E-,共同转染293T细胞,构建HIV/HA-NA模型病毒,对HIV/HA-NA模型病毒进行细胞侵染活性及特异性检测。【结果】HA、NA基因片段真核表达载体pcDNA-HA、pcDNA-NA与HIV骨架载体在293T细胞中成功表达组装,获得了HIV/HA-NA侵染模型病毒;敏感细胞特异性检测及侵染活性分析表明,HIV/HA-NA模型病毒与其野毒具有共同的敏感细胞。报告系统数据显示,模型病毒可以定量检测其对细胞的侵染程度。【结论】成功构建HIV/HA-NA模型侵染病毒,可以模拟H5N1病毒的侵染过程,定量报告病毒的侵染程度,并且该模型病毒不具有增殖能力,安全可靠,可以方便地用于普通实验室AIV抗体检测和特定药物的筛选。     

鳗肺炎克雷伯菌的分离与鉴定

从6尾患肠道胀气的病鳗腹水和肝脏病灶中分离、筛选出一株致病菌EP4,通过细菌形态学、生理生化测定及ATB Expression半自动细菌鉴定仪鉴定均符合肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)特性.以细菌16S rRNA基因通用引物进行PCR扩增,得到EP4的部分16S rRNA基因序列,长约1 502 bp.将所测序列与GenBank中序列进行BLAST比对并构建系统进化树,结果表明其与肺炎克雷伯氏菌[DQ444287]的同源性最高(98.9%).人工感染证明该菌株具有较强的致病力(致死率达70%),30种药物筛选结果显示,EP4对菌必治(头孢三嗪)、先锋V、头孢克洛、氧氟沙星、氟罗沙星、依诺沙星、萘啶酸等高度敏感,而对苯唑青霉素、氨苄青霉素、青霉素G、阿莫西林等不敏感.     

莴苣超氧化物歧化酶分离与鉴定

抑制剂敏感性试验表明 ,莴苣超氧化物歧化酶 (SOD)属于Cu·Zn -SOD。莴苣SOD对KCN和H2 O2 都很敏感 ,1mmol L的KCN抑制其活力达 92 % ,1mmol L的H2 O2 抑制其活力达 6 8%。莴苣不同组织SOD活力不同 ,以整株莴苣为原料提取的SOD活力为 1.6 5 1U ml,明显大于以莴苣茎为原料提取的SOD活力 ( 1.375U ml)。同时以酶活力最大为最优分离目标 ,确定了莴苣SOD最佳分离操作条件