鹅源肺炎克雷伯菌分离鉴定及其致病性分析

为了确证辽宁鹅源肺炎克雷伯菌的致病性,无菌采集鹅肺炎发病病例的肝脾和肺脏,应用细菌分离培养、生化试验以及PCR方法对分离出的细菌进行鉴定,选取所鉴定的代表菌株,应用小鼠和雏鹅进行致病性试验,结果确认分离到2株肺炎克雷伯菌。小鼠致病性试验显示发病率为95%,死亡率为90%,死亡小鼠表现脑实质出血、肝脏坏死有出血点、肺脏充血出血等病理变化。雏鹅致病性试验显示发病率为100%,死亡率为85%,死亡雏鹅表现气管黏膜出血、大叶性肺炎等病理变化。近年来,鹅源肺炎克雷伯菌引起鹅肺炎为主的疾病发病率、致死率越来越高,防治困难。本研究对鹅源肺炎克雷伯菌的致病性进行了分析,为进一步建立鹅源肺炎克雷伯菌病的诊断和防治技术提供了依据。     

引起幼貂大量死亡的肺炎克雷伯菌的分离和鉴定

采用西蒙式枸橼酸盐琼脂培养基从山东威海地区肺出血死亡幼貂的肺脏和肝脏中分离到1株细菌,对所分离的细菌进行形态特征、理化性质、16S rRNA测序鉴定,并对该分离菌进行了药敏试验和人工感染试验。结果显示,该菌16S rRNA序列与GeneBank登录号为CP006648的肺炎克雷伯菌16S rRNA序列同源性为95%,分离菌具有高度的耐药性,对小鼠具有较强致病作用,并可复制出与水貂类似的病理变化,由此推断肺炎克雷伯菌是导致幼貂大量死亡的主要致病菌。     

水貂肺炎克雷伯菌的分离鉴定及耐药性分析

【目的】 肺炎克雷伯菌是人畜共患的条件致病菌, 是引起水貂肺炎的常见病原菌之一。试验主要对吉林省某水貂养殖场送检的6只患有肺炎的病死水貂进行细菌分离鉴定及耐药性分析, 为指导临床合理用药提供依据。【方法】 通过分离纯化方法从样品中分离菌株并进行PCR鉴定, 应用多位点序列分型技术(MLST)进行菌株ST分型。通过感染小鼠了解菌株的致病性, PCR检测血清型及毒力基因的携带情况; 运用琼脂稀释法检测分离菌株对18种药物的敏感性, 并通过PCR检测分离菌株耐药基因的携带情况。【结果】 分离得到的6株菌株经PCR鉴定为肺炎克雷伯菌; MLST分析结果表明6株菌株分别有6种ST型, 分别为: ST2594、ST1782、ST2844、ST2330、ST86和ST661。致病性分析结果显示, 6株菌株均可引起小鼠死亡, 共检测出6种毒力基因, 未检测到毒力较强的血清型。药敏试验结果显示, 6株肺炎克雷伯菌对头孢他啶、头孢曲松、亚胺培南、美罗培南、阿米卡星较敏感, 对链霉素、庆大霉素、卡那霉素、青霉素、氨苄西林、环丙沙星、恩诺沙星、左氧氟沙星、多西环素和氟苯尼考较耐药。耐药基因检测结果显示, 6株菌株共检测出bla_SHV、bla_TEM-1、bla_CTX-M-1G、aadA1、aac(3’)-Ⅳ、aac(3’)-Ⅱc、aph(4’)-Ⅰa、aph(3’)-Ⅶ、aph(3’)-Ⅳ、aph(2’)-Ⅰb、rmtB、qnrB、qnrD、qnrS、qepA、oqxAB、floR和mcr-1 18种耐药基因。【结论】 分离到的6株肺炎克雷伯菌株为不同的种系进化, 并具有较强的致病性和耐药性, 为临床用药治疗带来困难。     

貉源肺炎克雷伯菌的分离鉴定及药敏试验

为确定河北昌黎地区某养殖场貉呼吸道疾病引起死亡的病因,本研究从送检的貉病料肺脏中分离到1株革兰氏阴性短杆菌,并对分离株进行形态学观察、16S rRNA序列测序及全自动细菌生化鉴定仪鉴定,在此基础上完成了分离株的分型、人工感染小鼠试验及药敏试验等。结果显示,该分离株为非K1/K2型肺炎克雷伯菌,并将其命名为CLKp18;该分离株的16S rRNA基因序列与GenBank中登录的多株肺炎克雷伯菌参考株同源性均高达99%。Vitek全自动细菌鉴定仪结果表明,该菌株与肺炎克雷伯菌鉴定标准相似度为99%。人工感染小鼠试验结果显示,试验组小鼠在攻毒后6 h开始出现临床症状。无菌取出死亡小鼠的肺脏、肝脏、脾脏及肾脏,划线涂板,均可分离到该菌,表明该分离株感染小鼠后,能侵入到小鼠体内多个组织器官,引起不同程度的病变,尤以肝脏和肺脏病变较为明显,对小鼠的半数致死量(LD₅₀)为2.17×10~7 CFU。药敏试验结果表明,该菌对单环内酰胺类、氯霉素类、氨基糖苷类、四环素类、磺胺类及大部分头孢类耐药,但对阿米卡星、阿莫西林/克拉维酸、头孢他啶和亚胺培南敏感。本研究结果确定了引起本次貉呼吸道症状疾病的致病菌为非K1/K2型肺炎克雷伯菌,且该分离株有较强的致病性和多重耐药性。本研究为临床治疗由该菌引起的貉肺炎提供了参考依据。     

石河子地区某规模化奶牛场肺炎克雷伯菌的分离鉴定及耐药性分析

为了阐明引起石河子地区某规模化奶牛场犊牛呼吸道症状的主要细菌性病原体及其生物学特性,本研究采集2~6月龄犊牛鼻拭子与肛拭子各39份,通过细菌分离培养、形态学观察、生化分析、PCR扩增16S rRNA基因和溶血酵素（khe）基因、药敏试验和小鼠致病性试验等方法对分离菌株的生物学特性进行分析。结果显示,分离菌株中有3株在MIAC平板上形成紫红色带有沉淀环的菌落（鼻拭子1株,肛拭子2株）,且镜检为革兰氏阴性短杆菌,疑为肺炎克雷伯菌。全自动微生物分析系统显示,分离株与肺炎克雷伯菌相似性均为96%;PCR扩增16S rRNA基因测序结果显示,分离株与GenBank数据库中肺炎克雷伯菌核苷酸相似性在96.5%~99.8%之间,肺炎克雷伯菌特异性基因khe阳性且相似性达99%以上;药敏结果显示,分离菌株对青霉素类、头孢菌素类、一代和二代氨基糖苷类、四环素类、一代大环内酯类、磺胺类、多烯类、林可酰胺类抗菌药呈现出不同程度的耐药;对三代氨基糖苷类、二代大环内酯类、氯霉素类、多肽类、喹诺酮类抗菌药敏感,且呈现不同程度的多重耐药性;致病性试验结果表明,分离菌株均可不同程度导致小鼠死亡且以鼻拭子分离株致病性较强。本研究成功分离鉴定石河子地区规模化奶牛场引起犊牛呼吸道症状的肺炎克雷伯菌3株,并阐明分离菌的部分生物学特性,为新疆地区牛源肺炎克雷伯菌病的检测、诊断及临床治疗提供技术支撑。     

牛源肺炎克雷伯氏菌的分离和鉴定

牛源肺炎克雷伯氏菌的分离和鉴定陈兴生叶育桐（海南省定安县兽医诊断室，５７１２００）陈永林（中国兽药监察所）肺炎克雷伯氏菌为肠杆菌科的条件病原菌，能使人畜发生肺炎、子宫炎、乳房炎及其它化脓性炎症，甚至发生败血症，对人畜具有高度病原性［１，２］。我们在开...     

狐狸源肺炎克雷伯菌的分离鉴定及毒力检测

从濒死期蓝狐肺脏中分离到1株革兰阴性短杆菌,并对分离菌株进行形态学观察、16S rRNA鉴定、全自动细菌生化鉴定仪鉴定及khe基因鉴定,在此基础上,完成了分离菌株的分型、人工感染小鼠试验、药敏试验及毒力基因检测等。最终鉴定结果显示,该分离菌株为K20型肺炎克雷伯菌,命名为SWKp17;同时,Vitek细菌鉴定仪鉴定该菌为肺炎克雷伯菌。人工感染试验和药敏试验结果表明,该细菌有致病性和多重耐药性。其对小鼠的半数致死量(LD₅₀)为2.9×10~7 CFU;对三代头孢菌素类、氯霉素类、喹诺酮类、氨基糖苷类、四环素类、磺胺类耐药,但对亚胺培南和多黏菌素敏感。该菌株具有fim、ureA、mrkD及wabG毒力基因,但不具有rmpA、kfu、alls、iroNB、ybtA、uge、iucB等毒力基因。结果表明,引起本次狐狸肺炎的致病菌为非K1、K2、K3、K5、K20、K54及K57型肺炎克雷伯菌,本研究为临床治疗由该菌引起的狐狸肺炎提供参考依据。     

貉源肺炎克雷伯菌的分离鉴定与药敏试验

为了确定引起貉肺炎的病原菌,本试验从临床貉子死亡病例中分离到的1株病原菌,命名为HM-1,试验采用分离培养、纯培养、形态观察、生化鉴定、16S rRNA序列测序等方法进行了鉴定。结果表明,分离菌株HM-1呈杆状、革兰染色阴性;16S rRNA基因序列通过NCBI的Blast检索系统进行序列同源性分析,HM-1株与克雷伯菌F2R9以及01A030聚为一支,相似度为最高,达到99.8%,确定分离菌株HM-1为肺炎克雷伯菌。动物致病性试验表明分离株HM-1株具有较强的致病性。药敏试验说明分离菌株HM-1株对头孢噻肟高度敏感,对卡那霉素、新霉素、头孢曲松中度敏感,对青霉素、氟苯尼考、恩诺沙星等10种药物耐药。本试验为防治貉肺炎克雷伯菌引起的肺炎提供一定的参考依据。     

肉牛上呼吸道肺炎克雷伯菌的分离鉴定及耐药分析

为研究重庆地区规模化肉牛场肉牛上呼吸道中肺炎克雷菌的带菌状况及耐药性。本研究从重庆荣昌、丰都两地肉牛上呼吸道分离细菌,采用形态学观察、生化鉴定及16SrRNA分子方法鉴定,获得12株肺炎克雷伯菌,分离率为19.7%,表明肺炎克雷伯菌是肉牛上呼吸道中主要的一种条件致病菌;分离菌株对庆大霉素,丁胺卡那霉素,头孢他啶,妥布霉素等药物敏感,对乙酰螺旋霉素,氨苄西林,苯唑西林耐药率达到100%,分离株存在多重耐药,但两个地区的分离株在耐药性上存在一定差异。     

奶牛肺炎克雷伯氏菌的分离与鉴定

2006年2月至4月，黑龙江省大庆市和内蒙古自治区某些奶牛场相继发生十余起产后奶牛急性死亡病例，经剖检发现这些病死奶牛病理变化非常相似，主要以败血症为主。经流行病学调查、病理学观察实验室病原分离鉴定以及动物实验，确诊发病原因为肺炎克雷伯氏杆菌感染。通过药物敏感性试验确定，该细菌对环丙沙星和菌必治高度敏感，对青霉素和复方新诺明不敏感。     

猪源性肺炎克雷伯菌的分离鉴定

肺炎克雷伯菌是一种严重威胁人类和经济类动物健康的条件性致病菌,可引发患病动物的多种器官组织病变,严重威胁着畜禽养殖业的发展。笔者采集了新疆阿克苏地区某养殖场中以高热,腹泻,呼吸困难,两耳皮肤发绀为临床特征仔猪的心、肺、淋巴等病料。对病料进行了细菌分离培养,通过菌落形态观察、16S rRNA基因测序对分离得到的菌株进行鉴定,最终获得1株猪源性肺炎克雷伯菌。继而对该菌涂板进行药敏试验,结果显示,该菌株具有较强的耐药性,对氯霉素、红霉素、利奈唑胺、利福平、四环素、复方新诺明、庆大霉素、克林霉素、诺氟沙星、头孢噻吩均耐药。本次试验为猪源性肺炎克雷伯菌的分离鉴定及进一步研究Kpn耐药机制和致病机理奠定了基础。     

1株猪源ST-35型肺炎克雷伯菌的致病性和药物敏感性分析

旨在了解从猪肺组织中分离得到的肺炎克雷伯菌的致病性和药物敏感性,本研究通过形态学鉴定、PCR鉴定、16S rRNA基因测序和MLST多位点序列分析等方法对分离菌株进行鉴定,毒力基因检测和小鼠攻毒试验确定分离株的致病性,并采用抗生素和中药分析药物敏感性。结果表明,分离菌株为革兰阴性杆菌,生化结果与肺炎克雷伯菌生化特性相符;16S rRNA基因序列比对分析和系统发育树构建确定分离菌株为肺炎克雷伯菌,命名为肺炎克雷伯菌KP-0728;MLST分析显示,KP-0728属于ST-35型,与ST-875汇聚在一支;KP-0728含有uge、wabG、fimH、kfu 4种毒力基因,感染小鼠可导致小鼠多个器官不同程度的病变,高剂量感染可导致小鼠死亡;KP-0728携带bla-SHV、sul2、tetA、aadA1 4种耐药基因;KP-0728对氨苄西林、亚胺培南、庆大霉素、四环素、复方新诺明耐药;对头孢曲松、头孢氨苄、头孢美唑、阿奇霉素、氧氟沙星、多黏菌素B、替考拉宁敏感;9味中药体外抑菌试验结果显示,茯苓对肺炎克雷伯菌分离株KP-0728的抑菌效果最为显著。动物治疗试验相关数据显示茯苓对KP-0728具有体内抑制作用。综上,本研究分离到1株猪源ST-35型肺炎克雷伯菌,携带多种毒力基因和耐药基因,人工感染小鼠可致小鼠发病,半数致死量(LD₅₀)为4.56×10⁶ CFU,对中药茯苓和多种抗生素敏感,研究结果为肺炎克雷伯菌的防治和疫苗研究提供了参考依据。     

兔肺炎克雷伯氏菌的分离与鉴定

重庆市某兔场洪灾后发生了以呼吸道症状和腹泻为主要特征的疾病,通过细菌分离培养、染色镜检、生化试验、动物接种试验、16S rRNA V3可变区基因扩增及测序,结果表明,该菌符合兔肺炎克雷伯氏菌的特性,其基因序列同源性与肺炎克雷伯菌高达99%。药敏试验结果显示,该菌对头孢噻肟、菌必治高度敏感。应用筛选的敏感药物,并采取综合防治措施,使疫情得到有效控制。     

藏猪源肺炎克雷伯菌的分离鉴定及生物学特性研究

为了了解西藏地区藏猪源肺炎克雷伯菌荚膜血清型、耐药性、毒力基因及遗传进化现状,试验对从西藏地区林芝市、拉萨市采集的60份腹泻藏猪新鲜粪便进行细菌分离,对分离菌进行生化试验、16S rDNA基因和特异性基因检测并构建系统进化树,采用PCR方法对分离菌进行荚膜血清型、耐药基因和毒力基因检测,用17种常用抗菌药物进行药敏试验,并用分离菌对小鼠进行致病性试验。结果表明：从西藏地区林芝市样品中成功分离鉴定出3株藏猪源肺炎克雷伯菌,分离率为5%(3/60),分别命名为P1、P2、P3菌株。3株分离菌能够发酵多种糖类,且不产生硫化氢。PCR扩增得到大小约为1 400 bp和430 bp的目的条带。3株分离菌均与郑州红袋鼠源CP051490和广州鹦鹉源CP064129聚成一簇,其中P1菌株和P2菌株聚为一个小簇;P3菌株与广州鹦鹉源CP064129聚成一个小簇,亲缘关系最接近。3株分离菌均未鉴定出荚膜血清型。3株分离菌对青霉素、氨苄西林的耐药率最高,达100%;对派拉西林和红霉素的耐药率为66.7%;对头孢氨苄和头孢呋辛的耐药率为33.3%。3株分离菌只携带2种耐药基因,分别为sul2、 blaROB...     

福建省莆田地区猪源肺炎克雷伯菌的分离鉴定及耐药情况检测

为了了解福建省莆田地区猪源肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)的耐药情况,试验采集猪粪便拭子样品共340份,采用细菌分离培养与PCR方法进行细菌分离鉴定,通过微量肉汤稀释法检测分离菌株对9种抗菌药物的耐药性,并检测耐药基因和整合子的携带情况。结果表明：从粪便拭子中共分离鉴定出58株肺炎克雷伯菌,分离率为17.1%(58/340)。分离菌株对四环素的耐药率最高,为96.6%(56/58);对呋喃妥因、氯霉素和多黏菌素的耐药率分别为84.5%(49/58)、81.0%(47/58)和50.0%(29/58);对亚胺培南的耐药率最低,为5.2%(3/58)。分离菌株中耐药基因aadA1、tetA、phoQ、phoP和oqxA的检出率较高,均大于70.0%;从13株分离菌株中检测到Ⅰ类整合子,携带率为22.4%(13/58),主要携带的是氨基糖苷核苷酸转移酶(ANT)aadA22耐药基因盒,未测到Ⅱ类整合子。说明福建省莆田地区猪源肺炎克雷伯菌的耐药情况比较严重。     

一株兔源耐药性肺炎克雷伯氏菌的分离与鉴定

本试验旨在对从患呼吸道感染和腹泻的仔兔血液中分离的1株疑似病原菌进行鉴定。采用分离培养、镜检、生化检测、荚膜染色、16S rDNA序列测序、药敏试验和动物体内感染等方法,对该疑似菌进行了分析。结果显示,该疑似菌呈杆状、含有丰富的荚膜多糖,其16S rDNA序列与肺炎克雷伯氏菌标准菌株序列相似性达到99%,且对链霉素、庆大霉素、氨苄青霉素、硫酸庆大霉素、硫酸卡那霉素和氯霉素均表现出不同程度的显著抗性。腹腔注射该菌(10⁹ CFU/mL),仔兔全部死亡;而口腔灌喂,仔兔有较强的耐受性(无死亡)。结果表明,从患病仔兔血液中分离到1株肺炎克雷伯氏菌且具有致病性。     

貂源肺炎克雷伯菌的分离与鉴定

本研究从疑似感染肺炎克雷伯菌(Kpn)的病死水貂病料中分离得到5株革兰氏阴性杆菌,通过对其进行细菌形态学、培养特征、生化特性和分子生物学鉴定,确认分离得到的菌株为Kpn。16S rRNA基因序列分析结果显示:该分离菌株与已知的Kpn相应序列的同源性为100%;药敏试验显示分离株对头孢曲松和舒巴坦高度敏感。动物致病性试验显示该分离株对小鼠具有较强的致病性。     

兔肺炎克雷伯氏菌的分离与鉴定

重庆市某兔场洪灾后发生了以呼吸道症状和腹泻为主要特征的疾病,通过细菌分离培养、染色镜检、生化试验、动物接种试验、16S rRNA V3可变区基因扩增及测序,结果表明,该菌属兔肺炎克雷伯氏菌,其基因序列同源性与肺炎克雷伯菌高达99％.该菌对头孢噻肟、菌必治高度敏感.选用头孢噻肟对发病兔群紧急防治,并采取消毒、隔离等综合防治措施,使疫情得到有效控制.     

小熊猫肺炎克雷伯菌的分离与鉴定

为探究1例10余岁小熊猫死亡的病因,无菌采集死亡小熊猫的肝、脾组织进行细菌分离培养。实验结果显示,在培养基上均有细菌生长,且菌落生长形态相似;分离菌革兰染色镜检、生化鉴定结果表明,各分离菌株特征一致,为肺炎克雷伯菌。小白鼠致病性试验结果显示,分离菌株具有较高致病性。