荷斯坦牛瓜氨酸血症焦磷酸测序检测方法的建立与应用

为建立一种快速高通量的荷斯坦牛瓜氨酸血症(Citrullinemia,CN)分子检测方法,依据CN是由于精氨酸琥珀酸(ASS)合成酶基因编码第86位精氨酸的密码子突变为终止密码子的遗传学基础,利用Assay Design SW软件设计了1对引物和1条测序引物对三种不同基因型的基因材料进行测序分析。用建立的方法对55份进境荷斯坦牛血样进行检测,发现有1例为隐性基因携带者,将PCR产物进行常规测序,结果与焦磷酸测序检测结果一致。研究表明该方法可用于荷斯坦牛瓜氨酸血症的检测,是一种有效的新方法。     

北京地区荷斯坦牛脊椎畸形综合征的调查研究

脊椎畸形综合征（Complex Vertebral Malformation,CVM）是由常染色体上SLC35A3基因单碱基突变（G→T）引起的隐性遗传疾病,该基因隐性纯合（CV/CV）时奶牛致死,但CVM携带者表现正常,所以CVM携带者公牛可以通过人工授精技术传播CVM缺陷基因。本研究利用PCR-SSCP方法对北京地区242头公牛样品和403头母牛样品进行了检测分析,研究结果表明,在所检测的样本中,荷斯坦种公牛和母牛CVM携带率分别为8.82%和5.71%,CVM基因频率分别为4.41%和2.85%。通过系谱追踪发现,CVM遗传缺陷的共同祖先是美国名牛＂Penstate Ivanhoe Star＂（USA.1441440,CV）。通过剔除CVM携带者公牛可以有效地控制CVM遗传缺陷的传播,但是,我国许多CVM携带者公牛冻精依然在商业化使用,所以有效地监控CVM携带者在奶牛群中的状况对CVM防控计划是有益的。     

荷斯坦牛脊椎畸形综合征分子诊断方法的建立与应用

脊椎畸形综合征(Complex Vertebral Malformation,CVM)是由常染色体上SLC35A3基因单碱基突变(G→T)引起的隐性遗传疾病,该基因隐性纯合(CV/CV)时奶牛致死,但CVM携带者表现正常,所以CVM携带者公牛可以通过人工授精技术传播CVM缺陷基因。本研究自行设计检测CVM特异性PCR引物,扩增长度为173bp,然后利用PCR-SSCP方法对186个公牛样品和140个母牛样品进行了检测分析,该方法简便快捷、准确率高,使用样品宽泛,适合大样本筛选。研究结果表明,在所检测的样本中,荷斯坦种公牛和母牛CVM携带率分别为11.3%和12.1%,并通过系谱追踪发现,CVM遗传缺陷的共同祖先是美国名牛"Penstate Ivanhoe Star"(USA.1441440,CV)。通过剔除CVM携带者公牛可以有效地控制CVM遗传缺陷,但是,我国许多CVM携带者公牛冻精依然在商业化使用,所以,有效地监控CVM携带者在奶牛群中的状况对CVM防控计划是有益的。     

中国荷斯坦牛脊椎畸形综合征的研究现状与展望

脊椎畸形综合征(CVM),是由在荷斯坦牛群中发现的一个隐性遗传缺陷基因所导致的,其纯合时可以造成妊娠奶牛流产、死胎或畸形,危害着奶牛业的健康发展.在荷斯坦牛群中发现的脊椎畸形综合征引起了各国奶牛育种协会和育种者的关注,奶业发达国家开展了相关的研究工作,纷纷报道了在本国奶牛群中发现了脊椎畸形综合征的存在,都相应建立了种公牛遗传缺陷基因的分子检测方法和育种方案,有效降低了CVM对奶业发展的危害.本文就我国荷斯坦牛脊椎畸形综合征的研究和应用状况进行了综述,主要介绍了CVM背景、传播途径、危害性、控制措施及展望等方面的内容,以供同行参考.     

荷斯坦奶牛瓜氨酸血症PCR-DHPLC检测方法建立与应用

为建立一种快速高通量的荷斯坦奶牛瓜氨酸血症(CN)的分子检测方法,根据CN是由于精氨酸琥珀酸(ASS)合成酶第86位精氨酸突变为终止密码子的遗传学基础,设计了1对引物对3种不同基因型的基因材料PCR扩增,利用Navigator software软件分析确定检测温度、洗脱浓度及梯度等条件,建立检测方法。对55份进境荷斯坦奶牛血样进行检测,发现有1例为隐性基因携带者,将PCR产物送测序,结果与DHPLC检测结果一致。研究表明,该方法可用于荷斯坦奶牛脊椎畸形综合征的检测,是一种有效的新方法。     

中国荷斯坦奶牛MOET育种体系的建立与实施

与世界大多数国家一样,迄今我国采用的奶牛育种方案,被称为“人工授精育种体系”即“AI育种体系”,其主要特点是：大规模使用种公牛的冷冻精液;在牛群中实施以获得优秀种公牛后代为目的的“定向选配”有计划地通过性能测定和后裔测定等育种措施,选育优秀种公牛;在育种群和生产群中全面使用“验证公牛”。这种育种体系的实施,可以在种子公牛即“公牛父亲”和种子母牛即“公牛母亲”的选择上实现一个较高的选择强度,在牛群的产奶性状和次级性状上获得较大的选择精确性。但AI育种体系最明显的缺点是：由于大规模的后裔测定,耗费大量…     

以色列荷斯坦奶牛

以色列的奶牛只有一个乳用品种，这就是以色列荷斯坦牛。这个品种的发展始于３０年代早期，通过引进弗里生（FRIESIAN）公牛，以后为荷斯坦（HOLSTEIN）公牛，与当地的大马士革母牛杂交。今天大马士革母牛的最后一点的原始痕迹已经荡然无存。经过在热带气候环境下的６０年育种，以色列荷斯坦母牛已经适应当地气候的热应激环境。这一点可以从卡利亚大型合作农场（KibbutzQali－a）得到证实，该农场位于低于海平面３８０米的死海附近，夏季最高气温达到４５．４７摄氏度。１９９８年这个农场的２７６头成母牛平均单产为１１，３２６千…     

世界荷斯坦奶牛联盟简介

世界荷斯坦奶牛联盟是全球奶牛业最权威的组织,成员国大会每四年举行一次,是世界奶牛业的峰会。世界荷斯坦联盟以在全球范围内提高、促进荷斯坦奶牛的繁育为目的,其宗旨是让所有的成员国在统一的水准上,组织和管理各自的良种登记和注册。目前该组织拥有包括美国、荷兰、德国、加拿大、法国、澳大利亚等世界奶业产销大国在内的28个成员国家,亚洲只有日本是成员国。一般各国均以代表团的形式组队参加会议,团长是各国奶协理事长和秘书长,成员多是各专业和各省协会负责人。世界荷斯坦奶牛联盟简介     

荷斯坦奶牛脊椎畸形综合征PCR-DHPLC检测方法建立与应用

为建立一种快速高通量的荷斯坦奶牛脊柱畸形综合征(Complex vertebral malformation,CVM)变性高效液相色谱(DHPLC)的分子检测方法,根据CVM是由于SLC35A3基因第4外显子559位处发生G→T突变的遗传学基础,设计了1对引物对3种不同基因型的基因材料PCR扩增,利用Navigator软件分析确定检测温度、洗脱浓度及梯度等条件,建立检测方法。对55份进境荷斯坦奶牛血样进行检测,发现有1例为隐性基因携带者,将PCR产物送测序,结果与DHPLC检测结果一致。研究表明,PCR-DHPLC是一种可有效用于荷斯坦奶牛脊椎畸形综合征检测的新方法。     

日本荷斯坦奶牛最新遗传评价方法

日本的奶牛评价包括公牛（乳用种公牛评价成绩）和母牛（牛群检定牛即生产性能测定）两部分,由日本农林水产省（相当于我国的农业部）的家畜改良中心负责一年发表两次评价结果──《乳用牛评价报告》,现根据笔者在日本了解到的有关奶牛评价方法的情况做一介绍（时间至１９９９年５月发表的结果）。１　评价性状１．１　泌乳性状：牛群检定项目中的７个泌乳性状,包括产奶量（ＭＩＬＫ）,乳脂量（ＦＡＦ）,非脂固形物量（ＳＮＦ）,乳蛋白量（ＰＲＴ）,乳脂率（Ｆ％）,非脂固形物成分率（ＳＮＦ％）,乳蛋白率（ＰＲＴ％）。１．２　体…     

我国荷斯坦种公牛CVM遗传缺陷基因的分子检测

研究运用引入酶切位点聚合酶链式反应(PIRA-PCR)方法检测牛脊柱畸形综合症(CVM)在我国荷斯坦种公牛中的携带情况。共检测了来自全国14个公牛站的587头种公牛,结果表明:携带者56头,携带率为9.54%。系谱分析确认40头携带者公牛是Carlin-M Ivanhoe Bell的后代。对公牛信息统计显示,2001—2007年各年度出生的种公牛都保持较高的CVM携带率(8.22%～15.56%)。美国、加拿大和澳大利亚是我国引进公牛的主要来源国,进口公牛的CVM携带率分别为11.37%、3.73%和14.29%。此外,本研究还对我国荷斯坦牛CVM遗传缺陷的控制和CVM携带公牛的利用提出建议。     

CVM、BLAD--两个奶牛致死遗传性疾病

近年来随着生物技术的进步，分子遗传学取得了举世瞩目的进展，生物科学中的一些重大问题诸如物种起源及进化，遗传疾病的防治，生物药品的制造甚至一些人类行为方面的课题都可以在分子水平上找到答案。就奶牛而言，通过染色体基因标记的方法测定出了许多基因控制表达的性状，不可否认研究结果喜忧参     

Ovarian Cyclicity and Reproductive Performance of Holstein Cows Carrying the Mutation of Complex Vertebral Malformation in Japan

This study was carried out on 71 lactating Holstein Friesian cows to investigate the resumption of ovarian cyclicity postpartum and the reproductive performance in cows carrying the mutation of complex vertebral malformation (CVM) compared with control ones. The cows were distributed in two dairy farms in Hiroshima Prefecture, Western Japan. Blood samples were collected from the cows to detect carrier cows with CVM mutation. Furthermore, plasma samples were collected weekly after calving from control cows (n = 10) and CVM carrier cows (n = 10), until 10 weeks postpartum to investigate the day of first ovulation and the resumption of ovarian cyclicity postpartum. The reproductive parameters were investigated and compared with control and CVM carrier cows. Thirty‐six cows were diagnosed to be CVM carriers by DNA examination and confirmed later by DNA sequencing. The pedigree analysis of the carrier cows revealed that they were daughters of six types of CVM carrier semen that still was used in dairy farms in Western Japan. In terms of reproductive indices, there were no significant differences between the control and the CVM carrier cows on the day of the first ovulation postpartum and the interval from calving to first insemination. However, CVM carrier cows significantly required more inseminations per conception and showed a significantly longer period to conception and subsequent calving than control ones. In conclusion, the reproductive performance of the CVM carrier cows was lowered through conception failure that might indicate the occurrence of intra‐uterine mortality in those cows.     

Effect of Complex Vertebral Malformation on Luteal Function in Holstein Cows During Oestrous Cycle and Early Pregnancy

The reason why cows carrying the mutation of complex vertebral malformation (CVM) show poor reproductive capability although they carry only one mutant allele is still not fully understood. Monitoring the progesterone profiles during oestrous cycle and early pregnancy in carrier cows might help explain their lowered reproductive capability. Progesterone concentration was measured in 19 CVM carrier cows and 21 control cows during oestrous cycle and early pregnancy. Milk samples were collected from all cows starting on the day of artificial insemination until day 45 post‐AI. Progesterone was measured in skim milk using enzyme‐linked immunosorbent assay (ELISA). Progesterone concentration was significantly reduced on day 7 (p < 0.05) and day 9 (p < 0.01) post‐insemination in conceived CVM carrier cows when compared with that in control conceived cows. The mean progesterone concentration during early pregnancy was significantly lower (p < 0.05) in conceived cows with CVM than that of control cows in the same period. However, the mean progesterone concentration did not differ significantly (p = 0.072) in CVM cows that showed fertilization failure or embryonic death than that of control cows. Additionally, of 13 conceived control cows, eight cows (61.5%) showed normal luteal function. In contrast, of nine conceived CVM cows, only four cows (44.4%) showed normal luteal function. The conception rate was 47.4% in CVM carrier cows and 61.9% in control cows, but this difference did not reach significance. In conclusion, progesterone concentration might be lowered during early pregnancy in conceived CVM cows compared with that in control cows.     

部分中国荷斯坦种公牛脊柱畸形综合征携带状况的检测和分析

摘本研究旨在对部分中国荷斯坦种公牛脊柱畸形综合征(Complex vertebral malformation,CVM)致病基因的携带状况进行筛查.应用错配PCR突变分析技术(PCR mismatch amplification mutation assay,PCR-MAMA)建立了针对CVM致病基因的特异性检测方法.利用PCR-MAMA法检测了154头荷斯坦种公牛,发现了24头CVM阳性个体,阳性率为15.58％.结果显示,应对中国荷斯坦种公牛进行全面的针对CVM的检测.     

传染性造血器官坏死病毒焦磷酸测序检测技术的建立

根据传染性造血器官坏死病毒(IHNV)基因序列,设计了IHNV最为保守的指纹序列,以及测序引物,建立了IHNV焦磷酸测序检测方法。对所构建的IHNV焦磷酸检测方法进行特异性试验和灵敏度检测。结果表明,所建立的方法特异性好,在8种鱼类病毒中能够特异性检测出目的病毒,检测方法灵敏度高,最低检出核酸量为10pg/μL。对建立的焦磷酸测序检测方法进行了实际应用研究,选取国内采集与进口的鱼类样本共计80批次进行IHNV检测。结果显示,焦磷酸测序检测方法可以有效的检出常规RTPCR不能检出的假阴性样本和弱阳性样本,该方法的灵敏度和特异性可以满足水生动物疫病检测的需要。     

实时荧光定量RT-PCR检测牛库布病毒

牛库布病毒（bovine kobuvirus,BKoV）可能是一个腹泻相关病原,目前还没有检测该病毒的实时荧光定量RT-PCR方法的报道。依据BKoV 3D核苷酸序列,采用Primer 6.0设计了一对引物,通过优化反应条件和反应体系,成功建立了检测BKoV的TB Green染料法实时荧光定量RT-PCR方法。结果显示此方法在4.86×10⁸~4.86×10² copies·μL^-1病毒浓度之间具有良好的线性关系,相关系数为0.999 5,扩增效率为92.75%;此方法只特异性检测BKoV,而与其他常见的腹泻病原没有交叉反应;组内及组间的变异系数均小于2%;最低检测下限为4.86×10² copies·μL^-1。本研究所建的实时荧光定量RT-PCR方法对奶牛和牦牛腹泻粪便样本中BKoV的检出率明显高于已报道的3篇有关RT-PCR方法。对2018年5月-2019年5月采集自青藏高原地区（青海、西藏和四川藏区）的131份牦牛腹泻粪便样本进行检测,结果显示BKoV检出率为31.30%。首次成功建立了检测BKoV的实时荧光定量RT-PCR方法,具有良好的特异性和稳定性,且灵敏度高,为BKoV的检测及流行病学调查提供了一种新的技术手段;并且首次证实BKoV在牦牛中的流行,为牦牛腹泻的防控问题提供了参考。