随机引物PCR技术及其在动物医学中应用的研究进展

随机引物PCR技术(AP-PCR)是一种建立在PCR基础上的新的DNA多态性检测技术,其特点是利用随机寡核苷酸引物扩增基因组DNA片段,在无需预知研究对象的情况下对其进行基因特征的分析,具有简便、高效、实用等优点,现已广泛应用于分子生物学的多个领域。文章主要对AP-PCR技术的原理、优缺点、研究近况及其在动物医学中的应用等作一综述。     

11种肉及肉制品动物源性成分PCR检测技术

为建立准确的动物源肉制品检测技术,采用生物信息学方法,针对猪、牛、马、山羊、小鼠、大鼠、兔、犬、鸡、鸭、鹅等11种动物肉类的特异性基因,建立了特异性PCR检测技术。该技术可高特异性检测猪、牛、马、山羊、兔、犬、鸡、鸭、鹅源肉样,并可鉴别掺入的大鼠、小鼠等违禁肉类成份,最低检测限为1.00 ng/μL基因组DNA,以及低至1%的肉类添加量。运用该技术在市场中随机抽检3种初加工肉制品各10份进行验证,结果在每种肉制品中均检出掺假样品,不同种类肉品的掺假率为10%～20%。本研究建立了具有高灵敏、准确、低成本、适用范围广等优势的肉制品动物源性成份检测技术,为消费市场肉制品质量检测提供了技术支撑。     

理化检验在动物种属鉴定中的应用概况

阐述了理化检验确定动物种属的原理、分析的方法及其在实践中的应用概况,并对理化检验用于动物种属鉴定的优缺点进行了评价。提出了理化检验用于动物种属鉴定还需要大量的试验工作,鉴定方法的方便与快捷、鉴定成本的低廉、多学科的交叉以及与计算机技术的联合是动物物种鉴定的发展方向。     

分子性别鉴定引物的优化及在雀形目鸟类中的应用

sex1/sex2是一对可以广泛应用于鸡形目鸟类分子性别鉴定的引物.本研究尝试采用此对引物对17种雀形目鸟类进行性别鉴定.然而在实验中,CHD-W片段常常出现优先扩增的现象,严重影响了性别鉴定结果的准确性.因此,本实验对sex1和sex2引物分别进行了修饰,获得了相对应的sex1'和sex-mix引物.同时,原有的引物与新获得的引物被重新组合并进行性别鉴定.经过对几种已知性别的雀形目鸟类进行性别鉴定,检测结果发现引物组合sex1'/sex2可以很好的抑制CHD-W片段的优先扩增现象,提高性别鉴定的准确性.由于此对引物正被广泛应用于红头长尾山雀(Aegithalos concinnus)的性别分配制度研究以及白腰文鸟(Lonchura striata)的鸣唱学习研究中,我们可以预期在未来的雀形目鸟类研究中,此优化的引物对将会有更广泛的应用前景.     

LAMP法鉴定胚胎性别在生产中的应用

家畜的性别控制(Sex Control)目前主要从两方面进行研究，一方面是分离X与Y精子，以此决定受精时后代的性别；另一方面是通过鉴定胚胎的性别，以控制出生后代的性别比。性别控制一直是生物科学研究领域一项重要课题，对畜牧业生产有着非常重要的意义，它可以按照生产需求控制家畜性别，以提高畜牧业生产的经济效益。     

Cytb分子标记技术在物种鉴定中的应用

细胞色素b（Cytochrome b,Cytb）基因作为一种线粒体DNA（mitochondrial DNA,mtDNA）分子标记,其结构和功能是mtDNA的13个蛋白质编码基因中了解得最清楚的基因。它的进化速度适中,一个较小的基因片段就包含着从种内到种间、属间乃至科间的进化遗传信息,被认为是解决分类及系统进化问题可信的分子标记之一,目前,在很多领域已经得到了广泛的应用。本文将简要介绍Cytb基因及其研究方法,重点总结和归纳Cytb分子标记在物种鉴定中的应用现状并对其应用中的问题及发展趋势做一阐述。     

应用LAMP法鉴定牛早期胚胎性别试验

使用LAMP法对12枚牛体外受精胚胎的基因扩增,通过使用不同的引物,对牛胚胎中的雄性特异性核酸序列和雌雄共有的核酸序列进行扩增,鉴定胚胎的性别,结果7枚为雌性,5枚雄性。     

LAMP法性别鉴定在胚胎工程技术中的应用

LAMP法特点是对目标基因6个区段设定4种引物，利用链置反应在等温条件下，使其发生反应。把基因检样、引物链置换型DNA聚合酶基质等放在一定温度条件（63-65℃）下保温。有无扩增反应是通过反应过程中获得的副产物焦磷酸镁所形成的白色沉淀的浑浊度来判定。应用LAMP法性别鉴定体内鲜胚移植291头，妊娠158头，妊娠率为54.30%,其中公犊3头，母犊155头，鉴定准确率98.10%；鉴定体内冻胚移植47头，产犊17头，妊娠率为36.17%，母犊17头，鉴定准确率100%。鲜胚妊娠率高于冻胚，两者之间差异极显著（P＜0.01），应用LAMP法性虽鉴定平均准确率98.29%。     

应用水洗淘米法对两种鱼粉品质质量的鉴定

应用水洗淘米法对两种鱼粉(国产鱼粉和进口蒸汽鱼粉)的品质作初步的鉴定,并对其所含的渣样物作定量分析,计算出每种鱼粉的含渣率,据此判断鱼粉的优劣。     

三重荧光PCR法鉴定食品中牛、猪、鸭3种动物源性成分

旨在建立一种快速、灵敏、可以同时鉴定食品中多种动物源性成分的方法。根据线粒体环氧酶3(cox3)、细胞色素b(cytb)和线粒体d-loop,分别设计鸭、牛和猪特异性引物序列。应用SYBR实时荧光PCR技术,分析熔解曲线,根据出峰位置的不同,定性识别鸭、牛、猪源成分。单重PCR试验测得鸭、牛和猪PCR扩增产物熔解曲线峰值对应的熔解温度分别为(83.5±0.5)℃、(79.5±0.5)℃和(76.5±0.5)℃。三重PCR体系扩增产物的吸收峰与单重PCR体系扩增产物的吸收峰对应的熔解温度吻合,说明试验的可行性。此外,试验检测鸭成分的灵敏度为0.1%,牛成分的为0.1%,猪成分的为1%。结果表明,该方法成本较低、灵敏度较高,可用于同时定性检测食品中鸭、牛和猪3种动物源性成分。     

X射线粉晶衍射法在岩矿鉴定中的应用

本文采用XRD和显微镜下观测相结合的方法 ,结合笔者实际工作中遇到的问题,对所选实验样品进行综合鉴定,并采用X射线荧光光谱仪(XRF)对鉴定结果进行验证,进一步证明了XRD辅助镜下鉴定的准确可靠性。     

B超在马发情鉴定和早期妊娠诊断中的应用

在马发情鉴定和早期妊娠诊断中,B超直肠探测法具有很多优越性。为了让更多的马繁育工作人员了解和掌握B超在马发情鉴定和早期妊娠诊断中的应用,笔者通过多年实践操作和收集大量典型的B超图片,总结出B超直肠探测法在马繁育工作中的详细操作方法,选择典型图像记录包括膀胱、子宫、子宫角、卵巢等影像予以详细介绍,为马的繁育提供帮助。     

发酵床养猪法在种公猪饲养中的应用

发酵床养猪法又叫生态养猪法或自然养猪法。发酵床养猪法是采用锯末、秸秆、稻壳、树叶等农林产品下脚料,经加工配以专门的微生态制剂而制作成的供猪生活和休息的特殊床体。床体垫料中添加的微生态制剂主要是有益的微生物,能迅速降解猪的粪尿排泄物。是一种零排放,无污染的生态养猪新模式。     

BLUP法和主成分分析法在杜泊绵羊商业化品系建立中的应用研究

本研究旨在为以一个初始杜泊绵羊群体为基础,建立适应多样化市场需求的商业化品系,提供可借鉴的实用方法.具体实施步骤包括:(1)用单性状动物模型BLUP法估计杜泊绵羊与品系划分有关性状的育种值;(2)利用主成分分析法,抽取所研究性状的可解释85％以上变异的主成分;(3)依据主成分值表达式的系数大小及符号,解释每个主成分的实际意义,确定各主成分可作为哪个品系的建立依据;(4)根据个体各标准化主成分值的大小及相应的分系标准,对杜泊绵羊群体进行商业化品系划分.本研究依据实际需求将现有杜泊羊群体划分为体长系、体宽系和肥羔系,其结果与依据性状估计育种值进行品系划分相似.在不考虑分系相关性状的经济权重时,BLUP法和主成分分析法适于初始群体的品系建立.     

荧光定量PCR法的优化及其在牛羊源性成分检测中的应用研究

SYBR Green荧光定量PCR法可对含牛羊源性成分饲料进行快速筛选。本文通过优化PCR条件,将原有的三步法简化为两步法,筛选时间由最初的116min减少至67min,并应用于170份饲料样品的检测。经过筛选,排除了166份阴性样品中的162份样品,占97.6%;被怀疑为阳性样品的8份样品中,有4份样品最终被确认为阳性样品。此方法的应用,将提高饲料中牛羊源成分检测的速度和灵敏度,加强了防止疯牛病传播的保障力度。     

一测多评法在含生物碱类成分中药质量控制中的应用研究

生物碱(alkaloid)是广泛分布于中药中的一类含氮有机化合物,其显著的药理活性和疗效已被大量研究文献和临床应用证实。在全球抗微生物药物耐药性背景下,生物碱类中药凭借其良好的抗菌、抗病毒活性广受关注。一测多评(quantitative analysis of multi-components by single maker, QAMS)法是一种适用于中药多成分质量控制的检测方法,可在缺少对照品条件下实现对多个待测成分的同步分析检测,在中药质量控制和评价领域得到较好验证和发展。本文梳理近15年QAMS法在生物碱类中药质量控制中的应用情况,系统分析常见问题并提出解决方法,以期为QAMS法的正确应用提供一些参考。