基于SCoT与IRAP标记的金枣柿实生后代遗传变异分析及其生殖特性北大核心CSCD

【目的】金枣柿是浙江重要经济果树之一,其果实有无核与有核之分,在雄花未见的情况下,其后代遗传变异情况及生殖特性有待探讨。【方法】以金枣柿母本一的15个子代及母本二的16个子代为研究群体,以来自浙江不同地区的12个金枣柿单株及柿(Diospyros kaki)、君迁子(D.lotus)、山柿(D.japonica)为对照;采用SCo T和IRAP分子标记技术,分析金枣柿实生后代的遗传变异情况,并以此推测其种子来源。【结果】利用筛选出的21条SCoT引物及20条IRAP引物对供试材料基因组DNA的扩增结果表明,2种标记共扩增出473条清晰、可重复谱带,其中多态性谱带454条;2种标记的多态性比例分别为93.56%和97.50%。2个子代群体均产生了遗传分离。群体1通过SCo T和IRAP标记得到的DICE相似系数变异分别为0.637~1.000和0.927~1.000,群体2利用这2种标记得到的DICE相似系数变异分别为0.987~1.000和0.981~1.000。【结论】金枣柿的实生群体中均存在一定程度的遗传变异,其中群体1的DICE变异系数虽低于群体2,但其变异主要集中于个别单株,群体2单株的变异类型比群体1更丰富。金枣柿的种子主要由有性杂交产生,其花粉供体很可能为同种的雄花,不排除其具有兼性无融合生殖的能力。     

基于SCoT与IRAP标记的金枣柿实生后代遗传变异分析及其生殖特性

【目的】金枣柿是浙江重要经济果树之一,其果实有无核与有核之分,在雄花未见的情况下,其后代遗传变异情况及生殖特性有待探讨。【方法】以金枣柿母本一的15个子代及母本二的16个子代为研究群体,以来自浙江不同地区的12个金枣柿单株及柿(Diospyros kaki)、君迁子(D.lotus)、山柿(D.japonica)为对照;采用SCo T和IRAP分子标记技术,分析金枣柿实生后代的遗传变异情况,并以此推测其种子来源。【结果】利用筛选出的21条SCoT引物及20条IRAP引物对供试材料基因组DNA的扩增结果表明,2种标记共扩增出473条清晰、可重复谱带,其中多态性谱带454条;2种标记的多态性比例分别为93.56%和97.50%。2个子代群体均产生了遗传分离。群体1通过SCo T和IRAP标记得到的DICE相似系数变异分别为0.637~1.000和0.927~1.000,群体2利用这2种标记得到的DICE相似系数变异分别为0.987~1.000和0.981~1.000。【结论】金枣柿的实生群体中均存在一定程度的遗传变异,其中群体1的DICE变异系数虽低于群体2,但其变异主要集中于个别单株,群体2单株的变异类型比群体1更丰富。金枣柿的种子主要由有性杂交产生,其花粉供体很可能为同种的雄花,不排除其具有兼性无融合生殖的能力。     

贵州地方火龙果芽变种质DNA指纹图谱及遗传多样性的ISSR分析

【目的】为了构建火龙果芽变种质的DNA指纹图谱,并揭示种质间的遗传关系,【方法】以贵州近几年选育的一些优良火龙果种质为试材,采用ISSR标记技术和NTSYS 2.01软件对这些新种质及其原始品种进行分析。【结果】利用筛选出的52条引物进行PCR扩增,共扩增出364个清晰、重复性好的标记,其中215个(60%)为多态性标记。M08、845和881等3个引物扩增出的标记能将22份种质区分开来。采用NTSYS 2.01软件计算,供试种质间的相似性系数为0.70~0.96,平均0.81,其中红肉种质间平均值为0.82,白肉为0.89。UPGMA聚类分析显示,在相似系数0.9处可将供试材料分为11类,其中7份分别各自聚类(红肉占86%)。【结论】火龙果体细胞变异率较高,且红肉品种高于白肉品种,通过芽变选种能有效地实现遗传改良。     

应用RAPD技术研究柿品种间的亲缘关系

采用随机扩增多态性DNA（RAPD）技术对原产中国、日本和韩国的部分柿品种间的亲缘关系进行了初步探讨。结果表明：（1）15个供试品种经OPA－06、OPA－08、OPA－19三个引物扩增后,品种间和引物间的谱带类型各不相同;（2）经6个随机引物扩增出的15个供试品种的谱带类型和相似指数的分析结果显示,‘富有’和‘次郎’,‘平核无’和‘仓光’,‘磨盘柿’和‘杵头柿’间可能具有较近的亲缘关系。     

应用RAPD技术研究柿品种间的亲缘关系

采用随机扩增多态性ＤＮＡ技术对原产中国,日本和韩斩部分柿品种间的亲缘关系进行了初步探讨。结果表明：（１）１５个供试品种ＯＰＡ－０６,ＯＰＡ－０８,ＯＰＡ－１９三个引物扩增后,品种间和引物间的谱带类型各不相同;（２）经６个随机引物扩增出的１５供试品种的谱带类型和相似指数的分析结果显示,“富有”和“次郎”,“平核无”和”仓光“,”磨盘柿“和”杵头柿“ 可具有较近的亲缘关系。     

辐射诱变和芽变柑橘品种(系)的AFLP分析

为了对广东省近年来新选育的16个60Co-γ辐射诱变和芽变柑橘优良品系(株系)进行遗传差异分析,应用AFLP技术,对3个亲本和16个辐射诱变和芽变的柑橘品种(系)进行了遗传差异分析。从64对引物中筛选出9对多态性高、分辨能力强的引物进行分析,结果表明:(1)与各自的亲本相比,供试16个辐射诱变和芽变的柑橘变异类型的遗传基础均已经发生了不同程度的变化。(2)利用引物EcoRⅠAAG+MseⅠCTT绘制供试样品的AFLP指纹图谱,并根据各自的差异带或特征带区分了19个柑橘试材。(3)对AFLP扩增结果进行聚类分析,根据相似系数0.77的水平可将19个样品分为4组。红江橙品系中的华青1号与亲本间的相似性系数仅为0.647 7,可将其单独划为一组。可为柑橘新品种选育研究的早期鉴定提供参考依据。     

中国甜柿‘鄂柿1号’偶开雄花现象及其杂交后代早期鉴定

【目的】绝大多数柿品种仅开雌花,但中国甜柿‘鄂柿1号’可偶尔开雄花,探讨该现象与DNA变异有无关系及其育种学意义。【方法】利用荧光AFLP技术探讨‘鄂柿1号’雄花枝梢与其母株间的基因组是否存在变异;通过检测其花粉生物学特性以及F1是否存在与中国甜柿自然脱涩连锁的RO2标记和与雄性性别紧密连锁的Dl Sx-AF4S标记,探讨其作为中国甜柿育种亲本的可能性。【结果】(1)AFLP分析表明已知遗传关系的‘前川次郎’和‘次郎’(前者为后者的早熟芽变类型)的相似系数0.88,而‘鄂柿1号’雄枝与母株的相似系数为1.00,说明‘鄂柿1号’偶开雄花性状可能与DNA序列变异无关;(2)‘鄂柿1号’雄枝花粉离体萌发率较低,但其与‘太秋’和‘早秋’柱头亲和性较强;(3)‘鄂柿1号’作父本与‘太秋’和‘早秋’杂交,以及作母本与‘太秋’杂交,均可获得携带RO2标记的F1代单株,且在其作父本的部分F1代单株中检测不到Dl Sx-AF4S标记。【结论】‘鄂柿1号’偶开雄花现象可能不涉及遗传物质DNA序列的改变,其变异原因有待进一步探讨;其作杂交父本时F1单株中均携带与中国甜柿自然脱涩性状连锁的RO2标记,且部分单株不含与雄性性状连锁的Dl Sx-AF4S标记,说明其在选育仅开雌花的完全甜柿新品种中具应用潜力。     

用AFLP标记分析广西龙眼种质遗传多样性

选用10对AFLP引物组合分析了广西38个龙眼品种（优良单株）和两个龙眼近缘亚种龙荔单株,以及10个来自国内外其他产区龙眼品种的遗传多样性。在所扩增的570条AFLP主带中,有485条具有多态性,占85.1%。所用引物可将供试的品种（优良单株）区分开来,供试材料的遗传相似系数在0.39（两个亚种间）到0.98之间。根据遗传相似系数（UPGMA, N-J）得到的分类树状图与传统方法的分类结果相类似。结果表明,广西龙眼种质具有较广泛的遗传多样性。     

辽宁绥中地方梨种质的SRAP分析

采用SRAP分子标记方法对辽宁省绥中县地方梨品种秋白梨、绥中谢花甜、水红宵、粉红宵、洋红宵及8个秋白梨可能变异单株进行遗传多样性和亲缘关系分析。从100对SRAP引物组合中筛选出9对引物组合,扩增条带数76条,其中多态性条带数43条,多态位点百分率为56.6%,具有较高的多态性;聚类分析将供试材料分为3组,遗传相似系数0.690～1.000。引物组合me2/em1、me4/em1、me4/em6、me7/em1可区分绥中谢花甜、粉红宵、水红宵、洋红宵、秋白梨及秋白梨单株1、2、4、7号;秋白梨1、2、4、7号在分子水平检测出变异。SRAP技术可有效地应用于梨的品种及芽变鉴定、遗传多样性及亲缘关系分析。     

广西龙荔遗传多样性的ISSR分析

选用l2条ISSR引物组合分析了广西67个龙荔单株和10个龙眼品种（单株）、12个荔枝品种以及l0个野生荔枝单株的遗传多样性,均得到了清晰指纹。在所扩增的151条ISSR主带中,有127条具有多态性,多态性比率占84.11%。所用引物可将供试的品种（单株）区分开来。供试龙荔单株的遗传相似系数在0.61~0.97,表明广...     

Identification of persimmon (Diospyros kaki) cultivars and phenetic relationships between Diospyros species by more effective RAPD analysis

Randomly amplified polymorphic DNA (RAPD) markers were used to identify cultivars of persimmon (Diospyros kaki Thunb.) and to estimate the phenetic relationships between Diospyros species. Long random primers (15 and 20 bases) were used to increase the effectiveness of recognizing polymorphism. Twenty-five of 34 (74%) long random primers amplified polymorphic bands of 25 persimmon cultivars, indicating that the effectiveness improved compared with RAPD analysis using 10-base primers. The 25 primers amplified a total of 444 polymorphic bands, which distinguished all 25 cultivars. RAPD markers (133) clarified the phenetic relationship between the six species and subspecies of Diospyros: D. lotus, D. lotus subsp. glabbra and D. taitoensis formed one group (lotus group), and persimmon was related in order of closeness to the lotus group, D. oleifera, and D. rhombifolia.     

广西西北部高原地区柿种质资源调查及遗传多样性分析

 调查和研究了广西西北部云贵高原地区柿种质资源状况,并对收集到的柿种质进行表型系统聚类和SCoT遗传多样性分析。结果表明,广西西北部云贵高原地区柿种质资源较丰富,至少拥有柿、油柿和野柿3个种31个不同品种和类型,部分地方仍保存有原始的野生种。不同柿种质在形态和DNA水平上都表现出很大的变异,具有丰富的多样性。35个相对独立的表型性状被用于柿种质的Q型系统聚类分析,在欧氏距离D = 9.8处,31份种质被分为5组,与果形及种质类型在一定程度上相吻合。13条SCoT多态性引物可从31份柿种质中扩增出161个DNA位点,多态性带比例为95.65%;UPGMA聚类分析显示,SCoT标记能将31份柿种质完全区分开,在相似系数0.686的水平将其分为5大类,与表型分析结果基本一致。     

柿野生雄性资源调查及其遗传多样性研究

柿（Diospyros kaki Thunb.）雄性种质资源非常稀缺,系统收集和梳理国内外现有雄性资源,阐明其遗传多样性并揭示其与主栽甜、涩柿品种及近缘种的亲缘关系,对雄性种质资源的高效利用有重要意义。在全国范围内开展柿野生种质资源调查,在湖北、广西、江苏等地发现野生雄性种质资源共计90余份。利用15对SSR引物对47份柿完全雄性资源、2份雄全同株资源和11份中国雌雄同株资源进行遗传多样性分析,以67份完全雌性资源、38份日本资源（其中包括25份雌雄同株资源）以及28份近缘种为对照。结果表明：15对引物共获得144个等位基因和316个基因型,平均每个引物获得9.60个等位基因和21.07个基因型,其中位点ssrDK11/DQ097479 遗传变异程度最高。从地理分布来看,柿雄性资源在适生的野外山区普遍存在,其中湖北木兰山来源的雄性资源遗传多样性最高,陕西省来源的雄性资源遗传多样性最低。UPGMA和ME聚类方法分别将193份资源分为16组和12组,两种聚类结果反映的总体规律类似：（1）各来源地间的野生雄性资源存在着一定程度的遗传隔离;（2）湖北木兰山野生雄性资源被分为遗传关系较远的两类,一类与江西、江苏、湖南野柿及‘火晶’等主栽涩柿品种和‘耀县五花柿’等雌雄同株涩柿品种亲缘关系较近,另一类与云架山雄性资源和罗田甜柿（包括‘甜宝盖’）亲缘关系较近;（3）大部分日本来源的柿资源可被单独聚为一类。     

不同海拔产地甜柿成熟期间品质变化规律研究

以种植于3个不同海拔产地的完全甜柿品种‘次郎'为试材,研究不同海拔产区甜柿在果实成熟期间的品质变化规律,结果表明:甜柿的最佳品质出现时间因产地海拔高度不同而不同,其限制因子是甜柿完全脱涩的时期。海拔低脱涩早,海拔高脱涩晚。用于采后低温冷藏的甜柿采收成熟度必须达8成熟,TSS含量不低于12%,否则冷藏期间易发生冷害。     

柿果ACC合成酶基因的克隆与植物表达载体的构建

以柿果组织中分离的总RNA为模板,经RT-PCR扩增到约1.1 kb的富有柿果ACC合成酶(Fuyu-ACS)的 基因片段,将此片段克隆到pGEMR-T easy vector上,经测序分析与Genbank中平核无柿果的DK-ACS1基因核苷酸 序列的同源性为99％。设计了2对带限制性内切酶位点的特异性引物,以测序质粒为模板,PCR扩增到2个ACS- Fuyu片段。2个片段经双酶切消化后,分别以正反2个方向插入到植物表达载体pBI121的35 S启动子和NOS终止 子之间,构建成Fuyu-ACS基因的植物表达载体。     

基于主成分与聚类分析的柿子开发利用预判分析

为建立不同柿子品种间的关系,依据品种类型选择相应加工处理方式,从而更好的确定不同类型柿子用途,以期得到具有高附加值的柿子产品。该研究测定了柿子中单宁、黄酮、绿原酸、水分及灰分含量,对成分指标进行了描述性统计、主成分分析、聚类分析。描述性统计结果表明,测定数据具有一定全面性与代表性。结果表明:提取出的3个主成分,方差累计贡献率为81.28%,包含了绝大多数测定指标所具有的信息。聚类分析结果表明,38个柿子品种可分为两大类,其中,“盖柿”“满堂红”“胎里红”为第一大类;其它35个柿子品种为第二大类。分成2类的柿子品种中,第一类各成分含量普遍偏低,此种类型的柿子可用于初等柿产品如柿饼的加工生产;第二类柿子各成分含量相对较高,此种类型的柿子可用作后续加工生产,如提取其中的活性物质后,依据其性质相应加入到产品中。该研究为柿子品种资源的科学规范利用,为更好地选择柿子相应加工方式提供理论依据。     

柿果脱涩机理研究新进展

从柿品种分类新体系出发,结合柿果发育特点,尤其是单宁细胞发育和原花青素代谢研究近况,重点从生理生化和分子生物学角度对柿果脱涩机理研究的新进展进行了系统评述;比较完全甜柿和非完全甜柿,以及中国甜柿和日本甜柿脱涩方式、特点及其分子机理的差异,旨在阐明完全甜柿的商品优越性以及中国甜柿在柿遗传改良中的特殊作用。     

Polymorphisms of amplified mitochondrial DNA non-coding regions in Diospyros spp.

Universal primers were used to amplify mtDNA non-coding regions in Diospyros spp. including 6 related species and 20 genotypes of Diospyros kaki Thunb. The results showed: (1) 32 universal primers successfully amplified either introns or intergenic regions in Diospyros spp. A total of 119 bands were obtained, in which 110 were polymorphic. (2) Twenty three universal primers were used to analysis genetic diversity at the level of intra-specific, which revealed that the mitochondrial genomes had abundant variation during recombination. Chinese, Japanese PCNA genotypes were separated distinctly from each other by clustering analysis. (3) Two Chinese PCNA genotypes of Japanese persimmon, ‘Baogaitianshi’ and ‘Eshi No.1’, have unique bands to other materials, which showed they would have derived from the same female parent according to the maternal inheritance of mitochondrial genome.     

柿采后丙烯和1–甲基环丙烯处理对两个扩展蛋白基因表达的影响

为进一步了解扩展蛋白（Expansin,EXP）在柿果实采后软化过程中的作用,以丙烯和1–甲基环丙烯（1-methylcyclopropene,1-MCP）处理‘富平尖柿’采后果实,采用实时荧光定量PCR技术检测果实中EXP基因表达量的变化。结果显示,丙烯促进柿果实成熟软化,使乙烯释放高峰升高并提前到来,提高ACC合成酶（ACS）、ACC氧化酶（ACO）活性;1-MCP减缓柿果实的成熟软化,推迟并降低乙烯释放高峰,抑制ACS和ACO活性。随着贮藏时间的延长,柿果实逐渐软化,对照果实DkEXP3和DkEXP4的相对表达量均表现为先上升后下降的趋势。丙烯处理促进了DkEXP3和DkEXP4的表达,使表达高峰升高且提早到来;1-MCP处理抑制了DkEXP3和DkEXP4的表达,推迟且降低了表达高峰。对照和1-MCP处理的果实的DkEXP3和DkEXP4的相对表达量高峰均较乙烯释放高峰早。DkEXP3和DkEXP4在果皮、果肉、果心中表达水平不同。本结果说明EXP可能在采后柿果实成熟软化前期起作用,其表达有组织特异性,且受到乙烯的调控。     

柿胚与果实发育相关性的研究

以甜柿品种卡迟莎和涩柿品种高安方柿为材料,采用常规石蜡切片法及SAS统计分析法,对果实发育及其与胚发育相关性进行了研究。结果表明:果实横切面从外到内是表皮层、石细胞层、中果皮及内果皮组成的果肉组织。表皮外层主要表现为垂周分裂和平周生长;石细胞是厚壁组织中典型的短石细胞。果实、种子发育与胚发育有着密切的关系,果径、种子长与胚长存在高度的正相关性,各相关方程的相关系数均达极显著水平。