FLCN对奶牛乳腺上皮细胞增殖及泌乳功能的影响

FLCN基因参与多种代谢途径和细胞过程,国内外关于FLCN在奶牛乳腺发育过程中表达及调节的研究鲜有报道。应用RNA干扰技术和质粒转染技术改变FLCN基因在奶牛乳腺上皮细胞中表达量,流式细胞仪检测细胞增殖,采用qRT-PCR和Western blot检测FLCN对泌乳相关功能基因AMPK、mTOR、CyclinD1、Caspase3和β-酪蛋白表达的影响。结果表明,FLCN正向调节mTOR磷酸化水平,促进乳蛋白合成和细胞增殖,抑制细胞凋亡,负调控能量代谢调节子AMPK。FLCN在奶牛乳腺上皮细胞中可通过mTOR信号通路调控细胞增殖及乳蛋白合成,研究对揭示FLCN调控奶牛乳腺上皮细胞增殖和泌乳具有重要作用。     

茶多酚对氧化应激所致奶牛乳腺上皮细胞损伤的保护作用

用过氧化氢(H2O2)建立体外奶牛乳腺上皮细胞的氧化应激损伤模型,研究不同质量浓度茶多酚对氧化应激所致奶牛乳腺上皮细胞损伤的影响。MTT法检测细胞存活率,比色法检测细胞培养液中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和乳酸脱氢酶(LDH)活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,分光光度法检测天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的活性。结果显示:与H2O2损伤模型组相比,20～100μg.mL-1茶多酚处理组的奶牛乳腺上皮细胞存活率、SOD活性显著升高,而MDA含量、LDH与Caspase-3相对活性与细胞凋亡率均下降,其中以100μg.mL-1茶多酚处理组效果最显著,说明一定质量浓度的茶多酚可以缓解氧化应激所致的奶牛乳腺上皮细胞的损伤,提高细胞存活率,抑制乳腺细胞凋亡。结论:茶多酚对乳腺上皮细胞氧化应激损伤具有保护作用,其保护作用可能与降低MDA含量,增强SOD活性及抑制Caspase-3活性有关。     

热应激诱导奶牛乳腺上皮细胞凋亡及其对HSP70基因表达的影响

为探讨热应激对乳腺上皮细胞凋亡的影响,以体外培养的奶牛乳腺上皮细胞为模型,取对数生长期的乳腺上皮细胞分别置于39℃和41℃热处理1 h(以37℃正常培养的细胞为对照),在37℃恢复培养0、6、12 h后收集细胞,采用MTT法检测细胞生长抑制率,Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡,比色法分析Caspase-3活性,荧光定量PCR检测HSP70基因的表达水平。结果表明,39℃热应激组细胞生长抑制率和死亡率高峰期均发生在热修复6 h,细胞死亡率为15.42%,而41℃热应激组发生在热修复12 h,细胞死亡率高达23.18%;高温处理后,Caspase-3活性呈上升趋势;39℃热应激组在热恢复6 h,HSP70基因表达量显著高于对照组,41℃热应激组在热恢复0、6、12 h,HSP70基因的表达量分别为对照组的3.53倍、5.61倍和2.93倍。综上可知,高温应激激活了Caspase-3活性,从而诱导乳腺上皮细胞凋亡,并随高温强度的增加而作用增强,同时高温诱导了HSP70基因过表达,协助细胞获得热耐受性。     

胆碱对热应激诱导的奶牛乳腺上皮细胞凋亡的影响

[目的]本试验旨在揭示胆碱对热应激诱导的奶牛乳腺上皮细胞凋亡的抑制作用.[方法]奶牛乳腺上皮细胞系(MAC-T细胞)于含10％胎牛血清的DMEM培养基中进行体外培养,将细胞分为对照组、胆碱组(100μmol·L-1)、热应激组(42℃,2 h)、热应激+胆碱组.采用CCK-8法分析添加胆碱对MAC-T细胞的药物毒性及细...     

橙皮苷调控Bcl-2/Bax-Caspase3信号通路阻抑H2O2诱导的奶牛乳腺上皮细胞凋亡

【目的】探析橙皮苷对奶牛乳腺上皮细胞凋亡的阻抑效果及其分子作用机制,为其在促进奶牛乳腺器官生长发育和维持泌乳功能领域的应用提供理论依据。【方法】以1000μmol/L H₂O₂处理奶牛乳腺上皮细胞8 h构建细胞凋亡模型,再用120μg/mL橙皮苷处理24 h,然后采用CCK-8法测定奶牛乳腺上皮细胞活性,通过激光共聚焦显微镜、流式细胞仪和DNA凝胶电泳检测细胞凋亡情况,利用实时荧光定量PCR检测奶牛乳腺上皮细胞的Bcl-2、Bax和Caspase3基因表达水平,并以Western blotting检测Bcl-2、Bax和Caspase3蛋白的表达变化。【结果】与空白对照组(CK)相比,H₂O₂组奶牛乳腺上皮细胞活性极显著下降(P<0.01,下同),发生凋亡的细胞比例极显著升高,且DNA片段呈梯状条带;橙皮苷组奶牛乳腺上皮细胞活性显著升高(P<0.05,下同),且细胞凋亡程度低,发生凋亡的细胞数目较少。与H₂O₂组相比,H₂...     

上海：奶牛场缓解热应激工程技术有了新进展

随着全球气候变暖，热应激已成为危害奶牛生产的重要因素。热应激是指机体应对环境高温，所产生的非特异性应答反应。热应激对奶牛的影响主要表现为采食量、生产繁殖性能和免疫力降低。     

谷氨酰胺对高温应激奶牛乳腺上皮细胞凋亡及Bcl-2、HSP70表达的影响

为探讨谷氨酰胺预处理抗高温应激损伤的作用,以体外培养的奶牛乳腺上皮细胞为模型,取对数生长期的奶牛乳腺上皮细胞,分为对照组、谷氨酰胺组、高温组、谷氨酰胺+高温组,采用MTT法检测细胞存活率、Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡、荧光定量PCR检测Bcl-2基因和HSP70基因的表达水平、比色法分析Caspase-3活性。结果显示,奶牛乳腺上皮细胞经谷氨酰胺预处理后,HSP70 mRNA表达量极显著增加(P 0. 01),提高了热应激状态下细胞的热耐受性和存活力;与高温组相比,谷氨酰胺+高温处理组Bcl-2 mRNA表达量在热恢复0、6、12 h分别提高3. 23倍(P 0. 05)、2. 49倍(P 0. 05)、1. 89倍(P 0. 05),Caspase-3活性分别下降68. 04%(P 0. 01)、40. 89%(P 0. 05)、52. 06%(P 0. 01)。综上,谷氨酰胺预处理促进了奶牛乳腺上皮细胞Bcl-2和HSP70表达,缓解了高温应激引起的Caspase-3活性上升,抑制了热应激所致的奶牛乳腺上皮细胞凋亡。     

动物食欲的调控

采食量是发挥动物生产力的基础,影响采食量的因素有年龄、代谢需要(妊娠、泌乳和活动水平)、热应激、光照周期、疾病和心理应激。中枢神经系统对食欲有控制作用。许多     

中草药饲料添加剂对奶牛抗热应激作用试验

为减轻热应激对奶牛的不良影响,进行中草药饲料添加剂对奶牛抗热应激作用试验。结果表明,在奶牛日粮中适当添加一定剂量的复合中草药制剂,可以增强奶牛机体对内外环境的适应能力和调节能力,改善新陈代谢,提高抗热应激能力;并能提高奶牛的抗病性,减少乳房炎发病率,保证奶牛乳腺正常旺盛的泌乳功能,提高产奶量。     

奶牛乳腺上皮细胞体外培养技术研究进展

奶牛乳腺上皮细胞具有合成和分泌乳汁的特殊功能,是制作乳腺生物反应器的靶细胞。以奶牛乳腺上皮细胞为试验模型,能够真实反应乳腺生长、发育及泌乳的细胞或分子生物学机制,验证乳腺组织特异性表达载体构建的合理性和有效性,对研究奶牛乳腺生物反应器、乳蛋白基因表达具有重要的意义。文章主要从培养方法、培养体系的建立、形态结构与细胞增殖分化方面阐述乳腺上皮细胞体外培养技术研究进展。     

热应激状态下泌乳奶牛通过激活GHIGF-I轴增强糖异生变化

【目的】选取分娩1周后的泌乳期荷斯坦奶牛6头,提前适应期1周后,正式饲喂从2013年6月29日至8月5日,总共35 d(5周),使泌乳奶牛处于热应激状态。进而检测泌乳奶牛乳产量及乳蛋白含量,血液中生长激素(GH)、胰岛素样生长因子(IGF-I)、葡萄糖以及肝脏中热休克蛋白70(HSP70)和糖异生作用的变化情况,拟从GH-IGF-I轴的角度阐明泌乳奶牛发生热应激时对糖异生作用及乳品质下降的机制。为进一步揭示奶牛热应激的发生机理及控制奶牛热应激的发生提供理论依据。【方法】分别统计第1—5周泌乳奶牛的产奶量及分析乳蛋白含量,并采集泌乳奶牛颈静脉血液和进行活体采取肝脏组织的方法,检测血液中葡萄糖和GH、IGF-I的含量,采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)技术对奶牛肝脏组织中HSP70和糖异生的关键酶丙酮酸羧化酶(PC)、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)以及生长激素受体(GHR)、胰岛素样生长因子受体(IGFR)进行检测。【结果】在35 d的饲喂过程中,日间平均气温在32℃以上的持续时间达25 d,且最高温度为38℃,高温持续时间大于72 h,即此气候条件下奶牛处于一个热应激状态。随着泌乳奶牛热应激程度的不断加深,从第1周到第5周产奶量和乳蛋白含量都有不同程度的下降。通过比较第5周和第1周泌乳奶牛肝脏中HSP70的表达,发现第5周HSP70的表达量极显著高于第1周。检测血液中GH、IGF-I以及葡萄糖的含量,发现在第5周的时候其含量均高于第1周且差异显著(P0.05);检测泌乳奶牛肝脏组织中PC和PEPCK的表达水平,发现第5周显著高于第1周(P0.05);通过检测第5周与第1周肝脏组织中GH和IGF-I受体的表达水平,发现GHR和IGFR同样上调,其中IGFR显著上调(P0.05)。【结论】随着泌乳奶牛热应激的程度的不断加深,血液中的葡萄糖含量显著升高,其可能是由于垂体分泌的GH刺激肝脏产生更多的IGF-I,即通过GHIGF-I轴上调肝脏糖异生途径关键酶的表达,使糖异生途径处于激活状态。而乳中乳蛋白含量的下降可能是由于其前体物被过多的用来进行糖异生作用,增加血液中葡萄糖含量,维持机体正常供能所致。     

长沙地区奶牛养殖现状调查

为探明湖南奶牛养殖发展缓慢的原因，以促进湖南奶业的发展，对长沙地区主要奶牛场奶牛的产奶性能和饲料使用情况进行了调查．结果表明：1）季节对奶牛产奶量和乳成分有极显著影响，8月奶牛的产奶量降至最低；2）不同牛场间4～9月乳成分存在极显著差异，且测定月份和牛场对乳蛋白互作影响极显著；3）长沙奶牛粗饲料明显缺乏．据此，笔者提出了发展长沙（湖南）奶业的主要措施：1）立足本地资源，开发具有长沙（湖南）特色的奶牛饲料，如全株青贮饲料稻和整粒棉籽；2）采取综合措施缓解奶牛热应激；3）提高奶牛饲养管理水平．     

利用F89和瘤胃素减缓奶牛热应激与提高产奶性能的研究

将３３头泌乳中期荷斯坦奶牛随机分为３组,试验Ⅰ组日粮中添加１．２ｍｇ／ｋｇ的Ｆ８９,试验Ⅱ组日粮中添加２０ｍｇ／ｋｇ的瘤胃素,结果表明：在热应激条件下,Ｆ８９可以提高奶牛的粗饲料采量和减缓产奶量下降;使用瘤胃素,奶牛产奶量比试前提高８．３２％;同时这两种物质都具有抗热应激和提高血清ＰＲＬ及Ｔ４水平的趋势。     

丙二醇对泌乳早期奶牛泌乳性能和血液代谢产物的影响

 【目的】研究丙二醇对泌乳早期奶牛采食量、泌乳性能、体重变化、能量平衡、血液代谢产物和尿酮浓度的影响。【方法】选取32头经产奶牛,根据泌乳期、上一泌乳期305 d产奶量和预产期,采用随机区组设计分为4组,分别在基础日粮中添加1,2-丙二醇0、150、300和450 ml?d-1,测定采食量、产奶量、乳成分、体重、血糖和尿酮等浓度的变化。【结果】日粮添加丙二醇对奶牛的采食量、产奶量、乳蛋白率、乳糖率、乳干物质率和饲料转化效率无显著影响,450 ml?d-1组乳脂率显著低于0和150 ml?d-1组（P＜0.05）。添加丙二醇后,300、450 ml?d-1组血浆葡萄糖和胰岛素浓度显著高于0组（P＜0.05）,而血浆游离脂肪酸和β-羟丁酸浓度显著低于0组（P＜0.05）;300、450 ml?d-1组尿酮浓度显著低于0和150 ml?d-1组（P＜0.05）。添加丙二醇300、450 ml?d-1显著改善泌乳早期奶牛能量负平衡,减少了体重下降。【结论】日粮添加丙二醇有益于改善泌乳早期奶牛能量平衡状况,适宜添加量为300 ml?d-1。     

过瘤胃胆碱对围产期奶牛生产性能和能量代谢的影响

为阐明日粮中添加过瘤胃胆碱对围产期奶牛生产性能和能量代谢的影响,选取年龄、胎次和泌乳量相近的健康荷斯坦奶牛40头,随机分为4组,每组10头。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组每天分别在基础日粮中添加5、10和20g过瘤胃胆碱,Ⅳ组饲喂基础日粮。试验期内(产前14d～产后42d)分别调查和检测奶牛的生产性能(泌乳量和干物质摄入量)、血液生化指标(葡萄糖、β-羟丁酸、游离脂肪酸、甘油三酯和胆固醇)和内分泌指标(胰岛素和胰高血糖素)。结果显示:1)围产期奶牛日粮中添加过瘤胃胆碱能明显提高奶牛泌乳量(MY)和干物质摄入量(DMI),以每头奶牛每天添加10g过瘤胃胆碱效果最好。2)围产期奶牛日粮添加过瘤胃胆碱,能延缓血浆葡萄糖(Glu)水平的下降(P<0.05),显著降低试验奶牛血浆β-羟丁酸(BHBA)、游离脂肪酸(NEFA)总胆固醇(TCHO)含量(P<0.05),与对照组相比,血浆甘油三酯(TG)有升高的趋势(P>0.05)。3)添加过瘤胃胆碱,有提高试验奶牛血浆胰岛素(Ins)含量、降低胰高血糖素(Gn)含量的趋势,但差异不显著(P>0.05)。上述结果表明围产期奶牛日粮添加过瘤胃胆碱能够提高奶牛的生产性能,改善奶牛体内脂肪代谢,促进体内糖异生作用,缓解围产期和泌乳早期奶牛的能量负平衡。     

河北省苜蓿生产及苜蓿对奶牛生产性能的影响

苜蓿作为优质饲草,对奶牛业的发展至关重要。针对河北省奶业发展中优质蛋白饲料短缺的问题,介绍了河北省苜蓿生产现状及发展苜蓿生产的现实意义;针对河北省奶牛生产性能中存在的问题,介绍了苜蓿对奶牛产奶量、牛乳品质和干物质采食量的影响。     

过瘤胃烟酸对北方奶牛热应激及生产性能的影响

通过温湿度指数确定北方高温季节奶牛的生产环境,并对烟酸在北方奶牛抗热应激的应用进行了系统评价。选取体况、胎次和产奶量相近的健康奶牛30头,随机分为三个试验处理组,分别添加过瘤胃烟酸0 g·d~(-1)(对照组)、6 g·d-1(试验Ⅰ组)、12 g·d~(-1)(试验Ⅱ组)。结果表明,试验组与对照组相比奶牛体温、皮温、呼吸频率、产奶量以及乳成分方面均没有显著差异(P0.05)。这说明在日粮中单独添加6 g·d~(-1)及12 g·d~(-1)过瘤胃烟酸不会对北方夏季轻度热应激的奶牛产生显著影响。     

热应激与喷淋-风扇系统对不同泌乳阶段奶牛生理和生产性能的影响

为比较热应激与喷淋-风扇系统对热应激期不同泌乳期奶牛生理、生产性能、发病率的影响,将泌乳牛按泌乳时间分为新产牛(0~21 d)、泌乳前期(22~120 d)、泌乳中期(121~200 d)、泌乳后期(201~305 d)奶牛,分别随机选择体况、年龄、泌乳时间相近的健康经产(2~4胎)各泌乳阶段奶牛10头,共计40头作为试验对象。按养殖场日常饲养和管理方式,不做人工干预,热应激期采用喷淋-风扇系统降温。每日测定牛舍温度、相对湿度、风速、直肠温度、呼吸频率、日产奶量、日大缸奶乳成分、日新发肢蹄病、酮病、临床型乳房炎和隐性型乳房炎等。结果表明:喷淋-风扇系统下,热应激期牛舍内温度接近30 ℃,相对湿度为82%,风速达1.35 m·s^-1,湿热指数处于中度热应激。热应激期,各泌乳期奶牛直肠温度平均分别升高0.9、0.7、0.6、0.5 ℃,呼吸频率平均分别上升32.9、29.1、29.3、28.5次·min^-1,较非热应激期均极显著(P<0.01)升高;新产牛、泌乳前期和中期奶牛日单产均极显著(P<0.01)下降,降幅分别为9.17%、18.97%和13.23%,而泌乳后期奶牛无显著变化(P>0.05),新产牛泌乳启动时奶产量下降,各阶段泌乳牛泌乳峰值均降低;全群泌乳牛乳脂率、脂蛋比均极显著(P<0.01)下降,乳蛋白显著(P<0.05)降低,乳脂率、脂蛋比、乳蛋白含量分别降低0.29百分点、5.23%和1.61%;全群泌乳牛肢蹄病、酮病、临床型乳房炎和隐性型乳房炎发病率分别升高5.77、0.78、2.60和5.77百分点。结果说明:喷淋-风扇系统对舍内热环境改善不显著;热应激影响新产牛和泌乳前期、中期奶牛直肠温度和呼吸频率,使新产牛泌乳启动时产奶量下降,各阶段泌乳牛产奶峰值降低;全群泌乳牛乳品质降低,发病率升高。     

热应激对奶牛生理性能的影响

综述了奶牛热应激的产生机制和热应激参数,以及热应激对奶牛生理活动、内分泌、血清中电解质和无机离子的影响。     

产犊月份、胎次和热应激对乳牛产奶量的影响

根据南京一个牧场乳牛群1977～1987年的生产记录和该地的气象资料,采用最小二乘法分析产犊月份和胎次对各泌乳阶段产奶量的影响;采用逐步回归法等统计方法分析热应激对产奶量的影响。结果表明:泌乳前期、中期、后期实际产奶量和305天校正产奶量最高的产犊月份分别是4,10～12,4和4月;产奶量最低的产犊月份分别是5～7,5,11～1和5日;第3胎的305天校正产奶量达最高水平;急性热应激对泌乳中期牛和高产牛的影响较大;平均气温和温湿度指标显著影响夏季日产奶量,而其影响程度与泌乳阶段和生产水平相关。