柑橘黄龙病病原遗传多样性研究进展

柑橘黄龙病是世界范围内最具毁灭性的柑橘病害之一,严重阻碍了柑橘产业的发展。对柑橘黄龙病病原的种群分化及遗传变异进行研究有助于了解柑橘黄龙病的流行、起源与进化。近年来黄龙病病原遗传多样性研究已成为热点之一,本文简要概述国内外在该领域的研究进展。     

网室栽培对柑橘生长及病虫害的影响

柑橘黄龙病（Citrus Huanglongbing,HLB）是柑橘生产上的毁灭性病害,在田间主要通过柑橘木虱（Diaphorina citri Kuwayama）传播,目前尚未有有效防治柑橘黄龙病的药剂。通过搭建防虫网室种植柑橘是目前国内多个黄龙病高发区用以防控柑橘木虱及黄龙病的新型种植方式,但有关网室栽培技术在柑橘木虱及黄龙病等主要柑橘病虫害上的防控效果并未有系统评估。本研究以黄龙病流行区（广东惠州）的柑橘果园为实验地进行防虫网覆盖,通过对网室栽培区与露天区柑橘的树势、柑橘木虱与黄龙病的流行状况及其他害虫发生情况进行系统比较,分析其差异。本研究发现,搭建防虫网室种植柑橘有利于增长其树势,一定程度上能够减少柑橘害虫的种类和数量,特别是柑橘木虱,同时黄龙病的病情也有所减轻。但网室内的相对湿度会在秋季降低,进而引起柑橘红蜘蛛（Panonychus citri McGregor）的爆发。搭建防虫网室的种植方式对柑橘生长及黄龙病的防控有重要的作用,但也会引起部分柑橘红蜘蛛和粉虱的泛滥。     

广东潮汕地区柑橘黄龙病菌及虫媒柑橘木虱的发生与种群研究

本文在柑橘黄龙病（Citrus Huanglongbing）及柑橘木虱起源地之一的潮汕地区,分别选择有针对虫媒的管理、无针对虫媒的管理和无管理3种防控水平的蕉柑果园。通过调查对比植株的感病率,不同虫态木虱的发生情况,黄龙病菌16SrDNA和前噬菌体的序列差异,以及柑橘木虱的种群类型。结果表明：（1）有针对虫媒管理的果园：植株发病率最低,发病等级为轻度,各虫态木虱数量最低且不带菌;无针对虫媒管理的果园中植株发病率显著提高,发病等级为轻度或中度,木虱卵和若虫的数量最多,虫媒成虫带菌率和带菌量均较低;无管理果园中植株发病率和发病等级最高,木虱成虫数量最多,虫媒带菌率和带菌量均最高;（2）植株和柑橘木虱样品中均携带黄龙病菌亚洲种Type 2原噬菌体类型,柑橘木虱均属于单一种群。     

江西信丰柑橘木虱的药效测定

柑橘木虱（Diaphorina citri K瑄wayama）是柑橘黄龙病的媒介昆虫,目前,其防治以化防为主。为了监测化学农药的防治效果,选用9种柑橘生产上常用的药剂对江西赣州市信丰县的柑橘木虱田间种群进行药效测定,并用华南农业大学昆虫生态研究室用九里香饲养的种群作为敏感对照。测定虫态为成虫。结果表明,对信丰种群,处理24h后敌敌畏效果最好,死亡率达95.5%;其次为毒死蜱,死亡率为84.7%。48h和72h后,除敌敌畏、毒死蜱外,啶虫脒、丁硫克百威、噻虫嗪的防效也显著高于其它处理。另外,吡虫啉SL的防效随时间推移逐渐提高。而甲维盐与清水对照相比一直无显著差异,阿维菌素和高效氯氰菊酯的防效也很低。对敏感种群,24h后效果最好的也是敌敌畏和毒死蜱;48h后除了甲维盐和阿维菌素以外,其余7种药剂的防效均达87%以上,各处理之间无显著差异;72h后,这7种药剂的防效均接近100%。两个种群相比,信丰种群用高效氯氰菊酯、吡虫啉SL、吡虫啉SC、毒死蜱、噻虫嗪、啶虫脒处理24h后校正死亡率显著低于敏感种群,说明信丰种群对这些农药的敏感性都有不同程度的下降。48h和72h后,前4种处理的防效还显著低于敏感种群;另外,72h后阿维菌素和甲维盐处理的信丰种群防效也显著低于敏感种群。信丰种群对高效氯氰菊酯的敏感性下降最为显著,与敏感种群相比死亡率降低了65%~77%,其次为吡虫啉,降低17%~75%,建议该地区暂时停止使用。     

单头柑橘木虱中黄龙病菌快速检测方法建立与应用

本研究将快速裂解制样法和环介导恒温扩增技术结合,建立了单头木虱体内黄龙病菌的快速检测方法,整个检测不需要提取核酸,仅需在65℃恒温,45min 内就可以完成。本方法和实时定量PCR法检测结果一致,其灵敏度高于普通PCR法。本研究所建立检测方法操作简便,所需时间短,准确度高,适用于基层检测部门,为单头柑橘木虱体内柑橘黄龙病菌的快速检测提供了新策略。     

赣南脐橙产区应用有人直升机防治柑橘木虱 控制柑橘黄龙病初报

防治柑橘木虱是遏制柑橘黄龙病扩散的关键措施之一,应用有人直升机防治柑橘木虱目前还没有相关文献报道。本文介绍了赣南脐橙产区在嫩梢期应用有人直升机防治柑橘木虱的做法及成效。结果表明：有人直升机施药雾化性能较好,雾滴附着率高,雾滴分布较均匀,14个处理607个雾滴检测样本平均雾滴密度13.33 粒/cm2,雾滴密度符合农业航空植保技术作业要求;各处理对柑橘木虱均有很好的防治效果,药后7 天,防效都达90%以上。有人直升机具有作业效率高、突击能力强、不同地形地貌适应性好等特点,能在短时间内大面积施药作业,对失管果园、隔离带和杂草上的木虱也能同时防治,解决了一家一户防治时间不统一的问题,可以大面积减少虫口基数,是目前柑橘黄龙病发生区可以借鉴应用的重要技术措施。提出了加快农药产品的研发和登记、防范发生次生灾害、完善防治技术及轮换用药避免产生抗药性等建议。     

一种快速高效提取柑橘黄龙病植物样品DNA的方法

为快速获得高质量的柑橘黄龙病（HLB）植物样品DNA,本研究在传统CTAB法基础上,结合热萃取技术,建立了一种简便、快速提取HLB植物样品DNA的CTAB简化法。与Solarbio植物基因组DNA提取试剂盒和传统CTAB提取法相比,该方法所需时间短,1~2 h即可完成整个提取过程,获得的HLB植物样品DNA质量高、产量多。同时比较了三种方法制备模板时黄龙病病原菌和其他柑橘病原菌的PCR检出率,CTAB简化法和传统CTAB法检出率一致,试剂盒稍低,表明本研究建立的CTAB简化法可用于柑橘DNA病害PCR检测DNA模板的制备。本研究研发的HLB植物样品DNA提取方法优势明显,适用于大量病样的快速检测。     

常用农药对湛江红江橙和广州九里香柑橘木虱种群的室内药效测定

柑橘木虱(Diaphorina citri Kuwayama)是柑橘黄龙病最重要的媒介昆虫,对其进行严格防控是阻延黄龙病传播的有效手段。本研究采用室内药效测定方法,测定了12种常用农药对广东重要柑橘品种红江橙(Citrus sinensis Osbeck cv. Hongjiang)和广州园林植物九里香(Murraya paniculata (L.) )上的柑橘木虱成虫的防治效果,并与实验室饲养的敏感种群进行比较,为合理选择农药、有效防治柑橘木虱提供依据。结果显示,77.5%敌敌畏乳油对3个种群防效一致,处理24 h后死亡率都达100%。25%呋虫胺可湿性粉剂和20%甲氰菊酯乳油处理24 h后敏感种群死亡率也达100%,但2个野外种群死亡率略有下降。2.5%高效氯氟氰菊酯水乳剂、350 g/L吡虫啉悬浮剂、30%噻虫嗪悬浮剂、5%啶虫脒乳油、45%毒死蜱乳油、12%高氯·毒死蜱乳油对敏感种群也有理想的防治效果,48 h或72 h死亡率达100%。但广州九里香种群对高效氯氟氰菊酯、吡虫啉、高氯·毒死蜱、噻虫嗪的敏感性显著下降,高效氯氟氰菊酯尤为严重,下降率达64-70%;湛江种群对啶虫脒、毒死蜱、高氯·毒死蜱、噻虫嗪的敏感性也显著下降,对高氯·毒死蜱敏感性下降最为显著,下降率达39%。97%矿物油乳剂处理24 h防效很低,但随时间推移不断提高,72 h达71-86%。5%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐微乳剂、3.2%阿维菌素乳油对3个种群的效果都不理想。测定结果说明两个地区、两种寄主植物的柑橘木虱对多种农药的敏感性存在差异,建议各柑橘产区加强对本地区柑橘木虱的抗药性监测,充分考虑防治其他害虫对柑橘木虱抗性产生的影响,以保证农药的防治效果。     

贵州省柑橘黄龙病发生历史回顾及现状调查

为掌握柑橘黄龙病在贵州省的发生及控制情况,本文回顾了病害在贵州省的发生历史,并对田间的疑似样品进行了。结果表明：贵州省柑橘黄龙病在经过近些年大力防控后,目前在黔东南柑桔主产区黄龙病病情得到一定控制,为零星发生。而在黔西南及黔南一些失管产区,病害发生较为严重。从病原菌序列比对的结果来看,此次收集的样品均为柑橘黄龙病菌亚洲种。此外,在本次田间调查中没有发现柑橘木虱。     

三种提取单头柑橘木虱体内黄龙病菌DNA方法的比较研究

对饲养在温室内的感染柑橘黄龙病甜橙树上的柑橘木虱采用三种方法进行单头核酸提取,通过超微量核酸蛋白分析仪和细菌通用引物27F1492R常规PCR检测核酸质量,利用柑橘黄龙病菌特异性引物OI1/OI2c常规PCR和以r-rplLAs/f-rplLAs引物进行荧光定量qPCR检测。研究结果表明,三种方法均可以成功提取到单头柑橘木虱总核酸且均能检测到黄龙病菌,李菁方法时间短,步骤简便,提取的核酸浓度较高,但核酸质量较低;氯仿-异戊醇抽提方法步骤较多、历时长,提取核酸浓度较低,但核酸质量较高;试剂盒方法简便快速,提取的核酸浓度高,核酸质量一般,成本较高。三种方法各有优缺点,可根据后续分子实验具体要求选择合适的提取方法。本文为有效的检测柑橘木虱体内黄龙病菌提供了技术基础,也可以推广到其他微小昆虫的内生细菌等相关基因研究领域。     

柑橘黄龙病株分布边缘效应研究

根据柑橘园黄龙病植株与健康植株的二阶中心矩比值DR和方差检验来分析HLB的分布边缘效应,同时以病株与健康株的一阶方向矩比值LR和方差检验来判断HLB的主要入侵方位(N、S、E、W)。结果表明,当DR≥1且方差F显著性概率P<0.05时,HLB病株分布呈显著边缘分布倾向,由此说明HLB具有边缘侵入效应;当DR≤1且方差F显著性概率P<0.05时,认为HLB为内源性苗木带菌入侵;当DR≈1且方差F显著性概率P>0.05时,或因HLB初侵染或盛发期而无法判断HLB侵染源。另,DR≥1、|LR|≥1且方差分析均呈显著差异时,可依据|LR|在各方向的大小来判定HLB的主要入侵方向。近距柑橘园间HLB传播具有边缘侵入效应与方向性,在HLB疫区建园时需注意防范。     

柑橘黄龙病菌浓度对琼中绿橙果实品质的影响

为了定量衡量黄龙病菌量对琼中绿橙果实品质的影响,本实验以采自海南琼中橘园中感染了柑橘黄龙病的琼中绿橙为实验材料,用实时荧光定量PCR相对定量的方法测定果实中柑橘黄龙病菌的浓度,同时对果实品质的8个外在指标（果实纵经、横径、果形指数、单果重、果皮率、残渣率、种子数量、种子重量）和5个内在指标（果汁率、可食率、可溶性固形物含量、可滴定酸含量、固酸比）进行测定,研究黄龙病菌浓度对琼中绿橙果实品质的影响。结果表明：随着琼中绿橙果实中柑橘黄龙病菌浓度的增大,果实外观品质变化明显的指标包括果实纵经、果形指数、单果重（p<0.05）,其中果实纵经呈现明显下降趋势,从64.97mm下降到57.44mm,相对较少11.59%;果形指数呈现明显上升趋势,从0.83上升到0.94,相对增多13.25%;单果重呈现下降趋势,从166.35g下降到109.66g,相对较少34.08%;果实横径、果皮率、残渣率、种子数量、种子重量等指标变化不明显。随着琼中绿橙果实中柑橘黄龙病菌浓度的增大,果实内在品质变化明显的指标为可溶性固形物含量,可溶性固形物含量呈现明显下降趋势（P<0.05）,从9.65%下降到8.19%,相对减少15.13%;果汁率、可食率、可滴定酸含量和TSS/TA没有明显变化。结论：在黄龙病菌浓度增加的情况下,琼中绿橙在果实外观、内在品质等多个指标呈现下降趋势。研究结果为定量评价黄龙病对柑橘果实的影响提供参考。     

桂东北柑橘黄龙病发生蔓延的气象条件分析

近年来,柑橘黄龙病在桂东北柑橘产区呈高发状态。该文通过对2008～2015年1～2月、5～7月和10～11月3个时期气象资料的统计分析,探索柑橘黄龙病发生蔓延的气象条件。结果显示,2009、2010年和2013～2015年5年为暖冬气候。特别是2013～2015年间,1～2月连续3年为暖冬气候、5～7月的南风大到暴雨次数达7次、10～11月平均温度仍处于柑橘新梢抽发的适宜值范围。为柑橘黄龙病传病媒介—柑橘木虱的越冬、迁移、增加食源创造了有利条件。因此,建议柑橘产区抓好1～2月、5～7月和10～11月这3个关键时期柑橘木虱的统防统治工作,控制柑橘黄龙病的传播蔓延。     

感染黄龙病年桔的症状表现及其病原分布规律分析

柑橘黄龙病是我国柑橘生产上最具毁灭性的病害,由限制于韧皮部的难培养细菌 “Candidatus Liberibacter asiaticus”(CLas)所引起。年桔是广东优势品种之一,近年来受黄龙病危害造成种植面积大幅缩减。本研究以感染黄龙病的年桔枝条和果实为材料,通过定量Real-time PCR分析CLas在染病年桔枝条及果实橘络中的分布规律。感染黄龙病年桔枝条的新梢普遍表现为叶片斑驳与黄化,但有部分染病枝条的新梢无明显症状,同时染病年桔枝条严重落叶。感染黄龙病年桔果实主要表现为小果、果实畸形、种子败育及“红鼻子果”的症状。定量结果表明,在同一染病年桔枝条中CLas呈不均匀分布的规律。除果实组织(果蒂、果实中轴和橘络)中能稳定检测到CLas外,新梢(新叶和新梢韧皮部)和主干韧皮部并不一定都能检测到CLas。统计分析表明,在同一染病年桔枝条中果实橘络部位的CLas浓度最高(103,360 ± 23,280)且要显著高于其他组织中的CLas浓度(P < 0.05)。此外,通过对同一橘络不同片段(每1.5 cm)中的CLas进行定量发现,CLas在同一橘络中的分布亦不均匀,其中以中前端(1.5-3.0cm)片段组织中的CLas含量最高(22,654,615 ± 4,528,014),且显著高于前端(0-1.5cm,10,423,214 ± 2,059,265)和后端(4.5-6.0cm,3,114,303 ± 1,133,173)(P < 0.05)。本研究得到的结果可为进一步探究CLas在柑橘植株中的转运与增殖规律提供参考。     

两组探针和SYBR Green染料qPCR检测柑橘黄龙病的灵敏度研究

本研究把柑橘黄龙病（Citrus Huanglongbing,HLB）阳性核酸样品进行梯度稀释后,分别采用HLBp、CQULAP两组TaqMan水解探针法和以rpl基因为目的片段的SYBR Green染料法进行HLB实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR, qPCR)灵敏度检测研究,结果发现HLBp探针法可以从105倍稀释的阳性叶片核酸样品中检测到病原菌（病菌拷贝数约为60个）,高于CQULAP探针法和SYBR Green染料法;将三种qPCR检测体系用于赣州安远县、寻乌县和赣县送检的60份田间样品检测,结果HLBp探针阳性率为86.66%,CQULAP探针阳性率为60%,以rpl基因为目的片段的SYBR Green染料法检测阳性率为68.33%。     

肇庆、云浮市砂糖橘主产区柑橘黄龙病发病率调查研究

对肇庆、云浮市部分砂糖橘果园的柑橘黄龙病进行调查和荧光定量PCR检测,探究该区域柑橘黄龙病的发生和危害情况。结果表明：通过荧光定量PCR检测,所调查的35个果园中,检测出柑橘黄龙病的果园有21个,占60%;受试果园的树龄以6-10年最多,占到了果园总数的60%;柑橘苗木的来源混乱,有网室的无病毒容器苗木为0;采集的14份苗圃样本中,检测出柑橘黄龙病的苗圃有6个,阳性率达42%;果农对柑橘黄龙病认知有限,57%的果农不懂得如何判断黄龙病;果农对柑橘黄龙病的防控措施差。     

基于生态位模型的广西柑橘黄龙病风险区空间分布及其变化研究

柑橘黄龙病是严重危害我国柑橘产业可持续发展的重大病害。对柑橘黄龙病进行空间分布和潜在风险预测是有害生物定量风险评估的重要研究内容。应用生态位组合建模技术分析了影响广西境内柑橘黄龙病发生的环境变量,并预测了当前和2030年气候情景下柑橘黄龙病的潜在发病风险区的空间分布及变化特征。通过集成GLM、GBM、FDA、RF和MAXENT的组合模型的TSS和AUC值分别为0.867和0.948,较单一模型均有明显提高;海拔是影响柑橘黄龙病发生的最主要因素,而气温年较差和气温日较差对病害发生也有重要作用。评估发现柑橘黄龙病风险区的总面积变化不大,但其空间分布变化较为明显。当前广西境内柑橘黄龙病高风险区主要分布于柳州、钦州、崇左、玉林、贺州、北海、桂林等地区,占到该全自治区面积的18.8%。到2030年,南宁、贵港和梧州等地区的潜在高风险区的面积将会明显增加。     

柑橘黄龙病菌在贡柑叶片中的分布分析

本研究从不同黄龙病症、叶片不同部位、不同树势三个方面综合分析贡柑叶片中黄龙病菌（Las）的分布。结果表明：（1）斑驳与均匀黄化是与黄龙病最相关的症状且斑驳黄化贡柑叶片中Las含量最高,缺锌黄化具有黄龙病阳性与阴性两种类型样品,无明显黄化症状但革质化的叶片中也含有Las且含量极高。（2）斑驳与均匀黄化典型黄龙病症的贡柑叶片中,Las的含量从叶尖到叶柄以及从叶片到主叶脉均呈现递增趋势,且主叶脉与叶柄的含量最高。（3）在感染初期顶端抽黄梢而下侧健康的病树中,Las的含量从发病严重的部位到树势强的部位呈现递减趋势。这些研究发现将为黄龙病症的田间诊断以及分子检测的样品采集提供有效线索,对黄龙病的有效防控具有重要意义。     

妊娠母猪中黑麦草粉常规养分的消化率研究

黑麦草在盛花期刈割,自然风干,营养物质含量为：总能１６．３６ＭＪ／ｋｇ,干物质８９．４３％,粗蛋白质１０．４７％,粗纤维３７．２１％,钙０．３３％,总磷０．２２％,平均必需氨基酸为０．２７％,其中赖氨酸、蛋氨酸、苏氨酸和色氨酸含量分别为０．３４％、０．１９％、０．３５％和０．０５％。试验选用４头妊娠母猪。以玉米－豆粕型日粮为基础日粮,分别用黑麦草粉替代１０％、２０％和３０％的基础日粮作为试验日粮。采用４×４拉丁方设计。结果表明０％、１０％、２０％和３０％黑麦草粉组饲料总能的消化率分别为７９．３８％、７４．６９％、６５．１８％和５９．８８％;粗蛋白质消化率分别为７８．９３％、７６．３７％、７２．４３％和６９．１６％;干物质的消化率分别为７７．３０％、７４．５１％、６６．１６０％和６１．６０％。经回归分析得出黑麦草粉总能、粗蛋白质、干物质的消化率依次为１１．５４％、４７．６５％、２２．３０％。黑麦草粉的总氨基酸、总必需氨基酸和总非必需氨基酸的平均粪表观消化率分别为３７．９８％、３７．７８％和３８．２３％;赖氨酸、蛋氨酸、苏氨酸、色氨酸的粪表观消化率为１８．４９％、２５．０８％、１３．９５％、５６．３４％。