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广西狂犬病野毒株N和G基因的克隆与序列分析 总被引:6,自引:2,他引:6
从广西南宁、隆安和巴马分离到三株狂犬病病毒野毒株,分别编号为GXN119、GXLA和GXBM。对三株的N基因和GXN119、GXBM株的G基因进行了RT-PCR扩增、克隆和测序。将测序所得结果和收集到的国内外已发表毒株相应基因进行了核苷酸和推定氨基酸的序列进行比较分析。三株野毒之间N基因的核苷酸同源性分别为:89.1%(GXN119/GXBM)、89.7%(GXN119/GXLA)和89.4%(GXLA/GXBM),G基因的核苷酸同源性为86.7%(GXN119/GXBM)。比较N基因推导氨基酸序列同源性,分别为:97.8%(GXN119/GXBM)、97.8%(GXN119/GXLA)和99.1%(GXLA/GXBM),表明N基因同义变异较多。将两株野毒株GXN119、GXBM与人用疫苗3aG株和兽用疫苗ERA株的G基因进行了核苷酸序列比较,同源性介于82.7%~84.0%之间,推定氨基酸同源性在88.0%~91.6%之间。N蛋白的第40位Ser和106位Asp显示了广西狂犬病流行病学的区域特异性。 相似文献
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本文通过反转录—聚合酶链反应 (RT- PCR)扩增并克隆了我国狂犬病病毒 (RV)鹿源野毒株 (82 0 2 )糖蛋白 (G)基因膜外主要功能区的两个片段 ,共 742个 bp(40 5~ 1 1 46) ,含有可以诱导中和抗体的多个抗原决定簇和决定毒力及与神经细胞受体结合部位的基因片段。采用 Sanger双脱氧终止法测定了克隆 c DNA片段的核苷酸序列并推导出了氨基酸序列。将82 0 2株与已发表的人疫苗株 (3a G)的相应序列输入计算机进行比较分析。结果表明两者在这一基因片段核苷酸序列和氨基酸序列分子差异很小 ,同源性极高 ,分别为 97%和 95.5% ,抗原决定簇内的氨基酸均未发生改变 ,只是 82 0 2株在 N2 4 7位缺少一糖基化位点。结合流行病学调查可推断 82 0 2株与中国疫苗株属于同源毒株 ,本研究结果提示应用人狂犬病疫苗预防鹿狂犬病将具有很好效果。 相似文献
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鹿狂犬病病毒G基因主要功能区的序列分析 总被引:3,自引:0,他引:3
通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增出了中国鹿狂犬病野毒株(8202株)糖蛋白(G)基因膜外主要功能区的2个片段,共约800个bp(370~1179),含有可以诱导中和抗体的2个抗原决定簇的基因片段和决定毒力及与神经细胞受体结合部位的基因片段。通过平端连接将2个片段克隆到pUC18的SmaⅠ位点,采用Sanger双脱氧终止法测定cDNA片段的核苷酸序列,并推导出其氨基酸序列。将这一序列与国内外已发表的11株狂犬病病毒的相应序列输入计算机进行比较分析,结果表明8202株主要功能区与上述11个毒株核苷酸序列的同源性在73.0%~96.4%之间,氨基酸序列的同源性在86.4%~94.4%之间,8202株与中国疫苗株无论是核苷酸序列还是氨基酸序列的同源性均最高,而与中国街毒(CDX-1)的核苷酸序列同源性最低,与CVS株的氨基酸序列的同源性最低。本研究对于进行狂犬病病毒的分子流行病学调查和研制鹿狂犬病基因工程苗具有重要意义 相似文献
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狂犬病无毒疫苗株SRV9G基因主要功能区的序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增出了狂犬病无毒疫苗株(SRV9)糖蛋白(G)基因膜外主要功能区的两个片段,共约740个bp(450 ̄1144),含有可以诱导中和抗体的两个抗原决定簇和决定毒力及与神经细胞受体结合部位的基因片段。通过平瑞连续将两片段克隆到pUC18的SmaI位点。采用Sanger双脱氧终止法测定cDNA片段的核苷酸序列,并推导出其氨基酸序列。将这一序列与已发表的狂犬病病毒 相似文献
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通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增出了狂犬病无毒疫苗株(SRV9)糖蛋白(G)基因膜外主要功能区的两个片段,共约740个bp(450~1144),含有可以诱导中和抗体的两个抗原决定簇和决定毒力及与神经细胞受体结合部位的基因片段。通过平端连接将两片段克隆到pUC18的SmaI位点。采用Sanger双脱氧终止法测定cDNA片段的核苷酸序列,并推导出其氨基酸序列。将这一序列与已发表的狂犬病病毒SADB19株的相应序列通过计算机进行比较分析。结果证明两者核苷酸序列的同源性为98.6%,推导氨基酸序列的同源性为95.9%,主要抗原区内的几个重要氨基酸(如333位精氨酸等)发生了变异,糖基化位点也改变。 相似文献
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犬瘟热病毒野毒株融合蛋白主要功能区基因的变异研究 总被引:10,自引:2,他引:10
根据犬瘟热病毒(CDV)融合蛋白(F)基因的核苷酸序列,设计合成了10条引物。用1对引物从延吉犬病料中扩增出了含F2区基因的314bp的片段。除两端引物序列外为265bp,编码88个氨基酸。它与日本弱毒株(CDV-D,Ooderstepoort弱毒株(CDV-ON)、海豹瘟热病毒2型(PDV2)、1型(PDV1)在核苷酸和氨基酸水平上的同源性,分别为98.1%和95.5%、96.2%和93.2%和 相似文献
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为了解狂犬病病毒(RV)的变异情况,本研究对广西不同地区的22个RV分离株的L基因3'端片段进行克隆和测序,与国内外发表的RV街毒、固定毒株及类RV株相应部分的多态性进行了比较分析.结果表明.所测定的22个广西RV野毒分离株属于基因I型,可分为3个群即I群、Ⅱ群和Ⅲ群.其中13株属于I群,其核苷酸同源性为96.9%~100.0%,氨基酸同源性为98.2%~100.0%;8株属于Ⅱ群,株核苷酸同源性为96.5%~99.7%.氨基酸同源性为97.8%~100.0%.仅1株属于Ⅲ群.22个RV分离株与RV固定毒株核苷酸和氨基酸的同源性分别为79.5%~86.9%和85.8%~96.5%,与类RV核苷酸和氨基酸的同源性分别为65.7%~70.3%和70.4%~76.5%. 相似文献
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狂犬病病毒糖蛋白基因主要功能区的克隆和序列比较分析 总被引:2,自引:0,他引:2
对我国不同来源的狂犬病野毒株8202、BRV、MRV以及无毒疫苗株SRV9的G基因405~1144位核苷酸序列进行了RT-PCR扩增、克隆和序列测定,并应用计算机对其进行了分析比较。结果证明,鹿源8202株与中国人用疫苗株为同源株(同源性达97.0%),因此我国鹿狂犬病极可能是人用疫苗毒株污染所致;同地不同动物分离的MRV株和BRV株为亲缘关系较远毒株,表明BRV引起的牛狂犬病不是由于MRV感染所致;疫苗株SRV9与3个野毒株同源性在83%~84%之间。3个野毒株8202、BRV、MRV及疫苗株SRV9的糖基化位点和抗原决定簇内某些氨基酸亦不同。由计算机建立的系统树首次证明我国存在着狂犬病病毒基因亚型。8202、MRV、SRV9和其他对照株的同源性在85.3%以上,为Ⅰa亚型;BRV与它们的同源性仅为82.3%,被分为Ⅰb亚型。从而证明我国存在亲缘关系较远的狂犬病野毒株 相似文献
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狂犬病病毒糖蛋白基因在原核细胞中的表达 总被引:2,自引:0,他引:2
将狂犬病病毒糖蛋白(RVgp)基因BglⅡ片段(1675bp)分别正向插入到原核高效表达载体pET-17b和pET-17b2(用SacⅠ-NdeⅠ缺失掉pET-17b60bp含起始密码子ATG小片段)的BamHⅠ切点,构建重组质粒pET-17bRVgp和pET-17b2RVgp。将其分别转化表达受体菌E.coliBL21(DE3)和E,coliBL21(DE3)plysS.IPTG诱导表达,菌体经超声波裂解处理后SDS-pAGE,染色,在分子量约60000处可见重组质粒表达的较宽的蛋白带,以抗RVgpMcAb进行Western-blot检测,表明该表达蛋白为RVgp。通过扫描显示,表达的RVgp占菌体总蛋白的10%~14%,其中pET-17b2RVgp在E。coliBL21(DE3)中的表达量最高。 相似文献
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不同启动子对重组痘苗病毒表达狂犬病病毒糖蛋白基因的影响 总被引:1,自引:1,他引:1
以血凝素(HA)基因为侧翼,将狂犬病病毒糖蛋白基因cDNA置于不同类型的痘苗病毒复合启动子下游,构建了4种表达质粒。重组表达质粒转染已感染WR株痘苗病毒的BHK21细胞,并通过鸡红细胞吸附试验,筛选、纯化出与表达质粒对应的4组HA-重组痘苗病毒:vSFJ1-10RVgp,vSFJ2-16RVgp,vRJ1-10RVgp,vRJ2-10RVgp。经间接免疫荧光试验(IFA)鉴定,从4组重组病毒中每组各鉴定出1株阳性重组病毒。Westernblot检测显示,重组病毒感染的BHK21细胞裂解物上清中有1种蛋白与抗RVGP的McAb发生特异反应,分子量为69000。在重组病毒感染早期,RVGP的表达量以vSFJ1-10RVgp最高;而在感染晚期,则以vSFJ2-16RVgp最高。4株重组病毒免疫小鼠,均能够不同程度地诱导小鼠产生抗RVGP特异性抗体。 相似文献
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试验旨在提高狂犬病病毒(rabies virus,RV)糖蛋白(G)在大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)中的表达量。通过优化蛋白质诱导表达的温度、时间、诱导剂浓度等条件,以提高该蛋白质的表达量。SDS-PAGE电泳分析结果显示,重组质粒在1 mmol/mL IPTG、30 ℃诱导6 h条件下蛋白表达量最高,经GST-resin亲和层析柱法纯化获得的纯化蛋白约为36 ku,与预期大小相符。Western blotting结果显示,表达蛋白具有很好的免疫原性和特异性。结果表明,RV G融合蛋白的优化表达和纯化为RV亚单位疫苗及中和抗体的研制奠定了基础。 相似文献
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对带有绵羊MT启动子-狂犬病病毒糖蛋白基因的(MT-Rgp)的TgN(oMT-Rgp)2Lge、TgN(oMT-Rgp)4Lge和TgN(oMT-Rgp)6Lge3株转基因小鼠系(子代)进行了表达检测。ELISA结果表明,小鼠肝脏、肾脏中均有糖蛋白表达产物,以肝脏的表达量较高;对肝脏的免疫组化检测结果显示,糖蛋白分布在肝脏实质细胞,主要位于细胞膜上和胞浆内。对8只TgN(oMT-Rgp)2Lge子代鼠一次接种灭活的狂犬病病毒8202株,接种前和接种后3周的血清抗体水平变化在转基因鼠和非转基因鼠之间有明显区别,非转基因鼠抗狂犬病病毒抗体水平明显升高,而转基因鼠抗体水平基本保持不变。经统计学分析,转基因鼠的抗体水平变化相差不显著,表明转基因小鼠对该病毒形成了部分免疫耐受性。 相似文献
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狂犬病是由狂犬病病毒(rabies virus,RABV)感染中枢神经系统引起的致死性人畜共患传染病。RABV糖蛋白存在于病毒表面,它既是病毒的主要保护性抗原,诱导体液免疫产生中和抗体和刺激T细胞产生细胞免疫,又是病毒与细胞受体结合的结构,在病毒致病性和嗜神经性中发挥重要作用,与病毒毒力直接相关。作者归纳总结国内外RABV糖蛋白结构与功能研究进展,并对糖蛋白中和抗体的检测与评价进行阐述。将为进一步揭示RABV糖蛋白生物学功能奠定基础,为糖蛋白中和抗体的诊断提供理论参考,为控制和消灭狂犬病做出相应贡献。 相似文献
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Rabies is a lethal zoonotic infectious disease caused by rabies virus (RABV), which infected the central nervous system. The RABV glycoprotein exists on the surface of the virus particles, it is a major protective antigen which stimulate the body to produce the humoral immunity and cellular immunity;It is the identification of structure of the cell receptors;It plays an important role in the viral pathogenicity and tropism in the nerve, directly related to the virulence of virus.In this review,we summarized research progress of structure and function of RABV glycoprotein,and also reviewed the detection and evaluation of the neutralizing antibody. All these fundamental studies are important for the control and elimination of the RABV,to provide research basis for further revealing the biological function of RABV glycoprotein. 相似文献
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鸡传染性支气管炎病毒中国地方分离株M基因的分子特征 总被引:9,自引:1,他引:9
本实验根据已经发表的鸡传染性支气管炎病毒(IBV)M基因序列设计并合成一对引物,利用RT-PCR扩增得到了IBM新疆分离株LX4株(HA价为2^7)M基因678bp的片段,将该片段克隆到PUC18载体上,通过对所得到的重组质粒进行酶切分析,PCR鉴定,证明得到了含有目的基因片段的阳性重组质粒。采用Sanger's双脱氧末端终止法对插入片段进行核苷酸序列测定,获得了IBV-LX4株M基因的核苷酸序列,利用DNASIS分析软件,将它与GENBANK中发表的15株国外参考毒株相比较,发现核苷酸的同源性(除D1466和DE072外)为85%-92%,氨基酸的同源性为83%-92%,与国内参考株(H52-GD)相比分别为90%和92%,确证我们得到的克隆片段为IBV-LX4株的M基因,且含有两个糖基化位点,9个高度保守的半胱氨酸,三个跨膜区域,与国外的报道一致。 相似文献
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不同转染介质对狂犬病病毒糖蛋白基因免疫的效应 总被引:4,自引:2,他引:2
将狂犬病病毒糖蛋白 ( RGP) c DNA Bgl 片段 ( 1 .6 7kb)分别克隆进质粒 p GFP-Cl、p SV2 -dhfr和pc DNA3 ,构建了重组质粒 p GFP-C1 -RGP、p SV2 -RGP和 pc DNA3 -RGP,通过脂质体和聚乙烯亚胺 ( PEI)包裹后分别转染 BHK-2 1细胞和乳鼠脑内接种 ,3种重组质粒均能表达出 RGP。表达水平高低依次为 p GFP-C1 -RGP>pc DNA3 -RGP>p SV2 -RGP。 3种重组质粒分别以全裸质粒、质粒 -脂质体、质粒 -PEI形式 ,经骨骼肌免疫小鼠 ,间接 ELISA检测。结果显示 ,免疫鼠血清中特异性抗体水平明显高于对照组 ;80 %免疫小鼠能抵抗狂犬病病毒强毒的攻击。全裸质粒免疫诱生的抗体水平同其剂量相关 ;而以 PEI或脂质体作为转染介质、质粒接种量超过 2 0μg时 ,诱生抗体水平不再随质粒剂量增大而显著变化。质粒免疫后 1 50 d采用 PCR仍然能从注射部位检测到 RGP基因的存在 相似文献