黄瓜疫病菌拮抗细菌的分离及鉴定

[目的]筛选对黄瓜疫病有较好稳定防治能力的生防菌。[方法]采用系列稀释法和平板涂布法对黄瓜疫病菌拮抗细菌进行初步分离,进一步通过平板对峙法对其进行筛选,并通过形态学、生理生化特征、16S rDNA序列分析方法对拮抗效果较好的细菌进行了鉴定。[结果]共分离到黄瓜疫病病原菌的拮抗细菌56株,有4株细菌对黄瓜疫病病原菌显示出较强的拮抗效果,其中LY-38菌株对黄瓜疫病病原菌拮抗带宽为6.5 mm,抑菌率高达81.2%,通过鉴定可以确定该菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。[结论]为黄瓜疫病的田间生物防治提供了参考。     

黄瓜立枯病高效拮抗菌的筛选与鉴定

为获得对黄瓜立枯病具有显著防效的优良菌株,以从果蔬体内、根际土壤等多生境中分离的100株细菌为出发菌株,采用平板对峙法和拌土法对100株供试菌株进行初筛和复筛。初筛得到8株能显著抑制立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)的菌株(抑菌带直径D0.60cm);复筛进一步分析表明,其中3株菌能够显著促进黄瓜幼苗的生长和高效防治苗期立枯病害,与对照相比,黄瓜幼苗壮苗指数分别增加16.22%(60)、13.48%(K13)和43.04%(Z84),相对防效分别达67.53%(60)、59.42%(K13)和77.27%(Z84);通过形态观察、生理生化试验及16SrDNA同源性序列对比分析,将60、K13和Z84菌株鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),可为蔬菜苗期高效微生物制剂的开发提供微生物资源。     

番茄灰霉病菌拮抗细菌B21的鉴定

对分离于叶片表面能较强抑制番茄灰霉病菌生长的拮抗细菌B21菌株进行了鉴定。通过形态特征、生理生化特征观察,利用PCR技术对菌株B2116SrDNA序列作全序列分析,序列结果在GeneBank中进行Blast同源序列检索,再用DNAStar软件与Bacillus属的其它种进行同源性分析,结果显示B21与已报道的B.subtilis16SrDNA序列(登陆号AY172513)有99.93%的相似性,且两者在系统发育树中处于同一个分支。确定B21为枯草芽孢杆菌(B.subtilis)的一个菌株。     

水稻稻瘟病菌拮抗细菌的筛选与鉴定

采用平板测定法和盆栽试验结合筛选对稻瘟病菌具有高效抑菌活性的拮抗细菌,结果表明：从江苏省南京市、丰县、泗阳县等地的50份稻田水稻根际土壤样品中,得到1 015个细菌分离物,共获得45株对稻瘟病菌具有高效抑菌活性的拮抗细菌,其中10株对稻瘟病菌、水稻纹枯病菌和水稻稻曲病菌、水稻细菌性条斑病菌及水稻白叶枯病菌均表现出较强的广谱抗菌活性(对5种水稻病原菌平均抑制率在45％以上)。水稻苗瘟的盆栽防治效果表明：拮抗细菌T429和T392具有较好的防治效果,分别达到69.4％和61.1％。结合理化特性和16S rDNA鉴定,T429为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),T392隶属伯克霍尔德菌属(Burkholderia)。     

黄瓜土传病害拮抗菌分离鉴定及其生物活性测定

从菜园地分离得到的200株细菌,通过平皿对峙培养初筛得到6个菌株ZJ7、ZJ14、ZJ31、ZJ32S1、ZJ45和A2,进一步通过促芽试验和无菌土盆栽测定,发现它们能促进黄瓜生长,增加干物质重.接种于黄瓜苗期猝倒病(Pythium spp.)和中期枯萎病(Fusarium oxysporumf.sp.cucumerinum)的盆栽测定中,发现它们能明显提高防病效果.并且,利用细菌16S rDNA对ZJ14、ZJ32S1、ZJ45和A2进行了快速分类鉴定.     

番茄土传病害拮抗菌的筛选、鉴定及拮抗性能评价

[目的]土传病害严重影响了番茄种植的产量和经济效益。因此筛选优良的土传病害拮抗微生物用于生物防治对解决此问题具有重要意义。[方法]本试验以番茄根际土壤为材料,以四株番茄根腐病致病菌立枯丝核菌、腐皮镰刀菌、尖孢镰刀菌和链格孢菌为对峙菌,筛选得到NSB-26和RSB-6两株具有优良拮抗性能的细菌。经形态学和生理生化鉴定及16 SrDNA序列分析,发现NSB-26为贝莱斯芽孢杆菌、RSB-6为暹罗芽孢杆菌。通过盆栽试验对菌株NSB-26和RSB-6的生防效果进行了验证,实验设置了三个处理：病原菌处理(T1),拮抗菌+病原菌处理(T2)和等量清水处理(CK)。[结果]结果表明：与T1和CK处理相比,T2处理番茄幼苗的生长有明显的上升趋势,株高、根长、鲜重、干重均明显提高,株高的增加幅度最高分别达10.06 %和3.95 %;根长的增加幅度最高分别达67.09 %和26.48 %;处理15天时,植株鲜重最高增加幅度分别达133.21 %和93.20 %;植株干重最高增加幅度分别达126.42 %和81.82 %。此外,叶绿素a、b含量也显著上升。[结论]说明拮抗菌处理可有效减轻土传病害,提高番茄幼苗的抗性,这为番茄根际拮抗菌的进一步开发利用提供了理论依据。     

蓝莓采后病害病原菌分离鉴定及其拮抗菌筛选

从西南林业大学大棚蓝莓种植基地内采集样本,并从采后腐烂果实中分离出8株真菌,成功鉴定出2株为青霉菌(Penicillium digitatum)和枝孢菌(Cladosporium tenuiussimum).从健康蓝莓果实、叶片和根际土壤中共分离到17株细菌,根据16S rRNA序列同源性,分别归入9个细菌属.通过检测其对蓝莓果腐病病原真菌的抑制活性,筛选出达到显著差异的拮抗细菌5株,其中3株为芽孢杆菌,2株为短芽孢杆菌;5株拮抗细菌对P.digitatum的抑菌率为67.6%～90.6%,其中3株拮抗细菌对C.tenuiussimum的抑菌率达90.7%～92.6%.菌株BS-3对P.digitatum和C.tenuiussimum的抑菌效果均在90%以上,有潜在生防利用价值.     

稻瘟病菌拮抗假交替单胞菌的分离与鉴定

为从海洋中分离并鉴定水稻稻瘟病菌拮抗菌,采用系列稀释法和对峙法筛选对稻瘟病菌具有较好抑菌活性的拮抗菌,根据其形态、生理特性及16S rDNA序列比对鉴定拮抗菌分类地位.结果:从辽宁省大连采集的样品中共分离到77株菌,以稻瘟病菌为指示菌,共筛选到9株具有拮抗作用的菌株,再通过发酵复筛,结果表明LM-003菌株的拮抗作用最好,且初步鉴定菌株LM-003为假交替单胞菌(Pseudoalteromonas).试验表明,假交替单胞菌LM-003是1株有应用前景的生防菌株.     

用16S rDNA序列分析方法鉴定4个拮抗细菌

用1对16SrDNA通用引物，对4个拮抗细菌96-38、96-41、96-79和9682的基因组DNA进行扩增，PCR产物经克隆、测序、同源性分析表明，这4个菌株的16SrDNA全长均为1513bp，同源性达99．79％，仅在13个碱基位点存在差异。Blast分析发现，这些菌株与Genbank收录的芽孢杆菌属5个菌株16SrDNA序列的同源性为99．1％～99．9％，由此推断这4个拮抗细菌为芽孢杆菌属细菌。     

香蕉枯萎病拮抗菌的筛选与初步鉴定

从果园土壤中分离获得4株对香蕉枯萎病菌(Fusarium oxysporum f. sp. cubense)具有显著抑制作用的拮抗菌bio-B3、bio-d4、bio-d5和bio-P,并对它们的防治效果进行了试验.结果表明,拮抗菌bio-B3、bio-d4、bio-d5发酵液100,200和300倍稀释液对香蕉枯萎病的防治效果为53.3%～80.2%,它们之间无显著性差异,但显著大于bio-P和恶霉灵的防治效果(P<0.05).经形态、培养特征和生理生化特性等鉴定,分别将拮抗菌bio-B3、bio-d4、bio-d5和bio-P初步鉴定为迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella tard)、绿针假单胞菌(Pseudomonas chlororaphis)、恶臭假单胞菌(Pseudomonas utida)和成团肠杆菌(Enterobacter agglomerans).     

壳聚糖对黄瓜苗期猝倒病的防控效果

通过壳聚糖离体抑菌试验和壳聚糖活体控病试验,研究壳聚糖离体和活体条件下对黄瓜苗期猝倒病的防控作用。结果表明,离体条件下壳聚糖对腐霉菌具有直接的抑制作用,且抑制效果随壳聚糖浓度的增加而提高。不同壳聚糖产品抑制效果不同,3种壳聚糖中壳Ⅱ效果较好,壳Ⅰ和壳Ⅲ效果较差。活体控病试验显示,壳聚糖拌土施用对黄瓜苗期猝倒病具有较好的防控效果。施0.5 g·kg-1壳聚糖,猝倒病防效即可达到49.44%,施用量提高到1 g·kg-1,防效显著提高到80.21%。     

稻瘟病菌的拮抗细菌筛选

自稻叶及其它禾本科杂草叶片表面分离纯化９８５株细菌分离物,分别培养在ＮＢ液体培养基中,经８０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ后取上清液,加入稻瘟病菌分生孢子悬液中,测定对稻瘟病菌分生孢子发芽,附着胞形成的抑制作用,从而筛选出１３株对稻瘟病菌孢子芽管生长或附着胞形成具有抑制作用的拮抗细菌．采用离体稻叶接种测定,进一步筛选得到３株拮抗细菌,初步鉴定为：Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ（Ｘｈ２１６）,Ｂａｃｉｌｕｓｓｐ．（Ｘｈ２２２）及Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｐ．（Ｘｈ２４０）．在离体条件下,Ｘｈ２１６,Ｘｈ２２２和Ｘｈ２４０对叶瘟的防治效果分别为７２．３％,７０．５％和６７．４％．     

青枯菌拮抗菌2-Q-9的分子鉴定及抑菌相关基因的克隆

通过16S rDNA碱基序列的测定和同源性分析,鉴定青枯菌拮抗菌2-Q-9与桥石短芽孢杆菌(Brevibacillus choshinensis)亲缘关系最近,其16S rDNA序列提交GenBank,登录号为FJ613127.根据已测得的该拮抗菌外泌抗菌肽氨基酸序列中的一段设计简并引物,利用染色体步移法得到全长序列780 bp,经测序和BLAST比对分析表明,该基因属于CodY家族,与已鉴定的转录因子抑制剂CodY(ZP_01171531)的同源性最高;表现在氨基酸水平的相似性为77%,其序列全长已提交GenBank,登录号为FJ613128.     

5株拮抗细菌对链孢霉的拮抗作用

用平板对峙法筛选出5株对链胞霉有拮抗作用的细菌。结果表明,SK-12、SK-10对链孢霉的拮抗能力最强;浓缩后拮抗细菌拮抗能力显著提高;浓度为20%时,SK-1、SK-10、SK-11对W-N、R-N的抑菌率均达到100%,且培养6d后,W-N仍然不能生长。     

大丽轮枝菌拮抗细菌菌株12-51的筛选鉴定与抗菌物性质分析

由大丽轮枝菌(Verticillium dahliae Kleb)引起的棉花黄萎病,是一种危害严重的世界性病害.通过初筛和复筛得到了对棉花黄萎病具有较高拮抗活性的细菌菌株12-51,通过对其进行形态鉴定、生理生化特征鉴定和16S rDNA全序列分析,最终鉴定此菌株为Bacillus velezensis,16S rDNA序列相似度达99.74%.采用有机溶剂萃取和盐析法对发酵产物进行了提取,初步断定拮抗物质为蛋白类.通过对粗蛋白进一步研究发现,60%组分活性较高,并且对热及酸碱敏感性较小.试验结果为棉花黄萎病的生物防治奠定了基础.     

黄瓜白粉病生防菌H_1、H_2的种类鉴定

通过形态特征、培养条件及生理生化指标,结合16SrDNA分子序列测定,对黄瓜白粉病生防菌H1、H2进行了鉴定.结果表明:生防菌H1、H2的形态特征及22项生理生化指标与枯草芽孢杆菌相符;生防菌H1、H216SrDNA序列与Genbank数据库中枯草芽孢杆菌的相似性高于99.5%,因此,H1、H2均为枯草芽孢杆菌亚种(Bacillus subtilis subsp.ubtilis).综合上述结果,最终确定生防菌H1、H2为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis).     

黄精根腐病分离菌及其拮抗内生细菌的鉴定

黄精是重要的药食同源植物。采集湖南洪江市发生的黄精根腐病株,从其分离菌株HF2的培养性状和形态学特征、真菌rDNA内转录区(ITS)、EF-1a区序列分析和系统发育关系比较等方面对该菌株进行了鉴定;通过平板对峙试验筛选对黄精根腐病菌具有抑制作用的内生细菌,并进行形态观察、生理生化指标测定和16S rRNA序列分析。结果表明:从根腐病株中分离得到的菌株为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum);从黄精中分离获得40株内生细菌,对尖孢镰刀菌有抑制作用的菌株10株,其中A8的抑菌效果最好,对病原菌的抑菌圈半径可达13 mm,经鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。     

番茄青枯病菌拮抗细菌的筛选及鉴定

[目的]筛选出番茄青枯病菌的拮抗细菌,为番茄青枯病的防治提供参考.[方法]从番茄青枯病发病田块中的无病植株根际土壤中筛选获得拮抗细菌,通过形态和培养特征的观察、生理生化的测定和16S rDNA系列分析鉴定其分类地位,并通过盆栽试验验证其防效.[结果]从湖南省张家界市采集的番茄田土壤在NA培养基中分离出104株细菌,有6株细菌对青枯病菌有拮抗活性,其中1株拮抗菌菌株88号对青枯病病原菌有较强拮抗效果,抑菌圈达7.2 mm,其发酵液温室盆栽防效达96.4％,该菌株初步认定为伯克氏属(Burkholderiasp.).[结论]菌株88号在防治番茄土传病害上具有很好的应用前景.