柱前衍生RP-HPLC法测定犀牛角中氨基酸的含量

[目的]建立柱前衍生法测定犀牛角中氨基酸含量的方法。[方法]犀牛角以酸水解法制备水解氨基酸样品溶液,采用柱前衍生-液相色谱法(RP-HPLC)法测定氨基酸含量。色谱条件为:色谱柱为Waters Nova-Pak C18柱(150 mm×3.9 mm,5μm),以乙腈-缓冲盐为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0 ml/min,紫外检测器检测波长为248 nm,柱温为37℃。[结果]17种氨基酸在0.003 4～0.191mg/ml范围内有良好的线性关系(r0.999 4),平均回收率(n=6)为97.8%。[结论]犀牛角中含有大量的氨基酸,其总氨基酸含量高达41.3%。该方法对研究犀牛角的药用价值与寻找犀牛角药用替代物有积极意义。     

直接进样和柱前衍生2种方法检测水中草甘膦及其降解产物的残留

[目的]本文旨在建立不衍生直接通过液相色谱质谱联用(HPLC-MS/MS)检测水中草甘膦和氨甲基膦酸的方法,并对传统柱前衍生HPLC-MS/MS检测水中草甘膦和氨甲基膦酸的方法进行优化,进而对2种方法进行系统比较。[方法]直接进样法:样品过0.22μm水系滤膜后直接进样检测,以乙腈和16 mmol·L~(-1)氨水为流动相,HSS T3色谱柱梯度洗脱,负离子源模式,HPLC-MS/MS检测;柱前衍生法:样品经过9-芴基甲基三氯甲烷(FMOC-Cl)柱前衍生后过0.22μm水系滤膜,以乙腈和1%甲酸+10 mmol·L~(-1)乙酸铵为流动相,BEH C_(18)色谱柱梯度洗脱,正离子源模式,HPLC-MS/MS检测。[结果]直接进样法:草甘膦和氨甲基膦酸在0.5～200μg·L~(-1)线性关系良好,检出限(以3倍信噪比计)分别为0.104和0.072μg·L~(-1),定量限(以10倍信噪比计)分别为0.348和0.241μg·L~(-1),空白水样2种物质5个浓度水平的添加回收率为81.98%～111.24%,相对标准偏差(RSD)为2.18%～16.52%。柱前衍生法:草甘膦和氨甲基膦酸在0.5～200μg·L~(-1)线性关系良好,检出限(以3倍信噪比计)分别为0.019和0.024μg·L~(-1),定量限(以10倍信噪比计)分别为0.063和0.078μg·L~(-1),空白水样2种物质5个浓度水平的添加回收率为85.56%～110.32%,RSD为0.44%～8.44%。[结论]柱前衍生法和直接进样法都能满足水中草甘膦和氨甲基膦酸的检测要求,前者具有更好的灵敏度,但是需要复杂的衍生步骤,且衍生时间需4 h以上;而直接进样法省去衍生步骤,易于操作,方便快捷。     

DNFB柱前衍生化RP-HPLC测定大鼠肝组织18种氨基酸

目的采用柱前衍生RP-HPLC法测定大鼠肝脏组织中18种氨基酸的含量。方法以2,4-二硝基氟苯(DNFB)为衍生化试剂,采用Hypersil BDS C18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱,以甲醇作为流动相A,0.015mol·L-1醋酸钠缓冲液(pH=6.0)作为流动相B,梯度洗脱,柱温30℃,流速为1ml·min-1,检测波长360nm。结果在30min内大鼠肝脏组织中的18种氨基酸可以得到完全分离,且各氨基酸浓度与峰面积之间具有良好的线性关系,回收率在88.3%~110%之间。结论该方法简便、快捷、灵敏、准确,有高度的稳定性和很好的重复性。可以为其他生物样品氨基酸测定提供参考。     

高效液相色谱法检测小鼠脑组织中氨基酸类神经递质

建立了高效液相色谱法测定小鼠脑中四种氨基酸类神经递质含量的方法。以2,4-二硝基氟苯（DNFB）为衍生化试剂,Diamonsil C18（4.6×200mm,5μm）色谱柱,乙腈和醋酸钠缓冲液为流动相,采用二元梯度洗脱,UV350nm检测。结果显示：在18min内四种氨基酸分离完全,在0.01～100ug·mL^-1范围内线性关系良好,Asp、Glu、Gly、GABA相关系数分别为0.998 5,0.997 6,0.994 3,0.992 4;日内变异系数分别为2.4%,3.8%,3.2%和3.5%;标准加入平均回收率分别为95.18%,94.70%,97 60%和95.90%。本方法快速、准确、简单、灵敏度高、重现性好,为临床检测及科研提供参考。     

柱前衍生HPLC测定阿胶中17种水解氨基酸含量

目的:建立柱前衍生高效液相色谱法(HPLC)同时测定阿胶中17种水解氨基酸含量的方法。方法用6 mol/L盐酸溶液水解阿胶中的氨基酸,以异硫氰酸苯酯为柱前衍生试剂;用Hypersil BDS C18柱(200 mm×4.6 mm,5μm),梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,检测波长为254 nm,柱温为30℃。结果 17种氨基酸在60 min内均可得到很好的分离,回收率为97.4%～100.1%,RSD为1.6%～3.4%。结论建立的方法可靠,可用于阿胶中17种水解氨基酸的含量测定。     

饼肥与无机肥的不同配比对白肋烟烟叶中的游离氨基酸的影响

建立了一种用于烟草中游离氨基酸测定的反相高效液相色谱法。实验采用超声波水解、邻苯二甲醛/3-巯基丙酸作为衍生剂进行柱前衍生。色谱柱为依利特C18柱(4.6mmi.d.×250mm,5μm),流动相A为18mmol/L的醋酸钠溶液(pH7.2)含体积分数为0.002%的三乙胺和0.3%的四氢呋喃,流动相B组成为:100mmol/L的醋酸钠溶液(pH7.2)-乙腈-甲醇(体积比为1:2:2),流速为1.0ml/min,柱温为40℃。荧光检测器,激发波长350nm,发射波长450nm。方法的回收率为95.3%～100.7%,RSD为2.32%～9.24%(n=6)。该方法简便、准确、重现性好。测定不同肥料配比生产的白肋烟烟叶中17种游离氨基酸的含量。结果表明,不论有机肥与无机肥怎样配比,天冬氨酸的含量与各氨基酸相比都是最高的;随着饼肥的加入,大部分氨基酸的含量是先增加后逐渐降低的趋势,15%饼肥 85%无机肥与30%饼肥 70%无机肥配比时,大部分游离氨基酸的含量接近,30%饼肥 70%无机肥配比时的游离氨基酸总量最高,综合考虑,30%饼肥 70%无机肥配比时的烟叶质量最好。     

高效液相色谱法测定谷物中的A-型单端孢霉烯族化合物

建立了高效液相色谱荧光检测器测定粮谷中谷物中的A-型单端孢霉烯族化合物的方法。样品经乙腈-水(84 16)混合溶剂和二氯甲烷提取,通过FlorisilSep-Pak净化柱净化,以氧杂萘邻酮-3-羰酰氯为衍生化试剂、4-二甲基氨基吡啶(DMAP)为催化剂进行衍生,然后再通过液液萃取净化,以ZORBAXEclipseXDB-C18柱为分离柱,乙腈-水-0.75%醋酸(65∶35)为流动相进行高效液相色谱分离和检测。四种毒素的浓度在0.01～2.0μgmL范围内呈良好线性,其相关系数最小为0.9962。检出限为0.01ugg,在0.01～2.0mgkg添加范围内的回收率均大于70%,相对标准偏差低于10%。该方法可同时分离四种毒素、操作简便、省时省力。     

高效液相色谱法对鲢鱼、鳙鱼和草鱼肌肉中氨基酸含量的测定

建立了高效液相色谱法检测鲢鱼(Hypophthalmichthys molitrix)、鳙鱼(Aristichthys nobilis)和草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肌肉中氨基酸含量的方法 ,采用专用氨基酸Eelipse-AAA色谱柱,以硼酸缓冲液为pH调节剂,以邻苯二甲醛(OPA)和9-芴甲基氯甲酸酯(FMOC)为柱前衍生化试剂,磷酸氢二钠、甲醇、乙腈和水为流动相,柱温40℃条件下分离目标化合物,同时用紫外检测器(DAD)和荧光检测器(FLD)检测同一个样品,对比两种检测器的检出限,利用两种检测器的检测结果来判定氨基酸的含量。结果表明,17种氨基酸在26 min内用紫外检测器能很好的分离,16种氨基酸在26 min内用荧光检测器也能较好的分离;鲢鱼、鳙鱼、草鱼的必需氨基酸占总氨基酸的比例分别为35.75%、34.67%、36.24%。     

离子阱液质联用仪应用于植物叶片游离氨基酸快速分析方法的建立

建立一种液相色谱-离子阱串联质谱(LC-MS-MS)同时分析植物组织中23种游离氨基酸的方法。植物样品经盐酸-乙醇法一步提取后直接进样,无需进行衍生和固相萃取等其他前处理步骤。液相色谱采用Intertsil OSD-4C18(250mm×3.0mm)色谱柱,采用甲醇-甲酸体系进行洗脱,对23种氨基酸获得比较理想的分离效果。结果表明,该方法通用性良好、样品制备简单(一步提取,无需衍生)、灵敏度高、检出范围宽、高效快速,可以在30min内完成整个分析过程。     

氯甲酸异丁酯二次衍生气相色谱法检测柑橘中游离氨基酸

采用单因素试验法对氯甲酸异丁酯二次衍生条件进行优化,并建立了1种柑橘果肉中18种游离氨基酸的气相色谱定量检测方法。结果显示:当吡啶、异丁醇、第1次氯甲酸异丁酯和第2次氯甲酸异丁酯加入量分别为20、120、50和50μL,萃取溶剂为二氯甲烷时,氨基酸衍生效果最佳;18种氨基酸在其对应范围内线性关系良好,相关系数R2均大于0.99,检测限在0.02～0.35μg/mL,5次重复试验相对标准偏差不超过10.57%;5种柑橘提取液样品的加标回收率均在72.82%～132.97%。该方法简便、准确、重现性好、成本低,衍生物稳定,可以用于柑橘果肉中18种游离氨基酸的检测。     

HPLC法测定喙尾琵琶甲药材中氨基酸的含量

[目的]建立HPLC法测定喙尾琵琶甲中氨基酸含量的方法。[方法]用盐酸水解、邻苯二甲醛和β-巯基乙醇柱前衍生,0.55%磷酸二氢钠缓冲液（pH7.80）-甲醇-乙腈为流动相,柱温35℃,检测波长338 nm,梯度洗脱后测定喙尾琵琵甲药材中氨基酸的含量。[结果]各氨基酸衍生物在40 m in内均能得到良好地分离,r为0.997 0～1.000 0（n=6）,平均回收率为90.16%～104.1%,RSD为1.89%～5.92%。[结论]该方法简便、准确、重现性好,可作为喙尾琵琶甲中氨基酸含量的测定方法。     

史氏鲟鱼鱼籽营养成分分析及评价

通过研究史氏鲟鱼鱼籽中主要营养成分的含量,利用蛋白质营养的化学评估,为鲟鱼鱼籽的深加工提供参考,为鲟鱼资源的开发及综合利用提供科学依据。采用常规测定方法分析史氏鲟鱼鱼籽中的营养成分。检测结果显示史氏鲟鱼鱼籽中粗蛋白含量为26.00%;18种氨基酸含量为25.21%,其中必需氨基酸的含量为10.16%,占氨基酸总量的40.30%,必需氨基酸与非必需氨基酸的比值为67.51%,第一限制氨基酸为色氨酸,其氨基酸评分为92;不饱和脂肪酸占脂肪酸总量的62.8%,EPA和DHA共占10.3%;矿物质含量丰富,尤其是Fe、Zn,达22.07 mg/kg和18.00 mg/kg。因此,史氏鲟鱼鱼籽具有高蛋白、低糖的特点;蛋白中氨基酸种类齐全,配比合理;含有丰富的矿物质和不饱和脂肪酸,是一种值得大力开发研究与推广的优质资源。     

柱前衍生反相液相色谱法测定饲料中氨基酸含量

采用邻苯二甲醛-氯甲酸芴甲酯(OPA-FMOC)柱前衍生反相高效液相色谱法测定饲料中17种氨基酸含量,以C18柱为分析柱,采用荧光检测器,25min内17种氨基酸得到了分离.氨基酸浓度在10-1000pmol/ul范围内,其峰面积与氨基酸浓度的线性相关系数均大于0.996,17种氨基酸的加标回收率在83.9%-109.8%范围内.试验结果表明本方法具有操作简单、灵敏度高,适用于饲料中氨基酸的测定.     

成熟中国鲎卵的营养成分分析

分别采用凯氏定氮法、索氏脂肪抽提称量法、反相液相色谱法及和相色谱-质谱法测定了成熟中国鲎卵中粗蛋白、粗脂肪、氨基酸及脂肪酸的含量。结果表明,中国鲎卵粗蛋白和粗脂肪含量分别为61.90%和15.82%;鲎卵至少含有16种氨基酸,其中异亮氨酸(Ile)、酪氨酸(Tyr)、亮氨酸(Leu)、赖氨酸(Lys)和天冬氨酸(Asp)含量较高,占氨基酸总量的60%以上;鲎卵至少含18种脂肪酸,其中不饱和脂肪酸(UFA)有7种,高度不饱和脂肪酸(HUFA)4种,分别占总游离脂肪酸含量的60.71%和13.15%。     

GC法同时测定蝉花中三种脂肪酸含量

分析江苏茅山地区蝉花(Isaria cicadae Miquel)中脂肪酸的组成,建立了同时测定蝉花中十六酸甲酯、油酸甲酯和亚油酸甲酯3种脂肪酸含量的方法。采用气相色谱-质谱联用法分析蝉花中脂肪酸的组成,并用气相色谱法对其主要脂肪酸进行定量分析。结果表明,蝉花中主要有8种脂肪酸,十六酸甲酯、油酸甲酯、亚油酸甲酯分别在50~500μg/m L(r=0.999 9)、100~1 000μg/m L(r=0.999 5)、20~200μg/m L(r=0.999 3)线性关系良好,平均回收率分别为97.66%、98.13%、97.33%,RSD分别为1.02%、0.73%、1.03%(n=9)。     

用高效液相色谱法测定长蛇鯔肌蛋白氨基酸

采用高效液相色谱法测定了长蛇鯔Saurida elongata新鲜肌肉中18种蛋白氨基酸的含量,结果表明,氨基酸总量为191.94 mg/g,其中必需氨基酸(72.58 mg/g)和鲜味氨基酸含量(91.59 mg/g)皆较高,分别占氨基酸总量的37.81%和47.72%.该方法分离效果较好,重现性好,除半胱氨酸和组氨酸的相对标准偏差(RSD)为8.1%和8.8%外,其余氨基酸的RSD均在3.0%～6.5%之间;仅组氨酸的回收率较低,为72.0%,其余氨基酸的回收率皆为83%～111%,平均回收率为93.2%.该方法测定结果准确,其线性范围为10～1000 μmol/L,检测极限为5 μmol/L.     

绿茶毛尖中有机酸的高效液相色谱分析

建立了测定绿茶毛尖中有机酸的高效液相色谱方法。应用反相C18色谱柱,0.05 mol/L KH2PO4(pH=2.7)为流动相,流速为0.6 mL/min,检测波长为210 nm,柱温为30℃,使绿茶中7种有机酸得到很好地分离。各有机酸在线性范围内呈良好的线性关系,回收率在95.6%~102.5%之间。该方法操作简单、快速、准确度高,适用于绿茶中有机酸含量的测定。     

鲢鱼鳞营养成分分析及营养学评价

[目的]了解鲢鱼鳞的营养成分,为鲢鱼鳞的食用和加工提供依据。[方法]采用生化成分分析方法对鲢鱼鳞的营养成分含量及组成进行了测定分析。[结果]鲢鱼鳞蛋白质含量为80.21%(干重),17种氨基酸总量为72.64%(干重),其中甘氨酸含量(15.98%)最高,脯氨酸含量(12.35%)次之;4种鲜味氨基酸总量为33.79%,3种支链氨基酸总量为6.36%,7种必需氨基酸总量为14.73%,占氨基酸总量20.27%。AAS和CS评分分别为0.30、0.24,必需氨基酸指数为33.34,其构成比例不符合FAO/WHO标准。鲢鱼鳞中共检测到13种脂肪酸,其中饱和脂肪酸4种,占23.18%;单不饱和脂肪酸5种,占37.78%;多不饱和脂肪酸4种,占31.55%。[结论]鲢鱼鳞中粗蛋白、氨基酸、不饱和脂肪酸含量较高,是一种良好的鱼鳞胶和保健食品源,同时也是一种良好的动物性饲料原料。