利用DAS-ELISA进行番茄花叶病毒的田间检测

 从制备的番茄花叶病毒(ToMV-S1)抗血清中提纯IgG,并用过碘酸钠法进行辣根过氧化物酶(HRP)标记,建立了检测ToMV的DAS-ELISA系统。利用此检测系统并结合生物学方法,对浙江及山西等地的田间病样进行测定,结果发现茄子、番茄等茄科作物中均有ToMV的侵染,其中茄子中有50%左右的发生率,番茄中ToMV发生率南北差异较大,在浙江发生率仅为10%左右,而在山西有60.7%的发生率,辣椒中未测到ToMV。这是在我国首次进行ToMV的田间发生情况检测。     

引起番茄植株坏死病的病毒研究

 2004~2005年,在上海郊区夏番茄上连续发生严重的植株坏死病。表现为番茄植株矮化、顶端坏死、果实畸形和整株枯萎症状,并在叶柄和茎干上出现不规则坏死条斑,具有典型的病毒病特征。通过采集典型病叶、病果,进行病毒分离、dsRNA分析、寄主生物学研究、病毒纯化、病毒蛋白分析、组织病理学与形态学观察和ELISA检测,初步确定是由番茄花叶病毒(Tomato mosaic virus,ToMV)和黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)侵染。经5次心叶烟单斑分离,获得N5分离物,对CP基因克隆测序的结果确定该分离物为ToMV。寄主反应测定显示,N5的寄主反应与常规ToMV株系存在明显区别,主要表现为常规番茄品种上出现严重坏死。进一步接种GCR品系番茄鉴定N5与ToMV-1株系相似。因此,作者认为,在上海地区番茄上流行并引起坏死病的主要病原可能是ToMV-1株系的1个变异株。     

侵染紫松果菊的黄瓜花叶病毒分离物鉴定

从表现黄花叶症状的紫松果菊病株上获得分离物2-1-2,电镜下可见直径约30 nm的球状病毒粒体,其与黄瓜花叶病毒抗体呈强的阳性反应,ds-RNA的谱带类型与本实验室保存的标准黄瓜花叶病毒株系相同。通过生物学、病毒粒体观察、血清学以及病毒核酸双链试验结果,确定该病毒分离物为黄瓜花叶病毒。     

侵染观赏南瓜的黄瓜绿斑驳花叶病毒的初步鉴定

从广西某农业展示中心观赏南瓜上分离到一种直杆状病毒,长约300nm,该病毒分离物P-3(NN)在测试的葫芦科作物上表现为系统花叶、褪绿斑及明脉症状,在曼陀罗上为局部褪绿斑,在测试的其它茄科作物及豆科和藜科作物上无任何症状反应.其致死温度为95～100℃.经DAC-ELISA测定,P-3(NN)与黄瓜绿斑驳花叶病毒有密切的血清学关系.根据以上结果,初步鉴定P-3(NN)为黄瓜绿斑驳花叶病毒(CGMMV)的一个分离物.     

番茄植株上烟草花叶病毒和早疫病菌的相互作用

在印度,导致番茄早疫病的交链孢霉(Alternaria solani)和烟草花叶病毒是为害番茄的具有重要经济意义的病原物。番茄花叶病的发病率60—70％,早疫病为50％。文献中有较多这样的报告,即一种病原物对某一寄主的侵染而明显影响另一种病原物的发生与发展。依病原物/寄主的组合而     

黄瓜花叶病毒两个甜瓜分离物的基因组及其侵染性克隆

为明确黄瓜花叶病毒（cucumber mosaic virus,CMV）甜瓜分离物的分子变异情况及其侵染性,对2个甜瓜分离物CH99和XH18的基因组进行克隆、测序和分析,并通过构建全长cDNA克隆分析其侵染性。结果显示,黄瓜花叶病毒甜瓜CH99分离物3条RNA长度分别为3 356、3 049和2 211 nt,甜瓜XH18分离物3条RNA长度分别为3 381、3 048和2 217 nt。分离物CH99与XH18的核苷酸序列一致性为89.40%～95.80%,氨基酸序列一致性为90.00%～97.80%,CH99分离物与其他CMV分离物的核苷酸和氨基酸序列一致性平均值分别为79.23%～89.29%和73.52%～93.90%,XH18分离物与其他CMV分离物的核苷酸和氨基酸序列一致性平均值分别为79.81%～89.83%和74.02%～95.14%。遗传发育分析显示,这2个分离物均属于亚组IB成员。接种试验结果显示,分离物CH99和XH18的侵染性克隆构建成功,这2个分离物均能系统侵染本生烟、甜瓜和黄瓜,并在本生烟和甜瓜上引起较严重的症状,在黄瓜上引起的症状较弱,而二者均不能侵染西...     

进境番茄种子中番茄花叶病毒的检测与鉴定

利用双抗夹心 酶联免疫吸附试验(DAS-ELISA)和反转录 聚合酶链式反应（RT-PCR）方法对来自韩国的番茄种子进行种传病毒检测。结果表明,在该批番茄种子中检测到番茄花叶病毒（ToMV）和烟草花叶病毒（TMV）。PCR产物测序结果表明,ToMV特异引物（ToA/ToB）与TMV特异引物（TA/TB）扩增的片段均为ToMV的外壳蛋白（CP）基因及3′非编码区（3′ UTR）,该片段与其他ToMV分离物的核苷酸序列相似性为98.2%~99.9%。本研究利用重新设计合成TMV和ToMV特异引物对该批种子进行RT PCR检测,仅ToMV特异性引物（ToMf1/ToMr1）扩增到670 bp的预期片段,TMV特异引物（TMf1/TMr1）则未出现特异性扩增,表明重新设计的引物可准确区分ToMV和TMV。以上结果证实该批番茄种子仅携带ToMV。     

黄瓜绿斑驳花叶病毒单克隆抗体的研制

将纯化的黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus, CGMMV)制剂免疫BALB/c小鼠,最后一次免疫后第3天取其脾细胞与SP2/0细胞融合,经采用选择性培养基、有限稀释法克隆和间接ELISA方法进行筛选,成功获得了3株分泌CGMMV特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株并分别命名为3C9,3F7,2G10。用ELISA方法对所获得的3个杂交瘤细胞株进行亚型鉴定均为IgG2a,kappa链。 间接ELISA效价测定结果分别为3C9：1.024×107,3F7：2.56×106,2G10：1.28×106。此3株杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗体均能与本研究室保存的其他3种不同的CGMMV分离物发生特异性反应,而不与其他3种同属成员病毒 烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus, TMV)、辣椒轻斑驳病毒(Pepper mild mottle virus, PMMoV)、齿瓣兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV) 发生反应。     

福建西番莲病毒病的发生及其病原黄瓜花叶病毒亚组鉴定

1988～1995年对福建西番莲病毒病的发生为害进行调查,发现在西番莲栽培区病毒病普遍发生,发病率通常在30％～40％,严重的达90％以上。田间症状主要表现为叶片环斑、皱缩、花叶、环斑花叶,死顶和果实木质化等。从田间病株采集40份样本,经电镜观察和采用A蛋白夹心ELISA(PAS-ELISA),用西番莲木质化病毒(PWV)、西番莲黄花叶病毒(PFYMV)、紫果西番莲花叶病毒(GMV)、烟草花叶病毒(TMV)及黄瓜花叶病毒(CMV)的抗血清进行测定,其中36个样本检测出CMV,表明福建西番莲病毒病的主要病原为CMV。与此同时,对西番莲上CMV进行亚组鉴定,采用鉴别寄主和单、多克隆抗体双夹心ELISA(DAS-ELISA)对36个CMV阳性样本进行测定,结果35个属CMV亚组Ⅰ,1个属CMV亚组Ⅱ,表明田间以CMV亚组Ⅰ分离物占绝对优势。     

Occurrence of Cucumber mosaic virus Subgroup IA in tomato in Pakistan

Journal of Plant Diseases and Protection - Infection of tomato in Faisalabad, Pakistan with subgroup IA strain of Cucumber mosaic virus (CMV) is reported for the first time. The virus was detected...     

西瓜感染黄瓜绿斑驳花叶病毒后糖的变化与倒瓤关系的研究

 By high performance liquid chromatography (HPLC), the contents of glucose, fructose and sucrose, and the sweetness were analyzed in watermelon inoculated with Cucumber green mottle mosaic virus (CGMMV).The relationship between sugar change and blood-flesh of watermelon was determined. The results indicated that the content of glucose was apparently increased compared to that of the control before maturity (within 28 days after pollination), but reduced to 24.8% of the control after maturity (at 35 days after pollination). The content of fructose was higher than that of the control within 14 days after pollination, and then decreased with a significant difference. In all cases, the content of sucrose increased with the growth of watermelon. However, compared with the control, the sucrose content of watermelon inoculated with CGMMV was lower. The ratios of glucose, fructose and sucrose in the total sugar were abnormal. Coincidence with the changes of the total sugar, the fruit sweetness before maturity was higher than that of the control, whereas decreased sharply after maturity (lower than that of the control). The inner pulp of the mature fruit appeared to be water-soaked and dirty red with no edibility. In a word, after inoculation with CGMMV, the changes of sugars and sweetness affected the watermelon quality.     

进境荷兰郁金香种苗中南芥菜花叶病毒的鉴定

为了防止南芥菜花叶病毒(Arabis mosaic virus,ArMV)传入我国,采用血清学、分子生物学、电镜观察及生物学接种等方法对从荷兰进口的郁金香种苗进行了ArMV检测。结果表明:ArMV血清学反应为强阳性;RT-PCR反应扩增出370bp的特异性目标条带;RT-PCR产物与已报道的3个ArMV部分外壳蛋白基因的核苷酸序列同源性为91.00%～93.24%,氨基酸序列同源性为99%～100%;免疫电镜观察到叶片病汁液中含有直径约30nm的球状病毒粒体;该病毒在黄花烟、白肋烟、矮牵牛和昆诺藜等鉴别寄主上引起坏死和褪绿等典型症状,经DAS-ELISA检测,这些接种寄主均呈ArMV血清学阳性反应。故将该病毒鉴定为南芥菜花叶病毒。     

观赏百合感染黄瓜花叶病毒后的超微病变研究

 黄瓜花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CMV)是雀麦花叶病毒科(Bromoviridae)黄瓜花叶病毒属(Cucumovirus)的典型成员,寄主范围极其广泛,能侵染1000多种的单、双子叶植物.该病毒可经75种蚜虫传播,有些分离物还可通过种子传播,是寄主植物最多、分布最广、最具经济重要性的植物病毒之一^[1].     

豌豆种传花叶病毒检测鉴定

豌豆种传花叶病毒(pea seed-borne mosaic virus,PSbMV)世界广泛分布,在国外已造成豌豆大量减产,国内有仅小范围低密度分布的报道。加拿大豌豆种子中挑拣皱缩、黑斑等症状的豌豆,先采用双抗体夹心酶联免疫吸附(DAS-ELISA)方法检出PSbMV阳性,再利用反转录PCR(RT-PCR)、序列比对分析和构建系统进化树对阳性样本进行验证鉴定,结果显示与PSbMV序列相似度为99.25%,综上确定从进境豌豆种子中检出豌豆种传花叶病毒。     

Coat protein-mediated transgenic resistance in tomato against a IB subgroup Cucumber mosaic virus strain

Transgenic tomato plants containing the coat protein (CP) gene of Cucumber mosaic virus (CMV) of subgroup IB were developed through Agrobacterium-mediated transformations. The progenies of transgenic plants showed the presence of transgene, its expression and translation of 26 KDa CP. The T₁ and T₂ generation plants were evaluated for resistance against challenge inoculations by a homologous strain of CMV. Visual observations of challenged transgenic plants categorized them into resistant, tolerant and susceptible as compared with untransformed control plants. Out of 33 plants of the T₁ generation, 36.3% showed resistance and remained symptomless throughout their life, 48.4% showed tolerance which developed delayed symptoms of mild mosaic, and 15.1% showed susceptibility to CMV which developed severe systemic mosaic and leaf distortion symptoms after 30?days of virus challenge. Out of 120 plants of the T₂ generation, 60% showed resistance, 26.6% were tolerant and only 13.3% were found susceptible to challenge inoculations of CMV. Resistant transgenic plants also showed less CP accumulation in systemic upper leaves as compared with challenged untransformed plants. In this study, CP of a CMV subgroup IB strain has demonstrated a significant level of resistance in transgenic tomato plants against the CMV strain. The strategy may be applied for better quality and productivity of tomato crops.     

Elimination of tomato mosaic virus by composting tomato residues

Tomato plants infected by tomato mosaic virus (ToMV) were composted. Although the temperature in the stack of tomato residues did not exceed 47°C during composting, ToMV was not detected in samples during composting. Moreover, tomato seedlings grown in pots containing a mixture of Russian peat and the composted material did not become infected. Because ToMV was detected in samples stored in an incubator at 47°C up to the 75th day of the incubation, it was concluded that the biological degradation of ToMV seems to play a more important role than the heat inactivation of the virus.Samenvatting Met tomatemozaïekvirus (ToMV) geïnfecteerde tomateplanten werden gecomposteerd. Hoewel de temperatuur in de composthoop tijdens de compostering niet hoger werd dan 47°C, kon ToMV niet worden geïsoleerd uit monsters, die tijdens de compostering werden genomen. Bovendien werden tomatezaailingen, die in een mengsel van potgrond met gecomposteerd materiaal waren opgegroeid, niet met het virus geïnfecteerd. Omdat ToMV tot 75 dagen na het begin van de incubatie bij 47°C in de monsters kon worden aangetoond, kan worden geconcludeerd, dat de biologische afbraak van ToMV een belangrijker rol speelt dan de inactivering ten gevolge van de warmteontwikkeling.     

黄瓜花叶病毒M株系引致烟草症状恢复的初步研究

 黄瓜花叶病毒M株系在白肋烟上具有典型的症状恢复现象,本研究用提纯病毒和DAS-ELISA建立了CMV-M病毒定量检测方法。研究发现,症状严重程度与叶片中的病毒浓度呈正相关:最早发病的黄化叶每克病组织中病毒可高达790 μg,而恢复叶片上部再发病的花叶症状病叶中每克病组织中病毒也可高达508 μg,恢复叶片中病毒含量很低,每克叶片中最高也没有超过6 μg,仅为发病叶片病毒浓度的1/85~1/135,远低于根和茎中的病毒浓度。RT-PCR和生物学检测结果表明恢复叶片中确实存在具侵染活性的病毒,而且病毒在长达半个月以上一直保持很低浓度。结果表明恢复叶中可能存在有效的病毒防御机制,其具体机理有待进一步研究。     

烟草品种对烟草花叶病毒病和黄瓜花叶病毒病的抗性鉴定

由烟草普通花叶病毒(TMV)和烟草黄瓜花叶病毒(CMV)引致的烟草病毒病是世界烟草主产区普遍发生且危害严重的侵染性病害,每年给烟叶生产造成了重大的经济损失。本文采用温室苗期接种鉴定的方法,对16份烟草种质进行了TMV和CMV的抗病性鉴定。结果表明:不同的烟草品种对TMV和CMV的抗病性存在较大差异。在供试种质中,对TMV表现免疫的有‘牛耳烟’、‘8301’、‘台烟7号’、‘三生-NN’共4份材料;表现抗病的有‘吉烟5号’、‘双抗70’、‘大护脖香’、‘秦烟95’共4份材料;表现中抗的有‘铁把子’、‘中烟15’、‘秦烟98’、‘中烟98’共4份材料;表现中感的有‘NC89’、‘翠碧1号’、‘云烟97’共3份材料;表现感病的只有‘秦烟97’。对CMV表现中抗的材料有1份,是‘铁把子’;表现中感的有‘秦烟95’、‘三生-NN’、‘8301’、‘牛耳烟’、‘翠碧1号’共5份材料;表现感病的有‘秦烟98’、‘云烟97’、‘中烟98’、‘NC89’、‘大护脖香’、‘双抗70’、‘秦烟97’、‘中烟15’、‘台烟7号’、‘吉烟5号’共10份材料。研究发现,‘铁把子’是兼抗这两种病毒病的材料。本研究明确了我国16个烟草品种资源的抗病性水平,为抗耐病品种的利用与品种合理布局提供科学依据,同时为烟草抗病毒病育种的亲本选择提供抗源信息。