FSH对体外培养仔猪睾丸支持细胞CyclinA2表达的影响

本试验利用体外培养的未成熟仔猪睾丸支持细胞,应用实时荧光定量PCR研究了FSH对CyclinA2 mRNA表达的影响。结果发现促卵泡素(FSH)以时间和浓度依赖的方式促进了CyclinA2 mRNA的表达(P<0.05);Forskolin促进了支持细胞CyclinA2 mRNA的表达,而Rp-cAMP、Verapamil和U0126都抑制了其表达(P<0.05),但这3种抑制剂单独作用时对CyclinA2 mRNA的表达与对照相比无显著差异(P>0.05)。这表明FSH以浓度和时间依赖的方式诱导了CyclinA2 mRNA的表达,并通过cAMP、Ca2+内流和细胞外信号调节的蛋白激酶1/2(ERK1/2)通路调节仔猪睾丸支持细胞CyclinA2 mRNA的表达。     

FSH对体外培养仔猪睾丸支持细胞skp2表达的影响

本研究旨在确定促卵泡素是否可通过cAMP、Ca2+内流和细胞外调节的蛋白激酶(ERK1/2)调节培养条件下未成熟仔猪睾丸支持细胞中S期激酶相关蛋白2(skp2)的表达.以培养的仔猪睾丸支持细胞为实验材料,通过添加各种信号通路的抑制剂,运用Western blot检测skp2、p27kip1蛋白的表达,运用实时荧光定量PCR检测skp2 mRNA的表达.结果发现,促卵泡素(50 ng·mL-1)以时间依赖的方式促进了skp2蛋白和mRNA的表达(P＜0.05),这一作用在30 min时达到高峰.FSH(50 ng·mL-1)和Forsko1in(10 μmol·L-1)均促进了skp2蛋白和mRNA的表达(P＜0.05),但降低了p27kip1蛋白的水平,而Rp-cAMP、Verapamil和U0126都抑制了FSH的作用,使skp2蛋白和mRNA的表达有所下降,但提高了p27kip1蛋白的表达,但3种抑制剂单独作用时对skp2蛋白、mRNA以及p27kip1蛋白的表达没有显著影响(P＞0.05).这表明FSH可能主要通过影响cAMP的产生和Ca2+内流,并激活ERK1/2通路调节skp2蛋白的表达,而skp2蛋白的水平与p27kip1蛋白成负相关.     

FSH对仔猪睾丸支持细胞增殖和GDNF表达的调节

以原代培养的仔猪睾丸支持细胞（SC）为试验模型，研究了FSH对SC胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）表达及其增殖的影响。结果显示，外源性添加FSH可促进GDNF蛋白表达，而且这种促进作用具有浓度和时间依赖关系，GDNF蛋白水平随着FSH浓度的增加而升高，FSH浓度为50ng／mL时，GDNF水平达到最高，然后逐渐降低；FSH（50ng／mL）作用30min，可显著促进GDNF蛋白的表达（P〈0．05），当FSH作用1h时，GDNF蛋白水平达到最高，随后逐渐降低。FSH可以时间-剂量依赖性促进SC增殖细胞核抗原（PCNA）的表达，FSH（50ng／mL）作用30min时，PCNA的表达显著增加（P〈0．05），作用1h达极显著水平（P〈0．01），至2h时，PCNA蛋白的表达水平达到最高，随后逐渐降低。提示，FSH可在体外条件下通过刺激SC表达GDNF进而促进其增殖。     

FSH通过激活ERK1/2调节仔猪睾丸支持细胞GDNF的表达

以体外培养的仔猪睾丸支持细胞为研究对象，研究了FSH对GDNF蛋白的调节及其信号传导机制。结果显示：（1）外源性FSH以浓度和时间依赖性促进GDNF蛋白表达：FSH浓度为50ng／mL、作用1h时，GDNF水平达到最高；（2）用FSH（50ng／mL）或dbcAMP（100μmol／L）处理支持细胞，可迅速激活MEK激酶，随FSH刺激时间的延长，ERK1／2活性逐渐升高（0～2h）；（3）MEK1／2的抑制剂U0126可显著抑制FSH对GDNF的激活作用。结果表明，FSH在诱导GDNF蛋白表达的过程中，通过cAMP-PKA-ERK1／2级联通路，促进GDNF基因的表达。     

FSH调节仔猪睾丸支持细胞GDNF表达的信号机制

本研究旨在阐明FSH调节睾丸支持细胞GDNF表达的信号机制.以体外培养的仔猪睾丸支持细胞为试验材料,通过加入不同信号通路因子,采用RT-PCR和Western blot等方法研究了FSH对支持细胞GDNF表达的调节.结果:(1)FSH(50 ng· mL-1)处理支持细胞,可迅速激活MEK激酶,随着FSH刺激时间的延长,ERKl/2活性逐渐升高(0～30 min);(2)dbcAMP(100 μmol·L-1)同样能迅速激活MEK激酶,诱导GDNF蛋白、mRNA的表达;ERK1/2活性随dbcAMP刺激时间的延长逐渐升高(0～30 min);(3)加入MEK1/2的抑制剂U0126和PKA的抑制剂H89,则显著抑制了FSH对GDNF的激活作用,GDNF蛋白、mRNA和活性明显下降;(4)加入PKA的抑制剂H89(10 μmol·L-1),则明显抑制了FSH诱导的ERK1/2磷酸化的激活作用.结果表明,FSH可通过cAMP-PKA激活ERK级联调节支持细胞GDNF的表达.     

活性氧对仔猪睾丸支持细胞微丝的影响

为阐明活性氧(ROS)对睾丸支持细胞(SC)的影响,并深入探讨精子发生调节机制,通过体外培养的仔猪睾丸支持细胞研究ROS对SC中微丝结构的影响.利用H2O2模拟细胞内的ROS环境,使用细胞松弛素B(CytB)破坏细胞中的微丝并利用维生素E(VE)抑制细胞内的ROS,通过细胞活性检测、免疫荧光、酶活检测、免疫印迹等方法检测ROS对睾丸支持细胞微丝的影响.结果表明,H2O2和细胞松弛素B均能提高SC内ROS的水平和细胞外信号调节激酶(ERK)的活性,降低抗氧化酶的活性,破坏细胞内微丝的结构和分布,二者具有协同作用,VE能降低ROS对SC的作用.上述证明,H2O2通过不依赖于微丝途径和降低细胞内抗氧化能力使细胞内ROS处于较高水平,并通过ERK级联,使细胞中微丝发生多聚化,破坏微丝的结构.     

H2O2对睾丸支持细胞凋亡的影响

本试验利用H2O2处理培养的仔猪睾丸支持细胞(SC),通过细胞活力检测、酶活性检测、电镜观察、流式细胞仪等方法,研究H2O2对 SC凋亡的影响.结果发现,H2O2对SC的作用具有时间和剂量依赖性,600 μmol/L的H2O2能诱导SC的凋亡率明显增加,细胞的超微结构受到破坏,出现明显的凋亡小体,同时也发现细胞的抗氧化能力下降.这表明,H2O2通过降低细胞的抗氧化能力,促进了SC的凋亡.     

miR-196a降调RCC2对睾丸支持细胞增殖的促进作用

为探究miR-196a对猪未成熟支持细胞增殖的影响及其机制,将miR-196a的激活剂(mimics)、抑制剂(inhibitor)及miR-ShNC转染至支持细胞,MTS方法检测细胞活力。发现miR-196a mimics能促进支持细胞的增殖,miR-196a inhibitor抑制细胞增殖;使用Targetscan软件预测miR-196a靶基因为RCC2 (regulator of chromosome condensation 2),将miR-196a的mimics及inhibitor转染支持细胞后使用RT-qPCR和Western blot法检测RCC2的表达,结果显示miR-196a下调RCC2的表达,RCC2是miR-196a的靶基因;使用RCC2的siRNA与miR-196a inhibitor共转染支持细胞,MTS方法观察支持细胞活力,发现干扰RCC2基因后,可促进支持细胞的增殖。本研究表明miR-196a通过下调RCC2促进支持细胞的增殖,为后续探索miR-196a在猪睾丸支持细胞发挥的作用提供一定的试验基础和理论依据。     

siRNA抑制牛睾丸细胞Nrf2基因表达的研究

为了探讨Nrf2基因被干扰后对牛睾丸细胞的影响,试验采用了实时荧光定量PCR和Western boltting方法检测了牛睾丸细胞中HO-1和NQO1基因的表达.结果显示,设计的siRNA-1672在终浓度为50nmol/L时抑制效果较好,Nrf2基因表达显著下降,HO-1和NQO1基因在mRNA水平上表达显著下降.N...     

自噬在ZEA对睾丸支持细胞细胞周期影响中的作用

为探讨玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEA)雄性生殖毒性的机理,本试验展开了ZEA对睾丸支持细胞细胞周期的影响以及自噬在ZEA对睾丸支持细胞细胞周期影响中的作用研究。试验以原代睾丸支持细胞为材料,分别以浓度为0(对照组),0.1,1,10,20,30μmol/L ZEA进行染毒,24h后利用CCK-8法、流式细胞术、免疫荧光技术和Western blot等进行ZEA对睾丸支持细胞的活率、细胞周期分布、LC3聚点、自噬及细胞周期相关蛋白等影响的检测。流式细胞术检测结果显示:与对照组比较,当ZEA浓度高于10μmol/L时,G0/G1期比例显著下降(P<0.05),G2/M期的比例极显著升高(P<0.01);与20μmol/L ZEA组相比,自噬抑制剂(CQ)+20μmol/L ZEA组细胞周期的G2/M期的比例显著降低(P<0.05),自噬促进剂(RAP)+20μmol/L ZEA组细胞周期的G2/M期的比例显著升高(P<0.05)。免疫荧光检测结果显示,当ZEA浓度高于10μmol/L时,产生LC3荧光信号的细胞数目较对照组呈极显著性升高(P<0.01)。Western blot检测结果显示:与对照组比较,当ZEA浓度高于10μmol/L时,LC3蛋白的表达量呈极显著性升高(P<0.01),CDK4、CyclinD1等细胞周期蛋白的表达显著降低(P<0.05);与20μmol/L ZEA组相比,CQ+20μmol/L ZEA组CyclinD1、CDK4等蛋白的表达量上升(P<0.05),RAP+20μmol/LZEA组CyclinD1、CDK4等的表达量下降(P<0.05)。结果表明:ZEA能诱导睾丸支持细胞发生自噬,并使睾丸支持细胞发生G2/M期阻滞,且存在剂量依赖性;促进自噬可导致细胞周期阻滞在G2/M期,造成M期延长,而自噬的缺陷可以部分逆转ZEA诱导睾丸支持细胞周期G2/M期的阻滞。在一定浓度范围内,ZEA能显著抑制睾丸支持细胞的增殖,细胞自噬在这一过程中起促进作用。     

运动对大鼠骨骼肌细胞凋亡及钙离子含量的影响

探讨运动对大鼠骨骼肌细胞凋亡及钙离子含量的影响。将大鼠分为对照组、一般运动组和强运动组,对照组大鼠正常活动,一般运动组大鼠跑台速度为18m/min,强运动组大鼠跑台速度为25m/min,一般运动组和强运动组大鼠均运动至力竭。分别检测大鼠比目鱼肌和胫骨前肌细胞凋亡情况,大鼠血清和大鼠后肢组织匀浆上清中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量和钙离子水平,大鼠肌肉组织中Bax、Bcl-2表达水平。结果发现,一般运动组大鼠比目鱼肌中细胞凋亡率和SOD活性均明显高于对照组,差异极显著(P0.01)。强运动组大鼠比目鱼肌中的SOD活性明显低于一般运动组,差异极显著(P0.01)。试验组大鼠血清中MDA水平均明显低于对照组,差异极显著(P0.01)。一般运动组大鼠胫骨前肌和比目鱼肌中MDA水平均明显高于对照组和强运动组,差异极显著(P0.01)。一般运动组大鼠比目鱼肌中钙离子水平和Bax表达水平明显高于对照组,差异显著(P0.05)。一般运动组大鼠比目鱼肌中Bcl-2表达水平明显低于对照组,差异极显著(P0.01)。表明一般运动比高强度运动更易导致比目鱼肌细胞凋亡,作用机制可能与钙离子浓度、氧自由基水平、Bax、Bcl-2有关。     

酵母固态发酵过程中Ca2+对酵母细胞增殖的影响

试验以秸秆、玉米淀粉、花生粕为原料,以福邦饲用高活性干酵母为菌种制备酵母培养物,以氯化钙为添加剂研究了外加不同量的氯化钙对酵母固态发酵过程中酵母细胞增殖的影响,通过对酵母细胞的计数、比较分析,得出酵母菌在该固态发酵培养基上发酵的最适CaCl2添加量,从而为新型酵母产品的研制生产提供一定的参考依据.     

胰高血糖素样肽-2促进细胞增殖、抑制细胞凋亡的分子机制

胰高血糖素样肽-2(GLP-2)是近年发现的一种由肠道L细胞分泌的功能性小肽,对胃肠道具有特异性的调节功能,能通过刺激肠细胞的增殖,抑制肠细胞凋亡和水解而增加肠绒毛高度、黏膜厚度及肠道重量等,进而影响肠道正常的结构和功能.GLP-2对肠细胞增殖、凋亡的调节涉及多种细胞信号传导途径,主要有G蛋白偶联的环化一磷酸腺苷/蛋白激酶A(cAMP/PKA)或磷脂酰肌醇-3激酶/Akt(PI-3K/Akt)途径、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)参与的Wingless(Wnt)/β-连环蛋白(β-catenin)途径、酪氨酸蛋白激酶介导的细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)等信号通路,其中以G蛋白偶联的信号途径为主要途径.这些途径相互协调,共同调控肠上皮细胞的稳态发育和肠道适应.本文将对GLP-2影响细胞增殖、凋亡的分子机制作一综述,为深入认识GLP-2的作用机理提供参考.     

支持细胞及其对精子发生的内分泌调控

支持细胞（ＳｅｒｔｏｌｉＣｅｌ）以多种途径影响精子发生。随着研究手段、方法的改进,支持细胞的诸多作用,如细胞联系、内分泌调控以及与间质细胞、生精细胞之间的交互作用等,已经或正在逐步被证实和揭示出来。这些功能的精细协调,为精子发生创造了适宜的微环境,保证了精子发生的有序进程。     

日循环高温对肉鸡淋巴细胞钙离子浓度、白介素-2水平及细胞周期的影响

本文旨在研究日循环高温对肉鸡淋巴细胞钙离子浓度、白介素-2(IL-2)水平、脾脏T淋巴细胞转化率以及细胞周期的影响.选择32日龄爱拔益加(AA)肉用公鸡150只,随机分为3个处理(适温组、配对组和高温组),每个处理5个重复,每个重复10只鸡.其中适温组昼夜维持恒温22℃,自由采食;配对组昼夜维持恒温22℃,按前1天高温组的采食量饲喂;高温组为27℃-35℃-27℃循环变化,自由采食;试验持续2周.结果显示,日循环高温可显著提高肉鸡的直肠温度、呼吸率和淋巴细胞内钙离子浓度(P<0.01);日循环高温处理7 d时,可显著提高肉鸡血浆中皮质嗣浓度和脾脏T淋巴细胞IL-2的分泌水平(P<0.05).显著降低肉鸡淋巴细胞伴刀豆球蛋白A诱导的T淋巴细胞转化率(P<0.01).日循环高温处理14 d时,各组间均无显著差异(P>0.05);日循环高温处理14 d时,可使处于G1期的细胞比例显著升高(P<0.05),使S期的细胞比例显著下降(P<0.01),而对G2期的细胞比例无显著影响(P>0.05).综合试验结果,日循环高温处理可使肉鸡淋巴细胞内钙离子浓度升高,同时提高细胞IL-2分泌水平;持续日变高温可抑制肉鸡的免疫功能,表现在抑制脾脏T淋巴细胞转化率以及降低细胞从G1期进入S期的比例等方面.     

Effects of extracellular Ca2+ on phagocytosis and intracellular Ca2+ concentrations in polymorphonuclear leukocytes of postpartum dairy cows

The aim of this study was to determine the effects of extracellular Ca(2+) concentration ([Ca(2+)](e)) on phagocytosis and intracellular Ca(2+) concentration ([Ca(2+)](i)) in bovine polymorphonuclear leukocytes (PMNs). The experiments were performed by using blood samples from parturient paretic and clinically normal parturient cows and manipulating the [Ca(2+)](e) in vitro. Phagocytosis by PMNs (with and without stimulation with phorbol myristate acetate and inhibition with cytochalasin B) and resting [Ca(2+)](i) were significantly lower in parturient paretic cows. Repletion of Ca(2+) in the extracellular media for the samples from these animals increased phagocytosis and resting [Ca(2+)](i). In the blood of clinically normal parturient cows, decreasing the [Ca(2+)](e) decreased phagocytosis and resting [Ca(2+)](i) in PMNs, but increasing the [Ca(2+)](e) did not affect phagocytosis. These results suggest that the hypocalcemic condition of parturient paretic cows in vivo causes decreased phagocytosis and resting [Ca(2+)](i) in PMNs, which may partly contribute to greater susceptibility to infection.