凡纳滨对虾循环水养殖系统弧菌消长研究

以鉴别性培养基TCBS琼脂采用平板菌落计数法对凡纳滨对虾循环水养殖系统水体中弧菌的消长进行了监测.结果表明,循环水养殖系统中主要存在非O1群霍乱弧菌、副溶血性弧菌、梅氏弧菌、溶藻弧菌和普通变形杆菌等病原细菌;与传统换水养殖模式相比,循环水养殖系统对非O1群霍乱弧菌、溶藻弧菌和普通变形杆菌控制效果更好,对副溶血性弧菌和梅氏弧菌控制效果相当;在整个养殖过程中,循环水养殖系统弧菌和普通变形杆菌的数量均低于对虾发病的阈值(104 CFU/mL);循环水养殖模式和传统换水养殖模式的水体pH值均在7～10范围内波动,但仅发现非O1群霍乱弧菌和副溶血性弧菌的消长与pH值波动有一定相关性.     

大连典型娱乐海水浴场重要病原细菌筛选及其在不同介质中的分布

为研究海水浴场环境中病原细菌的种类及其分布,以大连金石滩浴场和傅家庄浴场为研究区域,通过可培养、基因芯片、高通量测序等技术对其表层海水、沉积物、湿砂、干砂中病原细菌进行筛选,并分析指示细菌和常见病原细菌的空间分布特征。结果表明:不论金石滩还是傅家庄浴场,优势菌属皆为弧菌Vibrio、芽孢杆菌Bacillus、假单胞菌Pseudomonas等,可能的病原菌属为弧菌、假单胞菌、克雷伯氏菌Klebsiella等菌属中的某些种类;基因芯片检测结果显示,两浴场的主要病原细菌为溶藻弧菌V.alginolyticus、副溶血弧菌V.parahaemolyticus、哈维氏弧菌V.harveyi、鳗弧菌V.anguillarum、粪肠球菌Enterococcus faecalis、气单胞菌属Aeromonas、志贺氏菌属Shigella和大肠杆菌Escherichia coli等,会对游客身体健康造成巨大的潜在威胁;空间分布特征分析显示,粪便污染指示细菌粪大肠菌群和肠球菌主要分布在海水和干砂中,其中,排污口处细菌浓度最高,潜在病原细菌金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus主要分布在海水和干砂中,可培养弧菌主要分布在海水中。研究表明,排污口是大连金石滩和付家庄海水浴场病原细菌主要的污染来源,海滩是其重要的非点源污染来源,建议海滩管理者在泳季高峰期定期监测海滩与排污口周围病原细菌的污染情况,本研究结果可为海水浴场环境管理和保护提供重要参考依据。     

多重富集定量PCR(ME-qPCR)同时检测4种食源性病原弧菌

【目的】溶藻弧菌、副溶血弧菌、创伤弧菌、霍乱弧菌是4种重要的食源性病原弧菌,能够造成人类多种疾病,建立同时检测这4种食源性病原弧菌的检测方法是保障食品安全的基础。本研究旨在建立同时检测溶藻弧菌、副溶血弧菌、创伤弧菌、霍乱弧菌的多重富集定量PCR(multiplex enrichment quantitative PCR,ME-q PCR)方法,并含扩增内标用于指示PCR反应的假阴性,创新一种高通量、高灵敏度、具备定量能力的检测方法,为这4种食源性病原弧菌的检测提供新方法。【方法】以细菌16S r RNA为扩增内标靶序列设计引物,并针对副溶血弧菌的collagenase、溶藻弧菌的gyr B、霍乱弧菌的omp W、创伤弧菌的vvh A,分别设计内、外2对特异性引物,首先将所有内、外引物混合,进行一个循环数较少(10—20 cycles)的高通量多重富集PCR将靶基因富集出来,由于循环数较少,各个基因得到均匀的扩增,每个基因均有4种可能的产物,每1种产物均能作为第二轮巢氏荧光定量PCR的模板,这增加了靶基因从模板中被富集出来的概率,然后将产物稀释后作为模板,利用内引物分别进行巢式荧光定量PCR检测各个基因,最后根据扩增曲线和熔融曲线分析结果。通过设置不同的第一轮多重富集PCR循环数(10、15和20个循环),优化ME-q PCR第一轮循环数。采用14株标准菌株的基因组DNA作为模板,评价ME-q PCR的特异性。并以4种弧菌基因组DNA混合物梯度稀释的样品(100、10、1、0.1、0.01和0.001 ng·μL-1)作为模板,对建立的ME-q PCR进行灵敏度和定量能力的评价。并将该方法应用于已分离到的69株疑似弧菌菌落的鉴定中,与传统生理生化鉴定结果进行对比。【结果】优化后,ME-q PCR的第一轮循环数确定为15,特异性评价结果显示该方法特异性强,灵敏度达0.001 ng,高于普通荧光定量PCR约1个数量级,并能有效指示PCR反应的假阴性,且拥有与普通荧光定量PCR相同的定量能力,扩增效率和R2符合定量的要求;将建立的ME-q PCR方法应用于69株疑似弧菌菌株的鉴定,24个绿色菌落为副溶血弧菌,22个黄色菌落为溶藻弧菌,1个黄色菌落为创伤弧菌,没有检出霍乱弧菌,其结果与生理生化鉴定结果一致。【结论】该方法能够定量、快速准确地检测副溶血弧菌、溶藻弧菌、霍乱弧菌和创伤弧菌这4种食源性病原弧菌,灵敏度高,并能有效指示PCR反应的假阴性,结果无需凝胶电泳,适用于食品中4种常见病原弧菌的快速筛检。     

基于HSP60基因哈氏弧菌PCR检测方法的建立

研究基于哈氏弧菌HSP60基因序列设计1对特异性引物,通过优化PCR条件,特异性及敏感性检测,建立了一套哈氏弧菌特异性PCR检测方法.结果表明,该PCR检测方法可使分离自患病南美白对虾的哈氏弧菌扩增出238 bp的HSP60基因片段,其他五种对照病原弧菌未扩增出任何条带;检测方法最低能检测出2.1 pg的哈氏弧菌基因组DNA.表明建立的哈氏弧菌PCR检测方法可用于该菌引起的水产动物疾病的快速诊断.     

溶藻弧菌对水产动物致病性及其防治的研究进展

溶藻弧菌是一种常见的海洋伺机性病原体,是引起人类、水生动物细菌性疾病的重要病原之一。与其它病原微生物一样,弧菌的致病性与其产生的多种毒力因子息息相关,毒力基因是产生各种毒力因子的物质基础。本文对溶藻弧菌的病原学、致病机理及其防治等方面的最新研究成果进行了综述。     

抗红鳍东方鲀皮肤溃烂病病原哈维弧菌单克隆抗体的制备及特性分析

以红鳍东方鲀皮肤溃烂病病原——哈维弧菌2SYX002为抗原,通过杂交瘤技术制备了抗哈维弧菌的单抗1B6、1D6、1A4、5B4、6C6、2E7、4A7、5B2、4E12、1G3、7D7、8E10、4D12、2B9、7D6、6E6、1G2、6G6和2C1。特性分析结果表明:有8株单克隆抗体(1B6、1D6、1A4、5B4、6C6、7D6、6E6、6G6)特异性较差,与试验中所有菌株均发生反应;有6株(4A7、4E12、7D7、8E10、4D12、2B9)只与免疫菌株哈维弧菌2SYX002反应,与其他菌株均不发生反应。5株单抗(2E7、5B2、1G2、2C1、1G3)与部分参考菌株有不同程度交叉反应;通过进一步特性分析,从中筛选出单克隆抗体2C1,其抗原包被浓度为5×107 cells/m L时,与试验中所有哈维弧菌分离株反应均为阳性,除溶藻弧菌外不与其他参考菌株发生交叉反应,效价为1:256。本研究扩充了哈维弧菌单克隆抗体库,为哈维弧菌单克隆抗体的进一步应用提供参考数据。     

仿刺参及养殖环境中溶藻弧菌和灿烂弧菌的PCR快速检测

溶藻弧菌和灿烂弧菌是水产养殖中常见的致病菌,给水产动物的养殖带来巨大的损失,建立一种简便、快速、有效的检测方法十分必要。根据溶藻弧菌和灿烂弧菌gyrB基因序列的保守区序列分别设计引物,对9株溶藻弧菌和6株灿烂弧菌进行了PCR扩增。结果表明两对引物能特异地检测溶藻弧菌和灿烂弧菌,而与其他细菌没有交叉反应;检测溶藻弧菌的每个PCR反应的敏感度为0.13 pg的DNA和103 cfu/mL细菌,检测灿烂弧菌的每个PCR反应的敏感度为0.34 pg的DNA和103 cfu/mL细菌。该PCR检测方法具有特异性好、灵敏度高的特点,可用于对感染溶藻弧菌和灿烂弧菌的仿刺参及其养殖水体中的细菌性病原进行快速检测。     

高温期暴发性流行鱼病

一、病原暴发性流行病在不同鱼类,其致病病原体有一定的差异,主要是由嗜水气单胞菌、温和气单胞菌、弧菌、鲁克氏耶尔森氏菌等细菌感染引起。这类病原中许多是条件致病菌,池塘环境好,鱼体抵抗力强时,病原菌虽存在水体中但不会引起鱼病,池塘水质恶化、鱼体抵抗力差时,易引起鱼病     

半滑舌鳎腐皮病病原分离鉴定及对中草药的敏感性实验（英文）

对引起半滑舌鳎腐皮病的病原进行了形态学观察、生理生化鉴定,结果为哈维氏弧菌,动物回归试验显示该菌对半滑舌鳎有较强的致病作用。为了探索其致病机理,采用PCR方法进行了外膜蛋白(OMP)基因检测,结果发现,3株代表菌均携带OMP基因。通过中草药药敏试验的结果显示:五倍子、乌梅、沙棘、苏木四种单味中药对哈维氏弧菌有较强的抑菌作用;陈皮、石菖蒲、鱼腥草、马齿苋、穿心莲、桉树叶、薄荷等对病原哈维氏弧菌无作用;根据中药组方法则拟定了三个组方,其中由五倍子和乌梅组成的组方抑菌效果最强。     

舟山海域海泥细菌的分离及抗水产病原弧菌的筛选

采集中国东海舟山海域海底不同层次9个海泥样品,通过稀释培养分离纯化得到海洋细菌78株。采用滤纸片琼脂扩散法测定上述分离所得海洋细菌对鳗弧菌、溶藻弧菌、哈维氏弧菌、创伤弧菌、费氏弧菌等5种水产病害常见病原弧菌的抑制作用,获得具有抑弧菌作用的海洋细菌17株,占21.8%。其中6株菌株对费氏弧菌有明显的抑菌作用,占7.7%。7株菌株对哈维氏弧菌的抑菌作用较显著,占9.0%。2株菌株对创伤弧菌有明显的抑菌作用,占2.6%。2株菌株对溶藻弧菌和鳗弧菌显示一定的抑制作用,各占1.3%。研究结果表明：通过稀释培养法能分离到一定数量和种类的海洋细菌;来自海底泥的海洋细菌中存在较多的具有水产病原弧菌拮抗活性的菌株。     

嗜水气单胞菌和温和气单胞菌快速PCR方法检测

本研究根据GenBank数据库已发表的气单胞菌属16S rDNA序列,设计嗜水气单胞菌、温和气单胞菌16S rDNA序列的特异保守区,建立这2种菌的快速PCR检测方法。结果表明,仅嗜水气单胞菌和温和气单胞菌得到了特异性扩增,而几种常见弧菌科水产病原菌,包括豚鼠气单胞菌、易损气单胞菌、杀鲑气单胞菌、副溶血弧菌、创伤弧菌、溶藻弧菌和鳗弧菌并未得到特异性扩增,说明设计的引物可以用于这2种病原的PCR快速检测方法的建立,可以为水产动物嗜水气单胞菌、温和气单胞菌的快速检测、病害预警和病原调查提供技术支撑。     

红鳍东方鲀仔鱼期摄食与生长的研究

在水温 ( 1 6± 1 )℃条件下 ,红鳍东方 (Takifugurubripes)仔鱼孵出后 4d开始摄食 ,此时其卵黄囊体积由初孵时的 0 636mm3减少到 0 375mm3;1 2d时 ,卵黄完全耗尽。最高初次摄食率出现在卵黄耗尽时 ,可达 1 0 0 % ;仔鱼能维持 9d高达 90 %以上的初次摄食率。初次摄食强度最大值也出现在 1 2d。饥饿不可逆点 (PNR)出现在 1 5～ 1 6d。在内营养期日平均增长率为 0 2 1 7mm/d ;在PNR前的摄食期 ,饥饿仔鱼的日平均生长率为 0 0 1 7mm/d ;而摄食仔鱼的日平均生长率为 0 0 95mm/d ;PNR后至死亡前 ,饥饿仔鱼呈负增长 ,而摄食仔鱼的日平均生长率达 0 41 0mm/d。     

福建南部养殖石斑鱼暴发性疾病流行调查

近年来福建南部网箱养殖石斑鱼常暴发急性传染病,经试验确认的传染病病原有神经坏死病毒、微孢子虫、本尼登虫以及多种弧菌.由神经坏死病毒引起的病毒性神经坏死病表现典型的神经症状,中枢神经组织和视网膜细胞严重空泡坏死;微孢子虫病表现为腹部、生殖腺、肝脏、肌肉等组织寄生大量孢子囊;本尼登虫主要寄生于石斑鱼的体表;感染的细菌主要有溶藻弧菌、副溶血弧菌以及河流弧菌等10种,这些菌多为条件致病菌.调查结果表明,病毒性神经坏死病是该地区养殖石斑鱼最常见危害也最大的传染病.     

卵形鲳鲹吸收利用配合饲料中植物油的肠道微生物的筛选

为了探讨肠道微生物在水产动物脂类代谢中的作用,提高水产动物对配合饲料中植物油的利用能力,本研究收集摄食豆油或亚麻籽油配合饲料的卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)幼鱼的肠道内容物,通过在培养基中添加尼罗红染液及混合脂肪酸底物的方法,从中筛选出一株能吸收亚油酸、亚麻酸的溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus TO1);通过观察三丁酸甘油酯(tributyrin)固体培养基中的水解圈及在液体培养基中添加油脂和溴甲酚紫(bromocresol purple)指示剂方法,筛选到一株能高产脂肪酶、降解豆油和亚麻籽油的哈维氏弧菌(Vibrio harveyi TO1).这些结果表明,鱼类肠道微生物能够响应配合饲料中的脂肪源,当用植物油替代配合饲料中的鱼油时,肠道中吸收、降解、利用植物油的弧菌的丰度增加,进而参与鱼体内的脂类代谢.     

健康养殖话渔药(7)给药的方法

1.口服口服法用药量少,操作方便,不污染环境,对未患病的养殖动物不会产生应激反应等。此法常用于增加营养、病后恢复及体内病原生物感染,特别是细菌性肠炎病和寄生虫病等。但其治疗效果受养殖动物病情和摄食能力的影响,对病重和失去摄食能力的个体无效,对滤食性和摄食活性生物饵料的种类也有一定的难度。     

网箱养鳝(下)

5.日常管理(1)水质管理。夏季水温达到33℃,黄鳝摄食量下降,34℃时就会停止摄食,35℃以上开始死亡。当池水达到33℃时,要抽取低温清水注入池中,以调节池水温度。     

凡纳滨对虾急性肝胰腺坏死综合症病虾与健康虾肠道优势菌群比较分析

为研究急性肝胰腺坏死综合征(Acute hepatopancreatic necrosis syndrome,AHPNS)病原对凡纳滨对虾肠道菌群的影响,获取更多的AHPNS防治基础资料,采用PCR-RFLP方法比较了江苏地区患AHPNS病虾和健康对虾肠道微生物群落。结果发现,不同生长阶段病虾肠道中均只有弧菌属细菌;对照的健康对虾中,幼虾肠道优势菌为假单胞菌属、食酸菌属和固氮螺菌属细菌;养殖中期对虾肠道优势菌为发光杆菌属、弧菌属和希瓦氏菌属细菌;养殖后期对虾肠道优势菌为弧菌属、红杆菌属、莱茵海默氏菌属细菌。研究结果表明,凡纳滨对虾患AHPNS后肠道微生物群落明显不同于健康对虾,肠道菌群多样性遭到破坏,弧菌为肠道内绝对优势细菌,不同生长阶段健康对虾的肠道优势菌存在差异。本研究探究了AHPNS病原对于凡纳滨对虾肠道菌群的影响,并为认识和防控AHPNS提供试验基础。     

3种水产致病弧菌的生长速度对比研究

采用LB液体培养基,按照1∶500的比例对鳗弧菌(Vibrio anguillarum)、溶藻弧菌(V.alginolyticus)和河流弧菌(V.fluvialis)进行扩大培养,并测定不同时间段细菌培养液光密度D_(600nm)值和重量来间接反映其生长情况。结果显示,鳗弧菌在5.75h时为1.046,溶藻弧菌在4.5h时D_(600nm)为1.064,河流弧菌在3.75h时D_(600nm)为1.071。这表明河流弧菌生长速度最快,溶藻弧菌次之,鳗弧菌生长速度最慢。     

EMA-LAMP方法快速检测食源性副溶血性弧菌活细胞

将一种DNA染料叠氮溴化乙锭(EMA)与环介导等温扩增技术(LAMP)相结合,建立一种能快速检测食品中食源性副溶血性弧菌活细胞的新方法.结果表明,EMA-LAMP方法最低检测限为1×10 CFU/mL,PCR方法最低检测限为1×103 CFU/mL.与PCR方法相比较,EMA-LAMP检测方法具有快速、灵敏度高、操作简便等优点,并能检测鉴定副溶血性弧菌病原活细胞.     

养虾的投饵技巧与日常管理

1　投饵技巧根据对虾的摄食习性 ,在养殖过程中每天必须定时投饵 ,不应频繁变动投饵次数及时间。在水质恶化、虾体摄食量下降的情况下 ,应减少下次投饵量 ,而不应推迟投饵时间。高密度精养南美白对虾 ,投饵时要力求沿设定投饵区均匀撒布 ,切忌堆积 ;因为饵料成堆或分布过密会影