促卵泡素诱导羔山羊卵泡发育及活体采卵研究

对8只131￣150日龄山羊采用5 mg FSH诱导卵泡发育后,采用手术法间隔7 d进行采卵,第1￣4次诱导卵泡发育的可用卵泡数分别为(20.1±5.6)、(15.5±3.2)、(9.3±3.7)、(8.7±2.5)个,回收可用卵母细胞数分别为(11.1±3.2)、(8.3±1.8)、(6.6±3.7)、(6.0±1.7)枚,随采卵次数增加,每只羊的可用卵泡数呈下降趋势;不同采卵次间卵泡直径、回收卵母细胞的可用率无显著性差异。26次采卵抽吸卵泡376个(14.5个/只.次),回收COCS279枚(10.7枚/只.次),回收可用COCS 219枚,每只羊每次采卵获可用卵8.4枚,卵母细胞回收率和可用率分别为74.2%和78.5%;不同个体间回收率和可用率无显著性差异。     

布尔山羊在繁殖季节重复超排处理效果的研究

研究共进行了两个试验。试验Ⅰ ,成年布尔山羊在繁殖季节初期经超排处理 ,平均每只采得有效胚胎 17 0 7枚 ,两个月后再行重复超排处理 ,虽有 3只羊未能实现采卵 ,但其它羊只均获成功 ,其中B组 (FSH加量 )平均获有效胚胎 15 46枚 ,明显高于A组 (FSH未加量 ,平均每只 12 93枚 )。试验Ⅱ ,选择了 2 0 0 0年超排效果较好的布尔山羊 ,在 2 0 0 1年和2 0 0 2年秋季进行了第二次、第三次重复超排处理。结果表明 :在生殖器官未发生粘连的情况下 ,第二次平均获有效胚胎15 83枚 ,与第一次超排结果 (平均 15 5 0枚 )相近。第三次超排因两只羊生殖器官粘连未能采卵 ,其余 10只羊平均采得有效胚胎 13 40枚。     

影响山羊腹腔镜法活体采卵效果的研究

用屠宰厂采集的卵巢作为实验材料,比较了不同型号的采卵针对卵母细胞回收效果的影响,结果9号和12号针的回收率分别为66.78%和62.41%,显著高于7号针的52.63%(P<0.05);可用率分别为63.59%和68.82%,也显著高于7号针的55%(P<0.05)。在活体采卵实验中,比较了不同采卵间隔时间对活体采卵效果及供试羊卵巢损伤情况的影响,结果间隔1周组的每次每只卵泡数(12.08个)、每次每只获卵数(8.75枚),均显著低于间隔2周组(15.58个,11.97枚)和3周组(14.91个、11.42枚)(P<0.05)。间隔1周重复活体采卵对卵巢的损伤较大,卵巢表面有较多的血斑;间隔2周组和3周组卵巢基本能够恢复正常。同时还比较了离体卵巢与LOPU获得的卵子对体外受精效果的影响,二者在卵裂率(85.14%对83.33%)和桑椹胚率(52.38%对45.58%)方面差异不显著(P>0.05),但囊胚率差异显著(P<0.05),分别为30.16%和14.71%。     

水牛活体采卵体外生产胚胎技术

本研究应用B超引导阴道穿刺法,对40头尼里-拉菲和摩拉水牛连续3次采卵,采卵间隔为3 d.共采卵120头次.共穿刺卵泡935个,采集卵母细胞643枚,可用卵母细胞为456枚,卵母细胞回收率为68.77%(643/935),卵母细胞可用率为70.92%(456/643),头均可用卵母细胞为(3.80±0.23)个.第1、2、3次采卵头均回收可用卵母细胞数分别为(3.82±0.50)、(3.82±0.35)、(4.05±0.43)枚,差异不显著(P＞0.05).收集的卵母细胞经体外成熟、体外受精和受精卵与颗粒细胞单层体外共培养,受精后48 h分裂率为56.36%(257/456),囊胚率为20.39%(93/456).2个品种水牛的头均可采卵泡数、头均回收卵母细胞数和囊胚率均无显著差异.这表明,在B超引导下进行连续活体采卵,并利用卵母细胞进行体外受精生产胚胎是可行的. 3),头均可用卵母细胞为(3.80±0.23)个.第1、2、3次采卵头均回收可用卵母细胞数分别为(3.82±0.50)、(3.82±0.35)、(4.05±0.43)枚,差异不显著(P＞0.05).收集的卵母细胞经体外成熟、体外受精和受精卵与颗粒细 单层体外共培养,受精后48 h分裂率为56.36%(257/456),囊胚率为20.39%(93/456).2个品种水牛的头均可采卵泡数、头均回收卵母细胞数和囊胚率均无显著差异.这表明,在B超引导下进行连续活体采卵     

采卵间隔时间对山羊活体采卵效果的影响

目前从离体卵巢采集卵母细胞是体外受精研究所需卵母细胞的主要来源之一.一般是从屠宰场采集母畜的卵巢,抽取卵巢上的卵母细胞.但我国缺乏良种羊的卵巢资源,故所采卵母细胞种质一般较差,而且其系谱不明.而活体采卵技术(Ovum Pick-up OPU)正是解决当前我国体外受精研究中存在的卵母细胞资源缺乏、系谱不明等问题的有效手段.羊的活体采卵主要有三种方法:常规手术法、B型超声波法和腹腔镜法.腹腔镜法活体采卵(Laparoscopic Ovum Pick-up LOPU)操作相对简便,对羊的伤害较小,可重复采卵;而常规手术法对羊的伤害较大,较难重复采卵; B型超声波法活体采卵技术需要大量的练习才能掌握,可见卵泡数和获卵数较少.因此羊的活体采卵在国外应用最为广泛的方法当属LOPU.Snyder和Dukelow在1974年首先将腹腔镜用于绵羊的活体采卵,获得了6枚卵母细胞,然而当时并没有得到充分的发展,随着胚胎体外生产技术的发展,直到近些年在国外才逐渐得到应用.而在国内,这方面的研究甚少,因此本实验开展了山羊LOPU的探索研究.     

水牛活体采卵及体外受精研究

应用B型超声波采卵法进行水牛活体采卵,42头3～17岁良种水牛间隔3 d采卵1次,连续采卵2～3次,共进行96次,穿刺卵泡762个,回收卵母细胞513枚,其中可用卵母细胞305枚,回收率67.3%,可用卵占回收卵总数59.5%,平均每头次获卵母细胞5.34±4.25枚,其中可用卵母细胞3.18±2.89枚.采集的可用卵母细胞以MC和SOF 2种系统培养,受精分裂率和囊胚率分别为45.2%、30.6%和70.8%、18.8%.用8枚胚胎移植受体母牛8头,妊娠2头,产下了世界第1例由沼泽型水牛孕育生产的河流型水牛.     

采卵季节对水牛活体采卵及其体外受精效果的影响

为探讨采卵季节对水牛活体采卵及其体外受精效果的影响,本研究选自2006-2008年78批次的626头牛活体采卵收集3143枚卵母细胞数据和同一操作者的51批次共培养1366枚卵母细胞的体外受精生产胚胎数据,并根据水牛繁殖特点和发情规律,每年分为3个阶段,即春季(1～4月),夏季(5～7月)和秋冬季(8～12)3个季节进行统计分析。结果发现,水牛活体采卵和体外受精效果受季节影响较大。在秋冬季进行活采时,平均头次获卵母细胞总数和可用卵母细胞数分别为(5.88±2.84)枚和(3.56±1.51)枚,平均头次卵母细胞总数明显高于夏季的(3.72±1.58)枚(P<0.01),但与春季的(4.80±1.77)枚差异不显著(P>0.05),而头均可用卵母细胞数则高于春季的(2.77±1.19)枚(P<0.05)和夏季的(2.11±1.11)枚(P<0.01);季节之间卵母细胞可用率没有差异(P>0.05);虽然每个季节活体采卵体外受精卵分裂率没有差异(P>0,05),但在秋冬季采卵时,其囊胚率(27.09%)则明显高于春季(20.95%)和夏季(20.45%),P<0.05,而春季和夏季之间没有差异(P>0.05)。研究表明:一年四季都可以进行水牛活体采卵体外生产胚胎,但从采卵效果和胚胎生产效率上看,在秋冬季进行活体采卵效果最好。     

黄牛利用活体采卵的应用研究

应用活体采卵仪对两组黄牛进行活体采卵.对黄牛每周2次和每周1次进行活体采卵,平均获卵分别为5.30枚、4.75枚,两者比较差异不显著(P>0.05);回收率分别为64.92%和81.85%,每周1次采卵回收率显著高于每周2次(P<0.05);优质卵母细胞率分别为80.12%和65.79%(P<0.01).健康和非健康牛只采卵,平均获卵母细胞数分别为6.71枚、5.10枚(P<0.05);回收率分别为65.28%、62.20%,无明显差异(P>0.05);优质卵母细胞率分别为79.91%、73.37%,差异不显著(P>0.05).     

雪龙黑牛活体采卵与屠宰采卵在体外受精技术中的应用研究

利用超声波活体采卵技术(ovum pick-up,OPU)对12头纯种雪龙黑牛间隔4d采卵2次,对51头F2代遗传性能优秀的雪龙黑牛每周采卵1次,并对活体采卵与屠宰采卵及体外受精后胚胎的发育进行了对比分析.结果表明,活体采卵第2次卵泡数比第1次多82个,而获得的卵母细胞数第2次比第1次少1 2枚;屠宰采卵优秀卵母细胞率高于活体采卵,并且囊胚发育率高于活体采卵.     

淘汰牛连续活体采卵效果及影响因素分析

为挖掘利用具有优秀遗传性能的淘汰母牛的卵泡资源，本实验开展淘汰牛连续活体采卵的效果及影响因素研究。选取6头5～6岁无卵巢疾病的淘汰西门塔尔牛，分别于7、10、11月和12月每间隔4 d进行1次活体采卵，每月最高进行5次活体采卵，记录每头次的卵泡抽吸次数、获卵数、优质卵数，并对影响活体采卵效果的因素进行分析。结果表明：平均头次获卵数和优质卵数分别为4.61枚和2.22枚，卵子回收率和优质卵率分别为47.21%和49.13%；试验牛的平均头次获卵数无显著差异，但第1次活体采卵的卵子回收率高于第2～5次（P<0.05），第2次活体采卵的优质卵率显著高于第5次；采卵月份对平均头次获卵数、回收率和优质卵率无显著影响；采卵次数与采卵月份间无交互作用（P>0.05）。综上，淘汰牛连续活体采卵的效果相对稳定，连续采卵次数对卵子回收率、优质卵率具有一定影响。     

不同外源促性腺激素诱导成年山羊卵泡发育及活体采卵研究

为探讨不同的外源促性腺激素FSH和PMSG对诱导山羊卵泡发育和活体采卵的影响,选择25只2~4岁断奶3个月以上成年云岭黑山羊分两组进行试验。实验结果:用FSH处理后可用卵泡数明显高于PMSG组(P<0·05),但卵母细胞回收率显著低于PMSG组(P<0·05),两组间可用卵率无显著差异;PMSG处理后直径大于5mm卵泡的比例显著高于FSH处理组,结果表明活体采卵前用FSH诱导卵泡发育可以获得稳定的效果。     

山羊活体采卵及卵母细胞体外受精研究

选择健康空怀山羊母羊,随机分组,分别用PMSG1000u和FSH325~375u超数排卵处理,研究利用外源激素进行超排对山羊活体采卵效果的影响,比较活体采集与屠宰场采集的卵母细胞体外受精效果。结果表明,经超排处理后,卵巢明显增大,同时提高了采集卵母细胞的数量和质量。用FSH超排,≥2mm的卵泡数为23.00个±5.69个,采集卵母细胞数为12.67枚±4.06枚,极显著大于对照组(P<0.01)。活体采集的卵母细胞的体外成熟率及受精率分别为44.44%和33.33%,均略高于从屠宰场获取卵巢采集的可用卵泡卵母细胞,但差异不显著(P>0.05)。     

提高萨福克羊超数排卵的效果研究

对 5 4只 (次 )萨福克羊采用CIDR +FSH +PG法进行超数排卵 (以下简称超排 ) ,发情配种后第 6天从子宫角采胚 ,只均获胚数和只均获可用胚数分别为 (6 89± 2 6 2 )枚 (372 / 5 4 )和 (6 0 7± 2 2 8)枚 (32 8/ 5 4 )。并对不同国家产FSH ,注射LRH -A3 +P4,重复超排 ,左、右侧卵巢等影响萨福克羊超排效果的因素进行研究 ,结果表明 ,以加拿大和日本FSH超排效果最好 ,只均获可用胚分别为 (9 2 0± 1 6 4 )枚 (n =10 )和 (7 75± 1 6 7)枚 (n =16 ) ;注射LRH -A3 +P4组只均获可用胚(7 2 5± 1 18)枚 (n =16 ) ,极显著高于对照组 (4 11± 1 38)枚 (n =9) ;重复超排 (间隔 12月 )第 2次超排只均获可用胚(9 19± 3 39)枚 (n =16 ) ,明显高于第一次只均获可用胚 (6 0 0± 3 2 7)枚 (n =16 ) ;左右侧卵巢对萨福克羊超排效果无显著差异。     

影响水牛活体采卵效果的因素研究

为探讨不同采卵季节、供体牛年龄和连续采卵时间3个因素对水牛活体采卵效果的影响,本实验选择3～12岁、体重400～700 kg的尼里拉菲水牛52头（其中3～7岁40头、8～12岁12头）,根据单因子完全随机试验设计进行分组,分别观察不同采卵季节、供体牛年龄、连续采卵3个月以下（包含3个月）和3～9个月时间对活体采卵效果的影响。结果表明：冬季的头均卵母细胞数、头均可用卵母细胞数均高于春季（P<0.05）和夏季（P<0.01）,且夏季的头均卵母细胞数、头均可用卵母细胞数均低于其他季节（P<0.01）;3～7岁牛的头均可用卵母细胞数比8～12岁牛的多1.78枚（P<0.05）;活体连续采卵时间在3个月以下（包含3个月）的卵母细胞可用率比连续采卵3～9个月的多8.03(P<0.01)。可见,一年四季都可进行水牛活体采卵,但秋、冬季进行活体采卵较为适宜;3～7岁年龄段牛做供体的活体采卵效果更佳;卵母细胞可用率会随着连续采卵时间延长而明显下降,建议同一批牛连续采卵不超3个月。     

羔羊卵泡诱导发育、活体采卵和体外发育潜能研究

本研究旨在探讨聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinyl pyrrolidone,PVP)作为缓释剂在羔羊卵泡诱导发育中的应用效果,以及品种、年龄、激素剂量和超排次数对活体采集卵母细胞数量和体外发育能力的影响。选用4~12周龄无角道塞特、萨福克母羔120只,分为15%PVP一次肌注组、30%PVP一次肌注组和常规递减注射组,每组40只,注射剂量均为120 IU,对30%PVP一次肌注组按品种、周龄、激素剂量和重复次数分为3~4小组,分别进行卵泡诱导发育和活体采卵,并与屠宰厂采集的卵母细胞对比进行体外受精和胚胎移植。结果表明,采用30%PVP缓释FSH进行羔羊超排,可以起到与常规超排一致的效果,二者差异不显著(P>0.05),但采用15%PVP缓释FSH进行羔羊超排没有取得理想的效果,在各项指标上均显著低于30%PVP组和常规递减注射组(P<0.05);采用30%PVP缓释FSH分别超排道塞特和萨福克羔羊,只均获卵数和可用卵数差异不显著(P>0.05),4、6和8周龄羔羊只均获卵数和可用卵数显著高于12周龄羔羊组(P<0.05),40 IU组只均获卵数显著低于80、120和240 IU剂量组(P<0.05),240 I...     

奶牛活体采卵与屠宰场卵巢卵子体外生产胚胎的效果比较

先利用屠宰场卵巢获得的卵母细胞进行体外培养试验.在建立了培养体系获得较稳定的囊胚率的基础上,再利用具有优良乳用遗传性状的老龄奶牛进行活体采卵(OPU),获得的卵子进行体外胚胎生产,对奶牛活体采卵与屠宰场卵巢卵子体外生产胚胎的效果进行了比较.同时对奶牛重复OPU的效果及OPU卵子的培养天数对妊娠率的影响因素等进行探讨,试图为研究和生产建立一个高效的活体采卵体外胚胎生产方法.结果表明:(1)活体采卵获得的卵母细胞从形态以及后期的发育情况均明显差于屠宰场卵巢获得的卵子;OPU法的卵裂率、囊胚率(70.5%、18.3%)明显低于从屠宰场卵巢获得的卵子的卵裂率、囊胚率(75.1%、34.8%)(P＜0.01).(2)不同个体采集卵子数量差异明显(5.92枚/头与1.4枚/头)(P＜0.05).(3)同一头奶牛每次采卵数之间无显著差异,但有波动性变化.(4)奶牛OPU卵子经培养在第6 d或第7 d发育至囊胚的胚胎移植妊娠率高于第8 d发育至囊胚的胚胎.     

奶牛异地采胚与移植效果的研究

将16只饲养管理条件和超数排卵方法相同的供体奶牛随机分成试验1组、2组和对照组.各组供、受体牛的比例为1∶10.试验1、2组分别经过142km和207km,在采胚前5～9 h运输到采胚、移植地点,对照组在原饲养地采胚、移植.结果表明,试验1、2组供体牛平均每头采集胚胎数10.6枚和11.25枚,对照组12.6枚,差异显著(P＜0.05).平均有效采胚数38/5,34/4,41/5,差异不显著(P＞0.05).三地受孕率分别是15/33,17/35和18/37,差异不显著(P＞0.05),流产率为2/33,3/35,3/37,差异不显著(P＞0.05).     

萨福克×新疆细毛羊高杂母羊的超数排卵效果

2014年9月在玛纳斯县对萨福克×新疆细毛羊高杂母羊作为供体羊进行超数排卵,98只供体羊在超排配种后第6天进行子宫角冲胚,共冲出胚胎753枚,只均采可用胚胎7.68枚/只(753/98),另采出未受精卵476枚,只均未受精卵4.86枚/只(476/98),合计采卵1 229枚,只均采卵12.54枚/只(1 229/98)。     

非手术采集和移植骡胚的研究

选择已经配种的供体母马18匹,非手术冲洗子宫20次,其中排卵后4～5天的母马,冲洗5次,冲洗液平均回收率为94.80％,但未采到卵;排卵后5(1/2)～7(1/2)天的,冲洗15次,冲洗液平均回收率为85.66％,采到受精卵(骡胚)14个,采卵率为93.00％。结果表明,在排卵5(1/2)天之前,用非手术子宫采卵法未采到母马受精卵,而排卵5(1/2)天之后,非手术子宫采集马受精卵是有把握的。此外,另选没有配种而确切排卵的母马12匹,于排卵后5(1/2)～9天,回收马的未受精卵,虽冲洗液的平均回收率为89.30％,但也未采到未受精卵。显然,未受精的马卵没有进入子宫角,仍停留在输卵管中。经非手术采卵和二次重复采卵的母马都能按期发情,正常排卵。将14个骡胚中的7个以非手术法移植给7匹受体母马,结果一匹妊娠,妊娠率为14％。妊娠的受体母马生下一匹母骡驹,借腹怀胎350天。排卵同步差为-1(1/2)天。     

牛活体采集卵母细胞技术的研究

本研究利用自制采卵器对 2 4头健康牛和 2 0头有生殖障碍牛进行活体采集卵巢卵母细胞试验。卵母细胞回收率 4 2 .9% ,共采集卵母细胞 397枚 ,其中可用卵 2 6 6枚 ,占 6 6 .7% ,平均每头母牛获卵母细胞和可用卵母细胞数分别为 9.0 2枚和 6 .0 4枚。采集的卵母细胞经体外受精和体外培养 ,移植受体母牛 ,成功地分娩了我国第一头活体采卵牛犊