奶牛流产衣原体单克隆抗体研究——抗原的培养与提纯

将奶牛衣原体卵黄囊膜适应株ｃｙｐ１接种于７日龄鸡胚卵黄囊进行衣原体抗原培养，将培养的衣原体经差速离心，超速离心纯化，所得的纯化衣原体抗原经间接ＥＬＩＳＡ试验与标准阳性血清反应呈阳性结果。证明所用培养和提纯衣原体的方法是成功的。     

鸡衣原体病的调查研究：病原学与人工感染试验

本研究从患有纤维素性心包炎，气囊炎，肝周炎，腹膜炎和脾肿大的病死鸡中分离到３株衣原体（ＪＬＣ－３，ＪＬＣ－５和ＪＬＣ－６株）。该分离物接种７日龄鸡胚卵黄囊致鸡胚在９６－１２０小时内规律性死亡。剖检死亡鸡胚可见明显的病变，卵黄囊膜涂片镜检能观察到大量原生小体；交叉补体结合试验证明，该分离物能与标准衣原体补体结合试验抗原和阳性血清发生交叉反应，具有抗原相关性；对磺胺嘧啶钠具有抵抗力；磺染不着色；对鸡胚     

间接血凝试验检测衣原体抗体的研究

用标准株沙眼衣原体 T_(55)株和鹦鹉热衣原体 B_(11001)株感染的鸡胚卵黄膜乙醚浸提抗原致敏的公绵羊红细胞和两个标准株的高免血清分别与湖北分离的4株鹦鹅热衣原体的实验感染动物的抗血清和乙醚抗原致敏的绵羊红细胞进行间接血凝试验(IHA)双交叉反应,并与补体结合试验(CF)和间接补体结合试验(ICF)进行比较。结果表明,IHA 在检测衣原体抗体中能发生特异性的双交叉反应,而且重复性良好,比 CF 敏感8～16倍,比 ICF 敏感64～128倍。IHA 的效价高达1:4096～8192。用 IHA 和 CF 两法同时检测自然发病猪群的血清样品212份,阳性率分别为44.8%和44.3%,二者的符合率为98.9%。     

1株鹦鹉热衣原体的冻干、鉴定和分子分型研究

从国家兽医微生物菌(毒)种保藏中心领取1支鹦鹉热衣原体CVCC2410进行冻干和鉴定。将衣原体经卵黄囊接种SPF鸡胚进行复壮和传代，收获卵黄囊膜研磨后分装、冻干，并对冻干衣原体进行了无菌检验、真空度测定、染色特性和形态观察、特异性检验、16S rRNA鉴定、分子分型、衣原体含量测定。结果表明冻干衣原体CVCC2410 2203为C型鹦鹉热衣原体，含量为10^5.50ELD₅₀/0.2mL。本研究完善了该株衣原体的信息，为制定鹦鹉热衣原体的入库标准奠定基础。     

羊流产衣原体灭活疫苗大面积推广应用效果显著

数年前,中国农科院兰州兽医所的科技人员研制成功了羊流产衣原体卵黄囊甲醛灭活油佐剂疫苗。这些年来,他们又在提高抗原质量和产量、佐剂选择、乳化工艺等方面进行了较大的改进。经反复试验证明:绵羊流产衣原体所制的灭活苗和山羊流产衣原体所制的灭活苗     

羊流产衣原体矿物油佐剂灭活苗研究报告

材料与方法一、羊衣原体矿物油佐剂灭活苗的配制1.制苗用衣原体的繁殖培养:根据需要量孵育鸡胚,培养7—8日龄之后,卵黄囊接种B株衣原体,72小时之后死亡鸡胚解剖取卵黄囊和胚体(去头),涂片染色经显微镜检查衣原体颗粒呈现稠密时,保存于低温冰箱备用。     

羊流产衣原体灭活疫苗推广应用效果显著

近年来中国农科院兰州兽医所的科技人员对研制成功的羊流产衣原体卵黄囊甲醛灭活油佐剂疫苗,在提高抗原质量和产量、佐剂选择、乳化工艺等方面进行了较大的改进。经试验证明:用绵羊和山羊流产衣原体分别制成的灭活苗可以交互免疫,互相替代;在4℃下的有效保存期可达2     

山羊痘琼脂凝胶扩散(AGID)抗原的制备及初步应用

筛选所分离到的山羊痘云南省地方流行毒株KM株,应用牛睾丸原代及次代细胞进行病毒增殖、提纯及浓缩,制备山羊痘琼脂凝胶扩散试验(AGID)抗原。同时对该抗原进行抗原效价、判定标准、特异性、符合率及稳定性测定。测定结果显示该抗原效价为1∶4,且特异性及符合率高、稳定性好。并应用所制备抗原及参考阳性血清对采集自非疫点山羊血清186份,疫点390份,自然发病康复山羊血清46份,山羊痘免疫血清216份进行AGID初步应用。检测结果与流行病学相符合,证明我们所制备的山羊痘AGID抗原完全能够用于山羊痘抗体的检测及监测,且经济、简单、易操作,适于在基层单位推广应用。     

绵羊地方流行性流产调查诊断报告

1980年,青海省湖东羊场一群绵羊暴发性流产,采集4例胎儿,经细菌学检查,未培养出病原性细菌及霉形体。其中1号、2号胎儿的粘液和被覆的膜涂片见有原生小体,用经链霉素处理的肝组织乳剂,接种鸡胚卵黄囊,培养、传代分得一株衣原体。用分离物接种孕妊羊能引起流产,取1例流产胎儿的肝、肺接种鸡胚,还原出接种物。用分离物感染羊流产后的血清与相立抗原作补体结合反应为阳性,并与兰州兽医研究所的山羊衣原体抗原发生交叉反应。试验证明是羊地方流行性流产,病原是衣原体。     

B11001株鹦鹉热衣原体LD50和ID50测定

本试验将Ｂ１１００１株鹦鹉热衣原体作１０倍连续稀释至１０＾－１６，于卵黄囊内接种ＳＰＦ鸡胚＾「１－４」，观察６天，记录死亡情况。试验重复３次，所积累的数据，按Ｒｅｅｄ和Ｍｕｅｎｃｈ计算法计算，其ＬＤ５０为１０＾－１１．７２。同时取４８－１４４小时内死亡或仍然健活的鸡胚卵黄囊膜涂片，然后分别作姬姆萨和萤光抗体染色，在显微镜下检查衣原体和特异性萤光。     

荧光抗体技术检测病毒活疫苗中衣原体的污染

本试验将新城疫（ＮＤ）疫苗与Ｂ１１００１株鹦鹉热衣原体混合，用ＮＤ阳性血清中和，每个接种剂量最终含ＮＤ疫苗１０羽份，衣原体浓度分别为１０~（－９）、１０~（－２）、１０~（－３）、１０~（－４），分组接种ＳＰＦ鸡胚进行测定，检测了９株１０~（－４）稀释的衣原体。并以Ｂ１１００１株衣原体试验性污染５批ＮＤ疫苗作检测。试验中取卵黄囊膜涂片，用中科院动物所提供的衣原体萤光抗体试剂盒进行检测，并辅以姬姆萨染色法检查，结果表明用荧光抗体染色可以检查到疫苗中衣原体或包涵体的存在，与姬姆萨染色法基本一致。     

应用琼脂凝胶免疫扩散试验检测雏鸡卵黄和血清中的禽流感母源抗体

作者对来自3个养鸡场的父母代种鸡进行过禽流感H5型灭活苗紧急免疫接种的3批次共251只1日龄雏鸡应用琼脂凝胶免疫扩散试验（AGID）进行了血清与卵黄中禽流感母源抗体符合率的比较试验。试验结果表明：应用AGID检测1日龄雏鸡卵黄中禽流感母源抗体快速、简易、准确、敏感、检出率高，适用于口岸检疫、国内引种检疫及疫情监测等方面。     

云南省红河州猪衣原体性繁殖障碍的病原分离鉴定

从云南省红河州猪繁殖障碍较为严重的部分地区大批死亡的新生仔猪和流产胎儿的内脏中分离到2株衣原体.将分离株鸡胚卵黄囊膜悬液接种7日龄鸡胚能致使规律性死亡；该分离株对磺胺嘧啶(SD)具有抵抗力；碘染色阴性；补体结合试验阳性；对鸡胚致死毒价为10-8EID500.4 mL.用分离株接种豚鼠和小白鼠后,豚鼠在15d后出现流产,...     

禽脑脊髓炎琼扩抗原的研制和应用

将禽脑脊髓炎病毒（AEV）陕西分离株接种于6日龄鸡胚卵黄囊，16日龄时收取活胚脑、胃肠道和胰腺，匀浆灭活后制成琼扩抗原，该抗原与AE标准阳性血清在36h内出现特异性的沉淀线，而与ND、EDS－76、AI、IB阳性血清及SPF鸡血清不出现沉淀线，用其检测60份血清，48份呈AE阳性，与用标准抗原检测的结果一致。     

抗奶牛衣原体单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

将奶牛衣原体抗原免疫的 Ｂ Ａ Ｌ Ｂ／ｃ 小鼠脾细胞与 Ｓ Ｐ２／ Ｏ 细胞在聚乙二醇作用下融合, 用间接 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 试验筛选, 以有限稀释法克隆３ 次, 得到６ 株分泌抗奶牛衣原体单克隆抗体（ Ｍｃ Ａｂ） , 选择抗体分泌较高的 Ｇ２ 、 Ｆ２３ 、 Ａ 株进行详细的研究, 结果表明, 其核内染色体数为９０３５ 、９２１４ 、９４４２ ; 抗体属性为 Ｉｇ Ｇ２ａ 、 Ｉｇ Ｇ１ 、 Ｉｇ Ｍ, 用交叉 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 法对３ 株 Ｍｃ Ａｂ 作特异性分析, 该 Ｍｃ Ａｂ 只与奶牛衣原体抗原, 猪衣原体抗原、羊衣原体抗原发生反应,而不与沙眼衣原体抗原、伪狂犬病抗原、布鲁氏杆菌抗原发生反应。     

沙眼衣原体鼠肺炎株外膜蛋白抗原特性的研究

用提纯的鼠肺炎株免疫Balb/C小鼠,建立了一株能分泌种特异单克隆抗体和一株能分泌型特异单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用电泳技术和兔疫印迹试验证实,所建立的种特异单克隆抗体可与各种沙眼衣原体血清型的外膜主蛋白(MOMP)抗原相反应,说明沙眼衣原体的种特异抗原决定簇位于各型MOMP上;而与型特异单克隆抗体有反应关系的型特异抗原决定簇只分布于鼠肺炎株的MOMP上。并用放射免疫法探讨了种特异单克隆抗体与鹦鹉热衣原体脑膜肺炎株外膜主蛋白抗原间的相互关系。     

用含多糖抗原的琼脂凝胶免疫扩散试验检测牛对布氏杆菌的体液免疫

牛感染布病往往难以诊断,这是因为感染牛型布氏杆菌(Brucella abortus)牛的血清学反应受多种因素影响。本试验采用了含可溶性多糖组分(Poly—B抗原)的琼脂凝胶免疫扩散试验(AGID)进行检测。Poly—B抗原的特点是在免疫电泳和AGID中有显著的扩散性且碳水化合物含量高。用感染布氏杆菌或接种疫苗的牛、感染布氏杆菌     

云南省红河州猪衣原体性流产的病原分离鉴定

从母猪流产胎儿病料中分离到３株衣原体，将分离株鸡胚卵黄囊膜悬液接种７日龄鸡胚能致鸡胚规律性死亡；碘染色阴性；补体结合试验阳性；对鸡胚致死死毒价为１０^-9ＥＬＤ５０／０．４mL;该毒株能使小白鼠在３d内全部死亡。结果表明，该分离株为鹦鹉热衣原体；采用该场分离毒株,采用该场分离毒株制备的灭活苗免疫注射，母猪流产率由免疫前的３７．２１％下降到４．４２％，降低了３２．７９个百分点。     

猪伪狂犬病病毒和鹦鹉热衣原体分离与鉴定

本文报道重庆某集约化种猪场爆发流产、死产胎儿中伪狂犬病毒（RB9901）和鹦鹉热衣原体（CR99株）分离鉴定结果,伪狂犬病病毒RB9901株能引起MDBK细胞典型细胞病变,被伪狂犬病病毒Fa株标准阳性血清中和,能引起家兔奇痒及死亡。鹦鹉热衣原体CR99株在鸡胚卵黄囊中生长良好,对青霉素敏感,对磺胺嘧啶不敏感,能引起妊娠豚鼠注产。     

应用阻断酶联免疫吸附试验检测牛白血病病毒抗体

多年来,都用琼脂凝胶免疫扩散(AGID)试验检测牛白血病病毒(BLV)抗体。而此疫病的普查和根除需要检测大量的样品,酶联免疫吸附试验就可满足这一要求,间接法是先将提纯的抗原包被到固相载体,再加试验血清和特异性IgG结合物,阻断法是利用试验血清中的抗体干扰或阻断标准抗原-抗体