乌拉尔甘草组培再生体系的研究

甘草是兼具生态和经济双重价值的重要植物资源,人工培育以野生变家种为主,尚未开展系统的育种工作。本研究以内蒙古杭锦旗的野生乌拉尔甘草为材料,研究了外植体、基本培养基、NAA、TDZ和蔗糖对丛生芽诱导的影响以及微繁体系的建立。结果表明,适合甘草丛生芽诱导的外植体为生长4~7 d的无菌苗子叶节,培养基为MS TDZ 0.1 mg/L NAA 0.1 mg/L 蔗糖20~30 g/L;将带1叶的茎段在改良MS NAA 0.1 mg/L 6-BA1.0~2.0 mg/L的培养基中培养,其增殖倍数可稳定达到25倍;在1/2MS 核黄素2.0 mg/L中生根,炼苗3 d移栽到蛭石中,成活率达96%以上。1个带腋芽茎段培养3个月可获得13 906棵生根试管苗,成活13 350株,繁殖效率高达85%。     

硒化乌拉尔甘草多糖和乌拉尔甘草多糖对单核细胞增生李斯特菌抗菌活性的研究

为了比较硒化乌拉尔甘草多糖(selenizing Glycyrrhiza uralensis polysaccharide, SeGUP)和乌拉尔甘草多糖(Glycymhiza uralensis polyacchiade, GUP)对单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogene,Lm)体内、体外抗菌活性,试验采用药敏纸片方法分别测定Lm对480 mg/mL、240 mg/mL、120 mg/mL GUP和SeGUP的敏感程度;采用微量肉汤稀释法测定SeGUP和GUP对Lm的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC);设置SeGUP和GUP高剂量(240 mg/mL)组、中剂量(120 mg/mL)组、低剂量(60 mg/mL)组,各组分别与Lm混合培养24 h,每2 h取样测定OD₆₀₀值,观察SeGUP、GUP对Lm生长速率的影响;检测各组4小时时的培养上清液中的碱性磷酸酶(AKP)、β-半乳糖苷酶活性及蛋白质总含量;用结晶紫染色法检测SeGUP和GUP各剂量组对Lm生物被膜形成能力的影响;分别按体重灌胃小鼠SeGUP、GUP 300 ...     

软枣猕猴桃‘奇异莓6号’离体再生技术

以软枣猕猴桃无芽茎段为外植体进行离体培养,具有成本低、取材方便、材料充足等优点,但以往的研究表明无芽茎段诱导再生率低。本试验以‘奇异莓6号’软枣猕猴桃无芽茎段为外植体,探究不同植物生长调节剂、光照强度、温度、苗龄对不定芽诱导的影响。结果表明：最佳外植体为苗龄30d的无芽茎段,在光照12h/d(光照强度50LX)、室温20℃下,不定芽诱导的最适培养基为MS+2mg/L ZT,不定芽以间接途径发生,培养40d无芽茎段两端开始形成淡绿色愈伤组织,培养45d愈伤组织表面出现红色小点,开始形成不定芽,培养55d愈伤组织诱导率、愈伤组织分化率及不定芽数均到最大,分别为100%、100%及18.87个/块。待苗长至3cm左右时转到MS+0.4mg/L ^IBA中进行生根培养,培养30d生根率可达100%、根数为8.53/株、根长1.68cm、根粗0.14cm。     

无籽沙糖桔高效离体再生体系的建立

本研究以无籽沙糖桔异交种子(无籽沙糖桔×有籽沙糖桔) 的实生苗上胚轴为材料,研究了不同种类的激素及组合对无籽沙糖桔离体再生的影响,建立了高效的无籽沙糖桔离体再生体系。结果表明：ZT和TDZ不利于无籽沙糖桔不定芽的诱导;在一定浓度范围内,随着6-BA浓度的增加,不定芽诱导率和平均每个外植体不定芽数显著增加。当以MT为基本培养基、6-BA浓度为0.25 mg/L时,不定芽诱导率和平均每个外植体不定芽数最高,分别为88.5%和2.7个/外植体;当不同浓度的6-BA与不同浓度的IBA组合时,以6-BA 0.25 mg/L + IBA0.25 mg/L为最佳激素组合,不定芽诱导率达95.2%,平均每个外植体萌芽数为3.6个;再生的不定芽在附加IBA 1.0 mg/L的MT 培养基中生根并再生植株。     

桑树遗传转化的受体细胞及其再生

以近15年来国内外桑树遗传转化研究为主线,结合植物基因工程的研究动态,从分子生物学和细胞组织学方面阐述了桑树受体细胞与根癌农杆菌的相互作用和TDNA在感染细胞中的转移过程。用植物形态发生的基本原理分析了叶盘转化细胞再生的主要方式,并对植物细胞的感受态、农杆菌完成贴壁反应的先决条件、TDNA的穿壁通道进行了阐述。     

毛花猕猴桃茎段离体培养技术研究

通过对毛花猕猴桃茎段进行离体培养试验,得出了毛花猕猴桃茎段的最佳离体培养方案：选用当年生的茎段切割成块后接入培养基MS ZT3.0mg/L上,诱导出愈伤组织,进而愈伤组织分化出芽,切割这些芽继续转入该培养基配方扩大培养,然后将增殖的大量芽转入培养基1/2MS IBA1.2mg/L上诱导生根,待产生良好的根系即可出瓶移栽,得到毛花猕猴桃苗木。     

转基因玉米的遗传转化方法研究

主要介绍目前应用玉米遗传转化的各种方法 ,已取得的成果和其进展情况。     

转基因玉米的遗传转化方法研究

主要介绍目前应用玉米遗传转化的各种方法,已取得的成果和其进展情况。     

疏叶骆驼刺茎段离体快繁技术的研究

以疏叶骆驼刺Alhagi sparsifolia无菌苗茎段为外植体,探讨了不同浓度6 苄氨基嘌呤（6 BA）和萘乙酸（NAA）、水解糖蛋白（LH）、赤霉素（GA3）在疏叶骆驼刺茎段离体快繁中的作用以及NAA在生根时的作用。结果表明：1）当NAA浓度为0.1 mg/L时,降低6 BA浓度,有利于芽的生长,反之,有利于丛生芽分化;2）LH 能促进苗的生长,增加芽分化能力,MS+ 0.5 mg/L 6 BA +0.1 mg/L NAA+1.5 g/L LH为疏叶骆驼刺茎段快繁最佳培养基,增殖倍数为6.8;3）GA3对骆驼刺茎段离体培养无显著促进作用;4）1/2 MS+0.1 mg /L NAA为最佳生根培养基,生根率为71.7%。     

农杆菌介导的桑树遗传转化条件的研究

本实验探讨了多种因子对桑树遗传转化的影响,结果表明:菌株LBA4404 比C58Cl转化效率高;不同外植体转化效率有差异,以叶盘、茎尖和愈伤组织为受体转化频率分别为8.7% 、5.6% 和2.8% ;农杆菌菌液浓度、感染时间、共培养时间等对桑树叶盘转化效率有一定影响;AgNO3 对遗传转化具有明显的促进作用。     

水分和肥料对甘草产量及品质的影响

通过土壤水分、肥料对人工栽培甘草的产量和品质影响的研究。结果表明,当土壤水分在5%~18%,甘草的产量与土壤水分正相关,但产量提高的同时商品甘草的品质下降;不同肥料处理对甘草产量有很大影响,施肥处理与对照相比产量均有提高,使用专用肥料效果最佳。     

民勤绿洲甘草人工栽培及产业化发展技术探讨

通过对民勤绿洲甘草Glycyrrhiza uralensis人工栽培的关键技术及其民勤绿洲甘草产业的发展现状和潜力的分析,提出了民勤绿洲甘草产业化发展的技术措施和对策.民勤绿洲要实现甘草产业化的快速发展需从栽培技术、产品深加工、产品质量监测、营销和技术服务等方面入手.     

甘草试管苗炼苗过程中气孔行为、叶片蒸腾及光合能力的研究

对甘草试管苗炼苗过程中气孔行为、叶片蒸腾及光合能力的变化规律及特点进行了研究,并分析了试管苗炼苗过程中出现的叶片蒸腾及气孔导度的波动现象。甘草试管苗的炼苗过程设计为4个阶段:试管苗、蛭石苗、营养袋苗和土壤苗,在高光强及低湿度的自然条件下测定,气孔导度(gs)、叶片蒸腾速率(E)及胞间CO2浓度(CO2.int)随着炼苗的进展逐渐下降,净光合速率(Pn)逐渐增加,可见通过炼苗提高了叶片保水能力及光合能力。将各炼苗阶段的甘草幼苗在各自炼苗阶段的具体条件下连续测定,发现在炼苗开始的前几天,蛭石苗和营养袋苗叶片的蒸腾速率及气孔导度具有显著的波动,而胞间CO2浓度和净光合速率则比较稳定。这种蒸腾速率及气孔导度的波动可能与炼苗过程中湿度下降所引起的水分平衡的破坏密切相关,并具有防止水分过度散失的作用。     

灌水对沙漠绿洲区甘草生长动态和产量的影响

为研究灌水对沙漠绿洲区甘草（Glycyrrhiza uralensis）生长动态和产量的效应,本研究设2 700（W1）、3 600(W2)、4 500(W3)、5 400(W4)、6 300(W5)和7 200(W6) m3/hm2 6个灌水处理。结果表明,灌水明显促进甘草茎叶、根的生长。处理W4、W5和W6株高显著高于W1、W2和W3（P<0.05）,主茎生长速度W6处理较W1快60％,较W2快33％;W3、W4、W5和W6处理地上部干质量显著高于W1（P<0.05）,干物质积累速度W3处理较W1快11％;根长、芦径、根干质量随灌水量增加而增加,灌水量超过5 400 m3/hm2则表现下降趋势,处理W3和W4根干质量最高,在根快速生长期W3和W4处理的一年龄和二年龄根干质量增加速度分别较W1快50％和35％。灌水4 500和5 400 m3/hm2,一年龄甘草和二年龄甘草根产量均达到较高水平,但前者灌水效率较后者高,可节水900 m3/hm2。     

N+注入对甘草种子萌发和根发育效应及作用机制

甘草种子注入25 keV,剂量≤4.68×1016 个/cm2 N 对种子萌发的成活率和根发育表现为刺激效应,更高剂量的N 注入表现出"损伤-修复-损伤"的效应趋势,表明离子注入的能量沉积和动量传递效应产生的自由基伤害与质量沉积和电荷的中和效应对自由基的清除是一个动态反应过程.25 keV,4.68×1016 个/cm2 N 注入能提高甘草种子萌发成活率,促进根发育,提高幼苗的耐旱特性,可用于沙漠植被甘草种子的前处理.     

松嫩平原草甸生境甘草种群生殖构件表型可塑性及变化规律

采用大样本取样,对松嫩平原羊草草甸甘草种群生殖构件进行了表型可塑性分析。结果表明,在籽实完熟期,甘草种群单个生殖分株的生物量为23.99±12.99 g;豆荚生物量和豆荚数分别为13.55±10.03 g和67.10±48.83个;种子生物量和种子数分别为3.55±2.61 g和265.00±194.50粒;生殖分配Ⅰ和生殖分配Ⅱ分别为51.19%±13.21%和13.44%±3.65%。各生殖构件表型观测数据最大值比最小值高2.1~21.1倍。豆荚和种子形成均需要分株积累6.2 g以上的生物量。豆荚生物量、豆荚数、种子生物量、种子数分别与分株总生物量呈极显著(P<0.01)的线性正相关关系;豆荚数、种子数、生殖分配Ⅰ、生殖分配Ⅱ分别与叶生物量分配和豆秸生物量分配呈极显著(P<0.01)的幂函数负相关关系。甘草种群生殖分株同时具有同速和异速2种不同增减过程的表型可塑性调节。     

Lyz-GFP双元基因在苜蓿愈伤组织中的转化

利用农杆菌介导法将溶菌酶(Lyz)与绿色荧光蛋白(GFP)基因转入"甘农1号"杂花苜蓿(Medicago sativa Martyn)和"甘农3号"紫花苜蓿(Medicagosativa L.)品种中,获得含有该双元基因的苜蓿转基因愈伤组织;采用荧光检测和PCR扩增技术,检测到溶菌酶Lyz和绿色荧光蛋白GFP基因在苜蓿愈伤细胞中的表达;研究该双元基因在苜蓿品种"甘农1号"和"甘农3号"中转化的若干影响因素,确定适宜的转化条件以期提高基因转化效率。结果表明:75 mg·L^-1的卡那霉素对苜蓿愈伤组织的生长具有显著抑制效应;300mg·L^-1头孢霉素能够有效地抑制农杆菌LBA4404的生长;OD₆₀₀值为0.4-0.5的农杆菌适宜的侵染时间是10min;经预培养3-4d的材料侵染后再共培养3d之后,在愈伤组织诱导培养基MS₊2,4-D 2.0mg·L^-1+KT0.5 mg·L^-1+0.6%琼脂+2.5%蔗糖的培养基上诱导出抗性愈伤组织;"甘农1号"和"甘农3号"的抗性愈伤组织诱导率分别为35%和32%。     

农杆菌介导的Lyz-GFP基因对匍匐翦股颖Peen A-1 转化和表达的研究

 以匍匐翦股颖ＰｅｎｎＡ-１成熟胚为供试材料,建立了其植株高效再生体系。利用农杆菌介导法将溶菌酶与绿色荧光蛋白Ｌｙｚ-ＧＦＰ双元基因转入匍匐翦股颖ＰｅｎｎＡ-１ 胚性愈伤组织中,经培养获得抗病转基因植株。并对Ｌｙｚ-ＧＦＰ双元基因转化ＰｅｎｎＡ-１的适宜条件进行了研究。研究结果表明,在２．０ｍｇ／Ｌ２,４ Ｄ＋０．１ ｍｇ／Ｌ６-ＢＡ的ＭＳ培养基上ＰｅｎｎＡ-１愈伤组织诱导率最高,可达３６％,且质量最好。愈伤组织在ＭＳＯ＋０．５ｍｇ／ＬＮＡＡ 上分化率最高,达４２．５％;浓度为３００ｍｇ／Ｌ 的头孢霉素（Ｃｅｆ）可抑制农杆菌ＬＢＡ４４０４的生长;ＰｅｎｎＡ-１胚性愈伤组织经携有ｐＢＩ１２１-Ｌｙｚ-ＧＦＰ的农杆菌ＬＢＡ４４０４ （ＯＤ６００值０．３～０．５）侵染１０～１５ｍｉｎ,共培养３ｄ后,转化愈伤组织生长状况良好,转化率达１２．５％,且在后期的生长和转化苗的再生中有良好的表现,转化苗再生率为２７．５％;转化植株有较强的荧光表达量,并经ＰＣＲ 检测,获得的２株匍匐翦股颖ＰｅｎｎＡ-１转化植株中均扩增出７５０ｂｐ的目标基因片断。     

改良背主动脉注射法对鸡胚发育与转基因表达效率的影响

背主动脉注射是生产转基因鸡的经典方法,该方法不需换壳培养,但壳内注射技术难度大,并且无法实时观察后期胚胎发育情况.本实验对背主动脉注射法进行了改进,将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)腺相关病毒(Adeno-associated Virus,AAV)壳外注射至150枚HH 14～16期(Hamburger-Hamilton...     

Effects of oocyte-derived growth factors on the growth of porcine oocytes and oocyte–cumulus cell complexes in vitro

During oocyte growth and follicle development, oocytes closely communicate with cumulus cells. We examined the effects of oocyte-derived growth factors, growth differentiation factor 9 (GDF9) and bone morphogenetic protein 15 (BMP15), on the growth and acquisition of meiotic competence of porcine oocytes collected from early antral follicles (1.2–1.5 mm). First, we confirmed that GDF9 and BMP15 mRNAs were expressed almost exclusively in the oocytes. Oocyte–cumulus cell complexes (OCCs) collected from early antral follicles were cultured in growth medium supplemented with 0–100 ng/ml of GDF9 or BMP15 for 5 days. GDF9 dose-dependently increased the OCC diameter, while BMP15 did not. GDF9 and BMP15 had no significant effects on oocyte growth (P > 0.05). When OCCs that had been cultured with 50 and 100 ng/ml BMP15 were subjected to a subsequent maturation culture, they expanded fully by gonadotropic stimulation and 49% and 61% of oocytes matured to metaphase II (MII), respectively. In contrast, GDF9 did not promote cumulus expansion, and < 10% of oocytes matured to MII. Based on the difference in cumulus expansion, we compared the expression of luteinizing hormone/choriogonadotropin receptor (LHCGR) and follicle stimulating hormone receptor (FSHR) mRNAs in cumulus cells. The level of LHCGR mRNA was increased in cumulus cells of the BMP15 group, although there were no significant differences in FSHR mRNA levels among the groups. These results suggest that GDF9 promotes the growth of OCCs and that BMP15 promotes LHCGR mRNA expression in cumulus cells during oocyte growth culture, which may contribute to cumulus expansion and oocyte maturation.