反相液相色谱在多肽及蛋白质分离分析中的应用

反相液相色谱由于具有分辨率高、重复性好、回收率高等优点,在多肽及蛋白质研究领域中得到了广泛的应用。简要介绍了反相液相色谱及其分离机理,以及在多肽和蛋白质研究中分离纯化、肽图分析等方面的应用。     

反相高效液相色谱法在测定白肋烟烟叶游离氨基酸含量中的应用

应用反相高效液相色谱技术建立了白肋烟烟叶游离氨基酸的测定方法.试验前处理首先采用超声波萃取,而后用邻苯二甲醛/3-巯基丙酸作为衍生剂进行柱前衍生,衍生化后进行液相色谱分析.结果表明,该方法的回收率为95.3%~100.7%,RSD为2.32%~9.24%(n=6).利用该方法对湖北恩施中二级的白肋烟烟叶中的游离氨基酸进行了测定,有17种氨基酸被测出,其中天氡氨酸的含量最高,约占总量的65%,胱氨酸含量最低,约占总量的0.2%.     

反相高效液相色谱法测定植物组织中的水杨酸

以五角枫叶片为实验材料,经预处理后用反相高效液相色谱测定了植物组织中水杨酸的含量.该方法摸索出了使水杨酸与其他酸性（或杂质）组分很好分离的液相色谱条件,建立了植物组织中水杨酸的定性定量方法.用该方法测定水杨酸标样的回收率高于95%,精密度和重现性均较好（相对标准偏差为0.42%）.用该方法对实际植物样品的分析也取得了较理想的结果.      

反相高效液相色谱对银杏外种皮中银杏酚酸的分析

对RP-HPLC分离银杏酚酸的各影响因素进行研究,分析了流动相组成、pH值和温度对银杏酚酸各组分色谱保留行为的影响,得到优化分析条件为色谱柱:SUPELCOSILTMLC-18,5 cm×4.6 mm,5 μm;流动相:90％甲醇,乙酸pH值为3.15;紫外检测波长λ=310 nm;流速0.7 ml/min;AUFS=0.02;柱温30℃。在确定的分离条件下,银杏酚酸各组分能很好的分离。     

反相高效液相色谱法测定新疆不同品种葡萄干中的有机酸

[目的]测定新疆产不同品种葡萄干中有机酸的含量。[方法]采用Symmetry ShieldTMRP18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以磷酸盐缓冲溶液(pH 3.0)为流动相,流速1.0 ml/min,柱温30℃,紫外检测波长210 nm,建立了葡萄干中酒石酸、苹果酸等4种有机酸的高效液相色谱定量分析方法,测定了新疆8种不同品种葡萄干中的酒石酸、苹果酸、柠檬酸和丁二酸的含量。[结果]该方法相对标准偏差(RSD)0.57%～1.78%,回收率97.6%～101.2%,各种酸的线性相关系数r>0.999 7。[结论]所建立的方法快速、灵敏度高、重复性好,可用于葡萄干中有机酸的测定。     

反相高效液相色谱法检测水、土壤中的除草醚

介绍了应用反相高效液相色谱检测水、土壤中除草醚的方法。该方法对除草醚在水和土壤中的回收率分别为９９．０％和９２．５％,最小检出浓度分别为１．１×１０－２ｍｇ／Ｌ和０．１１ｍｇ／ｋｇ。     

东北林蛙皮肤活性肽的反相高效液相色谱纯化体系建立

为建立东北林蛙皮肤抗菌肽反相高效液相纯化体系,将东北林蛙(Rana dybowskii)皮肤分泌物冻干粉用0.1%TFA水溶液溶解,并对分析样品进行全波长扫描,确定检测波长,通过SunfireTM C18(5 μm,4.6 mm×150 mm)色谱分析柱对分离条件进行了优化.结果表明:分泌物在216 nm和280 nm处均有明显的吸收峰;乙腈能使样品较早被洗脱,而甲醇则能延迟样品的洗脱;流速与样品保留时间、分离度成反相关.经试验证实,最佳液相色谱检测条件为:检测波长216 nm和280 nm;流动相为V(乙腈)∶V(甲醇)∶V(水/TFA)=9∶1∶90;流速0.5 mL/min;进样量20 μL.     

反相高效液相色谱检测苯异硫腈柱前衍生的小麦叶片中的游离氨基酸

 本文采用反相高效液相色谱法,检测了用苯异硫腈柱前衍生的氨基酸;对小麦在水分胁迫条件下的12种有关氨基酸进行了实际分析的应用.方法上不采用通常的浓度梯度洗脱,而采用流速梯度洗脱;除组氨酸与酪氨酸合为一峰不能分离外,其余均能良好分离,且重复性好,保留时间最大偏差仅为0.152分,峰百分面积最大偏差仅为0.60%.检测结果能反映出小麦叶片氨基酸代谢的变化情况与抗旱性之间有一定联系.     

牛奶中克林霉素残留量的反相高效液相色谱测定方法

目的:研究建立牛奶中克林霉素残留量的反相高效液相色谱测定方法。方法:样品用水相提取,离心分离,经C18固相萃取柱净化,在205nm波长下用二极管矩阵检测器检测。色谱柱为Agilent ZORBOX SBC18柱(4.6mm×250mm,5μm),以0.025mol/L磷酸二氢铵溶液∶甲醇(55∶45,V/V)为流动相,流速1.0mL/m in。结果:克林霉素浓度在1.0~10.0μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系,平均回收率为80.3%~93.9%,变异系数为1.23%~3.47%,最低检测限为0.5μg/mL。结论:本方法简便、快速、准确。     

反相HPLC法同时测定青梅中的7种有机酸

建立了用反相高效液相色谱法同时快速测定青梅中草酸、酒石酸、苹果酸、乳酸、乙酸、柠檬酸及琥珀酸等7种有机酸的方法。采用的色谱柱为Hypersil ODS Cl8(250 mm×4.6 mm i.d.,5μm),流动相为0.01mol.L-1KH2PO4(pH 2.8),流速为0.8 mL.min-1,柱温21℃,检测波长215 nm。有机酸的回收率为75.4%~121.0%;相对标准偏差为0.78%~2.12%;检出限为0.022~1.290μg.mL-1。测定了4种不同青梅样品中有机酸的含量。     

用高效液相色谱法测定长蛇鯔肌蛋白氨基酸

采用高效液相色谱法测定了长蛇鯔Saurida elongata新鲜肌肉中18种蛋白氨基酸的含量,结果表明,氨基酸总量为191.94 mg/g,其中必需氨基酸(72.58 mg/g)和鲜味氨基酸含量(91.59 mg/g)皆较高,分别占氨基酸总量的37.81%和47.72%.该方法分离效果较好,重现性好,除半胱氨酸和组氨酸的相对标准偏差(RSD)为8.1%和8.8%外,其余氨基酸的RSD均在3.0%～6.5%之间;仅组氨酸的回收率较低,为72.0%,其余氨基酸的回收率皆为83%～111%,平均回收率为93.2%.该方法测定结果准确,其线性范围为10～1000 μmol/L,检测极限为5 μmol/L.     

18个龙眼品种果肉中氨基酸含量的HPLC测定

采用高效液相色谱(HPLC)对18个龙眼品种的鲜果肉进行了氨基酸含量的测定。结果表明:不同龙眼品种间在多种氨基酸含量上存在显著差异,其中谷氨酸含量变化较大,在1.7348～15.4081mg/g湿重之间。18个龙眼品种中均分离出16种水解氨基酸,7种必需氨基酸,龙眼肉中含量较高的氨基酸分别是谷氨酸、天门冬氨酸、丙氨酸。     

HPLC法快速测水产品中游离芳香族氨基酸含量的研究

建立了水产品中3种游离芳香族氨基酸含量的HPLC测定方法。试验确定了流动相的最佳pH、流速及浓度,并评价了方法的准确度、精密度和检测限。采用5%高氯酸溶液提取,用KOH溶液中和后进行HPLC分析。采用Waters Atlantis T3 C18（4.6×250 mm,5 μm）色谱柱分离,以15%甲醇-85%磷酸盐溶液为流动相,用磷酸调pH为6.0;色谱条件流速：0.9 mL/min;柱温：27 ℃;检测波长：256.7 nm;12 min内完成测定。结果表明：Tyr、Phe、Trp分别在6～500 μg/mL、30～1 000 μg/mL和3～250 μg/mL范围内有良好的线性关系,其线性相关系数（R²）在0.998 6～0.999 5之间。三者的检测限分别为2 μg/mL、10 μg/mL、1 μg/mL,加标回收率在88.0%～105.2%之间。方法操作简便且定性可靠、定量准确。     

高效液相色谱法分析霉菌干酪中游离氨基酸含量

近年来,国内外对干酪的研究工作在不断深入开展。霉菌干酪在干酪研究中具有非常重要地位。霉菌干酪在成熟过程中产生一定量氨基酸,它对干酪的风味产生重要影响。因此,对霉菌干酪中的游离氨基酸的组成和含量进行监测,以获得霉菌干酪过程中氨基酸变化模式具有非常重要的意义,目前国内尚未有对霉菌干酪中游离氨基酸进行检测的报道。目前柱前衍生反相高效液相色谱测定氨基酸技术取得很大进展[1-2]。邻苯二甲醛(OPA)衍生步骤简单、反应速度快,剩余试剂不干扰测定,因此在柱前衍生试剂中以OPA的应用最为广泛。本文采用HP1100系列高效液相色…     

高效液相色谱法分析霉菌干酪中游离氨基酸含量

近年来,国内外对干酪的研究工作在不断深入开展。霉菌干酪在干酪研究中具有非常重要地位。霉菌干酪在成熟过程中产生一定量氨基酸,它对干酪的风味产生重要影响。因此,对霉菌干酪中的游离氨基酸的组成和含量进行监测,以获得霉菌干酪过程中氨基酸变化模式具有非常重要的意义,目前国内尚未有对霉菌干酪中游离氨基酸进行检测的报道。目前柱前衍生反相高效液相色谱测定氨基酸技术取得很大进展[1-2]。邻苯二甲醛(OPA)衍生步骤简单、反应速度快,剩余试剂不干扰测定,因此在柱前衍生试剂中以OPA的应用最为广泛。本文采用HP1100系列高效液相色…     

液相色谱-串联质谱直接测定茶叶中多种游离氨基酸

建立高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)直接测定茶叶中多种游离氨基酸的方法。茶叶样品用沸水浸提45 min,过滤定容后利用反相液相色谱柱(Shim-pack VP-ODS,150 L×2.0 mm,5μm,日本岛津公司)进行梯度洗脱分离,而后采用串联三重四级杆线性离子阱质谱仪(4000QTRAP,美国ABSciex公司)于电喷雾源(ESI)正离子模式下选用多反应监测离子对扫描模式(MRM)进行定量。各氨基酸在0.625～10μmol·L-1线性范围内,相关系数r均大于0.99,回收率为85%～110%。该方法分析速度快、准确度高、选择性好,适用于茶叶品质分析中游离氨基酸的快速测定。     

绿茶毛尖中有机酸的高效液相色谱分析

建立了测定绿茶毛尖中有机酸的高效液相色谱方法。应用反相C18色谱柱,0.05 mol/L KH2PO4(pH=2.7)为流动相,流速为0.6 mL/min,检测波长为210 nm,柱温为30℃,使绿茶中7种有机酸得到很好地分离。各有机酸在线性范围内呈良好的线性关系,回收率在95.6%~102.5%之间。该方法操作简单、快速、准确度高,适用于绿茶中有机酸含量的测定。     

高效液相色谱法测定秸秆浸提液或腐解液中12种酚酸

建立了同时测定秸秆浸提液或腐解液中12种酚酸物质(没食子酸、原儿茶酸、龙胆酸、对羟基苯甲酸、绿原酸、香草酸、咖啡酸、丁香酸、对香豆酸、阿魏酸、芥子酸、水杨酸)的反相高效液相色谱测定方法。采用Waters HLB(500 mg、60μm、6 m L)固相萃取小柱对水溶液中的酚酸物质进行浓缩,以含0.5%乙酸的乙腈和0.5%乙酸的水溶液为流动相进行梯度洗脱,选用二极管阵列检测器,30 min内可对12种酚酸物质同时检测,各种酚酸均可达到基线分离。加标回收试验表明,样品中12种酚酸类化合物的加标回收率为79.41%~101.92%,12种酚酸保留时间和峰面积的RSD分别在0.02%~0.1%和0.25%~2.26%之间。该方法快速、灵敏、准确,适用于同时测定秸秆浸提液、腐解液、土壤溶液及水溶液中12种酚酸物质含量。     

高效液相色谱法测定辣椒素

研究了用高效液相色谱法测定辣椒中的辣椒素。色谱柱为HypersilBDSC18(5 μm ,2 5 0mm× 4 6mm)。UV检测器波长为 2 80nm。流动相为V (CH3 OH)∶V (H2 O) =85∶15 ,流速为 0 6mL min。结果表明 :线性回归方程是Y =11 2X +7 97,相关系数为r =0 9999,样品的精密度RSD =2 6 % ,平均回收率是95 71。