草莓果实总RNA提取方法的比较

为建立草莓果实总RNA的提取方法,针对草莓成熟果实中富含多糖、多酚和色素等次级代谢物质,总RNA提取难度大的特点,比较改良的EASYspin 植物RNA提取试剂盒法和改良的CTAB法提取草莓果实中总RNA的质量。通过琼脂糖凝胶电泳和核酸蛋白测定仪(NanoDrop 2000)检测2 种方法提取总RNA的浓度、纯度及完整性等。改良的EASYspin 植物RNA提取试剂盒法和改良的CTAB法都能够完成草莓果实总RNA 的提取,电泳检测在28S 和18S 处呈2 条清晰的条带,OD260/OD280值和OD260/OD230值均在2.0 左右;改良的EASYspin 植物RNA提取试剂盒法成本较高,且提取总RNA质量劣于改良的CTAB法,但是EASYspin植物RNA提取试剂盒法操作简便,安全可靠,节省时间。通过RT-PCR验证,2种方法所获得的草莓果实总RNA质量较好,可达到分子生物学试验对RNA质量的要求。     

板栗子叶总RNA提取方法研究?

为了获得板栗子叶总RNA提取的理想方法,为后续的分子生物学研究打下基础,以板栗幼果子叶为材料,采用改良CTAB法、硼砂-CTAB法、酚-SDS法、皂土法和2种植物总RNA提取试剂盒共6种方法提取板栗子叶总RNA。结果表明,除硼砂-CTAB法外,其他5种方法均能获得板栗子叶总RNA。但是,与酚-SDS法、皂土法和2种植物总RNA提取试剂盒相比较,改良CTAB法提取的板栗子叶总RNA完整性好,纯度高,且无DNA污染,能够满足cDNA-AFLP等分子生物学研究的要求。     

百合鳞片总RNA提取方法的比较

为了筛选出适合百合鳞片的总RNA的提取方法,本研究以东方百合品种Siberia的鳞片为材料,比较了Trizol法、改良Trizol法、RNA提取试剂盒以及改良CTAB法提取RNA的效果。结果表明:Trizol法、改良Trizol法及RNA plant plus Reagent提取试剂盒均不能提取到完整的RNA;离心柱型植物总RNA提取试剂盒存在DNA污染;改良CTAB法能有效去除多糖,28S条带的荧光亮度是18S条带的1.5～2倍,D260/D280值都在1.9～2.1之间,D260/D230值大于2,两个样品的平均得率分别为103.57μg/g和119.21μg/g,说明此方法适合百合鳞片RNA的提取。RT-PCR结果扩增出了特异性条带,说明改良CTAB法从百合鳞片中提取的RNA质量高、完整性好、产率高,完全可以用于后续的分子生物学实验。     

改良CTAB法提取不同作物总RNA技术研究

为提高操作效率,本研究开发出一种简洁有效的作物总RNA提取方法。研究以油菜、棉花、花生、小麦、马铃薯、玉米、大豆、西葫芦等作物的不同组织为试材,通过CTAB法、改良CTAB法及TanSzol Reagent试剂盒法提取总RNA,检测结果发现,经过改良后的CTAB法提取的总RNA质量较高。在油菜花瓣、小麦、花生、西葫芦叶片中,该方法获得了较高的总RNA得率,分别为24.5、23.7、26.4、17.35μg/mL;OD₂₆₀/₂₈₀和OD₂₆₀/₂₃₀值分别为1.90、1.73、1.72、1.80和2.10、1.50、2.01、1.70。综合比较以上3种方法,改良后的CTAB法适用于油菜、小麦、花生、西葫芦等作物的总RNA提取,为后续分子生物学检测奠定了基础。     

适用于转录组测序的毛葡萄叶片总RNA提取方法筛选

毛葡萄叶片中含有大量多糖、多酚等多种次生代谢物,严重影响RNA提取质量,筛选从毛葡萄叶片中提取高质量RNA的方法是开展相关分子研究的基础。本研究采用改良CTAB法、改良SDS/酚法和三种试剂盒法,筛选适合转录组测序的提取毛葡萄叶片总RNA的方法。结果显示,五种方法均可以获得毛葡萄叶片总RNA,但在纯度和完整性上差别较大。改良CTAB和改良SDS/酚法提取的总RNA OD_(260)/OD_(230)比值小于1.8,试剂盒A法提取的总RNA在纯度和完整性上均可以满足转录组测序要求,试剂盒B法和试剂盒C法提取的总RNA降解严重。相比其他四种方法,试剂盒A法提取的毛葡萄叶总RNA质量更好,在纯度和完整性上均能满足转录组测序及其他分子生物学实验的要求。     

烟草不同组织总RNA的提取方法初探

【研究目的】寻找烟草各个组织总RNA最佳的提取方法。【方法】以烟草K326的根、茎、叶、蕾、花和种子为材料,分别采用试剂盒法、Trizol法和CTAB法提取烟草6个组织总RNA进行对比。【结果】烟草不同组织总RNA提取方法有所不同,试剂盒法和Trizol法只能提取出根、茎、叶、蕾和花的总RNA,而不能提取种子总RNA;CTAB法能提取出6个组织的RNA。3种方法提取的RNA质量好,均能满足RT-PCR以及后续实验的要求。【结论】试剂盒法较Trizol法和CTAB法简单、快捷,适合于烟草除种子以外其余组织总RNA快速提取,CTAB法适合烟草所有组织总RNA提取。     

适宜苹果组培苗总RNA提取方法的研究

利用CTAB_异硫氰酸胍法、改良CTAB法和RNAplant试剂盒法,从富含多糖和酚类物质的苹果组培苗继代苗中提取总RNA。结果表明CTAB_异硫氰酸胍法对苹果组培苗总RNA的提取有较好的效果,所得RNA的A260/A230大于2.0,A260/A280为1.8~2.0,产率在16.95μg/g左右。改良CTAB法和RNAplant试剂盒法提取的RNA均有少量DNA污染,但RNAplant试剂盒法比CTAB法更快捷,简便。     

玛咖贮藏根总RNA提取方法的比较

为了筛选出适合玛咖贮藏根总RNA的提取方法,本研究比较了改良异硫氰酸胍法、CTAB法、Trizol法和E.Z.N.A.TM Plant mi RNA Kit试剂盒法等4种方法对玛咖根总RNA提取的效果。结果表明:改良异硫氰酸胍法提取效果不理想,CTAB法存在DNA污染;Trizol法和E.Z.N.A.TM Plant mi RNA Kit试剂盒法能有效去除多糖,提取出质量高、完整性好的RNA,OD260/OD280值大部分都在1.8~2.0之间,但Trizol法提取RNA的平均得率(156.3μg/g)是E.Z.N.A.TMPlant mi RNA Kit试剂盒法提取RNA的平均得率(48.6μg/g)的3.2倍,说明Trizol法可作为玛咖根总RNA提取的首选方法。     

茶梅花瓣总RNA提取方法的比较和分析

本研究分别利用CTAB多级沉淀法、改良的异硫氰酸胍法、改良的热硼酸法、Trizol法和EASY spin植物RNA提取试剂盒法等五种方法提取茶梅花瓣总RNA,并进行了对比分析,发现EASY spin植物RNA提取试剂盒法是最为简单、快速、高效的方法,CTAB多级沉淀法次之。本研究为今后有效开展茶梅分子生物学研究提供技术便利,并为其它花卉植物RNA的提取提供必要的参考。     

魔芋叶片中4种总RNA提取方法的比较

本研究分别利用TRIzol法、异硫氰酸胍法、改良的CTAB法及试剂盒这4种方法提取魔芋叶片的总RNA,并用紫外光谱和琼脂糖凝胶电泳对各个提取效果进行鉴定。反复试验的结果表明:TRIzol法难以提取魔芋叶片总RNA,异硫氰酸胍法提取的总RNA浓度低、杂质较多且有部分降解,这两种方法不适宜用于魔芋叶片总RNA提取;试剂盒方法提取的总RNA产率和纯度较高,但稳定性差、成功率低且成本较高;改良的CTAB法利用PVP和β-巯基乙醇去除酚类物质,水饱和酚-氯仿去除蛋白质,醋酸钾去除多糖,该方法提取得到的总RNA的纯度较高,OD260/OD280值为1.893,而且效果稳定,有良好的可重复性。因此,我们认为改良的CTAB法是一种简便、快速且经济的提取魔芋叶片总RNA的方法。     

可口革囊星虫体壁总RNA提取的有效方法

为了从可口革囊星虫体壁中提取高质量的RNA,以便深入开展分子生物学研究。采用改良Trizol法、Trizol法和十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法3种方法提取可口革囊星虫体壁中总RNA,并通过琼脂糖凝胶电泳比较不同方法提取总RNA的效果。结果表明：改良Trizol法提取的总RNA经电泳后能看到清晰完整的28S rRNA、18S rRNA和5S rRNA条带,无拖尾现象;而Trizol法和CTAB法提取的总RNA电泳条带完整性较差,缺少28S rRNA。传统的Trizol法和CTAB法不适用于可口革囊星虫体壁总RNA的提取;改良Trizol法提取的总RNA电泳条带清晰、完整性好,质量符合cDNA合成、RT-PCR扩增等后续实验要求,适用于提取可口革囊星虫体壁总RNA。     

银杏叶片RNA提取方法的研究

为了获得一种银杏（Ginkgo biloba L.）叶片总RNA提取的理想方法,为后续的分子生物学研究打下基础,笔者以不同生长期的叶片为材料,利用生物分光光度计和凝胶电泳法比较了改良CTAB法、乙二醇丁醚法以及改良Trizol法提取的银杏总RNA的产率和纯度。结果表明：改良Trizol法所提取RNA的OD260/OD280比值介于1.8~2.0之间,并且OD260/OD230在1.9~2.1之间,具有较高的纯度。凝胶电泳结果表明,改良Trizol法有28S rRNA和18S rRNA 2条清晰的条带,且很少有降解;CTAB法获得的RNA品质也较好,但存在降解和弥散现象,乙二醇丁醚法提取效果较差。这表明改良Trizol法提取的总RNA具有很高的纯度,可以满足进一步分子生物学研究的要求。     

三种百合种球病毒RT-PCR检测

本研究以4个百合品种为试材进行种球病毒分子生物学检测。研究结果表明,通过设计兼容性好、性状稳定的三对特异性引物,提高了PCR扩增的效率,改良了RNA的提取方法;改进Trizol法使其适合于内层鳞片及脱毒苗叶片总RNA的提取,而中外层鳞片则采用改进的CTAB法,得到高纯度、高质量以及完整度好的RNA;各反应成分的扩增条件得到了优化,建立了灵敏、快速、低成本的种球病毒RT-PCR检测反应体系及程序。     

杏叶片与果实总RNA提取方法研究

以杏叶片及幼果为材料,分别从操作耗时、RNA质量和产量等方面比较了CTAB法、改进CTAB法、SDS法、改进SDS-酚法和RNA提取试剂盒Trizol等5种不同的RNA提取方法。结果表明：5种方法均能从幼嫩叶片中提取到总RNA;经电泳检测,28SrRNA和18SrRNA两条主带清晰,A260/A280大于1.8。在叶片RNA提取过程中,改良的CTAB法及Trizol法能获得高质量的RNA,产量也分别达到395.21和839.25μg/g。其中改良SDS以及改良CTAB能更有效减少果实RNA的提取中酚类物质和多糖等杂质的影响,获得质量高的总RNA。每种方法提取的叶片和果实的RNA经反转录后形成cDNA,并进行RT-PCR扩增,成功扩出看家基因泛素蛋白UBQ片段,说明了RNA能够很好地应用于文库构建、基因克隆等研究。     

血红鸡爪槭叶片总RNA提取方法的比较研究

血红鸡爪槭叶片中富含多糖、多酚物质,严重影响了RNA提取纯度和质量。为了获得适宜血红鸡爪槭叶片总RNA提取的方法,采用柱式植物RNAout法、TRIZOL法和改良CTAB法3种提取方法对其叶片总RNA提取效果进行比较分析。结果显示,采用柱子法提取获得的总RNA产率最高,但是有DNA污染;TRIZOL法提取的总RNA OD260∕OD280为1.65,可能有多糖和酚类物质的污染,并且产率最低;改良CTAB法提取的总RNA纯度很高,OD260/OD280平均值在2.0左右,产率在上述两种方法之间,电泳图清晰,而且改良CTAB法提取的总RNA,经RT-PCR获得了清晰的特异性条带。表明改良CTAB法提取的总RNA纯度和产率高,完全可以满足进一步分子生物学研究的需要,是血红鸡爪槭叶片总RNA提取的适宜方法。     

几种植物材料中总RNA的提取

用改良前后的异硫氰酸胍一步法、Trizol法和CTAB-异硫氰酸胍法,从多糖和色素较少的豌豆、水稻、构树和华南蕨绿叶,色素较多的红绒球、蟛蜞菊和红背桂花叶,以及富含多糖的香蕉果肉等几种植物材料中提取RNA。发现一步法对豌豆、水稻和蟛蜞菊叶片总RNA的提取均有很好的效果。Trizol法也有好的效果,但如果提取缓冲液的pH达6．0,提取的RNA便有DNA的污染,且该污染随pH增加而增加。对于富含多糖的香蕉果肉,一步法和CTAB异硫氰酸胍法的效果均不理想;改良后的一步法中增加了乙醚去除多糖并获得了较好的效果。本文还提出了判断RNA的质量的标准。