狼山鸡消化道乳酸菌的分离·鉴定以及生物学特性研究

[目的]分离和鉴定狼山鸡消化道乳酸菌,为开发新型禽用微生态制剂提供依据。[方法]利用厌氧菌分离技术,从狼山鸡肠道中分离乳酸菌,通过形态、生理生化特性、16S rRNA基因序列测定以及同源性分析对其进行鉴定,并对菌株进行耐酸性、抗菌活性等筛选。[结果]分离到5株乳酸菌LCr-01、LCr-02、LCe-01、LCe-02、LCe-03,经过生理生化试验、16S rRNA基因序列测定以及同源性分析,初步鉴定植物乳杆菌、卷曲乳杆菌、德氏乳杆菌以及嗜酸乳杆菌。其中,LCr-02具有较强的耐酸性和抗菌活性。[结论]筛选到的5株菌乳杆菌中LCr-02具有较强的耐酸性与抗菌活性。     

PCR-DGGE技术分析蛋鸡MHC基因对肠道细菌种群结构的影响

 【目的】研究蛋鸡MHC（Major Histocompatibility Complex,主要组织相容性复合物）基因对不同周龄和不同部位肠道细菌种群结构的影响。【方法】使用基于16S rDNA的PCR-DGGE技术,结合特异性和共性条带割胶回收DNA进行克隆和测序,对2,4,6和8周龄商品蛋鸡和15I5系蛋鸡嗉囊、十二指肠、空肠、回肠和盲肠内含物细菌群落的结构和多样性进行比较,鉴定8周龄蛋鸡部分特异性和共性群落成员。【结果】商品蛋鸡和15I5系蛋鸡盲肠细菌的多样性最高,其次是回肠和空肠,嗉囊和十二指肠的细菌多样性比较低,且随着蛋鸡周龄增加,各肠段细菌多样性呈上升趋势,MHC基因对细菌多样性无显著影响。DGGE图谱聚类分析表明,蛋鸡MHC基因对4、6周龄肠道细菌的影响最大,对2周龄影响最小;而且MHC基因对消化道前段细菌的影响小于对后段影响。序列分析发现,8周龄商品蛋鸡和15I5系蛋鸡均有大量的三得利乳杆菌（Lactobacillus suntoryeus）,是蛋鸡消化道前段的优势细菌;商品蛋鸡空肠、回肠和盲肠中的特异性条带主要是Ochrobactrum spp,索氏梭菌（Clostridium sordellii）,超巨巨单胞菌（Megamonas hypermegale）和大量不可培养的细菌;15I5系蛋鸡的特异性条带主要是不可培养的细菌。【结论】蛋鸡MHC基因可影响不同周龄、不同肠段细菌群落的结构。     

鸡肠黏膜乳酸菌的抗菌能力及其对抗菌素的药敏特性

从肉鸡空肠黏膜上分离到6株菌,均为革兰氏阳性菌,其中3株乳杆菌（R2、R4、R6）,3株肠球菌（R1、R3、R5）。生理生化鉴定表明,R2为嗜酸乳杆菌;R4为德氏乳杆菌乳亚种;R6为德氏乳杆菌德氏亚种;R1、R3和R5为粪肠球菌。产乳酸能力分析表明,培养至12h时R2产乳酸速度最快,到24h时R4产生乳酸浓度最高,为69．59mmol/L。在抑菌试验中,R2、R4对鸡大肠杆菌O1、鸡伤寒沙门氏菌O3和金黄色葡萄球菌的抑制作用显著高于其它菌株（P〈0．05）;药敏试验结果表明,R2和R4对治疗性抗菌素青霉素、四环素、卡那霉素、链霉素、万古霉素有较强的耐受性;对添加剂用抗菌素二硝托胺、硫酸多粘菌素、氨苯胂酸、杆菌肽锌的耐受性较强。     

日粮补给罗伊乳酸杆菌和枯草芽孢杆菌对断奶仔猪消化道主要微生物的影响

断奶会显著改变仔猪肠道菌群结构,保持仔猪在断奶过程中肠道微生物结构的稳定性和健康,是缓解仔猪断奶应激的一个有效方法。本研究通过日粮中补给罗伊乳酸杆菌和枯草芽孢杆菌,探讨罗伊乳酸杆菌和枯草芽孢杆菌对仔猪胃肠道主要细菌的影响。结果表明,与对照相比,日粮补给枯草芽孢杆菌降低胃和十二指肠中乳酸杆菌含量,提高空肠、回肠和结肠中乳酸杆菌含量,显著降低大肠杆菌在各肠段的含量。日粮补给罗伊乳酸杆菌或者金霉素,显著提高各肠段乳酸杆菌含量,降低各肠段大肠杆菌含量。这些结果为微生物制剂在仔猪断奶上的应用提供肠道微生物方面的依据。     

德氏乳杆菌对鸡肠道菌群的影响

[目的]探索德氏乳杆菌对鸡肠道菌群的影响。[方法]从肉鸡肠黏膜上分离培养制备试验菌株。在45只肉鸡雏苗中投喂添加由单一德氏乳杆菌制备的微生态制剂和土霉素,在55d的投喂期内,采用平板计数法检测好氧性异养菌、鸡伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和德氏乳杆菌的数量。[结果]从肉鸡肠黏膜上分离培养得到6株菌,均为G+菌,生理生化鉴定表明,S2为嗜酸乳杆菌,S4为德氏乳杆菌乳亚种,S6为德氏乳杆菌德氏亚种,S1、S3和S5为粪肠球菌。在投喂冻干菌粉30d后德氏乳杆菌数量达到稳定并在肠道内定植。同时,由于德氏乳杆菌的抑制作用,肠道中的鸡伤寒沙门氏菌数量下降最明显。德氏乳杆菌对鸡肠道的好氧性异养菌没有任何影响。[结论]德氏乳杆菌对鸡肠道菌群的影响与抗生素具有相近的效果,表明德氏乳杆菌作为饲料添加剂可以取代抗生素应用在肉鸡的养殖中。     

健康仔猪肠道内乳酸菌的分离与鉴定

[目的]从健康仔猪肠道内分离并鉴定乳酸菌。[方法]结合细菌形态学、生理生化试验以及16S rRNA序列分析等鉴定方法。[结果]共分离到10株疑似乳酸菌,有9株菌株属于乳杆菌目,其中C1、C2、C6属于链球菌属;C3、F2、F3为约氏乳杆菌;C4、F4为屎肠球菌;C5为嗜酸乳杆菌;[结论]该研究可为仔猪微生态制剂的制备提供菌株基础。     

罗伊氏乳杆菌I5007对新生仔猪肠道形态、二糖酶活性和紧密连接蛋白表达的影响

【目的】罗伊氏乳酸杆菌是普遍存在于人和动物肠道的有益乳酸杆菌,研究表明,口服罗伊氏乳酸杆菌能显著降低腹泻的发病率和严重程度。研究罗伊氏乳酸杆菌I5007（Lactobacillus reuteri I5007）对新生仔猪肠绒毛发育和肠黏膜屏障功能的影响。【方法】试验选取9窝1日龄的杜×长×大初生仔猪,每窝挑选8头体重相近、出生状况良好的仔猪,按体重分为3组,每组3窝仔猪。即：对照组（灌服0.1%无菌蛋白胨溶液）,前4日龄灌服组（1-4 d,每日每头灌服活菌总数为1.2×10¹⁰ CFU 的L. reuteri I5007）和隔4日龄灌服组（1、5、9、13、17和21 d灌服,灌服剂量同前4日龄灌服组）。试验期21 d,试验期间仔猪由各自母猪哺乳饲喂。于试验第7、14和21 天,每个处理组随机选取4头仔猪,空腹称重、麻醉和屠宰,截取相同位置的十二指肠、空肠和回肠,测定其肠绒毛形态,并测定试验结束时（21 d）空肠和回肠二糖酶活性和紧密连接（TJ）蛋白的表达。【结果】灌服L. reuteri I5007对仔猪生长性能没有显著影响（P＞0.05）,但对不同阶段仔猪的肠道形态有不同程度的影响。7 d时,隔4日龄灌服组与对照组相比,仔猪十二指肠绒毛高度、绒毛高度/隐窝深度、杯状细胞数和回肠杯状细胞数均显著增加（P＜0.05）,前4日龄灌服组仔猪的十二指肠绒毛高度/隐窝深度、杯状细胞数和回肠杯状细胞数也均显著高于对照组仔猪（P＜0.05）,但对十二指肠绒毛高度无显著影响（P＞0.05）;14 d时,隔4日龄灌服组仔猪十二指肠的绒毛高度/隐窝深度和回肠杯状细胞数均显著高于对照组（P＜0.05）,前4日龄灌服组仔猪的回肠杯状细胞数也显著高于对照组（P＜0.05）,但却低于隔4日龄灌服组（P＜0.05）;21 d时,隔4日龄灌服组显著提高了仔猪十二指肠和回肠的杯状细胞数（P＜0.05）,前4日龄灌服组与对照组相比,仅提高了回肠杯状细胞数（P＜0.05）,反而降低了十二指肠绒毛高度/隐窝深度（P＜0.05）。另外,前4日龄灌服组仔猪空肠隐窝深度显著低于隔4日龄灌服组仔猪（P＜0.05）,但其十二指肠杯状细胞数和绒毛高度/隐窝深度均显著低于隔4日龄灌服组仔猪（P＜0.05）。在二糖酶活性上,隔4日龄灌服组仔猪空肠蔗糖酶和麦芽糖酶活性均显著高于对照组（P＜0.05）,前4日龄灌服组仅提高了仔猪空肠麦芽糖酶活性（P＜0.05）,且该组空肠蔗糖酶活性和麦芽糖酶活性均显著低于隔4日龄灌服组（P＜0.05）。隔4日龄灌服组对仔猪空肠和回肠的3种TJ蛋白（Claudin-1、Occludin和ZO-1）均有显著的促表达作用（P＜0.05）,前4日龄灌服组仔猪空肠Claudin-1、ZO-1和回肠Claudin-1的表达也均高于对照组（P＜0.05）,但是其空肠Occludin显著低于隔4日龄灌服组（P＜0.05）,且其回肠Claudin-1（P = 0.1）和ZO-1（P = 0.1）相比于隔4日龄灌服组也有降低的趋势。【结论】本试验条件下,新生仔猪隔4日龄灌服L. reuteri I5007（1.2×10¹⁰ CFU/头/日）,能有效促进仔猪肠绒毛发育,提高空肠二糖酶活性,促进仔猪肠上皮细胞TJ蛋白的表达,在改善新生仔猪的肠黏膜屏障功能中可能起到一定的作用。     

仔猪源罗伊氏乳酸杆菌生物学特性的研究

 研究了罗伊氏乳酸杆菌的生物学特性包括生长曲线、耐热存活率、耐酸存活率、贮藏存活率以及发酵参数。采用均匀设计的试验设计对影响乳酸杆菌发酵较大的6个因素如碳源、氮源和时间进行优化。试验结果表明,罗伊氏乳酸杆菌的浓度在开始时有所下降,经过2 h之后从1.0×10³数量级迅速上升,到第22 h接近1.0×10¹⁰数量级,到40 h细菌的数量级开始缓慢下降。75 ℃处理15 min之后存活率为31.3%,经过1个月贮藏存活率为85.5%,pH 2.0处理6 h的存活率为72%. 优化的发酵参数为:时间20 h;葡萄糖10 g/L;蔗糖60 g/L;胰蛋白胨30 g/L;酵母浸粉5 g/L;柠檬酸铵12 g/L. 试验表明了罗伊氏乳酸杆菌具有良好的抗逆性,生长繁殖迅速,可以用作益生菌生产菌种。     

益生菌增加IPEC-J2细胞表面半乳糖在抑制RV感染中的作用

轮状病毒通过识别细胞表面糖链附着于肠上皮细胞,一些肠道内常驻菌群可以修改细胞表面糖链。以3种益生菌上清孵育猪小肠上皮细胞IPEC-J2,猪轮状病毒(PRV)感染细胞。采用凝集素荧光技术测定各处理组IPEC-J2细胞表面半乳糖,检测对应轮状病毒滴度和RV含量变化。结果表明,对照组PRV TCID_(50)·0.1 mL~(-1)为10~(-7.15±0.14),干酪乳杆菌组TCID_(50)·0.1mL~(-1)为10~(-3.875±0.125),食淀粉乳杆菌PRV TCID_(50)·0.1 mL~(-1)为10~(-4.125±0.138),枯草芽孢杆菌PRV TCID_(50)·0.1 mL~(-1)为10~(-4.16±0.144)。3组益生菌上清组在RV感染48 h内,RV量显著低于未处理组。凝集素荧光标记表明,3株益生菌上清均可改变细胞表面半乳糖含量。干酪乳杆菌、食淀粉乳杆菌和枯草芽孢杆菌上清可增加IPEC-J2细胞表面半乳糖含量,提高细胞抗RV感染能力,阻断RV黏附,保护肠道上皮细胞。     

双齿围沙蚕消化道共栖微生物菌群多样性的PCR-DGGE分析

将采自青岛市沿海潮间带的双齿围沙蚕Perinereis aibuhitensis(体质量为4～5 g)置于无菌海水中暂养24 h后,分别从5条双齿围沙蚕消化道中提取微生物基因组总DNA,应用细菌16S rDNA通用引物341f/534r进行细菌16S rDNA基因V3高变异区的PCR扩增,再将PCR产物进行变性梯度凝胶电泳(DGGE),从而获得样品消化道共栖微生物群落特征的DNA指纹图谱。通过对指纹图谱半定量分析发现,采集的双齿围沙蚕消化道共栖微生物菌群多样性丰富,优势条带明显,不同个体间既存在共同的微生物种属,也有各自特异的种属。其中存在一条共同的优势条带,但优势条带含量存在个体间差异。分别对DGGE指纹图谱中公共条带序列进行测序比对,结果表明,产丙酸菌属Propionigenium分别为5个样品中的优势菌群,假交替单胞菌属Pseudoalteromonas广泛分布于双齿围沙蚕消化道中。研究表明,基于16S rDNA的PCRDGGE图谱技术是分析双齿围沙蚕及其他海洋沉积食性无脊椎动物消化道微生物菌群结构较为有效的手段。     

粘虫肠道细菌群落多样性的PCR DGGE指纹图谱分析

研究东方粘虫[ Myth imna se parata (Walker)]肠道细菌的多样性.采用常规分离培养与分子鉴定相结合的方法,并以16S rDNA作为分子标记的变性梯度凝胶电泳(DGGE)对肠道细菌进一步分离,DGGE分离样品是研磨提取粘虫中肠组织DNA、提取培养混合菌DNA及直接以培养混合菌为模板进行PCR扩增的产物.结果表明,共得到DGGE条带19条,其中肠组织研磨提取DNA的DGGE条带最多,为17条;直接以培养混合菌液为模板进行PCR扩增次之,为13条;培养混合菌液提取DNA的条带最少,为12条.传统方法和分子生物学方法相结合研究肠道微生物多样性时能获得更全面的微生物信息,可采用培养混合菌提取DNA再结合其他方法进行后续研究.     

添加嗜酸性乳酸杆菌对肉仔鸡免疫功能影响的研究

本文对肉鸡饲喂嗜酸乳酸杆菌时,鸡的体重及免疫器官及功能的影响进行了研究。结果表明:饲喂嗜酸乳酸杆菌可以提高鸡的体重,增加胸腺、法氏囊、脾脏的重量及淋巴细胞的 E-玫瑰花环率。     

玉米浸泡液中噬淀粉乳杆菌的分离与鉴定

从玉米浸泡液中分离出３株细菌，这些细菌为兼性厌氧，革兰氏阳性，无运动性，不形成芽胞的杆菌，呈单在或短链状排列．无过氧化氢酶．４５℃生长，１５℃不生长，发酵纤维二糖、水杨苷，不发酵阿拉伯糖、棉子糖、鼠李糖，水解淀粉．这些细菌与Ｌ．Ｋ．Ｎａｋａｍｕｒａ（１９８１）所报道的噬淀粉乳杆菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓａｍｙｌｏｖｏｒｕｓ）的性状完全一致，证明由玉米制淀粉的过程中有噬淀粉乳杆菌参与．     

2株不同源罗伊氏乳杆菌生物学特性的比较分析

[目的]对2种不同源罗伊氏乳酸杆菌的生物学特性进行比较分析,为乳酸杆菌在动物生产中的应用提供参考。[方法]分别从仔猪和北京油鸡盲肠黏膜各分离得到罗伊氏乳杆菌ZLR003和JLR002,对这2株菌的生长曲线、产乳酸能力、抗氧化活性以及抗生素药敏性进行测定。[结果]JLR002生长速度快于ZLR003,其最大OD600nm值（2.237）高于ZLR003（2.026）;ZLR003和JLR002最高乳酸产量分别为1.182和1.361 mmol/L;培养24 h后,ZLR003和JLR002细胞破碎液中均能检测到SOD活性,分别为28.2976和11.1655 U/ml;在常用的13种抗生素中,JLR002仅对大环内酯类的阿奇霉素、氨基糖苷类的链霉素和诺氟沙星以及多肽类的杆菌肽产生耐药性,而对于其他9种抗生素均敏感,而ZLR003仅对氨基糖苷类的庆大霉素和其他类的氯霉素敏感,而对于其他11种抗生素均产生耐药性。[结论]来源不同的同种乳酸杆菌,其生物学特性也存在着差异性。     

家兔肠道微生物ERIC-PCR指纹图谱构建及分析

[目的]构建不同周龄健康家兔及腹泻家兔肠道微生物的ERIC-PCR指纹图谱,分析二者肠道菌群结构的多样性及其差异性,为优化家兔饲养和疾病防治打下基础.[方法]收集l~8周龄健康家兔与腹泻家兔粪便样本,分离肠道微生物并提取其基因组DNA,PCR扩增其16S rDNA与ERIC,构建ERIC-PCR指纹图谱,对不同同龄健康家兔及腹泻家兔肠道菌群结构进行分析.[结果]肠道微生物迅速在1周龄仔兔肠道中定植且总量达最高值,其后不断减少,5周龄后总量趋于稳定,且l周龄仔兔与5周龄后(断奶后)家兔的肠道微生物总量间均存在显著差异(P<0.05).随着周龄的增加,肠道微生物ERIC条带特征发生明显变化,各周龄出现了不同的特征性ERIC条带.与同一周龄健康家兔相比,腹泻家兔肠道微生物ERIC条带明显减少,条带特征存在明显差异,菌群多样性低于健康家兔.[结论]随着周龄的增加,健康家兔的肠道微生物菌群结构和多样性发生明显变化.与同一周龄健康家兔相比,腹泻家兔肠道微生物菌群结构明显改变,多样性明显降低,且出现健康家兔中未出现过的优势菌群,进一步证明肠道微生物菌群结构与家兔生长发育和腹泻存在关联性.     

复合微生态制剂对异育银鲫肠道菌群和消化机能的影响

为了研究复合微生态制剂对异育银鲫肠道菌群和消化机能的影响,在饲料中添加不同水平的酿酒酵母(0.04%、0.06%、0.08%)、嗜酸乳酸菌(0.01%、0.02%、0.03%)以及枯草芽孢杆菌(0.01%、0.03%、0.05%)3种益生菌制剂,采用L9(34)正交设计法配制成9种复合微生态制剂。结果表明,酿酒酵母对肠道乳酸菌和芽孢杆菌含量的影响达到极显著水平(P<0.01),枯草芽孢杆菌对肠道乳酸菌含量的影响达到显著水平(P<0.05)。3种益生菌对大肠杆菌和气单胞菌含量的影响均显著(P<0.05)。3种试验益生菌对异育银鲫前、中、后肠段的淀粉酶、脂肪酶及蛋白酶均有不同程度的影响,但差异不显著(P>0.05)。酿酒酵母对肠道消化酶和营养物质表观消化率的影响最大,对磷表观消化率影响的极显著(P<0.01),对干物质表观消化率影响显著(P<0.05)。酿酒酵母、嗜酸乳杆菌和枯草芽孢杆菌3菌种适当搭配可改善异育银鲫肠道微生态环境,有益于消化酶的分泌和饲料养分的消化,较优的组合为酿酒酵母0.08%、嗜酸乳杆菌0.03%、枯草芽孢杆菌0.01%。     

仔猪HSP70蛋白表达与断奶腹泻关系研究

为了探讨HSP70在断奶过程中的作用,试验通过免疫组化方法检测民猪、长白猪断奶仔猪的胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠六个组织中HSP70蛋白的组织定位与定量变化.结果表明,胃肠道中HSP70蛋白主要在黏膜上皮和肠腺内表达,在各组织内的表达没有因腹泻与否而发生组织定位的改变,在除胃以外的其他消化道组织中,长白健康组仔...     

保加利亚乳杆菌H+-ATPase缺陷型菌株延缓后酸化及发酵性质的研究

检测由新霉素筛选保加利亚乳杆菌L15-4后酸化程度,并通过正交试验确定目的菌株的最适高密度发酵培养基组成.3株保加利亚乳杆菌(L15-4、L15、LW-1),42℃发酵酸奶,酸奶分别在4和20℃储存检测pH和滴定酸度变化;3株保加利亚乳杆菌分别与嗜热链球菌S18混合42 ℃发酵酸奶,酸奶分别在4和20 ℃储存检测pH和...     

产D-乳酸的德氏乳杆菌保加利亚亚种发酵工艺研究

[目的]筛选适合德氏乳杆菌保加利亚亚种的生长条件。[方法]以德氏乳杆菌保加利亚亚种为出发菌株,研究该菌株在不同条件下的生长情况。[结果]德氏乳杆菌保加利亚亚种最适生长温度为42℃,最适p H为6.5,最适发酵时间为72 h;代谢生成D-乳酸的适宜发酵条件为葡萄糖添加量7%、接种量10%、装液量125 m L/250 m L,在上述条件下发酵该菌种,D-乳酸产量达37.8 g/L。[结论]试验结果为德氏乳杆菌保加利亚亚种产D-乳酸条件摸索及生产应用提供了参考。     

菊苣残渣生物饲料添加剂在蛋鸡生产中的应用

[目的]研制1种新型的生物饲料添加剂,并探讨其对蛋鸡养殖的实际功效。[方法]选用枯草芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、保加利亚乳杆菌、地衣芽孢杆菌作为试验菌株,以菊苣残渣为发酵原料,研制1种新型的生物饲料添加剂,并探讨其对蛋鸡生产性能和鸡蛋品质的影响。[结果]在饲料中添加新型的生物饲料添加剂后,蛋鸡产蛋率提高2.3%,料蛋比降低13.9%,平均蛋重提高1.4%,蛋黄黄度明显提高15.5%。当该新型的生物饲料添加剂的添加量为1%时,蛋黄的粗蛋白含量也有显著提高。[结论]用菊苣研制成的新型生物饲料添加剂可用于蛋鸡生产中。