补糖对丝氨酸摇瓶发酵产酸率的影响

在测定丝氨酸产生菌黄色短杆菌C-12摇瓶发酵生长曲线和糖代谢曲线的基础上,研究补糖对丝氨酸产酸率的影响,并确定摇瓶条件下最佳的补糖浓度、补糖时间及补糖种类.     

麦芽根发酵生产碱性木聚糖酶

目的:Bacillus pumilus M-26以麦芽根为碳源发酵生产碱性木聚糖酶。方法:以单一麦芽根和复合麦芽根分别为碳源,首先确定碳源组成及浓度、氮源组成及浓度、无机盐种类及浓度,然后通过正交试验得出摇瓶发酵的培养基配方,最后进行20L发酵罐发酵生产碱性木聚糖酶工艺条件研究。结果:碳源:麦芽根,麦芽根:麸皮=7∶3,5%和8%,氮源:牛肉膏和氯化铵;无机盐:氯化钠、氯化钙及硫酸镁。摇瓶发酵条件,37℃,220 r·h-1,48 h,发酵罐发酵条件,37℃,24 h。单一碳源发酵培养基,麦芽根5%,Mg SO40.01%,氯化钠5 mmol·L-1,氯化钙1 mmol·L-1,氯化铵1.2%,牛肉膏1.2%,K2HPO40.4%,p H8.0;复合碳源发酵培养基,麦芽根麸皮7%,Mg SO40.03%,氯化钠1 mmol·L-1,氯化钙5 mmol·L-1,氯化铵1.0%,牛肉膏1.2%,K2HPO40.4%,p H8.0。摇瓶发酵最高产酶活力分别为268.38 IU·m L-1和363.13 IU·m L-1,发酵罐发酵最高产酶活力分别为748.58 IU·m L-1和1 348.99 IU·m L-1。结论:麦芽根与麸皮组成复合碳源经Bacillus pumilus M-26发酵生产碱性木聚糖酶,摇瓶产酶活力363.13 IU·m L-1,发酵罐产酶活力1 348.99 IU·m L-1。     

甲醇耐受性脂肪酶产生菌Galactomyses geotrichum SXL-107发酵条件的优化

对甲醇耐受性脂肪酶产生菌Galactomyses geotrichum SXL-107产酶条件进行了优化.通过单因素试验确定碳源、氮源和诱导剂,响应面法确定发酵培养条件,250 mL摇瓶培养和10 L发酵罐发酵试验进行验证.SXL-107菌株优化后的发酵培养基成分为黄豆粉25.56 g.L-1、橄榄油16.74 g.L-1、蔗糖4.78 g.L-1、蛋白胨10.00g.L-1,(NH4)2SO45.00 g.L-1,KH2PO41.50 g.L-1和Mg2SO41.00 g.L-1,培养温度30℃,起始培养基pH6.0,诱导剂橄榄油于发酵培养的第0,6,12 h分3批添加,在250 mL摇瓶发酵水平上,脂肪酶活性达到317.21U.mL-1,较初始发酵条件时脂肪酶活性提高了3.05倍;在10 L发酵罐放大试验中,脂肪酶活性在发酵培养38h时达到最大值332.03 U.mL-1.     

L-亮氨酸发酵培养基及基本发酵条件的优化

以黄色短杆菌FY-18为出发菌株,利用摇瓶发酵生产L-亮氨酸,并利用正交试验和单因素试验分别对其发酵培养基和基本发酵条件进行研究,从而优选出最佳培养基组分和培养条件参数。结果表明,L-亮氨酸发酵培养基的最适配比为:葡萄糖160 g/L、豆粕水解液20 g/L、玉米浆20 g/L、毛发粉15 g/L、硫酸铵70 g/L;其发酵最佳培养条件为:初始p H 7.2,培养温度32℃,发酵接种量为10%。在上述最佳条件下摇瓶中发酵的产酸量为22.5 g/L。     

大肠杆菌SerB基因的克隆及其在黄色短杆菌中的表达

磷酸丝氨酸转氨酶(Phosphoserine aminotransferase,SerB)是L-丝氨酸生物合成中的关键酶,应用PCR技术从大肠杆菌JM109(E.Coli JM109)中扩增出磷酸丝氨酸转氨酶基因,将其与表达载体pEC 7连接.通过电转化方法,将重组质粒转入黄色短杆菌(Brevibacterium flavum C-11,BfC-11)中,经酶活检测和摇瓶发酵培养,含有重组表达质粒的BfC-11B的磷酸丝氨酸转氨酶的活力和L-丝氨酸产率均比原宿主菌BfC-11有所提高,为构建L-丝氨酸高产基因工程菌的研究奠定了基础.     

L-苏氨酸摇瓶发酵工艺的研究

采用L-苏氨酸基因工程菌FCD13进行摇瓶发酵工艺的研究,经研究表明,种子培养基配方对发酵有较大影响,最佳种子培养基配方为:蔗糖30.0(g/L)、碳酸钙35.0(g/L)、硫酸铵10.0(g/L)、磷酸二氢钾2.0(g/L)。最优的摇瓶发酵条件为:250mL三角瓶中装液量为20mL;接种量5%;摇床温度37℃;摇床转速240 r/min。     

米曲霉沪酿3.042曲酸发酵工艺研究初报

对米曲霉沪酿3.042曲酸发酵工艺条件进行了研究,分析了碳源、氮源、pH、装液量对曲酸产酸量的影响,获得了最优摇瓶培养条件:10%蔗糖、1%蛋白胨、pH=2.5、装液量40mL(250mL三角瓶),发酵温度30℃、摇瓶转速200r·min-1条件下达最高产酸量3340mg·L-1。     

德州地区野生黄伞菌种分离及发酵条件的初步研究

 首次在德州发现野生黄伞,并成功分离、保种,得到菌种命名为DZS1。通过单因素试验对其液体发酵培养条件初步优化,确定了DZS1摇瓶发酵的最适摇瓶发酵工艺条件：起始pH值6.0,培养温度24℃,摇床转速165r/min,摇瓶装量100mL(250mL摇瓶)。在此工艺基础上测定了DZS1的生长曲线     

透明质酸产生菌的诱变选育及发酵工艺的研究

研究了透明质酸产生菌兽疫链球菌的诱变筛选及摇瓶发酵条件.通过紫外线和NTG复合诱变处理得到溶血性弱的菌株,突变菌株比出发菌株透明质酸产量提高1倍以上.同时,对摇瓶发酵条件进行了优化,确定了最佳发酵培养基、最适反应温度、最适pH、碳源及氮源的选择.     

紫外诱变选育高产碱性木聚糖酶优良短小芽胞杆菌

以短小芽胞杆菌M-11为研究对象,选育碱性木聚糖酶高产优良短小芽胞杆菌,并对其发酵条件进行研究。对短小芽胞杆菌M-11用紫外线(UV)诱变,用刚果红平板染色法初筛、摇瓶发酵复筛及稳定性筛选,选育出高产碱性木聚糖酶突变菌株M-11-2,研究发酵条件。结果表明:突变菌株M-11-2基础产酶活力500~600 IU·m L-1,是M-11酶活314.93 IU·m L-1的1.5倍;摇瓶发酵产酶活力811.28 IU·m L-1,是原始菌株M-11(613 IU·m L-1)1.3倍;发酵罐发酵产酶活力2 703.68 IU·m L-1,发酵液产酶能力1 600 000IU·L-1(以成品酶活计),发酵条件:发酵周期24 h,温度37℃,培养基:麸皮7.0%、氯化钠7.0 mmol·L-1、硫酸锌5.0 mmol·L-1、硫酸镁0.02%、酵母膏1.0%、氯化铵1.0%、磷酸氢二钾0.4%,p H调节至8.0。因此,采用紫外线诱变方法,成功选育出高产碱性木聚糖酶的短小芽胞杆菌菌株,稳定性良好,适宜发酵工程应用的优良菌株。     

一株高产魔芋葡甘聚糖酶菌种的中试发酵条件初探

采用(NH4)2SO4为无机氮源,利用实验室筛选的高产魔芋葡甘聚糖酶的B23菌种,在50 L发酵罐中进行中试放大,研究了工业发酵生产中的生产条件以及pH的调控,讨论了工业生产魔芋葡甘聚糖酶的可行性。结果表明:pH值7.0、接种量6%、通气量0.8 m3/h、搅拌速度100 r/min为最佳条件,总酶活力达到2 574 U/mL。优化了从实验室摇瓶生产至发酵罐生产中必须测定的通气量、搅拌速度、接种量等工业生产条件,提高了该菌在实验室摇瓶发酵的酶活力,可进入工业生产研究。     

地衣芽胞杆菌WX-02补糖发酵聚γ-谷氨酸的工艺优化

以地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)WX-02为研究对象,在摇瓶发酵中得到优化的葡萄糖补料方案,即初始葡萄糖质量浓度为70g/L时,发酵至15h一次性补加15g/L葡萄糖。将此补料方案在3L发酵罐上进行验证,结果表明:发酵生物量和聚γ-谷氨酸产量最大值分别为3.9g/L和44.5g/L,与对照相比分别提高56%和50%;谷氨酸利用率达到46%,而对照中仅为30%。通过补糖可以提高生物量,提高对谷氨酸的利用率,从而提高聚γ-谷氨酸发酵水平。     

脂肪酶菌种的筛选及分子鉴定

通过固体平板法,从温泉水样中筛选出1株耐热脂肪酶产生菌X-33。对该菌株进行了产酶条件的初步探索,得出其摇瓶发酵条件为：2%可溶性淀粉,3%酵母膏,MgSO4·7ddH2O 0.1%,K2HPO40.1%,三丁酸甘油酯乳化液0.1%,起始pH值7.5,通气量50 mL/250 mL摇瓶,250 r/min,发酵温度37℃,发酵周期24 h。该酶在60℃条件下温浴30 min,可保留部分活性。为鉴定该菌株,克隆并测序了其16S rDNA基因序列,NCBI上比对分析表明,该菌株与sphingomonas yabuuchiae（鞘氨醇单胞菌）有最紧密的亲缘关系。     

产L-精氨酸基因工程菌发酵培养基优化

以基因工程菌Escherichia.coli LGE35 (Thr-,Met-, Kan+)为实验菌株,利用SAS软件中的Plackett- Burman设计法,对影响菌株发酵生产L-精氨酸的八个因素进行了筛选,确定了蔗糖、硫酸铵和酵母粉为影响摇瓶发酵生产L-精氨酸的主要因素.利用响应曲面分析法对这三个主要因素的最佳水平及其交互作用进行了研究,建立了二次回归方程:Y=14.397+1.177 812 X1+0.701 125 X2-1.058 062 X3-1.067 688 X1X1+0.100 5 X1X2-1.244 813 X2X2+0.469 375 X1X3+1.296 25 X2X3-1.873 437 X3X3,并最终确定了发酵培养基为:蔗糖 71 g/L,硫酸铵31 g/L,酵母粉14 g/L,硫酸镁1 g/L,磷酸氢二钾3 g/L,L-蛋氨酸150 mg/L,L-苏氨酸100 mg/L,卡那霉素50 mg/L,VB1 100 mg/L.与对照相比,在此条件下L-精氨酸产量提高了19.26;,残糖降低了33.04;.     

A Proposed Batch In vitro Apparatus for Conducting Rumen Fermentation Experiment

This research proposes a batch in vitro rumen apparatus modified from Daisy incubator and procedures of measuring feed digestion by using nylon bag to replace the traditional centrifuging and filtration methods, for the purpose of studying ruminal fermentation. The apparatus consists of 8 sets of airtight reaction vessels which rotated at a speed of 1 r/min and located inside a thermostatic cabin. Optimum procedures was proved to be that the volume of incubation fluid was 400 mL; fineness and size of test feed were 0.125-0.25 mm and 0.4 g, respectively; amount of bags in one vessel was 6; fermentation diet in a single incubation was 4-5 g. Comparing experiments showed that fermentation speed attained with the apparatus was about 15-20% greater than that attained with flask-shaking machine method (revolutionary speed is 100 r/min) and more accurate results could be obtained with the new apparatus. In conclusion, this apparatus could provide an efficient mixing action, and the procedure could allow sensitive detection of differences in ruminal fermentation in a time-saving way.     

A Proposed Batch In vitro Apparatus for Conducting Rumen Fermentation Experiment

This research proposes a batch in vitro rumen apparatus modified from Daisy incubator and procedures of measuring feed digestion by using nylon bag to replace the traditional centrifuging and filtration methods, for the purpose of studying ruminal fermentation. The apparatus consists of 8 sets of airtight reaction vessels which rotated at a speed of 1 r/min and located inside a thermostatic cabin. Optimum procedures was proved to be that the volume of incubation fluid was 400 mL; fineness and size of test feed were 0.125-0.25 mm and 0.4 g, respectively; amount of bags in one vessel was 6; fermentation diet in a single incubation was 4-5 g. Comparing experiments showed that fermentation speed attained with the apparatus was about 15-20% greater than that attained with flask-shaking machine method （revolutionary speed is 100 r/min） and more accurate results could be obtained with the new apparatus. In conclusion, this apparatus could provide an efficient mixing action, and the procedure could allow sensitive detection of differences in ruminal fermentation in a time-saving way.     

绿色木霉降解木薯秆产糖及其工艺优化研究

[目的]对绿色木霉降解木薯秆产糖的工艺条件进行研究。[方法]先用绿色木霉初步降解经预处理的木薯秆,再用纤维素酶水解木薯秆,接着采用响应曲面（RSM）结合单因素试验法优化绿色木霉糖化木薯秆的摇瓶发酵条件。[结果]绿色木霉糖化木薯秆最佳工艺为：接种量11 ml孢子悬浮液,装液量100 ml,初始pH 4.6,发酵时间84 h,发酵温度30℃,摇床转速150 r/min,摇瓶瓶口包裹12层纱布。在此条件下,得到最佳产糖量3.06 mg/g木薯秆,比优化前提高了76%。[结论]虽然目前绿色木霉发酵产糖量与纤维素酶水解相比仍有一定差距,但微生物发酵糖化法成本更低廉,操作更简便,具有工业化生产的应用潜力。     

油菜秸秆适宜发酵条件研究

笔者采用正交设计的方法研究了油菜秸秆的粒径长度、C/N比、含水量、氮源对油菜秸秆堆肥发酵的性能参数,包括堆肥温度、C/N比、秸秆发酵后的浸提液种子发芽指数等的影响。结果表明:秸秆长度、氮源和含水量对油菜秸秆堆肥发酵效果的影响显著,而在本试验所设置的C/N比值范围内,C/N比对油菜秸秆堆肥发酵效果的影响不显著。综合各项指标以及从能耗和成本角度考虑,确定油菜秸秆发酵宜采用粒径长度为5cm,C/N比值为25,含水量为70%,氮源为鸡粪的组合进行堆肥发酵。     

纸浆中高产纤维素酶生产菌的筛选及发酵条件研究

[目的]筛选高效纤维素分解菌优化纤维素酶的发酵工艺条件。[方法]从造纸厂废纸浆中筛选了一株纤维素分解菌株JX-2,考察碳源、氮源、碳氮比、营养盐、pH值、装液量、接种量以及发酵时间对产酶特性的影响。[结果]较优的培养基组成是麸皮1.5%,豆饼粉0.5%,NaCl0.5%,KH2PO40.1%,发酵的较优条件是培养液的初始pH值10.0,发酵温度37℃,装液量20%,接种量2%,发酵时间48h,该条件下滤纸酶活力高达1158.6U/ml发酵液。[结论]该菌株为专性嗜碱好氧菌,发酵的较优条件之一指标已具备一定的工业应用前景。     

花生四烯酸高产突变株5L罐发酵及菌丝老化研究

[目的]研究花生四烯酸高产突变株的发酵及菌丝老化特性。[方法]对1株经诱变获得的花生四烯酸高产突变株A1．13进行5L罐发酵试验,考察不同培养条件对发酵产物的影响。[结果]碳源一次性过量加入并改变培养温度,可使该菌株花生四烯酸产量提高至602．99mg／L;发酵菌丝体在4℃条件下老化15d后,花生四烯酸产量达885．16mg/L。大豆油、花生油、玉米油、葵花籽油和芝麻油5种植物油均可起到消泡作用,添加浓度4％葵花籽油效果最佳,与对照相比,菌丝生物量和花生四烯酸产量分别提高了124％和22％。[结论]该研究可为突变株A1．13工业化发酵产花生四烯酸提供理论依据和现实参考。