三种中草药对大肠杆菌的抑制作用及机理初探

为探讨鹿蹄草、功劳叶和地榆三种中草药对大肠杆菌的抑制活性及作用机理。采用菌落计数法测定中草药提取液对大肠杆菌的抑制作用;采用倍比稀释法测定中草药的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC);通过紫外分光光度计测定不同时间段菌液吸光值和电导率值;将大肠杆菌在带药营养肉汤培养基中培养10 h并在扫描电子显微镜(SEM)下观察大肠杆菌的超微结构变化。结果表明：三种中草药均具有较好的抑菌作用,且中草药浓度越高,抑制作用越强。鹿蹄草的MIC值为31.25 mg/mL,MBC值为62.50 mg/mL;功劳叶和地榆的MIC值均为62.50 mg/mL,MBC值均为125 mg/mL。加药组的大肠杆菌生长受到抑制,菌体细胞膜渗透性增加。扫描电镜显示大肠杆菌细胞出现变长现象,表面出现许多凹坑。三种中草药均有较强的抑菌作用,其中鹿蹄草的抑菌效果最明显。     

滔罗定对大肠杆菌和沙门氏菌混合感染鸡的药效学试验

摘要：研究了滔罗定的体外抑菌效果及对人工混合感染雏鸡大肠杆菌和沙门氏菌病的治疗效果。采用试管两倍稀释法测定滔罗定对大肠杆菌和沙门氏菌的最小抑菌浓度。选择180只4日龄罗曼雏鸡随机分为健康组（Ⅰ）,感染对照组（Ⅱ),氟苯尼考治疗对照组（Ⅲ）和滔罗定高、中、低剂量组（Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ）等6个不同处理组,进行人工致病治疗试验。试验结果：与感染对照组相比,滔罗定高、中剂量组的死亡率分别降低了20.0%、16.7%,治愈率分别提高了23.3%、16.6%,差异均极显著(P<0.01);滔罗定高、中剂量组的有效率和治愈率均高于氟苯尼考组,但差异不显著(P>0.05);滔罗定对大肠杆菌和沙门氏菌的最小抑菌浓度大于或等于256 μg/mL。结果表明,滔罗定对人工混合感染雏鸡大肠杆菌和沙门氏菌病具有一定的治疗效果。     

香蕉内生拮抗细菌KKWB-5的几丁质酶在大肠杆菌中的表达纯化与复性研究

将香蕉内生拮抗细菌KKWB-5的几丁质酶在大肠杆菌中的表达,旨在检测该酶对香蕉枯萎病病原菌4号小种的抗性。PCR扩增该基因连入大肠杆菌表达载体pET22b,导入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导重组菌株,SDS-PAGE分析目的蛋白的表达,对目的蛋白进行纯化,并将纯化后的目的蛋白复性,对复性产物进行水解几丁质活性和拮抗香蕉枯萎病活性的分析。SDS-PAGE分析表明目的蛋白在大肠杆菌中以包涵体的形式大量表达,经变性Ni2+柱纯化得到了高纯度的重组蛋白,表达量达293 mg/L;稀释和透析两种复性方法中,透析复性法的目的蛋白得率较高,为84.6 %。复性后的目的蛋白具有水解几丁质的活性,同时对香蕉枯萎病病原菌也具有一定的抗性,但抗性较弱。该几丁质酶在大肠杆菌中得到高效表达,且复性后的几丁质酶对香蕉枯萎病病原菌4号小种有一定的抑制作用,该酶对KKWB-5菌株拮抗香蕉枯萎病菌的能力有一定的贡献。     

致蛋鸡输卵管炎的大肠杆菌分离及特性分析

2015年从福建省某蛋鸡场病死鸡的肝脏分离到一株细菌,命名FQ-180。为进一步了解其生物学特性,经革兰氏染色、电镜检测等方法初步鉴定为大肠杆菌;分离株O血清型鉴定分属于O78型;药敏试验结果表明菌株FQ-180仅对阿莫西林、氟苯尼考、头孢氨苄、头孢唑啉高度敏感。采用PCR法对分离株16S r DNA基因序列进行了扩增,扩增出长度为1470 bp左右特异性目的片段,进一步鉴定为大肠杆菌。     

动物益生菌对大肠杆菌抑制作用的培养条件优化

对能抑制畜禽大肠杆菌的动物益生菌短短芽孢杆菌YSJ-0401的培养条件进行优化。从时间、温度、摇床转速和培养基pH值研究短短芽孢杆菌YSJ-0401的最适培养条件,以获得最佳的抑菌效果。短短芽孢杆菌YSJ-0401培养24~84 h的抑菌圈为10.00~13.00 mm,在24~39 ℃下培养的抑菌圈为9.00~14.00 mm,转速在90~210 r/min下培养的抑菌圈为13.75~15.00 mm,pH 6.0~8.0下培养的抑菌圈为10.50~14.50 mm。动物益生菌短短芽孢杆菌YSJ-0401的最适培养条件为培养基pH 7.5、30 ℃下培养48 h,摇床转速在90~210 r/min范围内均可。     

猪源大肠杆菌的分离、鉴定及耐药性监测

为了调查京津冀地区猪致病性大肠杆菌的耐药性及流行血清型,从河北、北京、天津地区发生仔猪黄、白痢的十个猪场分离60株大肠杆菌,其中致病性大肠杆菌55株,进行了生化和血清型鉴定,并对其耐药性进行了监测与分析。结果发现：分离的猪致病性大肠杆菌优势血清型为O101、O152、O93、O78、O54,这5种血清型占总分离致病菌株的56.4%（31/55）。所分离的60株大肠杆菌药敏试验结果中抑菌作用最强的是菌必治、多粘菌素、先锋必、先锋霉素和壮观霉素,敏感率分别为95.0% (57/60)、90.0%(56/60)、88.3% (53/60)、86.7%(52/60)和85%(51/60)。耐药率较高的分别为链霉素（80%）、庆大霉素（53.3%）、氨苄青霉素（75%）复方新诺明（86.7%）、痢菌净（76.7%）、呋喃唑酮（71.2%）、诺氟沙星、环丙沙星（51.7%）、喹乙醇（75%）和洛美杀星（70%）氟苯尼考（55%）。60株大肠杆菌多数为6耐以上的菌株（80%）,其中8耐、10耐、6耐最高分别为17%、15%、12%。     

苏云金芽胞杆菌cry2Ac4基因在 大肠杆菌中的表达

在大肠杆菌中表达苏云金芽胞杆菌（Bacillus thuringiensis,简称Bt）cry2Ac4基因;笔者以含有Bt WB9菌株cry2Ac4基因的质粒pMD2Ac为模板,利用cry2Ac4基因的特异引物对(ET-F/ET-R)扩增获得该基因,进而将cry2Ac4基因与pET-29a原核表达载体连接;成功构建了重组表达载体并转化大肠杆菌JM109,从阳性转化子中提取重组表达质粒pET-29a-cry2Ac4,再转化大肠杆菌BL21（DE3）pLysS,经IPTG诱导后,对诱导表达产物进行了SDS-PAGE检测;cry2Ac4基因编码的约70kDa蛋白在大肠杆菌中得到了高效表达。     

病犬大肠杆菌16S rRNA甲基化酶基因检测研究

摘要：为了解郑州市发病犬大肠杆菌对氨基糖苷类药物高度耐药的16S rRNA甲基化酶流行情况,本研究测定了分离自河南郑州市宠物医院发病犬的123株大肠杆菌对氨基糖苷类代表药物阿米卡星的敏感性;分别设计6种16S rRNA甲基化酶基因特异性引物,对耐药分离株进行16S rRNA甲基化酶基因PCR扩增检测。检测结果显示,在发病犬大肠杆菌中仅检测到armA和rmtB,其检出率分别为3.25%（4/123）和38.2%（47/123）。其中,有3.25%（4/123）的大肠杆菌可同时检测到armA和rmtB。这些结果提示,此地区发病犬大肠杆菌16S rRNA甲基化酶基因以rmtB为主。病犬细菌一旦携带这些耐药基因,可导致对氨基糖苷类药物高度耐药,应引起重视。     

棘孢木霉几丁质酶基因的原核表达、复性、纯化以及酶学性质研究

为高效表达几丁质酶基因tachi1,研究Tachi1的酶学性质。采用PCR技术从棘孢木霉中克隆了几丁质酶基因tachi1并与pEHisTEV原核表达载体融合,转化大肠杆菌BL21。经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,获得了以包涵体形式高效表达的Tachi1。包涵体经洗涤、溶解、复性和纯化后获得了高纯度的Tachi1。复性后的Tachi1具有较高的几丁质酶活性,该几丁质酶反应的最适温度为50℃,最适pH 5.5。几丁质酶在30~35℃下稳定,在pH 3~7之间几丁质酶有较高活性。     

质粒介导的喹诺酮类耐药基因在鸡源大肠杆菌中的流行

为了解河南省质粒介导的喹诺酮类耐药基因(qnrA、qnrB、qnrS、qepA和aac(6′)-Ib-cr)在产16S rRNA甲基化酶鸡源大肠杆菌中的流行与分布,分别设计特异性引物对2005-2008年在河南省病鸡病料中分离保存的158株16SrRNA甲基化酶阳性鸡大肠杆菌进行PCR扩增。结果显示,在158株产16S rRNA甲基化酶鸡源大肠杆菌中,qnrA、qnrB、qnrS、qepA和aac(6′)-Ib-cr的检出率分别为0.6%,2.5%,13.9%,2.5%和58.2%。提示质粒介导的喹诺酮类耐药基因在河南省产16S rRNA甲基化酶鸡源大肠杆菌中普遍存在,且以qnrS和aac(6′)-Ib-cr为主。     

鸡源性大肠杆菌产超广谱β-内酰胺酶基因型分布

摘要: 检测鸡大肠杆菌超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的基因型并了解辽宁省鸡源性大肠杆菌产ESBLs基因型分布。对大连4个地区不同鸡场临床分离32株产ESBLs鸡大肠杆菌分别用TEM、OXA、CTX-M和SHV等4种通用引物进行PCR扩增确定其基因型。结果显示32株鸡大肠杆菌均检出TEM型基因、12株检出CTX-M型基因、2株检出OXA型、未检出SHV型;TEM+CTX-M双阳性检出11株、TEM+OXA双阳性检出2株。TEM基因亚型占检出比例最高（100％）。结论：目前辽宁省产ESBLs鸡大肠杆菌基因亚型以TEM为主,其次为CTX-M型,未发现SHV型;以TEM+CTX-M双阳性检出率最高（34.4％）。     

新疆伊犁某牛场不同生长期牛粪源大肠杆菌耐药性调查

为了调查新疆伊犁某牛场不同生长期牛粪源大肠杆菌对临床常用抗菌药物的耐药情况。从该牛场分别采集育肥牛、繁育牛、加育牛和未繁育牛的粪样。采用微量肉汤稀释法,对分离出的大肠杆菌进行最小抑菌浓度测定。结果表明,育肥牛、繁育牛、加育牛和未繁育牛粪源大肠杆菌分离率均为100%,不同生长期的牛源大肠杆菌对氨苄西林均耐药,耐药率分别为4.0%、8.6%、6.7%、20.0%;对安普霉素都较为敏感。繁育牛和加育牛粪源大肠杆菌耐药种类较多,未繁育牛粪源大肠杆菌对比其他生长期牛粪源菌耐药较严重,不同生长期的牛粪源大肠杆菌多重耐药情况不太严重,主要为0耐、1耐;新疆伊犁该牛场对临床常用抗菌药物的耐药程度不同,耐药程度虽然不高,但在养殖生产中需注意合理用药。     

2种苦木科植物活性组分对褐飞虱的触杀活性及作用机理初探

用不同溶剂萃取了苦木科植物苦木（枝叶）和鸦胆子（枝叶）的活性组分,并测定了活性组分对褐飞虱3龄若虫的触杀活性及对其乙酰胆碱酯酶（AchE）活性的影响。结果表明,在10mg／ml浓度下,处理24h．苦木和鸦胆子的氯仿萃取物对褐飞虱3龄若虫有明显触杀活性,校正死亡率分别达到96．37％和96.70％。24h内,经苦木氯仿萃取物处理的试虫,其AchE活性降低且不可逆恢复;而经鸦胆子氯仿萃取物处理的试虫．其AchE活性呈现“升-降-升-降”趋势,最后与对照持平。