牛蒡苷元及牛蒡子提取物的急性毒性试验研究

为评价牛蒡苷元及牛蒡子提取物在兽医临床使用中的安全性,根据兽药急性毒性试验(LD50测定)指导原则的要求,开展了牛蒡苷元及牛蒡子提取物在SPF级昆明小鼠经口给药的急性毒性试验研究。试验结果表明:小鼠灌胃给予牛蒡苷元的半数致死量为219.8 mg/kg,死亡均发生在3 h以内,存活动物均正常生长;鼠灌胃给予牛蒡子提取物后采用最大耐受量法测定发现,给药组与对照组雌雄小鼠生长良好,在14 d观察期内均未出现明显中毒症状和死亡情况,药物急性经口MTD≥36 g/kg.bw;根据兽药指导原则经口给药急性毒性试验剂量分级标准,牛蒡苷元属中等毒级,牛蒡子提取物为实际无毒级。     

牛蒡子粉中牛蒡苷元在仔猪体内的药物动力学研究

为研究牛蒡子粉中牛蒡苷元在仔猪体内的药物动力学特征,了解其在仔猪体内的吸收、分布、转化和排泄规律,为新兽药的研发和临床用药提供理论参考依据。选取健康仔猪8头(30.0±5.0 kg),以1.0 g/kg·bw的牛蒡子粉灌胃给药,不同时间点前腔静脉采血,采用HPLC法对猪血浆中牛蒡苷元的浓度进行分析。牛蒡子粉灌胃给药后,符合有吸收二室模型,主要药物动力学参数为:吸收半衰期(t_{1/2 ka})为0.274±0.102 h,分布半衰期(t_1/2α)1.435±0.725 h;消除半衰期(t_1/2β)63.467±29.115 h;表观分布容积(V_d)1.680±0.402 L/kg;清除率(CL_b)0.076±0.028 L/(h·kg);达峰时间(t_max)为0.853±0.211 h,峰浓度(c_max)为0.430±0.035μg/mL,药时曲线下面积(AUC)14.672±4.813μg·h/mL。试验表明:牛蒡子粉口灌后牛蒡苷元在仔猪...     

中药活性成分牛蒡苷元药理作用研究进展

牛蒡苷元是常见中药牛蒡子的主要活性成分,研究已经证实其具有抗炎、抗病毒、抗肿瘤及免疫调节等作用,对其药理作用进行简要综述,为进一步深入研究和应用提供一定参考。     

牛蒡苷元在仔猪体内的药物动力学研究

为研究牛蒡苷元在仔猪体内的药物动力学特征,了解其在仔猪体内的吸收、分布、转化和排泄规律,为新兽药的研发和临床用药提供理论参考依据。选取健康仔猪8头(30.0±5.0 kg),以2.0 mg/kg.bw的牛蒡苷元静脉注射给药,不同时间点前腔静脉采血,采用HPLC法对猪血浆中牛蒡苷元的浓度进行分析。牛蒡苷元静脉注射后,符合无吸收二室模型,主要药动学参数为：分布半衰期(t1/2α)0.166±0.022 h;消除半衰期(t1/2β)3.161±0.296 h;表观分布容积(Vd)0.231±0.033 L/kg;清除率(CLb)0.057±0.003 L/(h·kg);药时曲线下面积(AUC)1.189±0.057 μg·h·mL-1。由此可知,牛蒡苷元静脉注射后在仔猪体内分布迅速、分布组织较少、代谢消除较快。     

牛蒡苷元对禽流感疫苗的免疫增强作用

用牛蒡苷元(arctigenin,ACT)作佐剂,研究了牛蒡苷元对鸡禽流感疫苗的免疫增强效果。结果表明:牛蒡苷元对禽流感油乳剂灭活苗有较强的免疫增强作用,能够诱导雏鸡产生更高的抗禽流感抗体效价,腹腔巨噬细胞吞噬率和吞噬指数明显升高,对鸡胸腺、脾、法氏囊的发育均有一定的促进作用;T淋巴细胞E-花环率提高10%以上。     

牛蒡苷元对疫苗免疫猪抗体和T细胞亚群的影响

为了研究牛蒡苷元对猪外周血T细胞亚群和对不同疫苗免疫抗体的影响,将16只25~30日龄的健康仔猪,随机分成4组,将牛蒡苷元溶液分别以高、中、低3个剂量和生理盐水同时注射,给药前后不同时间点采血,流式细胞术检测猪外周血中T淋巴细胞亚群的变化。结果显示,中剂量的牛蒡苷元可显著促进猪外周血CD3~+、CD4~+细胞的增殖。另外25~30日龄断奶仔猪16头随机分为4组,将牛蒡苷元分别以高、中、低3个剂量和猪瘟疫苗同时注射,于免疫后7、14、21、28、35 d采血,ELISA方法检测猪瘟抗体水平。研究表明,与仅用疫苗免疫对比,牛蒡苷元疫苗联合使用,在免疫的初期和中期能够有效的快速提高猪体抗体水平,并且低、中剂量组比高剂量组更能够提高抗体水平,合适剂量的牛蒡苷元可以作为免疫增强剂单独或与疫苗联合使用。     

牛蒡根不同处理方式对提取牛蒡寡糖的影响及提取工艺的优化

研究牛蒡根不同处理方式对提取牛蒡寡糖的影响以及牛蒡寡糖提取工艺的优化。结果表明,鲜牛蒡根晒干后再粉碎提取的,牛蒡寡糖的得率和寡糖含量相对最大;其次是将鲜根60℃低温烘干后再粉碎提取的;鲜根80℃和100℃烘干后再粉碎提取的牛蒡寡糖得率均低于60℃烘干后再粉碎提取的,但各组间没有明显差异;而鲜根直接破碎提取的牛蒡寡糖得率最小,寡糖含量最低。因此,综合考虑选择鲜牛蒡根以60℃低温烘干为宜。选择料液比、提取温度、提取时间、提取次数4个因素进行单因素试验,确定其条件范围,并采用正交试验设计优化提取条件,得到诸因素的最佳组合:料液比为1:10、提取温度70℃、提取时间90min、提取2次。在此工艺下牛蒡寡糖的平均得率为15.87%,所制备的产品寡糖含量为95%左右,品质较好,纯度和均一性较高。     

神经生长因子的提取,纯化及鉴定

经凝胶过滤层析－离子交换层析－凝胶过滤层析分离方法将蛇毒中的神经生长因子提取并纯化。得到的神经生长因子经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳测得其分子量为１７０００，由２３１个氨基酸组成。在２２０．６ｎｍ处有１个特征吸收峰。最低活性单位为１０ｎｇ／ｍＬ。     

高效液相色谱法测定银翘片中牛蒡苷含量的方法建立

为完善银翘片质量标准,采用高效液相色谱法对银翘片中牛蒡苷的含量测定进行了研究。色谱柱为C18（4．6mm×250mm,5μm）,流动相为乙腈-0．1％冰乙酸溶液（25：75）,检测波长为280nm,流速1mL/min,柱温25℃,进样量10μL。牛蒡苷进样浓度在0．1～2mg／mL范围内与峰面积呈良好的线性关系（r=0．9999）;样品平均回收率为96．5％（n=6）,RSD为1．3％。本方法简便、准确度高、重复性好,为进一步控制银翘片的质量提供了依据。     

天然牛磺酸提取及分离纯化研究

牛磺酸作为营养强化剂已在食品中,尤其是婴幼儿食品、保健品中得到广泛的应用.综述了天然牛磺酸提取及分离纯化方法研究的最新进展,以期为牛磺酸的深入研究提供参考.     

水貂Mustla Vison微量血DNA的提取与纯化

作者通过采取活体水貂少量血液 ( 5 0 μL) ,利用蛋白酶K消化 ,酚、氯仿法抽取DNA ,结果测量获得的数据和曲线表明 :用 5 0～ 5 0 0 μL冻存血可以获得具有一定纯度和数量的DNA ,完全可以满足RAPD分析的PCR反应所需     

屎肠球菌荚膜多糖的提取纯化及其多糖含量的测定

为提取纯化屎肠球菌（E.faecium）荚膜多糖（CPS）并测定其多糖含量,试验采用高压法破碎菌体,加入核糖核酸酶（25 μg/mL）、脱氧核糖核酸酶（0.5 mg/mL）、溶菌酶（0.25 mg/mL）及蛋白酶K （1.25 mg/mL）等去除核酸和蛋白质,得到荚膜多糖粗提物,经过30 ku和100 ku超滤离心管超滤浓缩和DEAE Sepharose Fast Flow层析柱层析后,得到纯化的屎肠球菌荚膜多糖,再利用苯酚-硫酸法测定其含量。结果表明,成功从屎肠球菌中提取纯化出荚膜多糖,其含量为75.21%,初步确定了屎肠球菌荚膜多糖的提取纯化方法,为今后相关疫苗的研制奠定了基础。     

Extraction,Purification and Determination of Capsular Polysaccharide in Enterococcus faecium

In order to extract and purify the capsular polysaccharide of Enterococcus faecium and measure contents of polysaccharide, high pressure crushing methods and enzyme decomposition methods (RNase A (25 μg/mL), DNase (0.5 mg/mL), lysozyme (0.25 mg/mL) and protease K (1.25 mg/mL)) were used to remove the nucleic acids and proteins to obtain crude capsular polysaccharide, and centrifugal ultrafiltration with 30 and 100 ku ultrafiltration centrifuge tubes and DEAE Sepharose Fast Flow column chromatography were also adopted to obtain the purified capsular polysaccharides of Enterococcus faecium. Then the content of polysaccharide was determined by the phenol-sulfuric acid method. The results showed the capsular polysaccharide content was 75.21%. The results revealed that capsular polysaccharide ofEnterococcus faecium was extracted successfully. The method of extracting capsular polysaccharide in Enterococcus faecium was established initially.     

鹿茸多肽提取分离纯化及药理作用研究进展

鹿茸多肽具有抗炎、抗氧化、增强免疫并能促进细胞分化、伤口愈合、抑制肿瘤细胞、促进神经系统、周围神经系统组织的再生等药理作用,是鹿茸中最有效的成分之一。文中对鹿茸多肽的提取,分离纯化及药理作用研究进展进行了综述,希望为鹿茸多肽的研究和开发提供参考。     

紫锥菊根中菊苣酸的提取分离及其分子印迹聚合物的制备

菊苣酸为天然药物紫锥菊中有效酚酸类化合物,本试验旨在研究紫锥菊根中菊苣酸提取纯化的新方法。试验采用超声辅助提取法对紫锥菊根粉末进行提取,所得粗提物再用葡聚糖凝胶LH-20为固定相,80%、60%及40%甲醇为流动相,进行反复提取,得到菊苣酸单体。再将制得的菊苣酸单体作为模版分子,α-甲基丙烯酸为功能单体,乙二醇二甲基烯酸酯为交联剂,制备菊苣酸分子印迹聚合物,并应用此分子印迹聚合物为固定相,对紫锥菊根粉进行富集纯化。结果显示,经葡聚糖凝胶LH-20提取分离后,高效液相色谱法测定菊苣酸含量为90.22%。紫锥菊根粉经分子印迹聚合物富集纯化后,可同时富集母核结构相同的菊苣酸和咖啡酸。由此可见,本方法可用于紫锥菊根中菊苣酸的提取分离及其分子印迹聚合物的制备。     

肠炎沙门菌SEF14菌毛的抽提、纯化及生物学活性检测

试验从肠炎沙门菌国内标准株50336中抽提和纯化SEF14菌毛,并制备SEF14蛋白鼠源高免血清.结果发现,肠炎沙门菌在CFA培养液中,静止培养50 h左右,SEF14菌毛表达量相对较多,在机械高速匀浆后,经进一步的透析纯化,得到较纯的SEF14菌毛蛋白,蛋白大小和相关报道一致,约14 ku左右.Westem-blotting检测发现纯化的重组蛋白rSEFA(体外表达的SEF14菌毛主要亚单位蛋白SEFA)免疫小鼠得到的高免血清能识别标准株肠炎沙门菌SEF14菌毛蛋白以及纯化的重组蛋白rSEFA,说明体外抽提的SEF14菌毛蛋白和体外表达的rSEFA蛋白同样具有较好的免疫原性和反应原性.     

人工流产刮宫物中绒毛膜促性腺激素的提取和纯化

以健康妇女人工流产的刮宫物为原料,经50%乙醇溶液抽提、醋酸钠50%乙醇缓冲溶液分级沉淀、硫酸铵分段盐析,最后用DEAE—纤维素柱层析纯化.终产品放免活性为3500IU/mg,产品总回收率为40～50mg‰.终产品经PAG圆盘电泳分析,只出现1条电泳区带,并与纯度相近的尿HCG产品的电泳特性一致.     

猪圆环病毒2型病毒样颗粒的纯化及鉴定

为获得较高纯度的猪圆环病毒2型（porcine circovirus type 2,PCV2） Cap蛋白的病毒样颗粒（virus-like particles,VLPs）并对其进行结构和功能研究,本试验以大肠杆菌表达系统表达了PCV2重组Cap （PCV2 rCap）蛋白,通过硫酸铵分级沉淀、Sephacryl S-300 HR凝胶过滤层析、Capto Q离子交换层析、CsCl密度梯度离心等方法对其进行了纯化。通过Western blotting对纯化所得蛋白进行免疫反应性鉴定,透射电镜（TEM）观察纯化蛋白的粒径及形态,高效液相尺寸排阻色谱（HPSEC）检测其组分分布。结果显示,纯化后PCV2 rCap蛋白经SDS-PAGE检测,可见28 ku的目的蛋白带,灰度扫描法检测其纯度为97.53%。Western blotting结果显示,该处的特异性蛋白条带有明显的免疫反应性;TEM检测其为粒径17.35~19.24 nm的规则球形颗粒,表明所获得的PCV2 rCap蛋白在表达时能在菌体内自我装配成VLPs,且在纯化过程中没有被破坏而解聚,仍保持天然状态;HPSEC检测纯化样品中VLPs含量为92.67%。本试验结果为进一步研究PCV2 VLPs的空间结构及其免疫保护机制提供了参考依据。